CN105907683B - 一株解淀粉芽孢杆菌cd5bc及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一株解淀粉芽孢杆菌cd5bc，该解淀粉芽孢杆菌cd5bc的分类命名为Bacillus amyloliquefaciens cd5bc，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M 2016232，保藏时间为2016年4月28日。本发明还提供了所述菌株在防治作物病害方面的应用以及由该菌株制备得到的生防药剂。本发明菌株对于辣椒疫病具有十分显著的防治效果，接种15天后生防效果高达100％，接种60天后生防效果高达82.36％；本发明对多种作物病害均有优秀的抗病害效果，对辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄黑星病、水稻稻瘟病、水稻纹枯病、蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病的病原菌的抑菌率均高达70％以上，对蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病病原菌的抑菌率高达100％。

Description

一株解淀粉芽孢杆菌cd5bc及其应用

技术领域

本发明属于生物防治领域，涉及一株解淀粉芽孢杆菌cd5bc及其应用，具体涉及一株对于辣椒疫病具有显著防治效果且同时对多种作物病害也具有高效防治效果的解淀粉芽孢杆菌、基于其得到的生防药剂及其应用。

背景技术

近些年来，利用化学药剂防治作物病害的弊端逐渐显现出来，主要表现为损伤土质、造成土壤污染以及农药残留等。在此背景下，生物防治技术，特别是利用微生物防治作物病害技术，越来越受到重视。

然而，目前用于防治作物病害的微生物面临着数量过少、效果较低的情况，限制了其实际的应用。

辣椒疫病、辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄黑星病、水稻稻瘟病、水稻纹枯病、蚕豆赤斑病和蚕豆褐斑病使常见的作物病害，一直以来对农业的生产造成了较大的影响。

现有技术中，虽然零星有可以防治某种作物病害的菌株的报道，如《内生解淀粉芽孢杆菌TB2菌株活性物质诱导辣椒果抗疫病的生化机理》，然而其防治效果却不尽人意，且还需进行繁复的活性物质的提取操作。在研究可同时高效防治多种作物病害菌株方面，现有技术也尚未得到令人满意的效果，主要表现在对各种作物的防治效果差异过大，不利于推广使用。

发明内容

针对现有技术的缺点，本发明的目的之一在于提供一株解淀粉芽孢杆菌cd5bc，该解淀粉芽孢杆菌cd5bc的分类命名为Bacillus amyloliquefaciens cd5bc，保藏于中国典型培养物保藏中心(武汉市武昌珞珈山中国典型培养物保藏中心(武汉大学)，邮编：430072)，保藏号为CCTCC NO:M 2016232，保藏时间为2016年4月28日。

本发明的发明人长期从事利用微生物防治作物病害方面的工作，经过大量的实验摸索，发明人从蚕豆叶片上分离得到了解淀粉芽孢杆菌cd5bc。如本发明的实施例所示，本发明的解淀粉芽孢杆菌cd5bc对于多种作物病原菌均有高效的抑菌效果和生防效果。

本领域技术人员容易理解，本发明对现有技术贡献之一在于找到了一种对辣椒疫病的防治效果高达80％以上(优于化学农药50％烯酰吗啉WG)，且还能对其它多种(至少8种)作物病害具有高效的防治效果的微生物菌株。

本发明的另一个目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌cd5bc在防治辣椒疫病、辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄黑星病、水稻稻瘟病、水稻纹枯病、蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病中任一种上的应用。

本发明的另一个目的在于提供由上述解淀粉芽孢杆菌cd5bc制备得到的生防药剂。所述生防药剂包括细菌发酵液、细菌冻干粉剂中的一种。

所述细菌发酵液中，细菌的菌体浓度为10⁹cfu/mL～10¹⁰cfu/mL。

所述细菌发酵液的制备方法为：活化生防细菌cd5bc后，用200μL的灭菌枪头蘸取菌液，然后连枪头一起至于NB培养液中摇培，150r/min，30℃下振荡培养24h，即得生防菌的发酵液。

在防治辣椒疫病时，所述应用的方法包括如下步骤：

在辣椒苗长出4叶时，在距根际1～2cm的土壤扎一个小洞，将解淀粉芽孢杆菌cd5bc的发酵液接种注入于辣椒根部，每株5mL。

在防治黄瓜枯萎病时，所述应用的方法包括如下步骤：

在黄瓜长出两片真叶时，用解淀粉芽孢杆菌cd5bc的发酵液灌根，每株25mL。

优选的，在上述应用过程中，所述解淀粉芽孢杆菌cd5bc的发酵液中菌体浓度为10⁹cfu/mL～10¹⁰cfu/mL。

本发明的有益效果：

1、本发明菌株对于辣椒疫病具有十分显著的防治效果，接种15天后生防效果高达100％，接种60天后生防效果高达82.36％；

2、本发明对多种作物病害均有优秀的抗病害效果，对辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄黑星病、水稻稻瘟病、水稻纹枯病、蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病的病原菌的抑菌率均高达70％以上，对蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病病原菌的抑菌率高达100％。

