CN105722518A - 使用溶瘤腺病毒的脑癌治疗 - Google Patents

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Abstract

本公开内容涉及使用溶瘤腺病毒来治疗在成视网膜细胞瘤(Rb)途径中具有突变的脑癌的组合物和方法，所述溶瘤腺病毒包含在E1A的Rb结合位点中的改变，和***在Ad纤维蛋白中的靶向基序。所述腺病毒能够杀死肿瘤细胞而不损伤具有野生型成视网膜细胞瘤途径的细胞。

Description

使用溶瘤腺病毒的脑癌治疗
本申请要求于2013年6月18日提交的美国临时申请序列号61/836,230的优先权权益，其全部内容在此通过引用并入。
发明背景
A.发明领域
本发明一般性地涉及医药和肿瘤学领域。更特别地，本发明涉及使用溶瘤腺病毒来在患者中治疗胶质瘤的组合物和方法。
B.相关技术说明
癌症的发生被理解为是通过遗传改变的积累所发生的复杂、多步骤生物学进程的结果。这些改变中的很多(如果不是全部)都涉及特定的细胞生长控制基因。这些基因通常分为两类：原癌基因(proto-oncogene)和肿瘤抑制基因。这两类基因的突变通常都对含有改变之遗传物质的细胞赋予了生长优势。
与原癌基因相反，肿瘤抑制基因的功能是对抗细胞增殖。当通过如点突变或缺失使肿瘤抑制基因失活时，细胞中控制生长的调控机制被打乱。已经将成视网膜细胞瘤肿瘤抑制剂基因的功能突变和/或丧失与肿瘤形成相关联。在一些情况下，脑瘤是从中枢神经***(centralnervoussystem，CNS)外部的原发性肿瘤向脑部的转移瘤。由转移瘤衍生的脑瘤通常比脑部的原发性脑瘤更常见。转移至脑的最常见原发性肿瘤是肺瘤、乳腺瘤、黑素瘤和肾瘤。这些脑转移瘤通常发生在多个部位，但也可能发生孤立性转移瘤。
由于常规治疗通常失败并且具有毒性，因此基因治疗是用于脑瘤(包括胶质瘤在内)的有前景的治疗。另外，对导致恶性肿瘤之遗传异常的鉴定提供了关键性的分子遗传信息从而有助于设计基因治疗。肿瘤进展中显示的遗传异常包括肿瘤抑制基因失活以及多种生长因子和致癌基因(oncogene)过表达。肿瘤治疗可通过提供编码治疗性多肽的多核苷酸或者提供靶向肿瘤之突变及由此导致的异常生理状况的其他治疗剂来实现。肿瘤细胞与正常细胞的区别之处正是这些突变和异常生理状况。肿瘤选择性病毒将会是用于基因治疗的有前景的工具。已将病毒如何复制的知识的最新进展应用于设计肿瘤选择性溶瘤病毒。在胶质瘤中，已表明有三类病毒可用于动物模型：可选择性地在ras途径激活的肿瘤中进行复制的呼肠孤病毒(Coffey等，1998)；经遗传改变的单纯疱疹病毒(Martuza等，1991；Mineta等，1995；Andreanski等，1997)，其包括可通过正常细胞和癌细胞中蛋白质的差别表达激活的那些(Chase等，1998)；以及不能表达E1B55kDa蛋白并用于治疗p53-突变肿瘤的突变腺病毒(Bischof等，1996；Heise等，1997；Freytag等，1998；Kirn等，1998)。总而言之，这些报道确认了溶瘤病毒作为抗癌剂的相关性。在全部三种***中，目标均是病毒的瘤内扩散和选择性地杀灭癌细胞的能力。在关键点处靶向细胞途径的经遗传修饰腺病毒在胶质瘤中同时具有强力和选择性的抗癌作用。
由于大多数胶质瘤中存在p16/Rb/E2F途径的异常，因此已注意到对Rb途径的靶向与胶质瘤治疗的相关性(Fueyo等，1998a；Gomez-Manzano等，1998)。通过转移p16和Rb基因替代丧失的肿瘤抑制活性来靶向该途径已产生了细胞抑制效应(Fueyo等，1998a；Gomez-Manzano等，1998)。由于外源野生型E2F-1诱导细胞凋亡并且抑制体内肿瘤生长，因此E2F-1的转移产生了强效的抗癌作用(Fueyo等，1998b)。然而，用现有的腺病毒构建体治疗人胶质瘤实际上并不能影响肿瘤的显著部分，这主要是因为复制缺陷型腺病毒载体不能够复制并感染其它细胞，从而不能将外源核酸转移至足够数量的癌细胞(Puumalainen等，1998)。尽管对p16/Rb/E2F途径的靶向产生了体内抗癌作用，但是载体***的这一缺陷限制了所述基因的体内治疗效果。
仍然需要用于癌症(特别是脑瘤)的另外治疗，其包括构建能够进行细胞特异性复制的另外的溶瘤病毒。另外的治疗包括具有治疗能力或者能够被体内追踪的腺病毒。
发明内容
因此，根据本发明，提供了用于在人患者中治疗胶质瘤的方法，其包括a)鉴定患有胶质瘤的患者；和b)使胶质瘤与溶瘤腺病毒接触，所述溶瘤腺病毒具有不能结合Rb的E1A多肽并且包含在H1结构域中***有RGD氨基酸的纤维蛋白，其中治疗引起以下中的一项或更多项：i)肿瘤负荷降低大于25％；ii)六个月的无进展存活；和iii)肿瘤坏死，并且所述治疗不产生由所述溶瘤腺病毒引起的足以导致所述治疗终止的不良事件。观察到i)至iii)中的2项或更多项，或者观察到i)至iii)中的全部三项。所述对象还可表现出针对所述胶质瘤的自身免疫应答。肿瘤响应可包括如通过对比MRI所确定的更小的明确肿瘤边界(definedtumorborder)。
所述溶瘤腺病毒可以是Δ24腺病毒。步骤a)可包括肿瘤成像，并且所述方法还可包括在步骤a)之后且在步骤b)之前获得所述肿瘤的活组织检查。所述胶质瘤可以是星形细胞瘤、少突胶质瘤、间变性胶质瘤、成胶质细胞瘤、室管膜瘤、脑脊膜瘤、松果体区肿瘤、脉络丛肿瘤、神经上皮瘤、胚胎性肿瘤、外周神经母细胞性肿瘤、脑神经肿瘤、造血***肿瘤、生殖细胞瘤或鞍区肿瘤。所述胶质瘤可以是复发性的，和/或一种或更多种首次胶质瘤治疗已对所述胶质瘤失效。
所述胶质瘤可以是可切除的或不可切除的。可在所述治疗之后切除胶质瘤。可用所述溶瘤腺病毒处理切除后的瘤床(tumorbed)。可通过将腺病毒颅内递送到患者中来使胶质瘤与腺病毒接触。所述递送可包括瘤内注射，可包括多次注射，例如将切除后的导管植入所述患者中并经所述导管递送所述溶瘤腺病毒。可通过用针在最短10分钟的时间段内缓慢输注来施用所述溶瘤腺病毒。可立体定向地将溶瘤腺病毒施用到所述患者胶质瘤中的多于一个部位。剂量可以是向患者施用约103至约1015病毒颗粒，约105至约1012病毒颗粒，或者向患者施用约107至约1010病毒颗粒。所述治疗可包括以1×107、3×107、1×108、3×108、1×109、3×109、1×1010和3×1010病毒颗粒给药，包括剂量递增。
所述方法还可包括向患者施用第二治疗，其中所述第二治疗是抗血管生成治疗、化学治疗、免疫治疗、外科手术、放射治疗、免疫抑制剂或使用治疗性多核苷酸的基因治疗。可在施用包含溶瘤腺病毒的组合物之前向患者施用第二治疗，在施用包含溶瘤腺病毒的组合物的同时向患者施用第二治疗，或者在施用包含溶瘤腺病毒的组合物之后向患者施用第二治疗。所述化学治疗可包括烷化剂、有丝***抑制剂、抗生素或抗代谢物。所述第二治疗可特别地包括放射治疗和替莫唑胺。
可基于Th1应答的存在进一步选择对象。所述Th1应答可以抗原特异性干扰素-γ(IFN-γ)、IL-12和补体固定抗体(complement-fixingantibody)的增加为特征。
在另一个实施方案中，提供了用于在人患者群体中治疗胶质瘤的方法，其包括a)鉴定患有胶质瘤的患者；和b)使胶质瘤与溶瘤腺病毒接触，所述溶瘤腺病毒具有不能结合Rb的E1A多肽并且包含在H1结构域中***有RGD氨基酸的纤维蛋白，其中所述群体的治疗引起以下中的一项或更多项：i)30％的所述患者具有临床益处，其中临床益处定义为完全响应者+部分响应者加疾病稳定；ii)25％的六个月无进展存活；和iii)响应者具有12个月的中值存活，其中所述响应者定义为完全响应者+部分响应者。
所述溶瘤腺病毒可以是Δ24腺病毒。步骤a)可包括肿瘤成像，并且所述方法还可包括在步骤a)之后且在步骤b)之前获得所述肿瘤的活组织检查。所述胶质瘤可以是星形细胞瘤、少突胶质瘤、间变性胶质瘤、成胶质细胞瘤、室管膜瘤、脑脊膜瘤、松果体区肿瘤、脉络丛肿瘤、神经上皮瘤、胚胎性肿瘤、外周神经母细胞性肿瘤、脑神经肿瘤、造血***肿瘤、生殖细胞瘤或鞍区肿瘤。所述胶质瘤可以是复发性的，和/或者一种或更多种首次胶质瘤治疗已对所述胶质瘤失效。
所述胶质瘤可以是可切除的或不可切除的。可在所述治疗之后切除胶质瘤。可用所述溶瘤腺病毒处理切除后的瘤床。可通过将腺病毒颅内递送到患者中来使胶质瘤与腺病毒接触。所述递送可包括瘤内注射，可包括多次注射，例如将切除后的导管植入所述患者中并经所述导管递送所述溶瘤腺病毒。可通过用针在最短10分钟的时间段内缓慢输注来施用所述溶瘤腺病毒。可将溶瘤腺病毒立体定向地施用到所述患者胶质瘤中的多于一个部位。剂量可以是向患者施用约103至约1015病毒颗粒、约105至约1012病毒颗粒，或者向患者施用约107至约1010病毒颗粒。
所述方法还可包括向患者施用第二治疗，其中所述第二治疗是抗血管生成治疗、化学治疗、免疫治疗、外科手术、放射治疗、免疫抑制剂或使用治疗性多核苷酸的基因治疗。可在施用包含溶瘤腺病毒的组合物之前向患者施用第二治疗，在施用包含溶瘤腺病毒的组合物的同时向患者施用第二治疗，或者在施用包含溶瘤腺病毒的组合物之后向患者施用第二治疗。所述化学治疗可包括烷化剂、有丝***抑制剂、抗生素或抗代谢物。
可基于Th1应答的存在进一步选择对象。所述Th1应答可以抗原特异性干扰素-γ(IFN-γ)、IL-12和补体固定抗体的增加为特征。
对于本文中所述的任何其它方法和组合物，可采用在本发明方法和/或组合物的背景下所讨论的实施方案。因此，涉及一种方法的实施方案也可应用于本发明的其它方法。
术语“约”指测定病毒、蛋白质或其它量和测量值的不精确性，并且旨在包括由任何具体测定、测量或量化误差的至少一个标准差。
本文说明书中使用的没有数量词修饰的名词可意指一个/种或超过一个/种。如本文权利要求中所使用的，当与词语“包含/包括”联合使用时，没有数量词修饰的名词可意指一个/种或超过一个/种。
本发明的其它目的、特征和优势将由以下详细描述而变得显而易见。然而，应当理解，详细描述和具体实施例尽管指示出本发明的一些优选实施方案但是仅以举例说明的方式提供，因为根据该详细说明，在本发明的精神和范围内的多种变化和修饰对本领域技术人员而言将是显而易见的。
附图简要说明
以下附图形成本说明书的一部分，并包括在本说明书中以进一步证明本发明的某些方面。通过参照这些附图中的一个或更多个并结合本文所示的对具体实施方案的详细描述，将更好地理解本发明：
图1A至1D.轴向对比图像：在外科手术、放射治疗、替莫唑胺和一个周期的达沙替尼已失败的第一次复发后，用DNX-2401治疗对象。目前，在对DNX-2401治疗完全响应情况下，治疗后32个月无疾病的迹象(根据McDonald标准)。(图1A)治疗前，(图1B)2个月，(图1C)8个月，(图2D)23个月。箭头：肿瘤。在图1B中观察到明显进展，其由炎症而非肿瘤生长引起。肿瘤继续作出响应(图1C)，变得越来越小并且呈纤丝状。在图1D中观察到不存在肿瘤。在脑沟之下的小增强区为囊肿(箭头)。
