CN105842213B - 一种应用荧光猝灭法检测尿液中蛋白质含量的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种利用羟基磷灰石修饰CdTe量子点荧光猝灭检测尿液中蛋白质含量的方法。其特征在于：利用羟基磷灰石修饰CdTe量子点作为荧光探针，通过羟基磷灰石修饰CdTe量子点探针的荧光强度随蛋白质浓度的增加而增强的特性，进行高选择性和高灵敏检测，羟基磷灰石修饰CdTe量子点的荧光强度变化值与蛋白质浓度呈良好的线性关系，相关系数为0.991。本发明方法操作简单、快速，适用于临床检测分析。

Description

一种应用荧光猝灭法检测尿液中蛋白质含量的方法

技术领域

本发明提出的是设计一种检测尿液中蛋白质含量的方法。

背景技术

定性试验是用以筛选和粗略估计尿蛋白含量的方法。试验的方法有三种：磺柳酸法、加热醋酸法和试纸法。磺基水杨酸法和加热醋酸法都是根据浊度反应将无混浊或无沉淀定为阴性（一），将出现混浊或沉淀的定为阳性（+）。磺基水杨酸法操作简便，灵敏度高，可广泛用于普查，但其对白蛋白的灵敏度高于球蛋白，且影响因素较多，易造成假阴性或假阳性。加热醋酸法对白蛋白和球蛋白的灵敏度基本一致，影响因素少，准确性较高。

⑴磺基水杨酸法：这是目前医院化验室常用的方法。试剂的配制，称取磺基水杨酸3克，加蒸馏水至100毫升配成3%磺基水杨酸溶液。配好的溶液要贮存在棕色瓶内，放在不见阳光的暗处保存，以免失效。取一个干净的玻璃试管，加入尿液2毫升左右，然后用滴管在尿液上滴加试剂3～5滴，观察有无蛋白出现。根据混浊、沉淀和凝固的程度不同，确定“+”(加号）的多少。

⑵加热醋酸法：取一个玻璃试管，倒入被检查的尿液至三分之二处，加入2%醋酸或食醋数滴，用拇指和食指斜拿试管底部，放在火焰上（如洒精灯）直接将试管上端的尿液加热，经常转动试管，直到上端沸腾，观察有无混浊或出现沉淀凝固，根据程度判断加号。为了排除混浊不是由蛋白质引起的假阳性，应再加醋酸2～3滴或食醋十几滴，此时混浊不消失，则为阳性反应，说明是蛋白质。此法简单，不需要什么试剂，成为过去实验室检查尿蛋白常用的方法，现已被磺基水杨酸法代替。

⑶试纸法：试纸是一种预先由试剂厂制好的专门供尿蛋白定性试验用的试纸，在医药商店可以购买。该试纸用试剂液浸泡过，遇蛋白质显蓝色，并附有一个标准色板，根据所测出蓝色深浅与色板比对。方法比较简单，取一条试纸，浸入被检尿内，立即取出，约10～20分钟，观察有无蓝色显示，如无变化为阴性，显蓝色，则为阳性；碱性尿液可出现假阳性，因此，在试验前先用石蕊试纸检查一下尿的酸碱度，如为碱性（在pH=7.0以上），应先加几滴醋酸，使尿呈酸性再做。以上的三种方法均为尿蛋白定性检查，只说明尿内有无蛋白和相对多少，不能说出确切含量。

本发明，利用水溶性羟基磷灰石修饰量子点作为荧光探针，定量检测尿液中蛋白质的含量。该方法具有简单、快速、价格低廉、高灵敏度和高选择性等优点，实现对尿液中蛋白质含量的定量分析，对提高医生诊断的准确性有着重要意义。

发明内容

1建立工作曲线：配置一系列人血清白蛋白的浓度逐渐增加的标准溶液，每份溶液中加入相同量的羟基磷灰石修饰量子点，利用羟基磷灰石修饰量子点作为荧光探针检测溶液中蛋白质的含量，从荧光光谱图得出羟基磷灰石修饰量子点的荧光强度与蛋白质浓度之间的线性关系，即工作曲线。

2检测：将分析样品加入到羟基磷灰石修饰量子点溶液中，使得羟基磷灰石修饰量子点的浓度与上述各份标准溶液中的浓度相同，检测该分析试样溶液的荧光强度，根据所述工作曲线，确定分析试样中蛋白质的含量。

