CN105793301A - 制备层析材料的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种吸附剂材料，包括：多个交联的单乙烯基单体，定义一基质，疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基单体的体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲成为从约5到约9的pH范围；以及多个颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间。所述吸附剂用于层析管柱内以提升由血浆中分离时的免疫球蛋白G的结合力，因而分离出的免疫球蛋白G接着从吸附剂中被提取出来。所述吸附剂亦用于层析管柱内以提升由基因转殖乳类中分离时的免疫球蛋白G单株抗体的结合力，因而分离出的免疫球蛋白G单株抗体接着从吸附剂中被提取出来。

Description

制备层析材料的方法
相关申请的交叉引用
本案引用2013年11月17日提交的美国专利临时申请案，申请号为61/905,238，发明名称为“制备新的色谱层析材料的方法及用於高選擇性色谱层析法的新色谱层析材料”；以及2013年11月17日提交的美国专利临时申请案，申请号为61/905,239，发明名称为“制备混合型树脂的方法及用于高选择性色谱层析法的混合型树脂”，通过引用及主张上述申请案的优先权，将上述申请案的全部内容并入至本文中。
技术领域
本发明涉及一种制备新的树脂用于高选择性色谱层析的方法。
背景技术
以血浆作为为基础的产品在全球的需求量不断增加，因此寻求有效和经济的方法用于生物技术纯化产物。包括在上述方法的是多种蛋白质、酶、激素和其它来自于各种生理体液、自然资源和培养介质的生物活性化合物的纯化。有关于色谱层析领域的分离和纯化技术已得到相当多的关注。
目前对于现有的色谱层析材料中有效地且重要的应用于纯化的现有知识并不充分。纯化产品是用于治疗药物、化妆品和食品。例如，现有的色谱层析材料应用的缺点是：需要有预处理操作的多步骤纯化架构、在纯化过程中的材料损失较大，且所得产物收率低，产品成本高。
另一个问题涉及以原始人体血浆为起始分离和纯化免疫球蛋白(IgG)。目前的IgG纯化技术使用的是科恩步骤的Ⅱ+Ⅲ分馏物。然而，在上述纯化的阶段中，至少有30％的抗体是在许多制造步骤中失去。因此，商业收益率上，仅能得到低于50％的原始IgG抗体。
发明内容
本发明的实施例提供一种吸附剂材料，包括多个交联的单乙烯基单体，定义一基质。疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基单体的一体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲成为从约5到约9的pH范围，以及多個颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间。所述吸附剂用于层析管柱内以提升由血浆中分离时的免疫球蛋白G的结合力，因而分离出的免疫球蛋白G接着从吸附剂中被提取出来。所述吸附剂亦用于层析管柱内以提升由基因转殖乳类中分离时的免疫球蛋白G单株抗体的结合力，因而分离出的免疫球蛋白G单株抗体接着从吸附剂中被提取出来。
本发明的实施例是以新的高选择性色谱层析材料为基础。
本发明的实施例包括色谱层析材料及其应用。所述材料中为双功能性混合模式色谱层析材料，包括弱阳离子交换官能团和疏水性官能团、新型单官能阴离子交换树脂及色谱层析疏水相互作用的新材料。所述色谱层析材料被用以改善蛋白质、酶、糖蛋白、多糖，特别是各种原料来源的色谱纯化过程中。
本发明的实施例用以提升免疫球蛋白G的从人体原始(raw)血浆中分离与纯化效率，以用于治疗目的。
本发明的实施例包括从人体原始血浆中纯化免疫球蛋白G的方法。所述方法包括从人体原始血浆中通过本发明的色谱层析结构以层析纯化得到免疫球蛋白G。