图2.轴向对比图像：在之前的外科手术、放射治疗、替莫唑胺和贝伐单抗已失败的第三次复发后用DNX-2401治疗对象。在Δ-24-RGD治疗后2个月观察到小叶外观的肿瘤(左图)，其继续存在直至在6个月时显示崩解(“肥皂泡”)(右图)。在6个月时切除肿瘤并进行分析。独立的病理学报道声明，肿瘤大部分坏死，剩余部分被T细胞占优势的免疫细胞浸润(左侧：2个月；右侧：6个月)。
图3.冠状对比图像(右)：在A组实验中，在之前的外科手术、放射治疗和替莫唑胺已失败的第一次复发时用DNX-2401治疗对象。左图：DNX-2401治疗后1个月；右图：DNX-2401治疗后10个月。在10个月时肿瘤体积减小82％。
图4.轴向对比图像(右)：在A组实验中，在之前的外科手术、放射治疗和替莫唑胺已失败的第一次复发时用DNX-2401治疗对象。
图5.T2/FLAIR图像：在A组实验中，在之前的外科手术、放射治疗和替莫唑胺已失败的第一次复发后用DNX-2401治疗对象。图像证明显著的改善，其中FLAIR信号几乎完全消退。
图6.由1期B组患者切除的贯穿人肿瘤的切片。截止DNX-2401治疗后2周，对Ad六邻体蛋白染色显示出病毒扩散和抗胶质瘤作用的明显迹象。A，病毒引起的坏死；B，受感染的肿瘤细胞；C，未受感染的肿瘤细胞。
图7.由1期B组患者切除的贯穿人肿瘤的切片。如所示针对T细胞的存在进行染色。观察到主要是CD8T细胞的浸润。H&E，苏木精/曙红；CD3，正常存在于静息和活性T淋巴细胞中的T细胞特异性标志物；CD4，辅助性/诱导性T细胞淋巴中表达的T细胞标志物；CD8，通常存在于细胞毒/抑制性T细胞亚群上的T细胞标志物。
图8.I期临床试验设计。
图9.临床剂量研究递增计划。
图10.响应标准。
具体实施方式
对常规治疗有固有抗性的恶性肿瘤是重大的治疗挑战。此类恶性肿瘤包括但不限于恶性胶质瘤，其为最广泛的原发性脑瘤，年发病率为每100,000人6.4例(CBTRUS，2002至2003年)。这些破坏神经***的肿瘤是原发性脑瘤的最常见亚型并且是最致命的人类癌症之一。在最具攻击性的癌症中(其表现为多形性成胶质细胞(glioblastomamultiforme，GBM))，尽管进行了最大的治疗努力，患者的中值存活持续时间仍为9至12个月(Hess等，1999)。原型(prototypic)疾病恶性胶质瘤对现有的治疗方案有固有抗性(Shapiro和Shapiro，1998)。实际上，在约1/3的GBM患者中，尽管采用放射治疗和化学治疗，肿瘤仍持续生长。即使在积极(aggressive)治疗(包括外科手术、放射和化学治疗)的情况下，中值存活仍不到1年(Schiffer，1998)。由于几乎没有好的治疗选择可供许多这样的顽固性肿瘤使用，因此对新型创新性治疗方法的探索是必不可少的。
改善治疗的一种潜在方法基于以下观点：可将天然存在的病毒改造成在肿瘤细胞中产生溶瘤作用(Wildner，2001；Jacotat，1967；Kirn，2001；Geoerger等，2002；Yan等，2003；Vile等，2002；其分别通过引用并入本文)。在腺病毒的情况下，其腺病毒基因组中的特定缺失可减弱其在正常静止期细胞中复制的能力，同时其保留在肿瘤细胞中进行复制的能力。Fueyo等(2000)已描述了一种这样的条件复制型腺病毒Δ24，还参见美国专利公开No.20030138405以及美国专利8,168,168和6,824,771，其分别通过引用并入本文。Δ24腺病毒衍生自5型腺病毒(Ad-5)，并且在E1A基因的CR2部分内包含24个碱基对的缺失。Δ24已在细胞培养***和恶性胶质瘤异种移植模型中表现出显著的抗肿瘤效应。
溶瘤腺病毒包括条件复制型腺病毒(conditionallyreplicatingadenoviruse，CRAD)(例如Δ24)，其具有数个使其成为用作生物治疗剂的候选物的特性。这样的特性之一是在容许(permissive)细胞或组织中进行复制的能力，这扩大了溶瘤病毒的初始输入剂量并有助于药剂扩散至邻近肿瘤细胞来提供直接抗肿瘤效应。
I.溶瘤腺病毒Δ24
Δ24腺病毒的体外和体内溶瘤效应已得到证明。一般来说，腺病毒是36kb的线性双链DNA病毒(Grunhaus和Horwitz，1992)。宿主细胞的腺病毒感染导致腺病毒DNA以游离体形式维持，这降低了与整合载体相关的潜在基因毒性。而且，腺病毒的结构稳定，并且在大量扩增后检测不到基因组重排。腺病毒可感染几乎所有的上皮细胞，无论其处于何细胞周期阶段。迄今为止，腺病毒感染似乎仅与人中的轻度疾病(例如急性呼吸道疾病)有关。
Δ24病毒的一个具体形式是DNX-2401(DNATrix，HoustonTX)，其为用于瘤内施用的5型条件复制型腺病毒(adenovirus，AdV)载体，其在E1A基因中包含24bp缺失(bp923-946；Rb结合结构域)并且在Ad纤维的H1环中***有RGD整合素结合基序(4C肽：Cys-Asp-Cys-Arg-Gly-Asp-Cys-Phe-Cys；SEQIDNO：1)。DNX-2401可利用某些细胞表面整合素来进入肿瘤细胞。
DNX-2401通过正常的腺病毒受体(CAR)以及通常仅在肿瘤细胞和新血管***上表达的RGD结合整合素两者进入细胞。这是对必须依赖CAR受体获得活性的前代腺病毒的显著改进。已表明，这种RGD-4C肽(CDCRGDCFC；SEQIDNO：1)与很多细胞类型(包括肿瘤细胞)表面上存在的RGD结合(αVβ3和αVβ5)整合素以高亲和力结合。重要的是，已表明RGD结合整合素在肿瘤血管中和胶质瘤细胞上表达，但在正常脑中不表达，从而为DNX-2401大幅增强地选择性感染成胶质细胞瘤提供了基础。
一旦在细胞内，DNX-2401复制局限于Rb途径具有缺陷的细胞，所述Rb途径成为细胞***的主要控制途径。由于几乎所有的肿瘤细胞(包括＞90％的成胶质细胞瘤)的Rb/p16途径都有缺陷并且已经处在细胞周期中，因此DNX-2401选择性且有效地在这些肿瘤细胞中复制并将其杀灭。这种高度选择性可通过缺失在病毒E1蛋白中正常存在的24bpRb结合结构域来实现。该区域的主要功能是在具有正常Rb功能的健康细胞中实现腺病毒复制。该区域的缺失导致DNX-2401能够仅在具有Rb途径缺陷的肿瘤细胞中复制。
A.Δ24溶瘤病毒的机制
细胞增殖急剧增加是低级胶质瘤转变成中级胶质瘤所特有的，其在很大程度上与p16/Rb/E2F途径的调节异常有关(Fueyo等，2000；Fueyo等，1998；Chintala，1997)。最引人注意的是在该途径的多个成员中观察到的突变重叠的缺失，其认为可通过特异性地靶向Rb途径来实现这些肿瘤治疗方面的重要治疗进展(Kyritsis和Yung，1996；Fueyo等，1999)。Rb状态受到破坏将很可能提供利用下述药剂的机会，所述药剂排他性地在Rb缺陷型肿瘤细胞中发挥作用(Fuey等，1999)。大多数正常的人脑细胞通常是静止的。中枢神经***(CNS)中的细胞很少***，并且这些细胞被特异性地触发从而以受限的方式进行***。严密的调控已进化为严格地限制细胞使其不进行细胞***。p16/Rb/E2F途径是维持完全分化细胞的非***状态或者负向调节***中的正常细胞的细胞周期进程的重要途径。
人腺病毒通常感染为静止期细胞(非***中的细胞)或***中细胞(正常细胞或癌细胞)的人细胞。在将该病毒导入人细胞中(病毒感染)后，腺病毒DNA立即通过合成E1A腺病毒蛋白进行转录。E1A蛋白的CR2区与Rb蛋白特异性地相互作用并导致E2F释放，促使细胞进入细胞周期的S期(DNA合成期)并使细胞维持在***周期中。这一系列事件有效地征用宿主细胞以使其用于唯一地表达病毒编码的蛋白质。腺病毒颗粒的活跃产生依赖于驱使细胞进入活跃复制模式的能力，这是溶瘤病毒的关键特征。其生物特征的结果是：肿瘤细胞提供了有利于该活性的复制环境。病毒基因组关键序列的突变使腺病毒不能够与肿瘤抑制蛋白结合并使其失活。这些经修饰的腺病毒能够专一地在缺乏功能性靶标肿瘤抑制基因的细胞(仅肿瘤细胞)中复制。
因此，CR2区中具有24个碱基对缺失之E1A蛋白的表达防止蛋白质与Rb结合和使其失活。这种经减弱的E1A突变腺病毒不能够在具有功能活性Rb途径的正常静止细胞中复制。相反，肿瘤细胞容许病毒复制，所述病毒复制进而在体外和体内均有效地入侵并裂解人胶质瘤细胞。
与其它条件复制缺陷型腺病毒(例如Onyx-015)相比，Δ24的溶瘤潜力是显著的。图2中示出了Δ24在小鼠异种移植颅内胶质瘤肿瘤模型中的作用。在此情况下，表示RA55的弧线在E1B区中携带如Onyx-015中的缺失。在使用剂量相当(在此情况下1×108pfu)时，溶瘤腺病毒不具有与Δ24相同程度的效力。还示出了通过紫外线暴露而失活的阴性对照Δ24。Δ24的抗肿瘤作用已在多种人肿瘤细胞系和具有已知p16/Rb/E2F途径缺陷的动物异种移植模型中得到证实。Δ24在具有p16/Rb/E2F缺陷之细胞系中的容许(permissive)复制与在正常星形细胞和正常静止成纤维细胞中的高度减弱复制形成对比。此外，当导入到已通过稳定或瞬时转染技术进行Rb功能修复的肿瘤细胞中时，该病毒的活性减弱。
数个因素有利于使用溶瘤腺病毒来治疗脑瘤。第一，胶质瘤不转移，因此有效的局部方法应足以治疗该疾病。第二，每个胶质瘤具有数个表达不同遗传异常的细胞群(Sidransky等，1992；Collins和James，1993；Furnari等，1995；Kyritsis等，1996)。因此，对将单基因转移至癌细胞敏感的肿瘤谱可能是有限的。第三，可复制型腺病毒可感染并破坏停止在G0的癌细胞。由于胶质瘤总是包括非周期中的细胞，因此这一特性是重要的。最后，大多数胶质瘤中的p16-Rb途径是异常的(Hamel等，1993；Henson等，1994；Hirvonen等，1994；Jen等，1994；Schmidt等，1994；Costello等，1996；Fueyo等，1996b；Kyritsis等，1996；Ueki等，1996；Costello等，1997)，因此使Δ24策略适用于这些肿瘤的大部分。尽管成视网膜细胞瘤肿瘤抑制基因功能的丧失已与多种肿瘤类型的原因有关，但不限于胶质瘤的治疗。
在本发明的另一些实施方案中，可将E1A突变(例如E1A中的Δ24突变)与同一腺病毒的E1B区突变组合使用，由此产生双突变腺病毒。在本发明的某些实施方案中，腺病毒可包含Δ24突变和阻止E1B55kD蛋白的表达或功能的E1B区缺失。已表明，E1B55kD蛋白与p53结合并使其失活。E1B区突变可包括缺失genebank登录号NC_001406的2426bp至3328bp的腺病毒序列，其通过引用并入本文。
在本发明的某些实施方案中，溶瘤腺病毒可用作腺病毒表达载体。“腺病毒表达载体”意为包括这样的载体：其含有足以(a)支持载体包装和(b)表达已克隆在其中的多核苷酸的腺病毒序列。编码目的异源多肽的多核苷酸在腺病毒序列内的***位置对本发明而言并不重要。可***编码目的多肽的多核苷酸来替代如Karlsson等(1986)所述之E3置换载体内所缺失的E3区或对靶细胞中的病毒复制非必需的其它区。用于产生腺病毒颗粒的传统方法是将穿梭质粒与腺病毒辅助质粒共转染，随后体内重组到293或911细胞中(Introgene，TheNetherlands)。
