CN105687368B - 一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，枣仁挥发油作为促进小鼠毛发生长的活性成分，灌胃给药和待生发部位涂抹同时进行。本发明能够促进小鼠毛发快速生长。

Description

一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用
技术领域
本发明属于天然植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用。
背景技术
枣仁(Zizyphus jujube Mill)系鼠李科枣属植物枣类干燥成熟的种仁，枣仁主要含有枣仁皂苷类、三萜类、脂肪油、蛋白质、甾醇类、磷脂类等化合物。现代药理研究表明:枣仁有补心、镇静、安神、敛汗、补肝、生津等功效，用于虚烦不眠，惊淨多梦，体虚多汗，津伤口渴等症，是较为常用的镇静***类。始载于《神农本草经》，将其列为上品，《本草纲目》列为本部类。医籍初见于《伤寒杂病论》，并以枣仁汤而著名，已有1700多年的药用历史。近代载于历版《中华人民共和国药典》。挥发油是枣仁主要活性成分之一，近年来,枣仁油经研究表明具有和枣仁皂荚类成分相同的镇静催眠作用,已经逐渐为枣仁的一个重要研究内容。
目前枣仁挥发油提取大致为以下几种方法：水蒸气蒸馏法、有机溶剂提取法和超临界流体萃取法。前两种方法都存在收率低、工艺繁琐、操作条件不稳定等问题，而超临界CO2流体萃取法是目前新兴的提取分离技术，尤其适合提取热敏性物质，并且既无重金属污染、无溶剂残留，而且方便运输，提取条件稳定等优点，且在提取过程中加入适量的夹带剂，可以有效提高目标产物的收率，但是仍旧存在提取出油率较低的问题。
目前新疆枣树栽培面积已达700万亩，丰富的红枣资源为枣仁的开发研究提供了得天独厚的有利条件，红枣加工业已成为新疆林果种植业规模化与农民增收的重要环节；但是枣仁挥发油的新用途开发较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够促进小鼠毛发快速生长的枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，枣仁挥发油作为促进小鼠毛发生长的活性成分，灌胃给药和待生发部位涂抹同时进行。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，枣仁挥发油小鼠灌胃给药用量为1-3g/Kg，小鼠待生发部位涂抹以枣仁挥发油为活性成分的外用生发制剂，所述外用生发制剂由甘油、丙二醇和枣仁挥发油组成，甘油和丙二醇的体积比为3:4-8，所述外用生发制剂中枣仁挥发油的含量为50-100mg/mL。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，所述枣仁挥发油是采用如下步骤制备得到的：
(1)枣仁原料的预处理：将枣仁烘干，粉碎过筛，备用；枣仁烘干温度为45-65℃，烘干时间为15-25h，粉碎过筛后的粉末粒度为50-70目；
(2)装料：将预处理的枣仁原料加入超临界CO2流体萃取装置的萃取釜中；
(3)设定萃取釜、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ的温度、压力；萃取釜的萃取压力为20-35MPa，萃取温度为35-50℃，静态萃取时间为0.5-1h，动态一次萃取时间为1-2h，动态二次萃取时间为2-3h；分离釜Ⅰ的分离压力为8.0-9.0MPa，分离温度为30-40℃，分离时间为1-3h；分离釜Ⅱ的分离压力为4.9-5.8MPa，分离温度为30-40℃，分离时间为0.5-2h；
(4)静态萃取：通入一定量的CO2使得萃取釜内升至预定压力，先以溶剂A为夹带剂进行静态萃取；
(5)动态一次萃取：调控CO2的流速，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次萃取；
(6)动态二次萃取：调控CO2的流速，最后加入溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃取；
(7)将分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ得到枣仁挥发油合并；