附图说明

图1为本发明菌株的培养性状图；

图2为本发明菌株的显微镜镜检结果图；

图3为本发明***发育分析图。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。

实施例1

本发明菌株解淀粉芽孢杆菌cd5bc(下简称cd5bc)的形态、培养特征：

cd5bc在NA基上呈淡黄色菌落，菌落扁平、圆形或近圆形，浸润带光泽，边缘不整齐。革兰氏染色呈阳性，杆状，两端钝圆，有芽孢，芽孢囊不膨大，芽孢椭圆形(图1)。根据形态特征初步判断菌cd5bc属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。显微镜镜检，如图2。

实施例2

16S rDNA序列分析：

经测序拼接后，菌株cd5bc扩增的16S rDNA序列长为1466bp，通过NCBI网站中的BLASTN对菌株cd5bc的16SrDNA序列与基因库中已知菌株的16S rDNA序列进行了同源性比较，并下载序列，利用MEGA建立***发育树。结果显示与生防菌cd5bc与Bacillusamyloliquefaciens的亲缘关系最近。根据形态特征及16S rDNA序列***发育分析结果，判定cd5bc为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens。

实施例3

cd5bc生防效果检测

1.平板抑菌效果

将病原物菌辣椒疫霉菌、辣椒菌核病菌、苦瓜枯萎病接于PDA平板上培养5天,用直径为5mm的打孔器从菌落边缘打菌饼,置于空白PDA平板中央,等距离分两边接入生防菌株的发酵液(划线),26.5℃恒温培养,待对照皿中病原物菌菌丝即将长满全皿时,测量菌体的生长半径,并计算抑制率,每株供试菌设4次重复。根据抑菌圈大小计算抑菌率。

结果见表1.

表1cd5bc对不同病原菌的生防效果

2.cd5bc对辣椒疫病的盆栽生防效果

在辣椒苗长出4叶时，将生防菌cd5bc的发酵液接种于辣椒根部；每株5mL，在距根际1～2cm的土壤扎一个小洞，将发酵液注入；以化学农药50％烯酰吗啉WG 1000倍液为平行对照，并设置空白对照；每个处理接种30株，3次重复。

生防菌接种2d后，在接种生防菌相同的位置接种辣椒疫霉菌，接种浓度为10⁴游动孢子/mL，接种量为3mL。接种辣椒疫霉菌15、30d和60d后，调查辣椒疫病的病情指数，并计算生防菌的生防效果。

结果表明：接种60d后cd5bc对辣椒疫病的防治效果达到82.36％，显著高于50％烯酰吗啉WG的防治效果。

表2cd5bc对辣椒疫病的盆栽生防效果

3.cd5bc对黄瓜枯萎病的盆栽生防效果

黄瓜长出两片真叶时，用cd5bc的发酵滤液灌根25mL；24h后采用根部切伤接种法接种黄瓜枯萎病病原菌，于灌药后7、14和28d调查发病情况，并调查防治效果。结果如表3所示。

表3cd5bc对黄瓜枯萎病的生防效果

Claims (9)

1.一株解淀粉芽孢杆菌cd5bc，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌cd5bc的分类命名为Bacillus amyloliquefaciens cd5bc，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M 2016232，保藏时间为2016年4月28日。

2.权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌cd5bc在防治辣椒疫病、辣椒菌核病、苦瓜枯萎病、黄瓜枯萎病、黄黑星病、水稻稻瘟病、水稻纹枯病、蚕豆赤斑病、蚕豆褐斑病中任一种上的应用。

3.由权利要求1所述解淀粉芽孢杆菌cd5bc制备得到的生防药剂。

4.根据权利要求3所述的生防药剂，其特征在于，所述生防药剂包括细菌发酵液、细菌冻干粉剂中的一种。

5.根据权利要求4所述的生防药剂，其特征在于，所述细菌发酵液中，细菌的菌体浓度为10⁹cfu/mL～10¹⁰cfu/mL。

6.根据权利要求4所述的生防药剂，其特征在于，所述细菌发酵液的制备方法为：将所述细菌活化后，接种入NB培养液中，于150r/min，30℃下振荡培养24h，即得所述细菌发酵液。

7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，在防治辣椒疫病时，所述应用的方法包括如下步骤：

在辣椒苗长出4叶时，在距根际1～2cm的土壤扎一个小洞，将解淀粉芽孢杆菌cd5bc的发酵液接种注入于辣椒根部，每株5mL。

8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，在防治黄瓜枯萎病时，所述应用的方法包括如下步骤：

在黄瓜长出两片真叶时，用解淀粉芽孢杆菌cd5bc的发酵液灌根，每株25mL。

9.根据权利要求7或8所述的应用，其特征在于，所述解淀粉芽孢杆菌cd5bc的发酵液中菌体浓度为10⁹cfu/mL～10¹⁰cfu/mL。