B.赘生性细胞表面整合素靶向
可进行本文中所述的溶瘤腺病毒修饰以提高溶瘤腺病毒治疗癌症的能力。本发明还包括对溶瘤腺病毒进行任何提高腺病毒靶向赘生物细胞能力的修饰。包括在内的是对溶瘤腺病毒基因组进行修饰以通过改变受体结合分子来增强腺病毒感染癌细胞和在癌细胞中复制的能力。
细胞表面受体是用于癌症靶向治疗的引人注意的候选者。数种肿瘤类型上是否存在低水平的柯萨奇病毒和腺病毒受体(coxsackievirusandadenovirusreceptor，CAR)可限制溶瘤腺病毒的效力。可向纤维结(fiberknob)添加多种肽基序，例如RGD基序((RGD序列模拟细胞表面整合素的正常配体)、Tat基序、聚赖氨酸基序、NGR基序、CTT基序、CNGRL基序、CPRECES基序或strept-标签基序(Rouslahti和Rajotte，2000)。可将基序***到腺病毒纤维蛋白的HI环中。对衣壳进行修饰允许独立于CAR的靶细胞感染。这允许更高的复制、更有效的感染和肿瘤细胞的裂解增加(Suzuki等，2001，其通过引用并入本文)。还可添加结合特异性人胶质瘤受体(例如EGFR或uPR)的肽序列。专一或优先在癌细胞表面上发现的特异性受体可用作用于腺病毒结合和感染的靶标，例如EGFRvIII。
II.RB途径
Rb是一种肿瘤抑制基因，其功能丧失与肿瘤形成相关。本文中使用的成视网膜细胞瘤蛋白或Rb指由成视网膜细胞瘤基因(Rb)编码的多肽。成视网膜细胞瘤基因位于人的13q14并且编码约110千道尔顿(kD)的蛋白质。未经磷酸化的Rb通过隔离转录因子(例如E2F)并使细胞停止在细胞周期的G1来抑制细胞增殖。当Rb被磷酸化后，转录因子从Rb释放。E1A与Rb的结合导致转录因子以与磷酸化大致相同的方式释放。数种病毒癌蛋白(oncoprotein)靶向Rb使其失活以有利于病毒复制。这些蛋白质包括腺病毒E1A、SV40大T抗原和***瘤病毒E7。
E1A蛋白是在腺病毒感染后首先合成的病毒特异性多肽之一并且是发生病毒复制所需的(Dyson和Harlow，1992；Flint和Shenk，1997)。Rb蛋白和E1A蛋白的相互作用导致E2F从先前存在的E2F-Rb细胞复合物释放。然后，E2F游离以激活由腺病毒E2启动子和受感染细胞之受E2F调控的基因的转录。这些细胞基因的转录激活进而有助于在除静止细胞之外产生适合病毒DNA合成的环境(Nevins，1992)。E1A的两个区段对Rb结合是重要的：一个包含30-60位氨基酸，而另一个包含120-127位氨基酸(Whyte等，1988；Whyte等，1989)。任一区域的缺失均可阻碍在体外和体内形成可检测的E1A/Rb复合物(Whyte等，1989)。
包含Δ24突变的腺病毒产生不能结合Rb的E1A蛋白，导致受感染细胞停留在G0。因此，突变Rb途径和突变体E1A以及E2F激活是Δ24腺病毒转录所必需的。
本文中使用的成视网膜细胞瘤(Rb)途径指与Rb相互作用的调控蛋白组或与Rb相互作用的其他蛋白质在调控细胞增殖中的相互作用(有关综述参见Kaelin，1999)。Rb途径内的蛋白质包括但不限于Rb、E2F家族的转录因子、DRTF、RIZ286、MyoD287、c-Abl288、MDM2289、hBRG1/hBRM、p16、p107、p130、c-Abl酪氨酸激酶和具有保守LXCXE基序的蛋白质、细胞周期蛋白E-cdk2和细胞周期蛋白D-cdk4/6。Rb的磷酸化释放E2F，其结合至未经磷酸化的Rb。E2F刺激细胞周期蛋白E的转录和活性，这导致更多的Rb磷酸化。未经磷酸化的Rb通过与提高DNA复制的调控蛋白(例如E2F)结合而起肿瘤抑制剂的作用(TheGeneticBasisofHumanCancer，Vogelstein和Kinzler编辑，1998)。
本文中使用的缺陷型成视网膜细胞瘤途径指Rb的失活、突变或缺失或者与Rb相互作用的上游或下游调控蛋白由于一种或更多种蛋白质的突变或修饰、蛋白质活性或蛋白质-蛋白质相互作用而不能够调控细胞增殖。导致缺陷型Rb途径的突变包括但不限于Rb、INK4蛋白和CIP/KIP中的失活突变以及细胞周期蛋白基因(例如细胞周期蛋白D/cdk4，6和细胞周期蛋白E，cdk2)中的激活突变。Rb调控途径的各种要素(包括p16、细胞周期蛋白D、cdk4、E2F或Rb本身)的突变可以是在几乎100％的人肿瘤中的突变(TheGeneticBasisofHumanCancer，1998)。Rb相关的肿瘤包括胶质瘤，肉瘤，肺、乳腺、卵巢、子宫颈、胰腺、胃、结肠、皮肤、喉、膀胱和***的肿瘤。
III.用于治疗脑癌的方法
本发明涉及包含Rb途径受到破坏之肿瘤细胞的脑瘤的治疗。预期多种脑瘤可使用本发明的方法和组合物进行治疗，包括成胶质细胞瘤、间变性星形细胞瘤和神经胶质肉瘤。
术语“胶质瘤”指源自于脑或脊髓的神经胶质中的肿瘤。胶质瘤由神经胶质细胞类型(例如星形细胞和少突胶质细胞)衍生，因此胶质瘤包括星形细胞瘤和少突胶质瘤以及间变性胶质瘤、成胶质细胞瘤和室管膜瘤。星形细胞瘤和室管膜瘤可发生于儿童和成人两者中脑和脊髓的全部区域中。少突胶质瘤通常发生于成人的大脑半球中。在儿科中胶质瘤占脑瘤的75％，而在成人中胶质瘤占脑瘤的45％。脑瘤的剩余百分比为脑脊膜瘤、室管膜瘤、松果体区肿瘤、脉络丛肿瘤、神经上皮瘤、胚胎性肿瘤、外周神经母细胞性肿瘤、脑神经肿瘤、造血***肿瘤、生殖细胞瘤或鞍区肿瘤。
出于本发明的目的，使用Macdonald标准(Macdonald等，1990)将响应和进展标准(可持续至少4周的所有响应)定义为由世界卫生组织(WorldHealthOrganization)采用并适用于脑瘤的那些术语，并使用对比增强病变的二维测量(MRI扫描上病变的最长横向直径(crossdiameter)的减小)来确定所述响应和进展标准：
·完全响应：在生理学剂量之上所有病变消失并且无类固醇(steroid)；
·部分响应：缩小≥50％并且类固醇稳定或降低；
·稳定疾病：缩小＜50％；
·进展：新病变，明确进展的非指数病变，指数病变生长≥25％，或在不存在放射进展的情况下明显的临床恶化。
成胶质细胞瘤是对常规治疗有抗性的一种毁灭性的原发性高级恶性胶质瘤。当前的介入法(例如外科手术、放射治疗和化学治疗)使总中值存活延长至约14.6个月。很多新化合物甚至当组合测试时仍未能改善整体存活或者产生有用的临床响应。对可影响疾病进程的对这些肿瘤的新攻击模式仍然存在远远尚未满足的医疗需求。
高级恶性胶质瘤是具有高血管性和浸润性的肿瘤并且因此即使进行了手术切除也倾向于复发。对于新诊断以及复发性疾病而言治疗选择有限，对于患有无法进行外科手术的肿瘤的患者而言治疗选择尤其有限。此外，尽管80％或更多的成胶质细胞瘤复发发生在与原始肿瘤相同的区域，但是由于毒性问题常常排除额外的放射治疗。替莫唑胺被批准用于治疗新诊断的成胶质细胞瘤和复发性间变性星形细胞瘤，并且贝伐单抗被最新批准用于治疗复发性成胶质细胞瘤。这些药物是全身递送的并且必需以多剂量方案施用。替莫唑胺最有效地被用作外科手术或放射治疗的辅药。相比之下，贝伐单抗通常单独施用以用于复发性疾病，或者实验性地与现有的化学治疗剂(例如依立替康)组合施用。
所理解的肿瘤生物学进展已经允许鉴定多个关键的信号传导途径和肿瘤发生过程。然而，由于途径和可选的信号传导过多，对单个靶标的抑制可能不足以显著性地抑制肿瘤生长，因此可能需要数种药剂的组合。
目前，有多种抗血管生成剂被考虑用于临床实践中。由于其FDA批准加快，因此在脑瘤患者中最常研究的抗血管生成药物为贝伐单抗其为破坏VEGF途径、诱导肿瘤血管尺寸减小并产生渗透性降低的较为正常化的血管网络的人源化单克隆抗体。现在，已经将该化合物作为单一和组合药剂两者在预先(upfront)情况下和复发性情况下用于多个研究。
目前，大部分目前进行中的II/III期研究已转变为使用小分子激酶或整合素抑制剂，例如恩扎妥林(enzastaurin)、西地尼布、帕唑帕尼、索拉非尼(sorafenib)、舒尼替尼(sunitinib)和西仑吉肽。治疗方案可包括这些治疗剂的组合，通常涉及非抗血管生成治疗的并行处方并且可施用于患有新诊断疾病和复发性疾病的两种患者。初始结果表明，尽管这些药剂中的数种可适度地延长6个月PFS，但是对存活的潜在长期益处和影响仍待证明。
多形性成胶质细胞瘤是最常见的成人的恶性原发性脑瘤。这些肿瘤中的一半以上在参与细胞周期控制的基因中具有异常。通常在CDKN2A中有缺失或成视网膜细胞瘤基因丧失表达。其它类型的脑瘤包括星形细胞瘤、少突胶质瘤、室管膜瘤、成神经管细胞瘤、脑脊膜瘤和神经鞘瘤。
在很多情况下，并不一定必需将细胞杀死或者诱导细胞经历细胞死亡或“细胞凋亡”。反之，为了实现有意义的治疗，所需要的只是使肿瘤生长减慢至一定程度。其可以是完全阻断细胞生长或者实现一些肿瘤退化。考虑其正常用途时，临床术语如“减轻”和“肿瘤负荷减小”也在构思之内。
术语“治疗益处”指与对象疾病(condition)的医疗治疗有关的促进或增强其好转的任何事情，其包括初癌(pre-cancer)、癌症和过度增生性疾病的治疗。其非穷尽实例的列表包括延长对象的寿命任意时间段、疾病的赘生物发生减少或延迟、过度增殖降低、肿瘤生长降低、转移延迟、癌细胞或肿瘤细胞增殖速率降低以及由对象疾病引起的对象的疼痛降低。
A.腺病毒治疗
本领域技术人员充分知晓如何将腺病毒递送应用于体内和离体情况。对于病毒载体，一般将制备病毒载体贮存液。根据病毒种类及可达到的滴度，将如下文所讨论的在可药用组合物中向患者递送1至100、10至50、100至1000，或者高达1×104、1×105、1×106、1×107、1×108、1×109、1×1010、1×1011、1×1012或1×1013的感染性颗粒。
针对不同的肿瘤类型考虑不同的途径。当可鉴定离散肿瘤质量或实体瘤时，可采用多种直接、局部和区域性方法。例如，可用腺病毒直接注射肿瘤。可在切除和/或其它治疗之前、期间或之后处理瘤床。在切除或其它治疗之后，一般将通过接入肿瘤或术后残余肿瘤部位的导管递送腺病毒。可利用肿瘤脉管***通过注射支持静脉或动脉来将载体引入肿瘤中。也可利用较远端的供血途径。
治疗癌症的方法包括肿瘤的治疗以及靠近肿瘤或肿瘤周围的区域的治疗。在本申请中，术语“残余肿瘤部位”指邻近肿瘤的区域。该区域可包括肿瘤所在的体腔以及邻近肿瘤的细胞和组织。
B.针对患者的施用制剂和途径
当考虑临床应用时，将必需制备适合预期应用的形式的药物组合物。一般来说，这将需要制备基本不含热原以及可对人或动物有害的其它杂质的组合物。
本发明的活性组合物可包括典型的药物制剂。一般将期望采用合适的盐和缓冲剂以使递送载体稳定并允许被靶细胞摄取。本发明的水性组合物包含有效量的溶解或分散于可药用载剂或水性介质中的载体：细胞。也可将这样的组合物称为接种物。短语“可药用或药理学上可接受的”指当施用于动物或人时不产生有害反应、变应性反应或其它不利反应的分子实体和组合物。本文中使用的“可药用载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包被物(coatings)、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这些介质和药剂用于药物活性物质的用途在本领域中是公知的。除非任何常规介质或药剂与本发明不相容，否则其在治疗性组合物中的用途均在考虑之内。还可向组合物中掺入补充活性成分。