本发明的部分实施例包括色谱层析结构以及其制备方法。所述色谱层析结构结合材料特性，包括离子交换、疏水性和所需孔径的原理。这些色谱层析材料提供本发明用于制造抗体的色谱层析方法的优点。其优点包括：避免前处理、取代离心步骤(或微孔过滤)、从原料来源高度选择性吸附示范、充分吸附回收、高流体力学特性、结构体积稳定性流速为600毫升/小时。
本发明材料的结构可应用于低压液相层析(LPLC)，可承受至少3巴下的压力。本发明所述双功能性混合模式材料或介质可以被整合为从不同的原始来源第一步获得的抗体(和许多其他蛋白质)。
相对于其他现有的树脂，本发明所述混合模式(如吸收剂材料或介质)提供约两倍的抗体结合能力。在免疫球蛋白G所需吸附条件下，PH值范围为6至7，提供使用混合模式得到高抗体纯度。本发明为使得一个新的疏水交互作用层析(HIC)具备所需的孔径尺寸，以用于研磨(IgG抗体完成纯化)。使用本发明实施例结构纯化IgG的方法由2至3个步骤组成。
本发明省去了离心和淡化的需要，因为离子交换容量高，疏水/亲水平衡且孔隙平均，例如，大的孔径。本发明的吸附剂材料包括必要活性组成以分离IgG和IgG单株抗体。
利用聚合物基质，本发明能够从血浆中分离IgG。并具有参数可调节的离子交换优化平衡、疏水性和亲水性，以及应用模拟性质得到通过彼此连通颗粒粒径大小和相关的孔隙度。
本发明避免了许多前置准备步骤以纯化血浆或基因转殖乳类，如本发明避免了避免前处理、取代离心步骤(或微孔过滤)、从原料来源高度选择性吸附示范、充分吸附回收、高流体力学特性、结构体积稳定性流速为600毫升/小时。结构适用于低低压液相层析(LPLC)和承受至少3巴下的压力。本发明的混合模式(例如，吸附材料)可以被整合为从各种原料来源的第一获得IgG(和许多其他的蛋白质)的步骤。
本发明的实施例包括一种从基因转殖乳类纯化人类免疫球蛋白G(IgG)的方法。所述方法包括色谱层析纯化人类免疫球蛋白G，如通过使用色谱层析结构及本发明的吸收剂材料从基因转殖乳类纯化人类免疫球蛋白G单株抗体。
本发明的实施例提供一种吸附剂材料(或介质)，包括多个交联的单乙烯基单体(如共聚单体)，定义一基质。疏水性单乙烯基单体(如共聚单体)与亲水性单乙烯基单体(如共聚单体)的体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲成为从约5到约9的pH范围，以及多個颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间。所述吸附剂用于层析管柱内以提升由血浆中分离时的免疫球蛋白G的结合力，因而分离出的免疫球蛋白G接着从吸附剂中被提取出来。所述吸附剂亦用于层析管柱内以提升由基因转殖乳类中分离时的免疫球蛋白G单株抗体的结合力，因而分离出的免疫球蛋白G单株抗体接着从吸附剂中被提取出来。
优选地，所述粒径介于约100微米至约200微米之间。
优选地，所述颗粒包括尺寸为约500埃至约3微米的多个孔隙。
优选地，所述孔隙之间彼此相互连接。
优选地，所述疏水性单乙烯基单体与所述亲水性单乙烯基单体的体积比例约为20:80。
优选地，所述基质可被缓冲至一约为7的pH值。
优选地，所述单乙烯基单体包括约0.1毫当量/毫升至约1.5毫当量/毫升的羧基。
优选地，所述羧基约为0.7毫当量/毫升。
优选地，所述单乙烯基单体选自以下组合中所组成的群组，包括：乙烯基酸，包括丙烯酸和疏水性乙烯基化合物；乙烯基酸，包括丙烯酸丁酯、叔丁酯、甲基丙烯酸丁酯、辛苯基丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯。
优选地，所述单乙烯基单体选自以下组合中所组成的群组，包括：含乙烯基的化合物，包括胺取代基；含乙烯基的化合物，包括烯基化胺取代基、丙烯胺类、N-烷基乙胺和二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯。
优选地，所述单乙烯基单体选自以下组合中所组成的群组，包括：含疏水性乙烯基的化合物，包括丙烯酸丁酯、丙烯酸叔丁酯、丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸丁酯和丙烯酸苯酯和甲基丙烯酸酯。