(8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，除去流动相得到枣仁挥发油纯品。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，步骤(4)和(5)中：溶剂A为正己烷、乙酸乙酯和三氯甲烷的一种。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，步骤(6)中：溶剂B为正丁醇、叔丁基甲基醚或者正丁醇和叔丁基甲基醚的混合物。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，步骤(5)和(6)中：CO2的流量均为1.0-1.5L/min。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，溶剂A的用量为枣仁原料质量的20-30wt％，溶剂B的用量为枣仁原料质量的50-100wt％。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，在步骤(8)中：a)色谱柱：ACQUITYUPLC BEH C18柱，2.1mm×50mm,1.7μm；b)流动相由A相和B相组成：A相为：甲醇，B相为：1mmol/L甲酸铵水溶液；c)梯度洗脱条件：初始时A相与B相体积比为10:1,1分钟时A相与B相体积比为8:3,3分钟时A相与B相体积比为7:4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相与B相体积比为5:6，12分钟时A相与B相体积比为4:7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分钟时A相与B相体积比为1:10，开始收集时间：1min，结束收集时间：18min；d)柱温：35℃；e)流速：0.6mL/分钟。
上述枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，在步骤(1)中还包括将粉碎过筛后的枣仁原料依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡以及晾干步骤；碱浸泡使用的碱溶液是质量浓度为5-12wt％的碳酸钠溶液，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为300-400mL，碱浸泡时间为5-10h，碱浸泡之后过滤；酸浸泡使用的酸溶液是质量浓度为10-15wt％的盐酸，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为200-300mL，酸浸泡时间为0.5-2h，酸浸泡之后过滤；缓冲溶液浸泡使用的缓冲溶液是pH＝7.2的磷酸缓冲溶液，缓冲溶液浸泡时间为5-10h。
本发明的有益效果是：本发明能够促进小鼠毛发快速生长，增大了枣仁挥发油的药用价值和实用价值，提高了枣仁的利用率，增加了其经济效益。
具体实施方式
枣仁挥发油制备实例
实施例1：
一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，包括如下步骤：
(1)枣仁原料的预处理：在温度为45℃将枣仁烘干15h，粉碎过筛，粉末粒度为50-70目，备用；
(2)装料：将预处理的枣仁原料和溶剂A一起加入超临界CO2流体萃取装置的萃取釜中；本实施例中溶剂A为正己烷；溶剂A的用量为枣仁原料质量的20wt％；
(3)设定萃取釜、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ的温度、压力；
萃取釜的萃取压力为20MPa，萃取温度为35℃；分离釜Ⅰ的分离压力为8.0MPa，分离温度为30℃；分离釜Ⅱ的分离压力为4.9MPa，分离温度为30℃；
(4)静态萃取：通入一定量的CO2使得萃取釜内升至步骤(3)中的设定压力，先以溶剂A为夹带剂进行静态萃取，静态萃取时间为0.5h；
(5)动态一次萃取：调控CO2的流量为1.0L/min，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次萃取，动态一次萃取时间为1h；
(6)动态二次萃取：调控CO2的流量为1.0L/min，最后用夹带剂泵向萃取釜中加入溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃取，动态二次萃取时间为2h；溶剂B为正丁醇，溶剂B的用量为枣仁原料质量的50wt％；
(7)在分离釜Ⅰ中分离时间为1h，在分离釜Ⅱ中分离时间为0.5h，将分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ得到枣仁挥发油合并；
(8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，a)色谱柱：ACQUITY UPLC BEHC18柱，2.1mm×50mm,1.7μm；b)流动相由A相和B相组成：A相为：甲醇，B相为：1mmol/L甲酸铵水溶液；c)梯度洗脱条件：初始时A相与B相体积比为10:1,1分钟时A相与B相体积比为8:3,3分钟时A相与B相体积比为7:4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相与B相体积比为5:6，12分钟时A相与B相体积比为4:7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分钟时A相与B相体积比为1:10，开始收集时间：1min，结束收集时间：18min；d)柱温：35℃；e)流速：0.6mL/分钟；除去流动相得到枣仁挥发油纯品。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为21.15％。