根据本发明的这些组合物的施用将通过合适的途径进行，但特别地提及颅内/瘤内施用。施用可通过注射或输注进行，有关进行颅内施用的方法，参见Kruse等(1994)，其特别地通过引用并入。这样的组合物通常将作为可药用组合物施用。
治疗剂的有效量根据预期目标(例如消除肿瘤细胞)来确定。术语“单位剂量”指适用于对象的物理离散单位，每个单位包含经计算与其施用(即，合适途径和治疗方案)联合时产生上述讨论的期望响应的预定量的治疗性组合物。根据治疗数量和单位剂量二者施用的量取决于待治疗的对象、对象的状况以及所期望的保护。治疗性组合物的精确量还取决于医师的判断并且因个体而异。可将本发明的经改造病毒直接施用于动物，或者可替选地施用于细胞，随后将细胞施用于动物。
本文中使用的术语体外施用指对从动物取出的细胞进行的操作，所述细胞包括但不限于培养的细胞。术语离体施用指已对细胞进行体外操作并随后将其施用于活动物。术语体内施用包括在动物体内对细胞进行的所有操作。在本发明的某些方面，所述组合物可体外、离体或体内施用。体内施用的一个实例包括通过颅内施用将本发明组合物直接向肿瘤注射以选择性地杀死肿瘤细胞。
特别地考虑将瘤内注射或注射到肿瘤脉管***中用于离散的、实心的、可接近的肿瘤，包括在外科手术期间暴露的肿瘤。对于直径为1.5cm至5cm的肿瘤，注射体积将是1cc至3cc，优选3cc。对于直径大于5cm的肿瘤，注射体积将是4cc至10cc，优选5cc。作为单次剂量递送的多次注射包含约0.1ml至约0.5ml体积，优选0.2ml。有利地，可通过间隔约1cm间距向肿瘤施用多次注射来与病毒颗粒进行接触。
在手术介入的情况下，可在术前使用本发明以使不宜手术的肿瘤对象能够进行切除。可替选地，可在手术时使用本发明，和/或者其后使用本发明以治疗残余疾病或转移性疾病。例如，可用含有腺病毒的制剂注射或灌注经切除的瘤床。可在切除之后持续进行灌注，例如通过将植入的导管保留在手术部位。定期的术后治疗也在设想之内。
适当时，也可应用优选经由导管***术的持续施用，例如当肿瘤被切除并且处理瘤床以消除残余的显微可见疾病时。在开始治疗之后，这样的持续灌注可发生约1-2小时至约2-6小时、至约6-12小时、至约12-24小时、至约1-2天、至约1-2周或更长的时间段。一般来说，治疗性组合物经由持续灌注的剂量将等同于通过单次或多次注射所提供的剂量，在灌注发生的时间段期间进行调整。
治疗方案也可进行变化，并且通常根据肿瘤类型、肿瘤位置、疾病进展以及患者的健康和年龄。显然，某些肿瘤类型将需要更积极的治疗，而同时，某些患者不能耐受较为繁重的方案。临床医生将最适宜依据治疗制剂的已知效力和毒性(如果有的话)作出这样的决定。
可在适当地混合有表面活性剂(例如羟丙基纤维素)的水中制备活性化合物(如游离碱或可药用盐)的溶液剂。还可在甘油、液态聚乙二醇及其混合物中和在油中制备分散体。在普通贮存和使用条件下，这些制剂包含防止微生物生长的防腐剂。本发明的治疗性组合物有利地以作为液体溶液剂或混悬剂形式的可注射组合物施用；还可制备适合在注射前溶解或混悬于液体中的固体形式。也可对这些制剂进行乳化。用于这样的目的的典型组合物包含可药用载剂。例如，所述组合物可包含10mg、25mg、50mg或高至约100mg人血清白蛋白/毫升磷酸盐缓冲盐水。其它的可药用载剂包括水溶液，无毒赋形剂，包括盐类、防腐剂、缓冲剂等。非水性溶剂的实例为丙二醇、聚乙二醇、植物油和可注射的有机酯如油酸乙酯。水性载剂包括水、醇溶液/水性溶液、盐水溶液、肠胃外载剂例如氯化钠或林格葡萄糖。静脉内载剂包括流体和营养补充剂。防腐剂包括抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体。药物组合物中pH和各种组分的精确浓度可根据公知参数进行调整。当所述途径是外用的时，所述形式可以是乳膏、软膏或油膏。
C.联合治疗
对多种治疗有抗性的肿瘤细胞提出了临床肿瘤学中的一个重大问题。当前癌症研究的一个目标是找到提高化学治疗和放射治疗以及其它常规癌症治疗之效力的方式。一种方式是通过将此类传统治疗与溶瘤腺病毒治疗组合。治疗癌症的传统治疗可包括去除受感染器官的全部或一部分、外束照射、氙弧和氩激光凝固、冷冻治疗、免疫治疗以及化学治疗。对治疗的选择基于多个因素，例如1)多病灶或单病灶疾病，2)肿瘤的部位和尺寸，3)疾病的转移，4)患者的年龄，或5)组织病理学发现(TheGeneticBasisofHumanCancer，1998)。
在本发明的背景下，考虑可将腺病毒治疗与抗癌剂联合使用，包括化学治疗或放射治疗介入以及放射诊断技术。将溶瘤病毒治疗与免疫治疗组合也被证实是有效的。
使“靶”细胞接触突变溶瘤病毒并任选地接触至少一种其它药剂可杀死细胞、抑制细胞生长、抑制转移、抑制血管生成或者另外逆转或降低靶细胞的过度增殖表型。这些组合物将以有效杀死靶细胞或抑制其增殖的组合量提供。这一过程可涉及使细胞与表达构建体和药剂或因子在相同时间或不同时间接触。可如下实现这一点：使细胞与单一组合物或包含两种药剂的药理学制剂接触，或者使细胞与两种不同的组合物或制剂接触，其中一种组合物包含溶瘤腺病毒而另一种组合物包含第二药剂。
还可将溶瘤腺病毒治疗与免疫抑制组合。免疫抑制可如WO96/12406中所述进行，其通过引用并入本文。免疫抑制剂的实例包括环孢素、FK506、环磷酰胺和甲氨蝶呤。
可替选地，溶瘤腺病毒治疗可发生在第二药剂或治疗之前或之后，间隔数分钟至数周。在其中第二药剂和溶瘤腺病毒单独施用于细胞的实施方案中，一般将确保各次递送时间之间不超过显著时间段，使得第二药剂和溶瘤病毒将仍能够对细胞施加有利的组合作用。在这样的情况下，考虑使细胞与两种模式在彼此的约12小时至24小时内，并且更优选地在彼此的约6小时至12小时内接触，其中最优选仅约12小时的延迟时间。然而，在一些情况下，当各次施用之间间隔数天(2、3、4、5、6或7天)至数周(1、2、3、4、5、6、7或8周)时，可理想地显著延长治疗时间段。
还可设想的是，将期望超过一次地施用溶瘤腺病毒和/或第二药剂。如下文所例示的，可采用多种组合，其中溶瘤腺病毒为“A”而另一药剂为“B”：
A/B/AB/A/BB/B/AA/A/BB/A/AA/B/BB/B/B/AB/B/A/B
A/A/B/BA/B/A/BA/B/B/AB/B/A/AB/A/B/AB/A/A/BB/B/B/A
A/A/A/BB/A/A/AA/B/A/AA/A/B/AA/B/B/BB/A/B/BB/B/A/B
其它组合也在考虑之内。此外，为了实现细胞杀伤，将两种药剂以有效杀死细胞的组合量递送至细胞。
适用于联合治疗的药剂或因子为任何抗血管生成剂和/或具有抗癌活性的任何化学化合物或治疗方法；因此本申请通篇使用的术语“抗癌剂”指具有抗癌活性的药剂。这些化合物或方法包括烷化剂、拓扑异构酶I抑制剂、拓扑异构酶II抑制剂、RNA/DNA抗代谢物、DNA抗代谢物、抗有丝***剂以及当施用于细胞时诱导DNA损伤的DNA损伤剂。
化学治疗药物和前药的实例包括CPT11、替莫唑胺、铂化合物和前药例如5-FC。烷化剂的实例特别包括苯丁酸氮芥、顺铂、环代松(cyclodisone)、flurodopan、甲基CCNU、哌嗪二酮、替罗昔隆。拓扑异构酶I抑制剂涵盖化合物如喜树碱和喜树碱衍生物以及吗啉代多柔比星。拓扑异构酶II抑制剂的实例为多柔比星、吡唑啉吖啶(pyrazoloacridine)、米托蒽醌和柔红霉素苯腙(rubidazone)。RNA/DNA抗代谢物包括L-阿拉诺新、5-氟尿嘧啶(5-fluoraouracil)、氨基蝶呤衍生物、甲氨蝶呤和吡唑呋喃菌素；而DNA抗代谢物组涵盖例如阿糖孢苷(ara-C)、guanozole、羟基脲、硫代嘌呤。典型的抗有丝***剂为秋水仙碱、根霉素、紫杉醇和硫酸长春碱。其它药剂和因子包括诱导DNA损伤的辐射和波，例如γ-辐射、X-射线、UV-辐射、微波、电子发射等。多种抗癌剂(也描述为“化学治疗剂”)起诱导DNA损伤的功能，其全部旨在用于本文中公开的联合治疗方法。考虑使用的化学治疗剂包括例如阿霉素、博来霉素、5-氟尿嘧啶(5-FU)、依托泊苷(VP-16)、喜树碱、放线菌素-D、丝裂霉素C、顺铂(CDDP)、鬼臼毒素、维拉帕米以及甚至过氧化氢。本发明还涵盖一种或更多种DNA损伤剂的组合的使用，不管是基于辐射还是实际化合物，例如X-射线与顺铂的使用或者顺铂与依托泊苷的使用。
在根据本发明对初癌或癌症的治疗中，将使癌前病变(precancerouslesion)的细胞或肿瘤细胞与除溶瘤腺病毒之外的药剂接触。这可通过用辐射(例如X-射线、UV光、γ-射线或者甚至微波)照射局部肿瘤部位来实现。可替选地，可通过向对象施用治疗有效量的包含以下化合物的药物组合物来使细胞与所述药剂接触，所述化合物例如阿霉素、博来霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊苷、喜树碱、放线菌素-D、丝裂霉素C、鬼臼毒素、维拉帕米，或者更优选地，顺铂。所述药剂可通过将其与溶瘤腺病毒组合来制备并作为组合的治疗性组合物或药盒使用。
直接使核酸(特别是DNA)交联的药剂也在考虑之内以促进DNA损伤，产生与溶瘤腺病毒的协同的抗赘生物组合。可使用顺铂类药剂例如顺铂，以及其它DNA烷化剂。顺铂已被广泛地用于治疗癌症，其中在临床应用中使用的有效剂量为：每3周，20mg/m2，持续5天，总共3个疗程。顺铂不能经口吸收，因此必须通过静脉内、皮下、瘤内或腹膜内注射递送。博来霉素和丝裂霉素C是通过静脉内、皮下、瘤内或腹膜内注射施用的另一些抗癌剂。博来霉素的典型剂量为10mg/m2，而丝裂霉素C的这一剂量为20mg/m2。
损伤DNA的药剂还包括干扰DNA复制、有丝***和染色体分离的化合物。这样的化学治疗性化合物包括阿霉素(也称为多柔比星)、依托泊苷、维拉帕米、鬼臼毒素等。当广泛地用于在临床环境中治疗赘生物时，如下施用这些化合物：对于阿霉素而言，以21天的时间间隔以25mg/m2至75mg/m2的剂量静脉内推注；对于依托泊苷而言，以35mg/m2至50mg/m2的剂量静脉内注射或者以双倍的静脉内剂量口服。
破坏核酸前体和亚基的合成和保真度的药剂也可导致DNA损伤。因此已开发了多种核酸前体。特别可用的是已进行大量测试并且容易获得的药剂。因此，如5-氟尿嘧啶(5-FU)的药剂优先被赘生物组织利用，使得该药剂特别地可用于靶向赘生物细胞。尽管毒性很大，但是5-FU可应用于多种载体(包括局部载体)，然而通常利用以3至15mg/kg/天的剂量进行静脉内施用，或者作为替代，可施用5-FC并在靶组织或靶细胞中进行转化。