本发明另一实施例提供一种从血浆分离免疫球蛋白G(IgG)的方法，所述方法包括获得(或提供)吸附剂材料，包含：多个交联的单乙烯基单体，定义一基质，疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基单体的体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲成为从约5到约9的pH范围，以及多個颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间；将所述吸附剂材料置入一层析管柱內；以及使血浆通过所述层析管柱以分离出免疫球蛋白G。
优选地，所述方法更包括：从吸附剂材料分离由血浆所分离的免疫球蛋白G。
优选地，通过进行冲提从吸附剂材料分离由血浆所分离的免疫球蛋白G。
优选地，所述血浆为原始血浆。
优选地，所述原始血浆为哺乳动物血浆。
优选地，所述原始血浆为人体血浆。
本发明又一实施例提供一种从乳类乳清分离免疫球蛋白G(IgG)单株抗体的方法，其特征在于，包括：获得(或提供)吸附剂材料，包含：多个交联的单乙烯基单体，定义一基质，疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基单体的体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲为从约5到约9的pH范围，以及多個颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间；将所述吸附剂材料置入一层析管柱內；以及使所述乳类的乳清蛋白通过所述层析管柱以分离出免疫球蛋白G单株抗体。
优选地，所述乳类包括基因转殖乳类。
优选地，所述基因转殖乳类为哺乳动物乳。
除非另有定义，否则本文使用的所有技术和/或科学术语具有如本发明有关的领域中的普通技术人员通常的相同的含义来理解。尽管类似方法或等同于本文描述的材料可以在本发明实施例中实践或测试，以下将以例示性方法和/或材料进行说明。在冲突的情况下，专利说明书将控制定义。此外，材料、方法和实施例仅是说明性的，并不是必要限制。
附图说明
本发明在本文中描述的一些实施例，参考附图仅作为例示的方式。附图的详细说明，它强调的是通过举例的方式例示细节，并用于本发明实施例的说明性讨论的目的。在这点上，结合附图所作的描述使得本领域技术人员如何在本发明的实施例可以显而易见的实施。
所附图式：
图1为本发明方法流程示意图；
图2为本发明实施例中通过双功能性混合模式从未稀释人体原始血浆中纯化得到免疫球蛋白G(IgG)示意图；
图3为本发明实施例中通过离子交换方式从人体原始血浆中纯化得到免疫球蛋白G(IgG)示意图；
图4为本发明实施例中从人体血浆中纯化得到免疫球蛋白G(IgG)示意图；
图5为本发明另一方法流程示意图；
图6为本发明实施例中乳清蛋白在色谱层析管柱中的吸附试验示意图；
图7为本发明实施例中乳清蛋白层析示意图；
图8为本发明实施例中乳清蛋白通过大孔隙尺寸于乳清的初始PH值层析示意图；以及
图9为本发明实施例中通过小孔隙管柱层析乳清蛋白的层析示意图。
具体实施方式
I.从原始血浆中纯化得到免疫球蛋白G(IgG)
一开始注意参照图1，
一个流程图，详细说明了一个例示性的从血浆中纯化抗体的过程及/或流程，例如，从人体血液中的原始人体血浆。所述流程图的方块也被引用在整个本段落。
最初，在方块102为吸附剂被制备。然后在方块104装入一个色谱层析管柱。过程移动到方块106，所述血浆，例如原始人体血浆，通过装载入色谱层析管柱的吸附剂来分离免疫球蛋白G，在方块106，被分离的免疫球蛋白G被黏附到吸附剂。
步骤从方块106块到方块108的过程中，其中分离的免疫球蛋白G被从吸附剂洗脱，以获得分离的免疫球蛋白G。在方块110，这种分离的免疫球蛋白G现在适合于许多产品。
回到方块106，未结合吸附剂的色谱层析管柱的非免疫球蛋白G产物，可选择性收集。这些产物可能再次通过装载相同吸附剂的色谱层析管柱，或一个不同的，但类似的装载相同吸附剂的色谱层析管柱，例如，包括本发明的吸附剂。之后过程返回到方块106，从该处继续。