附图说明

图1为羟基磷灰石修饰量子点随牛血清白蛋白浓度增加的荧光光谱图；

图2为羟基磷灰石修饰量子点随牛血清白蛋白浓度增加的工作曲线。

具体实施方式

1建立工作曲线：取十一个比色管，分别加入1 ml 羟基磷灰石修饰量子点，依次加入蛋白质溶液（0 mg/mL，0.1 mg/mL，0.2 mg/mL，0.3 mg/mL，0.4 mg/mL，0.5 mg/mL，0.6mg/mL，0.7 mg/mL，0.8 mg/mL，0.9 mg/mL，和1 mg/mL），用pH值为7.4的PBS缓冲溶液定容至4 mL（量子点浓度2×10^-4 mol/L），室温下孵育5分钟后，用荧光分光光度计测得荧光F₀-F₁₁。用lg(F/F₀)为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标作图（如图2所示），得到工作曲线Y=1.3202X+0.7787，R²=0.991，检出限为0.0287 g/L。

2 实例一：将10 ml尿样，用1mol/L氢氧化钠调节至pH为7.4；取10 µL样品加入到羟基磷灰石修饰量子点溶液中，使得羟基磷灰石修饰量子点的浓度与上述各份标准溶液中的浓度相同，用荧光分析仪测定荧光，根据所述工作曲线确定分析试样中蛋白质的含量为0.1207 mg/mL，根据浊度反应测定该分析试样中蛋白质的含量为0.1209 mg/mL，检出率为99.8 %。

3 实例二：取一定量蛋白质标准溶液加入到羟基磷灰石修饰量子点溶液中，使得羟基磷灰石修饰量子点的浓度与上述各份标准溶液中的浓度相同，蛋白质浓度相当于1 g/L，用荧光分析仪测定荧光，根据所述工作曲线确定分析试样中蛋白质的含量为0.998 g/L，检出率为99.8 %。

4 实例三：取一定量蛋白质标准溶液加入到羟基磷灰石修饰量子点溶液中，使得羟基磷灰石修饰量子点的浓度与上述各份标准溶液中的浓度相同，蛋白质浓度相当于0.4mg/mL，用荧光分析仪测定荧光，根据所述工作曲线确定分析试样中蛋白质的含量为0.3992g/L，检出率为99.8 %。

5 对比例1：取一定量蛋白质标准溶液加入到羟基磷灰石修饰量子点溶液中，使得羟基磷灰石修饰量子点的浓度与上述各份标准溶液中的浓度相同，蛋白质浓度相当于0.04mg/mL，用荧光分析仪测定荧光，根据所述工作曲线确定分析试样中蛋白质的含量为0.0501mg/mL，检出率为125.2 %，说明超出检测范围误差太大。

6对比例2：取一定量蛋白质标准溶液加入到羟基磷灰石修饰量子点溶液中，使得羟基磷灰石修饰量子点的浓度与上述各份标准溶液中的浓度相同，蛋白质浓度相当于6mg/mL，用荧光分析仪测定荧光，根据所述工作曲线确定分析试样中蛋白质的含量为10.012mg/mL，检出率为166.9 %，说明超出检测范围误差太大。

Claims (3)

1.一种利用羟基磷灰石修饰CdTe量子点荧光猝灭检测尿液中蛋白质含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)建立线性关系：配置一系列浓度人血清白蛋白标准溶液，其中，人血清白蛋白的浓度逐渐增加，加入相同量的羟基磷灰石修饰CdTe量子点，利用量子点作为荧光探针检测溶液中的蛋白质的含量，从荧光光谱图得出CdTe量子点的荧光强度与蛋白质浓度之间的线性关系；2)检测：将分析样品加入到CdTe量子点溶液中，使得CdTe量子点的浓度与上述各份标准溶液中的浓度相同，检测该分析试样溶液的荧光强度，根据所述线性关系，确定分析试样中蛋白质的含量；

其中，所采用的羟基修饰CdTe量子点浓度为0.25mg/mL，检测的线性范围为0.1-1mg/mL；

所采用的羟基修饰CdTe量子点浓度为2×10^-4mol/L，检测的检出限为0.0287g/L。

2.根据权利要求1所述的方法，蛋白质浓度与F/F₀成反比例关系，其中F0为加入蛋白质前羟基磷灰石修饰CdTe量子点的荧光强度，F为加入蛋白质后羟基磷灰石修饰CdTe量子点的荧光强度。

3.根据权利要求1所述的方法，工作曲线回归方程为得到工作曲线Y＝1.3202X+0.7787，R²＝0.991。