导致DNA损伤并且已得到广泛使用的其它因素包括通常称为γ-射线、X-射线和/或直接递送至肿瘤细胞的放射性同位素。其它形式的DNA损伤因子也在考虑之内，例如微波和UV辐射。最可能的是，所有这些因子对DNA、DNA前体、DNA的复制和修复以及染色体的装配和维持造成广泛的损伤。X-射线的剂量范围为：日剂量50伦琴至200伦琴持续长时间(3周至4周)，至单剂量2000伦琴至6000伦琴。放射性同位素的剂量范围广泛变化，并且取决于同位素的半衰期、所发射的放射强度和类型以及赘生物细胞的摄取。
免疫治疗可作为联合治疗的一部分与突变溶瘤病毒介导的治疗组合使用。联合治疗的一般方法在下文进行了讨论。一般来说，肿瘤细胞必需携带一些可适用于靶向，即不存在于大多数其它细胞上的标志物。存在很多肿瘤标志物，并且其中的任一种均可适用于在本发明的背景下进行靶向。常见的肿瘤标志物包括癌胚抗原、***特异性抗原、泌尿肿瘤相关抗原、胎儿抗原、酪氨酸酶(p97)、gp68、TAG-72、HMFG、唾液酸化路易斯抗原(SialylLewisAntigen)、MucA、MucB、PLAP、***受体、层粘连蛋白受体、erbB和p155。CAR、整合素或其它细胞表面分子的特异性抗体可用于鉴定腺病毒可充分感染的细胞。CAR是腺病毒受体蛋白。腺病毒的五邻体基底(pentonbase)介导病毒附着于整合素受体和颗粒内化。
本领域技术人员参考“Remington’sPharmaceuticalSciences”第15版，1980。基于所治疗对象的状况，将有必要进行一些剂量变化。在任何情况下，负责施用的人员将确定用于个体对象的合适剂量。此外，对于人施用，制剂应满足FDA生物标准局(FDAOfficeofBiologicsstandards)所要求的无菌度、热原性、一般安全性和纯度标准。
除将溶瘤腺病毒治疗与化学治疗和放射治疗组合之外，还考虑到与其它基因治疗的组合将是有利的。例如，将溶瘤腺病毒的靶向同时与p53的靶向组合可产生改善的抗癌治疗。可以想到地，编码多肽的任何肿瘤相关基因或核酸均可以以此方式靶向，例如p21、Rb、APC、DCC、NF-1、NF-2、BCRA2、p16、FHIT、WT-1、MEN-I、MEN-II、BRCA1、VHL、FCC、MCC、ras、myc、neu、raf、erb、src、fms、jun、trk、ret、gsp、hst、bcl和abl。
还可有利地将抗血管生成治疗与本文中公开的溶瘤腺病毒治疗组合。特别地，贝伐单抗(Genentech/Roche)是一种血管生成抑制剂，其为减慢新血管生长的药物。其被许可用于治疗多种癌症，包括结肠直肠癌、肺癌、乳腺癌(在USA之外)、成胶质细胞瘤(USA和日本)、肾癌和卵巢癌。贝伐单抗是抑制血管内皮生长因子A(vascularendothelialgrowthfactorA，VEGF-A)的一种人源化单克隆抗体。VEGF-A是在多种疾病中(特别是在癌症中)刺激血管生成的化学信号。贝伐单抗是美国最早可在临床上使用的血管生成抑制剂。
还考虑到，可将上述治疗与所有类型的外科手术组合实施。约60％的癌症患者将经受一些类型的外科手术，其包括预防性、诊断性或分期性、治疗性和姑息性外科手术。可将这些类型的外科手术与其他治疗(例如溶瘤腺病毒治疗)联合使用。
治疗性外科手术包括切除，其中物理去除、切除和/或破坏癌组织的全部或一部分。肿瘤切除指物理去除肿瘤的至少一部分。除肿瘤切除之外，通过外科手术的治疗包括激光外科手术、冷冻外科手术、电外科手术和显微镜控制的外科手术(莫氏外科手术)。还考虑到，可将本发明与去除浅表性癌症、初癌或偶然量的正常组织联合使用。
在切除一部分或全部癌细胞、癌组织或肿瘤之后，可在体内形成腔。可通过用另外的抗癌治疗灌注、直接注射、全身性施用或局部施用该区域来完成治疗。可重复这样的治疗，例如每1、2、3、4、5、6或7天，或者每1、2、3、4和5周，或者每1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月。这些治疗也可具有不同的剂量。此外，在涉及多于一种单一治疗类型(即构建体、抗癌剂和外科手术)的治疗中，这些治疗类型之间的时间段可为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或约24小时；为约1、2、3、4、5、6或7天；为约1、2、3、4或5周；以及为约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个月，或者更久。
还应指出的是，上述任意治疗本身可证明是有用的。在此方面，以组合提及的化学治疗和非突变溶瘤病毒治疗也应当理解为考虑了这些方法可单独采用。
IV.筛选方法
在腺病毒Δ24和不能够结合Rb的其它突变腺病毒的情况下，Rb途径必需是缺陷型的以使细胞转录和翻译病毒蛋白。要求Rb途径是缺陷型的意指其不能够抑制E2F的转录-激活活性。如果E2F的活性未受到抑制，则其激活细胞基因和腺病毒DNA的转录。E2F可逃避抑制的方式的实例包括但不限于：Rb不能够结合E2F(即，E1A与Rb结合)、E2F过表达、Rb比E2F少以及其中Rb保持磷酸化的情况。
另外，本发明人已发现，在对象中鉴定Th1极化的免疫应答对本发明溶瘤腺病毒的成功治疗具有预示性。而且，Th2应答的存在可以是未响应的指示。一种特别的Th1标志物是IL-12p70。此外，可评估高水平的针对肿瘤相关抗原(例如NLRP4)的抗体，并且如果发现则预测响应于溶瘤病毒治疗。
Th1标志物包括IL-1β、IL-2、IL-8、IL-12、IL-18、IFN-γ、TNF-α、TNF-β、GMCSF、经切割的胱天蛋白酶3、新蝶呤和β2-微球蛋白(β2-microglobuin)。Th1表面标志物包括CXCR3、CCR5、CCR1以及IL-12受体β1和α链。Th2标志物包括IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-13、TGFβ和磷酸化STAT3。Th2表面标志物包括CXCR4、CCR3、CCR4、CCR7、CCR8、IL-1受体和CD30。肿瘤相关抗原包括BRAF、CABYR、CRISP3、CSAG3、CTAG2、DHFR、FTHL17、GAGE1、LDHC、MAGEA1、MAGEA3、MAGEA4、MAGEB6、MAPK1、MICA、MUC1、NLPR4、NYES01、P53、PBK、PRAME、SOX2、SPANXA1、SSX2、SSX4、SSX5、TSGA10、TSSK6、TULP2、XAGE2和ZNF165。特别地，检测CABYR、MAGEA1、MAGEA3、MAGEB6、NLPR4、NYES01、PBK和ZNF165中的1、2、3、4、5、6、7个或全部8个。
可使用抗体来检测腺病毒蛋白(例如E1A)、Rb以及Rb途径的其它蛋白质、Th1应答、Th2应答或肿瘤相关抗原。在本发明的某些方面，可产生一种或更多种与多种抗原具有免疫反应性的抗体。这些抗体可用于本文下文所述的多种诊断或治疗应用。
本文中使用的术语“抗体”旨在广泛指任何免疫结合剂，例如IgG，IgM、IgA、IgD和IgE。一般来说，IgG和/或IgM是优选的，因为其是在生理情况下最常见的抗体并且因为其最容易在实验室环境下制备。用于制备和表征抗体的方法在本领域中也是公知的(参见，例如Harlow和Lane(1988)，其通过引用并入本文)。
本发明的某些实施方案提供了与至少一种物质连接以形成抗体缀合物的针对抗原的抗体以及所翻译的蛋白质、多肽和肽。为了提高抗体分子作为诊断剂或治疗剂的效力，常规地连接或共价结合至少一种期望分子或部分或者与其形成络合物。报道分子被定义为可使用测定进行检测的任何部分。已与抗体缀合的报道分子的非限制性实例包括酶、放射性标记、半抗原、荧光标记、磷光分子、化学发光分子、生色团、发光分子、光亲和分子、着色颗粒或配体例如生物素。
抗体缀合物的某些实例是其中抗体与可检测标记连接的那些缀合物。“可检测标记”是由于其特异性的功能特性和/或化学特征而可被检测的化合物和/或元素，其使用允许检测和/或者进一步量化(如果期望的话)其所连接的抗体。
可使用抗体作为腺病毒蛋白的探针通过western印迹分析来确定细胞群中的Rb表达或腺病毒基因表达。检测到的病毒蛋白水平将指示该细胞中是否正在发生病毒蛋白表达。
可采用用于检测生物组分(例如参与腺病毒复制或者细胞Rb或p53途径的蛋白质、多肽或肽)的免疫检测方法。一些免疫检测方法包括酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫放射测定、荧光免疫测定、化学发光测定、生物发光测定和Western印迹等等。多种可用免疫检测方法的步骤已在科学文献例如Doolittle和Ben-Zeev(1999)；Gulbis和Galand(1993)；DeJager等(1993)；Nakamura等(1987)中进行了描述，每一篇均通过引用并入本文。
在抗原检测方面，所分析的生物试样可以是怀疑含有抗原的任何试样，例如，如组织切片或样品、经均化的组织提取物、细胞、细胞器、上述任一含抗原组合物的分离和/或纯化形式，或者甚至是与细胞或组织接触的任何生物流体，包括血液和/或血清，但优选组织试样或提取物。
一般来说，免疫复合物形成的检测在本领域中是公知的并且可通过应用多种方法实现。这些方法一般基于标记或标志物的检测，所述标记或标志物例如那些放射性标签、荧光标签、生物标签和酶标签中的任一种。涉及这些标记的使用的美国专利包括3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,277,437、4,275,149和4,366,241，每一篇均通过引用并入本文。当然，如本领域中已知的，通过使用第二结合配体(例如二抗和/或者生物素/亲和素配体结合布置)可发现额外的优点。
可在治疗之前、期间或之后对肿瘤进行活组织检查并对其进行上述测试以确定胶质瘤细胞是否存在。活组织检查方案的一个实例如下。立体定向活组织检查是将金属探针精确地导入脑瘤中，切下脑瘤的一小片并取出使得可在显微镜下对其进行检测。在局部麻醉下将患者转运至MRI或CAT扫描套间并使框架(frame)与头皮相连。框架的“针”与颅骨的外板相连以刚性固定(框架将不会并且不能从该点向前移动直至活组织检查完成)。获得扫描(MRI或CT)。神经外科医生对扫描进行检查并确定针对靶标的最安全轨道或途径。这意味着避开了关键的结构。确定靶标的空间坐标并选择最佳途径。在全身麻醉下进行活组织检查。在进入点之上产生小的切口并经颅骨钻取小孔。对“硬脑膜”进行穿孔并向靶标缓慢地导入活组织检查探针。取出活组织检查样品并将其置于保存流体中以用于在显微镜下进行检测。通常，活组织检查套间中有病理学家，使得可快速确定活组织检查的成功。
V.实施例
包括以下实施例以证明本发明的一些优选实施方案。本领域技术人员应认识到，以下实施例中公开的技术代表本发明人发现的在本发明实践中起良好作用的技术，并且因此可认为构成其实践的优选模式。然而，根据本公开内容，本领域技术人员应认识到可在所公开的具体实施方案中进行多种改变并且仍获得相似或类似的结果而不偏离本发明的概念、精神和范围。更具体地，将显而易见的是，可用在化学和生理上均相关的某些物质替代本文中所述的物质同时将获得相同或类似的结果。对本领域技术人员而言显而易见的所有这些类似替代和改变均被认为在如所附权利要求书限定的本发明的精神、范围和概念内。