只要有需要，方块102、104、106、108、110和方块112的过程可能会重复。
A.吸附剂制备(混和模式制备)(图1方块102)
制造结构的方法，例如，基质的聚合物单体，例如，交联和疏水性单体(例如，共聚单体)和亲水性单体(例如，共聚单体)，将如下所述。包括自由基共聚的方法，包括悬浮聚合构成的预聚合阶段。
本发明的一实施例包括共聚单体，优选地，包括单乙烯基单体，选自任何弱酸性单乙烯基酸组合中所组成的群组，例如包括丙烯酸和疏水性乙烯基化合物；乙烯基酸，如丙烯酸丁酯、叔丁酯、甲基丙烯酸丁酯、辛苯基丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯。
另外，共聚单体是从一组包括任何弱碱性乙烯基化合物中如胺取代基，包括烯基化胺取代基、丙烯胺类、N-烷基乙胺和二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯。
另外，单乙烯基共聚单体是由一组包括疏水性的乙烯化合物如丙烯酸丁酯、叔丁酯、甲基丙烯酸丁酯、辛苯基丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯。这些材料是新的疏水交互作用层析树脂。
例如，基于体积，疏水性乙烯基单体与亲水性乙烯基单体的比例约为5∶95至约为40:60，例如，约20:80。所述吸附剂材料，例如单乙烯基单体包括约0.1毫当量/毫升至约1.5毫当量/毫升的羧基。
对于上述单体的交联剂，例如，共聚单体，为例如长链的交联剂中具有至少两个重复碳基团，优选为2-10个重复碳基团。交联剂是聚乙烯单体，选自以下所组成的群组：1,3,5-三丙烯酰基六氢(HTA)、三烯丙基异氰酸酯(TAIC)、苯二甲基丙烯酰胺(p-PHDMA)、Ν，Ν'-乙烯二甲基丙烯酰胺(EDMA)、N，N'-六亚甲基二甲基丙烯酰胺(HMDMA)、季戊四醇三丙烯酸酯(PETA)，和季戊四醇四丙烯酸酯(PETETA)。
本发明的色谱层析材料以自由基聚合方法为基础。在所述方法中的引发剂选自以下所组成的群组：1，1'-偶氮过硫酸铵、1，1'偶氮(环己烷)。共聚单体和引发剂在溶液中被配制，优选选自有机溶剂，例如有机溶剂的混合物。
另外地或任选地，共聚单体和引发剂被配制的溶液中，其优选是聚乙二醇和丁醇、环己基和癸基醇、月桂醇的混合物中。任选地，共聚合溶液包含乙酸和聚乙二醇、甲酰胺、丁醇、环己基和癸基醇的混合物。预聚合阶段包括在所选择的溶剂中溶解共聚单体和引发剂。
共聚单体混合物与所选择的溶剂的范围例示性比值为从1到4。一种例示性溶剂用以配制一预聚合混合物包括溶剂组成的混合物。所有聚合物的配制都是由具有一预聚合步骤的悬浮聚合法制备。分散介质包括无机盐的水溶液，分散介质的比率，以预聚合步骤约1至4或约1至5体积/体积为优选。
所有聚合物的结构由具有一预聚合步骤的悬浮聚合法制备。单乙烯基单体、交联剂及引发剂皆溶解于所选择的溶液中。在预聚合步骤中自由基聚合产生的温度为50℃至80℃，以达到所需的粘度。粘性预聚合的分散体在分散介质中70℃-80℃的温度下掺入，最终产物在80℃-95℃产出。一分散介质是20％硫酸钠溶液及/或选择性加入氯化钠水溶液产生。
所得的产物被制备称为球形颗粒(颗粒)，粒径(平均粒径，例如直径)介于约10微米至约300微米之间，例如大约为100微米至约200微米。所述粒子(例如颗粒)包括尺寸为约500埃至约3微米的多个孔隙，所述孔隙之间彼此相互连接。所述粒子由冰醋酸、水、氢氧化钠(NaOH)、盐酸(HCl)及水洗涤而制备。洗涤后，颗粒是湿分离的
制备好的吸附剂装入色谱层析管柱。吸附剂由一缓冲溶液为0.1M醋酸钠以约5至约9的pH值达到平衡，并且，例如管柱中pH值约为7。血浆，例如为人体血亦取得的原始人体血浆，由初始pH值7.4装入管柱中。通过一平衡缓冲液冲洗所述管柱后，将吸附于管柱的免疫球蛋白G进行脱离结合。脱离结合是通过用0.1M柠檬酸盐缓冲液在不同pH值为5、5.5、6.0的梯度进行，在结束时使用1M氢氧化钠。