实施例2：
一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，包括如下步骤：
(1)枣仁原料的预处理：在温度为65℃将枣仁烘干25h，粉碎过筛，粉末粒度为50-70目，备用；
(2)装料：将预处理的枣仁原料和溶剂A一起加入超临界CO2流体萃取装置的萃取釜中；本实施例中溶剂A为乙酸乙酯；溶剂A的用量为枣仁原料质量的30wt％；
(3)设定萃取釜、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ的温度、压力；
萃取釜的萃取压力为35MPa，萃取温度为50℃；分离釜Ⅰ的分离压力为9.0MPa，分离温度为40℃；分离釜Ⅱ的分离压力为5.8MPa，分离温度为40℃；
(4)静态萃取：通入一定量的CO2使得萃取釜内升至步骤(3)中的设定压力，先以溶剂A为夹带剂进行静态萃取，静态萃取时间为1h；
(5)动态一次萃取：调控CO2的流量为1.5L/min，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次萃取，动态一次萃取时间为2h；
(6)动态二次萃取：调控CO2的流量为1.5L/min，最后用夹带剂泵向萃取釜中加入溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃取，动态二次萃取时间为3h；溶剂B为叔丁基甲基醚，溶剂B的用量为枣仁原料质量的100wt％；
(7)在分离釜Ⅰ中分离时间为3h，在分离釜Ⅱ中分离时间为2h，将分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ得到枣仁挥发油合并；
(8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，a)色谱柱：ACQUITY UPLC BEHC18柱，2.1mm×50mm,1.7μm；b)流动相由A相和B相组成：A相为：甲醇，B相为：1mmol/L甲酸铵水溶液；c)梯度洗脱条件：初始时A相与B相体积比为10:1,1分钟时A相与B相体积比为8:3,3分钟时A相与B相体积比为7:4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相与B相体积比为5:6，12分钟时A相与B相体积比为4:7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分钟时A相与B相体积比为1:10，开始收集时间：1min，结束收集时间：18min；d)柱温：35℃；e)流速：0.6mL/分钟；除去流动相得到枣仁挥发油纯品。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为23.11％。
实施例3：
一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，包括如下步骤：
(1)枣仁原料的预处理：在温度为50℃将枣仁烘干17h，粉碎过筛，粉末粒度为50-70目，备用；
(2)装料：将预处理的枣仁原料和溶剂A一起加入超临界CO2流体萃取装置的萃取釜中；本实施例中溶剂A为三氯甲烷的一种；溶剂A的用量为枣仁原料质量的22wt％；
(3)设定萃取釜、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ的温度、压力；
萃取釜的萃取压力为30MPa，萃取温度为40℃；分离釜Ⅰ的分离压力为8.5MPa，分离温度为35℃；分离釜Ⅱ的分离压力为5.0MPa，分离温度为35℃；
(4)静态萃取：通入一定量的CO2使得萃取釜内升至步骤(3)中的设定压力，先以溶剂A为夹带剂进行静态萃取，静态萃取时间为0.8h；
(5)动态一次萃取：调控CO2的流量为1.2L/min，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次萃取，动态一次萃取时间为1.5h；
(6)动态二次萃取：调控CO2的流量为1.3L/min，最后用夹带剂泵向萃取釜中加入溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃取，动态二次萃取时间为2.5h；溶剂B为正丁醇和叔丁基甲基醚的混合物，溶剂B的用量为枣仁原料质量的60wt％；
(7)在分离釜Ⅰ中分离时间为2h，在分离釜Ⅱ中分离时间为1h，将分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ得到枣仁挥发油合并；