实施例1-方法
在德克萨斯州休斯敦(HoustonTexas)的MD安德森癌症中心(MDAndersonCancerCenter)在研究人员赞助的IND下开始DNX-2401对高级胶质瘤的1期、剂量递增、两部分研究。为了符合本研究，要求患者患有经组织学上证实的复发性高级恶性胶质瘤。本研究的A组评价将单剂量的DNX-2401直接瘤内注射到经活组织检查确定的复发性胶质瘤的生长区中，而B组评价将分开剂量的病毒注射到切除胶质瘤后的切除床中。两个研究组的起始剂量均为107(例如1×107)病毒颗粒(vp)，并计划以半对数增量将剂量递增至310vp。本研究的主要目的是确定将DNX2401原位注射到人脑瘤中的安全性、耐受能力、可行性和生物学效应。
使A组患者通过针接受直接的瘤内注射并按组群(cohort)经历标准剂量递增。肿瘤可以是或者可以不是已经通过外科手术可切除的。分配剂量水平为：1×107、3×107、1×108、3×108、1×109、3×109、1×1010和3×1010病毒颗粒(vp)。在进行病毒注射之后，观察患者，持续28天，之后招募下一组群的患者并进行治疗。
B组仅包括患有可切除肿瘤的患者。通过永久植入肿瘤中心的导管使B组患者接受直接的瘤内注射，然后按组群经历标准剂量递增(即，剂量水平：1×107、3×107、1×108、3×108、1×109、3×109、1×1010和3×1010病毒颗粒(vp))。B组的剂量递增与A组类似，不同之处在于B组比A组滞后1个剂量水平。B组中不包括A组的患者。在观察14天之后，以整体方式切除肿瘤并使导管保持原位以提供用于病理学和分子分析的生物样品。在去除肿瘤之后，向切除腔周围的残余肿瘤中再次注射DNX2401(即，瘤内注射到瘤床中)。
A组于2012年9月完成25个对象的招募。如所计划的，所达到的最大剂量为3×1010vp。评价DNX-2401作为外科手术之辅药的B组的招募开始的较晚并且招募了12个对象，其中最大剂量为3×108vp。此后按计划对两个治疗组进行追踪：以月为间隔持续4个月，每两个月持续2年，以及每4个月持续终生。已经并且将监测患者的毒性和症状，并在研究期间基于临床护理标准在适当时使用磁共振成像(magneticresonanceimaging，MRI)、腰椎穿刺(spinaltap)及其它测试进行评价。
实施例2-结果
如评估时间表中所列出的，以定期时间间隔对两个治疗组进行研究评估。依照MD安德森标准以电子病例报告形式记录数据并约每4周通过MD安德森的IND部门进行数据的内部机构监测。所示数据是未经审核的并且此时应被认为是初步数据。
暴露程度。在瘤内递送之后，A组患者的最大病毒暴露由3×1010vp组成(4名患者)。B组中有三名患者被递送6×108vp的最大剂量。
表1-暴露
患者数目 总剂量(vp) 说明
A组(N＝25)
组群1-1X107 3 1X107 瘤内
组群2-3X107 3 3X107 瘤内
组群3-1X108 3 1X108 瘤内
组群4-3X108 3 3X108 瘤内
组群5-1X109 3 1X109 瘤内
组群6-3X109 3 3X109 瘤内
组群7-1X1010 3 1X1010 瘤内
组群8-3X1010 4 3X1010 瘤内
B组(N＝12)
组群1-1X107 3 2X107 瘤内/壁内
组群2-3X107 3 6X107 瘤内/壁内
组群3-1X108 3 2X108 瘤内/壁内
组群4-3X108 3 6X108 瘤内/壁内
表2-患者分布
总共招募37名患者，其中A组中治疗25名患者(DNX-2401的瘤内施用)，B组中治疗12名患者(DNX-2401瘤内/壁内施用)。截止2013年3月，A组中25名所治疗患者中的2名和B组中12名所治疗患者中的1名仍继续进行研究并依据方案进行追踪。
在招募的37名患者中，29名患者患有经组织学确认的成胶质细胞瘤，7名患有间变性星形细胞瘤，以及1名患者患有神经胶质肉瘤。在进入研究之后，27名患者已经历第一次复发并且10名患者已发生两次肿瘤复发。在功能损伤方面，28名患者报道具有90至100的卡氏评分(Karnofskyscore)(A组中的20名患者和B组中的8名患者)，9名患者报道具有70至80的卡氏评分(A组中的5名患者和B组中的4名患者)。
A组(招募25名)。具有可测量的肿瘤且完成单剂量治疗的所有患者均认为有可评价的响应(N＝25)。患有经组织病理学确认的复发性高级胶质瘤的患者在研究招募时针对该疾病进行了着重预治疗。所有的患者均已接受放射治疗伴随有替莫唑胺。
所有患者(其可以是已可进行外科手术的，也可以不是)均成功完成了高至3×1010vp的剂量的治疗(N＝25)。尽管这是横跨四个数量级的剂量递增研究，但是所有患者都涵盖在效力分析中。在4名(16％)患者中观察到完全响应(completeresponse，CR)，在2名(8％)中观察到部分响应(partialresponse，PR)，在7名(28％)中观察到稳定疾病(stabledisease，SD)，并且在12名(48％)中观察到进行性疾病(progressivedisease，PD)。在13名(52％)患者中观察到临床益处(CR+PR+SD)。依据RANO标准观察到响应(CR)的最低剂量为1×108vp(组群3)。这名患者继续表现出完全响应，在DNX-2401治疗后38个月时仍存活并继续研究。第二CR在组群7中，剂量为1e10vp。
所有患者均包括在PFS(无进展存活)和OS(整体存活)分析中。总共7名(28％)患者获得至少6个月的无进展存活(PFS-6)。所有对象的中值OS为8个月和1年。OS为32％，其中1个存活患者(5.5个月)尚未达到一年的存活标记。响应者(CR+PR)的中值OS为14个月。截止2013年3月，6名患者(24％，2CR、1PR、3SD)仍保持存活，其从治疗开始已存活超过一年。
B组(招募12名)。患有经组织病理学确认的复发性高级胶质瘤的患者在招募时进行了重度预治疗。所有的患者均已接受放射治疗伴随有替莫唑胺。
所有患者成功完成了高至3×1010vp剂量的治疗(N＝12)(对于在第0天和第14天分次递送的6×108vp的总暴露)。3名患者(25％)在瘤内注射后14天在切除后患有可测量的疾病，9名(75％)患者由于外科手术而未患可测量的疾病。在患有可测量疾病的3名患者中，1名实现部分响应(PR)，2名患者实现稳定疾病(SD)。在未患可测量疾病的9名患者中(75％)，5名(56％)患者表现出稳定疾病(SD)，其通过不存在复发而确定。B组中所有患者的临床益处(CR+PR+SD)为66％。总体而言，至少3名(25％)患者在6个月时无进展。7名(58％)患者截止2013年3月仍保持存活。
肿瘤响应机制。单次施用DNX-2401作为用于复发性高等级胶质瘤的单一治疗的关键优势包括：
●持续的抗肿瘤响应，具有MRI上的特征改变
●毒副作用最小(如果有的话)，从而增强患者的生命质量
●不排除组合使用其它抗癌剂或治疗
●完全抗肿瘤响应的潜力。
肿瘤响应于治疗似乎伴随着对比MRI上的标记变化。这些变化包括对比图案(pattern)(“葡萄串(bunchofgrapes)”)中的早期全局变化(globalchange)，在一些情况下随后出现“螺纹(thread)”图案或类似于“肥皂泡”的图案。截止DNX-2401治疗后几个月，数个肿瘤似乎有所进展并且具有较不清楚的边界。现在认为这是由炎症引起的，如在其它免疫治疗产品下所观察到的炎症一样。随后，其将变成有更大差别的较小肿瘤，其在一些情况下继续进行至完全响应。
证明在该试验期间观察到之MRI上的特征变化与响应相关的证据部分来源于对经外科手术切除的肿瘤的病理学报道。在DNX-2401治疗后数月，对于看似为肿瘤进展的响应，切除两个肿瘤。在两个事件中，病理学家报道，肿瘤受到＞80％的破坏(“治疗相关的坏死”)，而剩余的肿瘤被免疫细胞混合物浸润(随后表明主要是CD8T细胞)。这向我们表明，DNX-2401感染可能正触发有效的抗肿瘤免疫应答或者另外地使肿瘤变得不稳定。如果这一发现得到证实，则其可解释在单次DNX-2401注射后在数个对象之肿瘤中观察到的抗胶质瘤效应的持续性(通过MRI扫描和/或治疗后切除)。
对治疗的抗肿瘤响应是该疾病中尤其重要的终点，因为由于肿瘤快速生长而导致的正常脑组织移位最终将导致重度残疾和死亡。总而言之，对可以积极影响疾病进程使发病率最低的攻击成胶质细胞瘤的新模式仍然存在高度尚未满足的需求。作为与较少副作用相关同时降低药物抗性和脱靶毒性之风险的新药剂，DNX-2401有潜力比复发性成胶质细胞瘤的当前治疗更安全且更有效。此外，其效力看起来甚至超过了(达到25.9％的目标响应率(22/85))。22名患者实现部分缓解，其响应的中值持续时间为4.2个月。
生物标志物和抗肿瘤免疫。在I期临床试验期间获得的经验已揭示了对DNX-2401溶瘤治疗作出响应的患者与未作出响应的患者之间的有趣关系。这一关系是基于针对抗癌症相关抗原(cancer-relatedantigen，CRA)之抗体进行的血清测定。由于CRA抗原在正常组织中不存在，但是当癌症进展时可由癌症“打开(turnedon)”，因此其对癌症内的疾病性质提供了信息。
发明人已针对是否存在针对31种不同CRA的抗体对进入I期临床试验的患者进行了测试。他们特别地寻找了在接受DNX-2401之前表达针对这些抗原之抗体的患者，并且还寻找了在治疗后产生抗体的患者。令人吃惊的是，其肿瘤对DNX-2401有射线照相术响应(radiographicresponse)的患者对限定的肿瘤抗原组具有低体液抗体应答或者没有体液抗体应答。
抗体应答的缺乏表明对DNX-2401治疗的响应可能基于细胞相对于体液免疫应答。由于这一原因，发明人对响应者相对于非响应者的细胞因子谱进行了研究，并且预期强响应者将展现出更多的Th1(细胞毒T8细胞)极化而未响应者将显示出与Th2(抗体产生性)谱较一致的谱。一般来说，Th1应答以抗原特异性干扰素-γ(IFN-γ)、IL-12和补体固定抗体的增加为特征，而Th2表型以IL-4、IL-5、IL-10的产生以及IgE、IgA和总IgG抗体的增加为特征。细胞因子表达证实了这一预期(使用ELISA半定量MSD测定)。
与其它较常规的生物标志物类别相比，测量患者血清中的抗体具有数个优势。第一，血清是容易获取的组织，其需要相对非侵入性的取样。第二，抗体提供了放大的应答，并且其相对丰度能够实现早期警示或者检测小的变化。第三，无需进行组织活检，其是入侵性的、使患者感到不舒服并且依赖于肿瘤的可接近性，通常包含多种细胞类型的混合物。