一些例子来说明本发明结构的可能性。所得的资料是通过本发明的吸附剂材料或介质从原始人体血浆中分离和纯化的免疫球蛋白G。从原料开始血浆高选择吸附的结果在第一步骤和第二步骤。完全纯化(分离)IgG在第三步骤中进行。吸附、洗脱条件提供分离出的IgG纯度高、完成度高的目的。这是由于，例如，因素和参数，如吸附-洗脱的pH值、结构的亲水性-疏水性平衡和孔径的尺寸。
下面描述的实施例是非限制性的，因此，并不限制本发明的实施例色谱层析材料的聚合物的广泛应用的可能性。
A.1.混和模式(吸附剂)制备
实施例
在250毫升烧瓶装有搅拌器、氩气进气管和滴液漏斗。所述烧瓶中倒入120毫升的20％硫酸钠和氩气泡20分钟。同时，加入2毫升的苯基丙烯酸甲酯、3毫升甲基丙烯酸、0.921克HTA、2毫升月桂酸醇、11毫升丁醇、11毫升环己醇。共聚单体溶解后加入0.06克1,1'-偶氮环己烷。聚合反应在60℃的温度下进行10分钟，得到的粘度预聚物。预聚物被分散到120毫升20％硫酸钠。温度维持在60℃至70℃持续30分钟。然后将温度升高到100℃，所述反应在所述温度下持续1小时。下一步，冷却至温度约25℃以下后，将得到的球形颗粒，从所述分散体分离。颗粒随后用冰醋酸洗涤，然后用水，之后再用1MNaOH水溶液，然后用1M的盐酸水溶液，最后用水洗涤。产率为5.6克，所制备的共聚物在湿状态下分馏的分级：200微米、100微米和小于100微米。
所术颗粒具有约1000埃的平均尺寸的多个孔，各个孔之间相互连通。所述疏水性共聚单体与所述亲水性共聚单体的体积比例约为20:80，所述羧基(来自甲基丙烯酸)离子交换的离子浓度约为0.7毫当量/毫升(毫当量/毫升)。
B.从原始人体血浆层析的免疫球蛋白G
4毫升混合模式100微米-200微米颗粒(颗粒)的分馏液被导入(装载)到管柱(图1，方块104)，具有1.6厘米的内直径及2厘米高度，并且用1MNaOH和1MHCl和蒸馏水(DW)被调节。最后，所述吸附剂用0.1M乙酸盐缓冲液在pH值7下管柱的平衡吸附：原始人体血浆的流速为0.6毫升/分(图1，方块106)。
冲洗：PH值为7的0.1M醋酸缓冲液。
洗脱：0.1M柠檬酸缓冲液在不同pH值：5、5.5、6及在1MNaOH(图1，方块108)。
色谱层析分离的结果示于图2-4。有从管柱(图表)洗脱的蛋白质和冲提峰值减少12.5％SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析用考马斯亮蓝G-250染色的概况。
图2为根据弱酸和疏水性共聚单体显示的分离图表和还原电泳(PAGE)通过双功能性混合模式从未稀释人体原始血浆中一步骤纯化得到免疫球蛋白G(IgG)。根据电泳图像线2分离图表的冲提分馏液5、根据电泳图像线3的冲提分馏液6、根据电泳图像线4的冲提分馏液7、根据电泳图像线5的冲提分馏液8。冲提分馏液的电泳分析展现分离的免疫球蛋白G具高纯度而没有人类血清白蛋白的混合物。通过1M氢氧化钠完成洗脱证明缺乏A280nm的吸收，因而不具有任何的蛋白质。
如图3所示，根据一分离图表和还原电泳(PAGE)通过使用一离子交换树脂从未稀释人体原始血浆中一步骤纯化得到免疫球蛋白G(IgG)。流洗分馏液1-4以及图表上的冲洗结果是根据电泳图像上的线1和线2。全血清白蛋白在流洗过程被分离且无免疫球蛋白G。冲提分馏液7-18为根据电泳图像线3、4、5、6。其确实示出免疫球蛋白G的充分吸附并没有混合人类血清白蛋白。冲提分馏液21-27为根据图3中电泳图像线7，此处显示不具有任何蛋白质。冲提分馏液21-27在波长A280nm的高吸收由于在1M氢氧化钠溶解低分子外来物。
在图4中，根据一分离图表和还原电泳(PAGE)通过使用HIC材料从未稀释人体原始血浆中一步骤纯化得到免疫球蛋白G(IgG)流洗分馏液1-3以及图表上的冲洗结果是根据电泳图像上的线1。冲提分馏液6-8为根据电泳图像线2。根据标记线3，其显示分离的免疫球蛋白G具高纯度而没有人类血清白蛋白的混合物或其它血浆蛋白。冲提分馏液10-12为根据电泳图像线4。显示不具有任何蛋白质。冲提分馏液10-12在波长A280nm的高吸收是由于溶解了低分子外来物。所有三个附图电泳结果证明充分吸附并恢复，因为以1MNaOH处理结束吸附后的色谱层析管柱-冲提结果显示不具有任何蛋白质。