(8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，a)色谱柱：ACQUITY UPLC BEHC18柱，2.1mm×50mm,1.7μm；b)流动相由A相和B相组成：A相为：甲醇，B相为：1mmol/L甲酸铵水溶液；c)梯度洗脱条件：初始时A相与B相体积比为10:1,1分钟时A相与B相体积比为8:3,3分钟时A相与B相体积比为7:4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相与B相体积比为5:6，12分钟时A相与B相体积比为4:7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分钟时A相与B相体积比为1:10，开始收集时间：1min，结束收集时间：18min；d)柱温：35℃；e)流速：0.6mL/分钟；除去流动相得到枣仁挥发油纯品。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为22.75％。
实施例4：
一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，包括如下步骤：
(1)枣仁原料的预处理：在温度为60℃将枣仁烘干23h，粉碎过筛，粉末粒度为50-70目，备用；
(2)装料：将预处理的枣仁原料和溶剂A一起加入超临界CO2流体萃取装置的萃取釜中；本实施例中溶剂A为乙酸乙酯；溶剂A的用量为枣仁原料质量的25wt％；
(3)设定萃取釜、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ的温度、压力；
萃取釜的萃取压力为32MPa，萃取温度为45℃；分离釜Ⅰ的分离压力为8.3MPa，分离温度为33℃；分离釜Ⅱ的分离压力为5.4MPa，分离温度为36℃；
(4)静态萃取：通入一定量的CO2使得萃取釜内升至步骤(3)中的设定压力，先以溶剂A为夹带剂进行静态萃取，静态萃取时间为0.7h；
(5)动态一次萃取：调控CO2的流量为1.4L/min，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次萃取，动态一次萃取时间为1.5h；
(6)动态二次萃取：调控CO2的流量为1.4L/min，最后用夹带剂泵向萃取釜中加入溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃取，动态二次萃取时间为2.2h；溶剂B为正丁醇和叔丁基甲基醚的混合物，正丁醇和叔丁基甲基醚的体积比为1:3，溶剂B的用量为枣仁原料质量的80wt％；
(7)在分离釜Ⅰ中分离时间为2.5h，在分离釜Ⅱ中分离时间为1.5h，将分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ得到枣仁挥发油合并；
(8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，a)色谱柱：ACQUITY UPLC BEHC18柱，2.1mm×50mm,1.7μm；b)流动相由A相和B相组成：A相为：甲醇，B相为：1mmol/L甲酸铵水溶液；c)梯度洗脱条件：初始时A相与B相体积比为10:1,1分钟时A相与B相体积比为8:3,3分钟时A相与B相体积比为7:4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相与B相体积比为5:6，12分钟时A相与B相体积比为4:7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分钟时A相与B相体积比为1:10，开始收集时间：1min，结束收集时间：18min；d)柱温：35℃；e)流速：0.6mL/分钟；除去流动相得到枣仁挥发油纯品。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为23.26％。
实施例5：
本实施例与实施例1的区别在于：在步骤(1)中还包括将粉碎过筛后的枣仁原料依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡以及晾干步骤；碱浸泡使用的碱溶液是质量浓度为5wt％的碳酸钠溶液，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为300mL，碱浸泡时间为5h，碱浸泡之后过滤；酸浸泡使用的酸溶液是质量浓度为10wt％的盐酸，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为200mL，酸浸泡时间为0.5h，酸浸泡之后过滤；缓冲溶液浸泡使用的缓冲溶液是pH＝7.2的磷酸缓冲溶液，缓冲溶液浸泡时间为5h。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为23.82％。
实施例6：