安全性。迄今，尚没有与向脑瘤施用DNX-2401相关的无法预期的毒性。在两种类型的施用(即，瘤内和壁内)之后，不良事件的严重程度一般为轻度至中度并且与病毒无关。没有患者由于不良事件而中断研究，并且对患者血清、唾液和尿液的分析并未证实病毒散布(shed)。认为所有的死亡SAE与DNX-2401无关。这一安全性特征的显著之处在于可在患者中引起重度毒性。这些患者均未经历任何与所述药物相关的不良事件，因此目前DNX-2401绝对不存在安全性或毒性问题。
来自用DNX-2401进行的另外两个临床研究的安全性数据支持了在脑临床研究中观察到的安全性。在妇科癌症中，使患有妇科(gynelogic)恶性肿瘤的21名女性接受每日1e9vp至1e12vp/天的剂量×3天(Kimball等，2010；ClinicalTrials.govIdentifier：NCT00562003)。另外，对患有高等级胶质瘤的12名患者进行治疗并且研究人员已报道在肿瘤中和脑周围输注病毒是可行且安全的。不良事件是短暂的并且严重的不良事件与病毒无关(ClinicalTrials.govIdentifier：NCT01582516)。
当前的很多癌症治疗剂由于对患者具有重度毒性而在其使用方面受到限制。例如，AVF3708g中招募的患者中＞99％的接受贝伐单抗的患者被报道经历不良事件，包括疲劳、头痛、高血压、失血/出血、静脉/动脉血栓栓塞事件。其它的严重事件包括伤口愈合并发症、蛋白尿症、胃肠道穿孔。基于癌症治疗剂毒性的历史数据来看，DNX-2401未观察到不良事件是出乎意料且令人惊讶的。
特定患者结果的实例。仅接受DNX-2401来治疗成胶质细胞瘤的3名患者已继续进行追踪。细节提供如下。
患者#12。对患者#12(56岁白人女性)的诊断导致肿瘤切除，以及用由替莫唑胺和达沙替尼组成的化学治疗以及放射治疗的后续治疗。将她招募于A组(瘤内施用DNX-2401)并随机分配至组群3。其接受1mLDNX-2401的4次瘤内注射，总剂量为1×108病毒颗粒(vp)。在临床上，该患者已表现的很好。所有的神经病学症状均随后在最初6个月内消退。其脑病变的总尺寸确实略有增加，具有假性进展/炎症的表现；然而，在那之后是持续的肿瘤缩小。在研究期间，其未经历严重不良事件(seriousadverseevent，SAE)。已认为除淋巴细胞减少之外的所有AE均与DNX-2401无关，而认为淋巴细胞减少也不太可能相关而是替莫唑胺继发性的。在32个月时，该患者当前仍存活并且继续追踪其存活。最后的MRI仅揭示了周围的脑的瘢痕形成和收缩，认为这是对仅用病毒治疗的完全响应。患者持续表现良好并且每4个月进行监测。她感觉良好并且报道每天行走60分钟且种植花木，而其在接受DNX-2401之前她无法进行这些活动。
患者#33。患者#33(40岁白人女性)经历了鉴定为成胶质细胞瘤的原发性肿瘤的切除。她接受替莫唑胺化学治疗和放射治疗。将她招募于A组(瘤内施用DNX-2401的)并随机分配至组群7。她接受4次/mLDNX-2401的瘤内注射，总剂量为1×1010vp。其在注射后的当月立即表现良好并且神经病学症状消退，尤其是表达性失语和部分综合性癫痫(partialcomplexseizure)。另外，连续MR扫描上的对比增强块以及FLAIR异常几乎都已消失。在研究期间，该患者未经历严重不良事件。总之，根据McDonald标准，患者看起来已具有完全响应。自DNX-2401施用以来，患者当前仍存活并表现良好。到目前为止，在注射DNX-2401后16个月，她已经没有神经病学方面的症状。
患者#42。患者#42(白种人，女性)已经历确认为成胶质细胞瘤的原发性肿瘤的切除。她接受放射治疗，并且还如下接受4个化学治疗疗程：替莫唑胺、美金刚(memantine)、再次的替莫唑胺以及马西替坦(macitentan)。将她招募于B组(瘤内/壁内施用DNX-2401)并随机分配至组群4。她接受1次瘤内注射/mLDNX-2401，总剂量为3×108vp，之后接受10次1mLDNX-2401的壁内注射，总剂量为3×108vp。在切除之后，没有可测量的疾病。在参与研究期间，其未经历严重的不良事件。患者目前仍存活并且表现良好。
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本领域技术人员容易理解，本发明非常适合于实施所述目的并获得所提及的目标和优点以及其中固有的那些目标和优点。本文中所述的方法、操作和技术目前代表了一些优选实施方案并且旨在是示例性的，并非旨在限制范围。本领域技术人员将会想到其中的改变及其它用途变化，这些涵盖在本发明的精神或所附权利要求书的范围所限定的精神内。
VI.参考文献
以下参考文献，以其提供补充本文所述内容的示例性操作或其它细节的程度，特别地通过引用并入本文。
美国专利3,817,837
美国专利3,850,752
美国专利3,939,350
美国专利3,996,345
美国专利4,275,149
美国专利4,277,437
美国专利4,366,241
美国专利8,168,168
美国专利6,824,771
美国专利申请20030138405
Andreanskietal.，CancerRes.，57：1502-1509，1997.
Chaseetal.，Nat.Biotechnol.，16，444-448，1998.
Chintalaetal.，Oncogene，15(17)：2049-2057，1997.
Coffeyetal.，Science，282：1332-1334，1998.
CollinsandJames，FASEBJ.，7：926-930，1993.
Costelloetal.，CancerRes.，56：2405-2410，1996.
Costelloetal.，CancerRes.，57：1250-1254，1997.
DeJageretal.，Semin.Nucl.Med.，23(2)：165-179，1993.
DoolittleandBen-Zeev，MethodsMolBiol，109：215-237，1999
DysonandHarlow，CancerSurv.，12：161-195，1992.
FlintandShenk，Annu.Rev.Genet.，31：177-212，1997.
Freytagetal.，Hum.GeneTher.，9：1323-1333，1998.
Fueyoetal.，ArchivesofNeurology，56(4)：445-448，1999.
Fueyoetal.，J.Natl.CancerInst.，95：652-60，2003.
Fueyoetal.，Nat.Med.，4：685-690，1998b.
Fueyoetal.，NatureMedicine，4(6)：685-690，1998.
Fueyoetal.，Neurology，50：1307-1315，1998c.
Fueyoetal.，Neurology，51：1250-1255，1998a.
Fueyoetal.，Oncogene，12：103-110，1996a.
Fueyoetal.，Oncogene，13：1615-1619，1996b.
Fueyoetal.，Oncogene，19：2-12，2000.
Furnarietal.，CancerSurv.，25，233-275，1995.
Geoergeretal.，CancerRes.，62(3)：764-772，2002.
Gomez-Manzanoetal.，In：GeneTransferandTherapyforNeurologicalDisorders，ChioccaandBreakefield(Eds.)，HumanPressInc.：NJ，201-225，1998.
GrunhausandHorwitz，SeminarinVirology，3：237-252，1992.
GulbisandGaland，Hum.Pathol.，24(12)：1271-1285，1993.
Hameletal.，J.Neurooncol.，16：159-165，1993.
HarlowandLane，In：Antibodies：ALaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratory，ColdSpringHarbor，NY，346-348，1988.
Heiseetal.，Nat.Med.，3：639-645，1997.
Hensonetal.，Ann.Neurol.，36：714-721，1994.
Hessetal.，Neuro-Oncol.，1(4)：282-288，1999.
Hirvonenetal.，Br.J.Cancer，69：16-25，1994.
Jacotot，Acad.Sci.Hebd.SeancesAcad.Sci.，264(22)：2602-2603，1967.
Jenetal.，CancerRes.，54：6353-6358，1994.
Kaelin，Bioessays，21(11)：950-8，1999.
Karlssonetal.，EMBOJ.，5：2377-2385，1986.
Kimballetal.，ClinCancerResearch，16(21)；5277-87，2010.
Kirnetal.，Nat.Med.，4，1341-1342，1998.
Kirn，ExpertOpin.Biol.Ther.，1(3)：525-538，2001.
Kruseetal.，J.Neuro-Oncol.，19：161-168，1994.
KyritsisandYung，BaillieresClinicalNeurology，5(2)：295-305，1996.
Kyritsisetal.，Mol.Carcinog.，15：1-4，1996b.
Kyritsisetal.，Oncogene，12：63-67，1996a.
Martuzaetal.，Science，10：854-856，1991.
MacDonaldetal.，J.Clin.Oncol.，8(7)：1277-80，1990.
Minetaetal.，Nat.Med.，9：938-943，1995.
Nakamuraetal.，In：HandbookofExperimentalImmunology(4thEd.)，Weiretal.(Eds)，1：27，BlackwellScientificPubl.，Oxford，1987.
Nevins，Science，258：424-429，1992.
PCT申请WO95/27071
PCT申请WO96/12406
Puumalainenetal.，Hum.GeneTher.，9：1769-1774，1998.
Remington’sPharmaceuticalSciences，15thed.，33：624-652，MackPublishingCompany，Easton，PA，1980.
RouslahtiandRajotte，Annu.Rev.Immunol.，18，813-827，2000.
Schiffer，Forum，8(3)：244-255，1998.
Schmidtetal.，CancerRes.，54：6321-6324，1994.