II.从基因转殖乳类中纯化得到免疫球蛋白G(IgG)
最初注意图5，为从基因转殖乳类中纯化得到免疫球蛋白G单株抗体的一例示性流程及/或步骤详细流程示意图。例如，所述乳类包括基因转殖乳类。所述流程图的方块也被引用在整个本段落。
最初，在方块502为吸附剂被制备。然后在方块504装入一个色谱层析管柱。过程移动到方块506，其中所述乳清蛋白呈液态，以下简称为乳清，通过装载入色谱层析管柱的吸附剂来分离免疫球蛋白G单株抗体，在方块506，被分离的免疫球蛋白G单株抗体被黏附到吸附剂。
进入方块506之前，于方块505，所述乳清取自于现有技术中从牛乳中取得乳清的基因转殖乳类。例如为了生产乳清，基因转殖乳类被加热并加入粗制凝乳酶或可食用酸，其造成基因转殖乳类凝固或凝结，从液体乳清可分离出乳固体(凝乳)。
步骤从方块506块到方块508的过程中，其中分离的免疫球蛋白G单株抗体被从吸附剂洗脱，以获得分离的免疫球蛋白G单株抗体。在方块510，这种分离的免疫球蛋白G现在适合于许多产品。
回到方块506，未结合吸附剂的色谱层析管柱的非免疫球蛋白G单株抗体产物，可选择性收集，于方块512。
只要有需要，方块502、504、506、508、510和方块512的过程可能会重复。
A.吸附剂制备(混和模式制备)(图1方块502)
所述混和模式(吸附剂)，如新合成树脂及其制备方法，用以与部分重要材料特性结合，包括离子交换、疏水性、孔隙度的原理。
混和模式吸附剂被装入色谱层析管柱。所述吸附剂由一pH值为6的0.1M乙酸钠缓冲溶液在管柱中平衡。乳类乳清(牛奶释放酪蛋白)由pH值4.5处理至pH值为7(几滴1N氢氧化钠)，并被装入所述管柱中。通过一平衡缓冲溶液对结合免疫球蛋白G的所述管柱进行冲洗。通过用0.36M醋酸铵(乙酸铵)缓冲剂溶液阶段式梯度冲提产生不同PH值为PH5、PH6、PH7及PH8，最后再使用1N的氢氧化钠。
一些例子来说明本发明的结构的可能性。所得的资料与本发明的结构和介质中的乳清蛋白的分离和纯化有关。结果表明，所有乳清蛋白中多数免疫球蛋白G都由新结构所吸附。高度纯化和完全的还原的吸附状况提供了蛋白质纯化上相当好的前景。这是由于，例如，因素和参数，如吸附-洗脱的pH值、结构的亲水性-疏水性平衡和孔径的尺寸。
所述的实施例不用以限制本发明实施例的聚合物色谱材料广泛应用的可能性。
所述吸附剂材料的制备符合前述吸附剂材料或介质。
A.1.混和模式(吸附剂)制备
所述吸附剂的制备与前述实施例“混和模式制备”相同。
B.乳清蛋白的层析
4毫升100微米至200微米的混和模式组份被装入内径为1.6公分、高度为2公分的管柱内，并且加入1M氢氧化钠及1M盐酸调整。最后，所述吸附剂由PH值为4.7的0.1M醋酸盐缓冲液衡平管柱吸附:50毫升乳类乳清的流速为0.6毫升/分。
冲洗：PH值为4.7的0.1M醋酸缓冲液。
洗脱：0.36M醋酸铵缓冲液在不同pH值：4.5、5、5.2、5.5、60.、7.0、8.0及最后为1M氢氧化钠。
色谱层析分离的结果示于图7、图8及图9。有用考马斯亮蓝G-250染色显示从管柱(图表)洗脱的蛋白质和冲提峰值减少12.5％SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析的概况。
图6为乳清蛋白在混和模式树脂的吸附测试，线1呈现最初的原始乳清蛋白。
线2、线3为由大孔径混和模式管柱层析后以PH值5到PH5.5的0.36M乙酸铵缓冲液冲提的分馏成分。
所获得的数据表明，根据最初的原始乳清蛋白(线3)的内容，所有乳清蛋白在大孔隙混合模式(带5、6)的吸附。亦呈现免疫球蛋白G的吸附。低分子量的乳清蛋白由小孔隙新结构(带1、2)所分离。新结构的理想吸附和冲提条件取决于不同的孔径大小、疏水性的贡献、和免疫球蛋白G(免疫球蛋白G单株抗体)纯化允许实现的PH值。