本实施例与实施例2的区别在于：在步骤(1)中还包括将粉碎过筛后的枣仁原料依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡以及晾干步骤；碱浸泡使用的碱溶液是质量浓度为12wt％的碳酸钠溶液，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为400mL，碱浸泡时间为10h，碱浸泡之后过滤；酸浸泡使用的酸溶液是质量浓度为15wt％的盐酸，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为300mL，酸浸泡时间为2h，酸浸泡之后过滤；缓冲溶液浸泡使用的缓冲溶液是pH＝7.2的磷酸缓冲溶液，缓冲溶液浸泡时间为10h。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为24.31％。
实施例7：
本实施例与实施例3的区别在于：在步骤(1)中还包括将粉碎过筛后的枣仁原料依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡以及晾干步骤；碱浸泡使用的碱溶液是质量浓度为10wt％的碳酸钠溶液，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为350mL，碱浸泡时间为8h，碱浸泡之后过滤；酸浸泡使用的酸溶液是质量浓度为12wt％的盐酸，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为250mL，酸浸泡时间为1h，酸浸泡之后过滤；缓冲溶液浸泡使用的缓冲溶液是pH＝7.2的磷酸缓冲溶液，缓冲溶液浸泡时间为8h。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为23.71％。
实施例8：
本实施例与实施例4的区别在于：在步骤(1)中还包括将粉碎过筛后的枣仁原料依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡以及晾干步骤；碱浸泡使用的碱溶液是质量浓度为7wt％的碳酸钠溶液，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为360mL，碱浸泡时间为9h，碱浸泡之后过滤；酸浸泡使用的酸溶液是质量浓度为11wt％的盐酸，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为300mL，酸浸泡时间为2h，酸浸泡之后过滤；缓冲溶液浸泡使用的缓冲溶液是pH＝7.2的磷酸缓冲溶液，缓冲溶液浸泡时间为6h。
经称量最终得到枣仁挥发油的质量，得到枣仁挥发油的产率为30.05％。
由实施例5-8可以看出：依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡之后，枣仁挥发油的产率会大幅提高，所得挥发油的总抗氧化能力变化不大。但是，如果碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡的顺序发生改变，会使得枣仁挥发油的产率相对不浸泡时降低26％以上。
促进小鼠毛发生长实例
促进小鼠毛发生长中包括如下步骤：
(1)选择试验小鼠；
所述小鼠为皮色粉红，出生40d后，毛生长将进入休止期的C57BL/6J近交系小鼠，雌性、雄性对半兼用，35～65d，15～20g，共150只。
(2)小鼠毛发生长期的诱导；
毛发生长期的诱导：在小鼠经一周左右的饲养适应期后，在正式试验的前1天，将松香与石蜡按1：1的质量比例进行加热溶化，待温度合适时涂抹在小鼠背部，待其凝固***后迅速撕下，以达到拔毛的效果。
(3)试验小鼠的分组；
试验分为5组，每组30只小鼠，每组3个重复，每个重复10只(雌雄对半)。第1组为模型空白对照组(拔毛后涂抹蒸馏水及胃灌注生理盐水)；第2组为阳性对照(涂抹章光101及胃灌注生理盐水)。其余3组为试验组，其中：
第3组涂抹外用生发制剂由甘油、丙二醇和枣仁挥发油组成，甘油和丙二醇的体积比为3:4，所述外用生发制剂中枣仁挥发油的含量为50mg/mL；枣仁挥发油小鼠灌胃给药用量为1g/Kg，即按照小鼠体重灌胃给药，每千克小鼠给药1000毫克；本组中所用枣仁挥发油为实施例1中制备的枣仁挥发油。
第4组涂抹外用生发制剂由甘油、丙二醇和枣仁挥发油组成，甘油和丙二醇的体积比为3:8，所述外用生发制剂中枣仁挥发油的含量为100mg/mL；枣仁挥发油小鼠灌胃给药用量为3g/Kg，即按照小鼠体重灌胃给药，每千克小鼠给药3000毫克；本组中所用枣仁挥发油为实施例2中制备的枣仁挥发油。
第5组涂抹外用生发制剂由甘油、丙二醇和枣仁挥发油组成，甘油和丙二醇的体积比为3:6.2，所述外用生发制剂中枣仁挥发油的含量为76mg/mL；枣仁挥发油小鼠灌胃给药用量为2.3g/Kg，即按照小鼠体重灌胃给药，每千克小鼠给药2300毫克；本组中所用枣仁挥发油为实施例8中制备的枣仁挥发油。