ShapiroandShapiro，Oncology，12(2)：233-240，1998.
Sidranskyetal.，Nature，355：846-847，1992.
Suzukietal.，Clin.CancerRes.，7：120-126，2001.
Uekietal.，CancerRes.，56：150-153，1996.
Vile，CancerGeneTher.，9(12)：1062-1067，2002.
Whyteetal.，Cell，56：67-75，1989.
Whyteetal.，Cell，62：257-265，1988.
Wildneretal.，CancerRes.，59：410-413，1999.
Yanetal.，J.Virol.，77(4)：2640-2650，2003.

Claims (31)

1.一种用于在人患者中治疗胶质瘤的方法，其包括：
a)鉴定患有胶质瘤的患者；和
b)使所述胶质瘤与溶瘤腺病毒接触，所述溶瘤腺病毒具有不能结合Rb的E1A多肽，并且包含H1结构域中***有RGD氨基酸的纤维蛋白，
其中治疗引起以下中的一项或更多项：
i)肿瘤负荷降低大于25％；
ii)六个月的无进展存活；和
iii)肿瘤坏死，
并且所述治疗不产生由所述溶瘤腺病毒引起的足以导致所述治疗终止的不良事件。
2.权利要求1所述的方法，其中所述溶瘤腺病毒是Δ24腺病毒。
3.权利要求1所述的方法，其中步骤a)包括肿瘤成像，并且所述方法还包括在步骤a)之后且在步骤b)之前获得所述肿瘤的活组织检查。
4.权利要求1所述的方法，其中所述胶质瘤是可切除的。
5.权利要求1所述的方法，其中所述胶质瘤是不可切除的。
6.权利要求4所述的方法，其中在所述治疗之后切除所述胶质瘤。
7.权利要求6所述的方法，其中用所述溶瘤腺病毒处理切除后的瘤床。
8.权利要求5所述的方法，其中在所述治疗之后切除所述胶质瘤。
9.权利要求1所述的方法，其中通过将所述腺病毒颅内递送到所述患者中来使所述胶质瘤与所述腺病毒接触。
10.权利要求9所述的方法，其中递送包括瘤内注射。
11.权利要求10所述的方法，其中进行多次注射。
12.权利要求7所述的方法，其中将切除后的导管植入所述患者中并经所述导管递送所述溶瘤腺病毒。
13.权利要求1所述的方法，其中所述胶质瘤是星形细胞瘤、少突胶质瘤、间变性胶质瘤、成胶质细胞瘤、室管膜瘤、脑脊膜瘤、松果体区肿瘤、脉络丛肿瘤、神经上皮瘤、胚胎性肿瘤、外周神经母细胞性肿瘤、脑神经肿瘤、造血***肿瘤、生殖细胞瘤或鞍区肿瘤。
14.权利要求13所述的方法，其中所述胶质瘤是成胶质细胞瘤。
15.权利要求1所述的方法，其中通过用针在最短10分钟的时间内缓慢输注来施用所述溶瘤腺病毒。
16.权利要求1所述的方法，其中立体定向地将所述溶瘤腺病毒施用到所述患者的胶质瘤中的多于一个部位。
17.权利要求1所述的方法，其还包括向所述患者施用第二治疗，其中所述第二治疗是抗血管生成治疗、化学治疗、免疫治疗、外科手术、放射治疗、免疫抑制剂或使用治疗性多核苷酸的基因治疗。
18.权利要求17所述的方法，其中在施用包含所述溶瘤腺病毒的组合物之前向所述患者施用所述第二治疗。
19.权利要求17所述的方法，其中与施用包含所述溶瘤腺病毒的组合物同时向所述患者施用所述第二治疗。
20.权利要求17所述的方法，其中在施用包含所述溶瘤腺病毒的组合物之后向所述患者施用所述第二治疗。
21.权利要求17所述的方法，其中所述化学治疗包括烷化剂、有丝***抑制剂、抗生素或抗代谢物。
22.权利要求1所述的方法，其中向所述患者施用约103至约1015个病毒颗粒。
23.权利要求21所述的方法，其中向所述患者施用约105至约1012个病毒颗粒。
24.权利要求21所述的方法，其中向所述患者施用约107至约1010个病毒颗粒。
25.权利要求1所述的方法，其中基于Th1应答的存在进一步选择所述对象。
26.权利要求24所述的方法，其中所述Th1应答以抗原特异性干扰素-γ(IFN-γ)、IL-12和补体固定抗体的增加为特征。
27.权利要求1所述的方法，其中观察到i)至iii)中的2项或更多项。
28.权利要求1所述的方法，其中观察到i)至iii)中的全部三项。
30.权利要求1所述的方法，其中所述胶质瘤是复发性的。
31.权利要求1所述的方法，其中一种或更多种首次胶质瘤治疗已对所述胶质瘤失效。
32.一种用于在人患者群体中治疗胶质瘤的方法，其包括：
a)鉴定患有胶质瘤的患者；和
b)使所述胶质瘤与溶瘤腺病毒接触，所述溶瘤腺病毒具有不能结合Rb的E1A多肽，并且包含H1结构域中***有RGD氨基酸的纤维蛋白，
其中所述群体的治疗引起以下中的一项或更多项：
i)30％的所述患者具有临床益处，其中临床益处定义为完全响应者+部分响应者加疾病稳定；
ii)25％的六个月无进展存活；
iii)响应者的12个月中值存活，其中响应者定义为完全响应者+部分响应者。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110072550A (zh) * 2016-11-01 2019-07-30 德那翠丝有限公司 用于治疗脑癌的组合疗法
CN110799204A (zh) * 2017-05-19 2020-02-14 小利兰·斯坦福大学理事会 治疗肺高血压的恩扎妥林和脆性组氨酸三联体(fhit)增加剂
CN113677370A (zh) * 2018-12-20 2021-11-19 马德里自治大学 使用细小病毒治疗携带TP53基因突变和/或p53蛋白翻译后修饰的癌症

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2013211871B2 (en) 2012-01-25 2017-12-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Biomarkers and combination therapies using oncolytic virus and immunomodulation
AU2013214776B2 (en) 2012-02-02 2017-11-09 Board Of Regents, The University Of Texas System Adenoviruses expressing heterologous tumor-associated antigens
AU2014236207B2 (en) 2013-03-14 2019-05-23 Salk Institute For Biological Studies Oncolytic adenovirus compositions
CA3013637A1 (en) 2016-02-23 2017-08-31 Salk Institute For Biological Studies High throughput assay for measuring adenovirus replication kinetics
CN117384961A (zh) 2016-02-23 2024-01-12 萨克生物研究学院 对病毒动力学影响最小的治疗性腺病毒中的外源基因表达
WO2018111767A1 (en) 2016-12-12 2018-06-21 Salk Institute For Biological Studies Tumor-targeting synthetic adenoviruses and uses thereof
KR20190098215A (ko) 2016-12-21 2019-08-21 멤젠 엘엘씨 무장된 복제-가능 종양 분해 아데노바이러스
US20210340279A1 (en) 2018-08-31 2021-11-04 Yale University Compositions and methods of using cell-penetrating antibodies in combination with immune checkpoint modulators
AU2020325825A1 (en) 2019-08-05 2022-03-17 Mesoblast International Sarl Cellular compositions comprising viral vectors and methods of treatment
KR20230046298A (ko) 2020-08-10 2023-04-05 메조블라스트 인터내셔널 에스에이알엘 세포 조성물 및 치료 방법
RU2759405C1 (ru) * 2021-02-26 2021-11-12 федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный медицинский исследовательский центр онкологии» Министерства здравоохранения Российской Федерации Способ адъювантной адаптивной стереотаксической лучевой терапии в лечении первичных злокачественных глиальных опухолей головного мозга
EP4329878A1 (en) * 2021-04-26 2024-03-06 Dnatrix, Inc. Use of oncolytic adenovirus for the treatment of pediatric brain cancer
WO2024081736A2 (en) 2022-10-11 2024-04-18 Yale University Compositions and methods of using cell-penetrating antibodies

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030138405A1 (en) * 2001-04-17 2003-07-24 Juan Fueyo Conditionally replicative adenovirus to target the Rb and Rb-related pathways

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL154598B (nl) 1970-11-10 1977-09-15 Organon Nv Werkwijze voor het aantonen en bepalen van laagmoleculire verbindingen en van eiwitten die deze verbindingen specifiek kunnen binden, alsmede testverpakking.
US3817837A (en) 1971-05-14 1974-06-18 Syva Corp Enzyme amplification assay
US3939350A (en) 1974-04-29 1976-02-17 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Fluorescent immunoassay employing total reflection for activation
US3996345A (en) 1974-08-12 1976-12-07 Syva Company Fluorescence quenching with immunological pairs in immunoassays
US4275149A (en) 1978-11-24 1981-06-23 Syva Company Macromolecular environment control in specific receptor assays
US4277437A (en) 1978-04-05 1981-07-07 Syva Company Kit for carrying out chemically induced fluorescence immunoassay
US4366241A (en) 1980-08-07 1982-12-28 Syva Company Concentrating zone method in heterogeneous immunoassays
US7252989B1 (en) 1994-04-04 2007-08-07 Board Of Regents, The University Of Texas System Adenovirus supervector system
JPH10507758A (ja) 1994-10-19 1998-07-28 ジェネティック セラピー，インコーポレイテッド アデノウイルスおよび免疫抑制剤同時反復投与を伴う遺伝子治療
CN101028523A (zh) * 1995-11-30 2007-09-05 德克萨斯州立大学董事会 诊断和***的方法及组合物
WO2000067576A1 (en) 1999-05-12 2000-11-16 The Uab Research Foundation Infectivity-enhanced conditionally-replicative adenovirus and uses thereof
US20040175362A1 (en) 1999-05-12 2004-09-09 Curiel David T. Infectivity-enhanced conditionally-replicative adenovirus and uses thereof
FI123955B (en) * 2011-11-25 2014-01-15 Oncos Therapeutics Ltd Oncolytic adenovirus

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030138405A1 (en) * 2001-04-17 2003-07-24 Juan Fueyo Conditionally replicative adenovirus to target the Rb and Rb-related pathways

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HONG JIANG ET AL: "Oncolytic adenovirus: preclinical and clinical studies in patients with human malignant gliomas", 《CURR GENE THER.》 *
MARTINE L. M. LAMFERS ET AL: "Potential of the Conditionally Replicative Adenovirus Ad5-Δ24RGD in the Treatment of Malignant Gliomas and Its Enhanced Effect with Radiotherapy", 《CANCER RESEARCH》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110072550A (zh) * 2016-11-01 2019-07-30 德那翠丝有限公司 用于治疗脑癌的组合疗法
CN110799204A (zh) * 2017-05-19 2020-02-14 小利兰·斯坦福大学理事会 治疗肺高血压的恩扎妥林和脆性组氨酸三联体(fhit)增加剂
CN113677370A (zh) * 2018-12-20 2021-11-19 马德里自治大学 使用细小病毒治疗携带TP53基因突变和/或p53蛋白翻译后修饰的癌症

Also Published As

Publication number Publication date
EP3010519B1 (en) 2021-04-07
HK1225962A1 (zh) 2017-09-22
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RU2016101057A3 (zh) 2018-03-19
WO2014204814A1 (en) 2014-12-24
SG10201710528WA (en) 2018-01-30
SG11201510430RA (en) 2016-01-28
US20160143967A1 (en) 2016-05-26
AU2014281826B2 (en) 2019-10-17
JP2016523861A (ja) 2016-08-12
JP2020033373A (ja) 2020-03-05
JP6956159B2 (ja) 2021-10-27
ES2878549T3 (es) 2021-11-19
CA2915973A1 (en) 2014-12-24
JP6613231B2 (ja) 2019-11-27
US20210213079A1 (en) 2021-07-15
IL243215B (en) 2019-10-31
EP3010519A1 (en) 2016-04-27
DK3010519T3 (en) 2021-05-17

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