图7为乳清蛋白通过大孔隙混合模式树脂(如吸附剂材料)的层析。其显示免疫球蛋白G(如免疫球蛋白G单株抗体)和其他蛋白质(带3、4)被纯化。针对免疫球蛋白G的纯化，吸附-脱附的PH理想状况值是必要的。
图8为乳清蛋白通过大孔隙混合模式树脂(如吸附剂材料)于乳清的起始PH值的层析。通过数据显示于乳清蛋白起始PH值的吸附允许从低分子量(MM)蛋白质的第二步骤分离。
图9为乳清蛋白通过具小尺寸孔隙及相当疏水性质量的混合模式树脂(如吸附剂材料)于乳清的起始PH值的层析。呈现的数据显示具小尺寸孔隙及所需疏水性作用使得小分子量蛋白质得以分离。在PH值为4的吸附条件是乳清蛋白的初始pH值。
术语“包括”，“包含”，“包括”，“包含”，“具有”和它们的组成的意思是“包括但不限于”。此术语包括术语“由...组成”和“基本上由...组成”。
所述用语“基本上组成”是指所述组合物或方法可包括另外的成分和/或步骤，但只有当另外的成分和/或步骤不实质上改变所要求保护的组合物或方法的基本和新颖特征。
如本文中所使用的，单数形式“一”，“一个”和“所述”包括复数引用，除非上下文另有明确说明。例如，术语“化合物”或“至少一种化合物”可包括多种化合物，包括它们的混合物。
“例示性”用语在本文中用于表示“用作例示，实例或说明”。为优选的或优于其它实施例被描述为“例示性”的任何实施例不一定被解释和/或排除来自其它实施例的特征结合。
“任选地”在本文中使用用语的意思是“在一些实施例中提供，而不在其他实施例中提供”。本发明的任何特定实施例可包括多个“可选的”特征，除非此类特征冲突。
在整个本申请中，本发明的各种实施方式可以以范围的形式呈现。但是应当理解的是，范围形式的描述仅仅是为了方便和简洁，不应该被解释为对本发明的范围的限制。因此，范围的描述应当被认为具有具体公开该范围内的所有可能的子范围以及单独的数值。例如，范围的描述，例如从1到6应被认为具有具体公开的子范围如从1到3、从1到4、从1到5、从2到4、从2到6、从3到6等、以及在这个范围内个体数例如，1，2，3，4，5，和6。这适用于不考虑范围的宽度。
每当数值范围在本文中所指出的，它是指包括任何引用标号指示的范围内(分数或整数)。短语在第一指示数字和第二指示数字以及第一指示数字“到”第二指示数字在本文中可互换使用“测距/范围从”并且意味着包括第一和第二指示数字“范围内/范围之间”和其间的所有分数和整数。
当表达量、范围和大小、尺寸和其它可测量的量词语“大约”和“约”可以互换使用。
可以理解，本发明的某些功能，其中，为清楚起见，在单独实施例的上下文中描述的，也可以组合在单个实施例中提供。相反地，本发明的各种特征，这是为简明起见，在单个实施例的上下文中描述，也可以单独地或以任何合适的子组合或适合于本发明的任何其他描述的实施例提供。在各种实施例的上下文中描述的某些特征不应被认为是那些实施方案的必要特征，除非该实施例是没有那些组件不起作用。
尽管本发明已经结合其具体实施方案结合进行了描述，显而易见的是，许多替换，修改和变化将是显而易见的那些熟练的技术人员。因此，其意在涵盖落入所附权利要求的精神和广泛范围内的所有此类替换，修改和变型。
在本说明书中提及的所有出版物，专利和专利申请在此整体并入作为参考入本说明书中，以相同的程度如同每个单独的出版物，专利或专利申请被具体和单独地指出通过引用并入本文。此外，引用或在本申请中任何参考文献的标识不应当被解释为承认这样的参考文献可作为现有技术的本发明。到该部分的标题使用的情况下，它们不应该被解释为必要的限制。

Claims (20)

1.一种吸附剂材料，其特征在于，包括：
多个交联的单乙烯基单体，定义一基质，疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基单体的一体积比例约5:95至约40:60，
所述基质可被缓冲成为从约5到约9的pH范围；以及
多个颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间。
2.根据权利要求1所述的吸附剂材料，其特征在于，所述粒径介于约100微米至约200微米之间。
3.根据权利要求2所述的吸附剂材料，其特征在于，所述颗粒包括尺寸为约500埃至约3微米的多个孔隙。
4.根据权利要求3所述的吸附剂材料，其特征在于，所述孔隙之间彼此相互连接。
5.根据权利要求1所述的吸附剂材料，其特征在于，所述疏水性单乙烯基单体与所述亲水性单乙烯基单体的体积比例约为20:80。
6.根据权利要求1所述的吸附剂材料，其特征在于，所述基质可被缓冲至一约为7的pH值。
7.根据权利要求1所述的吸附剂材料，其特征在于，所述单乙烯基单体包括约0.1毫当量/毫升至约1.5毫当量/毫升的羧基。
8.根据权利要求7所述的吸附剂材料，其特征在于，所述羧基约为0.7毫当量/毫升。
9.根据权利要求1所述的吸附剂材料，其特征在于，所述单乙烯基单体选自以下所组成的群组：乙烯基酸，包括丙烯酸和疏水性乙烯基化合物；乙烯基酸，包括丙烯酸丁酯、叔丁酯、甲基丙烯酸丁酯、辛苯基丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯。
10.根据权利要求1所述的吸附剂材料，其特征在于，所述单乙烯基单体选自以下所组成的群组，包括：含乙烯基的化合物，包括胺取代基；含乙烯基的化合物，包括烯基化胺取代基、丙烯胺类、N-烷基乙胺和二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯。
11.根据权利要求1所述的吸附剂材料，其特征在于，所述单乙烯基单体选自以下所组成的群组，包括：含疏水性乙烯基的化合物，包括丙烯酸丁酯、丙烯酸叔丁酯、丙烯酸丁酯、甲基丙烯酸丁酯和丙烯酸苯酯和甲基丙烯酸酯。
12.一种从血浆分离免疫球蛋白G(IgG)的方法，其特征在于，包括：
获得一吸附剂材料，包含：
多个交联的单乙烯基单体，定义一基质，疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基单体的一体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲成为从约5到约9的pH范围；以及
多个颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间；
将所述吸附剂材料置入一层析管柱内；以及
使血浆通过所述层析管柱以分离出免疫球蛋白G。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，更包括：从所述吸附剂材料分离由所述血浆所分离出的免疫球蛋白G。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，通过进行冲提从所述吸附剂材料分离由所述血浆所分离出的免疫球蛋白G。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述血浆为原始血浆。
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述原始血浆为哺乳动物血浆。
17.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述原始血浆为人体血浆。
18.一种从乳类的乳清分离免疫球蛋白G(IgG)单株抗体的方法，其特征在于，包括：
获得一吸附剂材料，包含：
多个交联的单乙烯基单体，定义一基质，疏水性单乙烯基单体与亲水性单乙烯基单体的一体积比例约5:95至约40:60，所述基质可被缓冲成为从约5到约9的pH范围；以及
多个颗粒，粒径介于约10微米至约300微米之间；
将所述吸附剂材料置入一层析管柱内；以及
使所述乳类的乳清蛋白通过所述层析管柱以分离出免疫球蛋白G单株抗体。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述乳类包括基因转殖乳类。
20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述基因转殖乳类为哺乳动物乳。
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