(4)涂抹枣仁挥发油；
给小鼠涂抹枣仁挥发油的方式为：涂抹枣仁挥发油前24h将小鼠背部用温和脱毛剂脱毛，去毛面积4cm2，每日在拔毛部位涂2-3次，连续涂抹21d，连涂抹至背部去毛区的毛全部长出。
(5)小鼠毛发生长周期的观察；
小鼠毛发生长周期的观察：每天观察小鼠皮肤颜色变化，分别记录每只小鼠背部去毛区皮肤颜色从用药到开始变黑、开始长毛和开始变灰的时间，并定期拍照。以皮肤从用药到开始变黑作为毛发从休止期进入生长期的时间，而从开始变黑到开始变灰的时间作为毛发生长期总时间。
(6)小鼠毛发长度的测量；
小鼠毛发长度的测量：从小鼠背部长出毛发开始，每隔3天测一次毛发长度，直至试验结束。将各组小鼠背部由头至尾的3个部位拔毛，每个部位拔毛5～10根，所拔毛发用游标卡尺测量，以毛发两端的最远距离记为毛发长度。
与空白对照组和阳性对照组进行对照，观察小鼠毛发生长速度和生长时间以及生长周期的影响，测试结果如表1和表2所示：
表1枣仁挥发油对C57BL/6J小鼠毛发生长速度和生长时间的影响(
Figure BDA0000933468670000151
Figure BDA0000933468670000152
n＝10)
Figure BDA0000933468670000153
注：与空白对照组比较1)P＜0.01，2)P＜0.05，与阳性对照组比较3)P＜0.01，4)P＜0.05(表2同)；阳性对照组用药为章光101。
表2枣仁挥发油对C57BL/6J小鼠毛发生长周期的影响(
Figure BDA0000933468670000161
n＝10)
Figure BDA0000933468670000162
由表1可知，枣仁挥发油在毛发生长早期和中期均有加速毛发生长的作用，并缩短了毛发的生长时间，与空白对照组比较有显著性差异(P＜0.01)；由表2可知，小鼠脱毛后，皮肤呈现粉红色，毛发进入休止期，涂药7～10d后，阳性对照组与试验3组开始发黑，12～15d后试验组1和2组的小鼠开始皮肤开始变黑，14～16d后，空白组开始变黑，空白对照组与阳性对照组及试验组之间均有显著差异。涂药13～17d后，阳性对照组和试验组黑色皮肤开始长出毛发，17～19d后，试验组1开始长出毛发，21d后，空白组开始长出毛发。各个试验组与空白对照组均有显著差异。涂药26～29d各个给药组均长满了毛发，各组时间无显著性差异。
上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明创造所作的举例，而并非对本发明创造具体实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所引伸出的任何显而易见的变化或变动仍处于本发明创造权利要求的保护范围之中。

Claims (1)

1.一种枣仁挥发油在小鼠毛发生长中的应用，其特征在于，枣仁挥发油作为促进小鼠毛发生长的活性成分，灌胃给药和待生发部位涂抹同时进行；
枣仁挥发油小鼠灌胃给药用量为2.3g/Kg，小鼠待生发部位涂抹以枣仁挥发油为活性成分的外用生发制剂，所述外用生发制剂由甘油、丙二醇和枣仁挥发油组成，甘油和丙二醇的体积比为3:6.2，所述外用生发制剂中枣仁挥发油的含量为76mg/mL；
所述枣仁挥发油是采用如下步骤制备得到的：
(1)枣仁原料的预处理：在温度为60℃将枣仁烘干23h，粉碎过筛，粉末粒度为50-70目，备用；在步骤(1)中还包括将粉碎过筛后的枣仁原料依次进行碱浸泡、酸浸泡和缓冲溶液浸泡以及晾干步骤；碱浸泡使用的碱溶液是质量浓度为7wt％的碳酸钠溶液，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为360mL，碱浸泡时间为9h，碱浸泡之后过滤；酸浸泡使用的酸溶液是质量浓度为11wt％的盐酸，每100g枣仁粉末的碱溶液用量为300mL，酸浸泡时间为2h，酸浸泡之后过滤；缓冲溶液浸泡使用的缓冲溶液是pH＝7.2的磷酸缓冲溶液，缓冲溶液浸泡时间为6h；
(2)装料：将预处理的枣仁原料和溶剂A一起加入超临界CO2流体萃取装置的萃取釜中；本实施例中溶剂A为乙酸乙酯；溶剂A的用量为枣仁原料质量的25wt％；
(3)设定萃取釜、分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ的温度、压力；
萃取釜的萃取压力为32MPa，萃取温度为45℃；分离釜Ⅰ的分离压力为8.3MPa，分离温度为33℃；分离釜Ⅱ的分离压力为5.4MPa，分离温度为36℃；
(4)静态萃取：通入一定量的CO2使得萃取釜内升至步骤(3)中的设定压力，先以溶剂A为夹带剂进行静态萃取，静态萃取时间为0.7h；
(5)动态一次萃取：调控CO2的流量为1.4L/min，再以溶剂A为夹带剂进行动态一次萃取，动态一次萃取时间为1.5h；
(6)动态二次萃取：调控CO2的流量为1.4L/min，最后用夹带剂泵向萃取釜中加入溶剂B作为夹带剂进行动态二次萃取，动态二次萃取时间为2.2h；溶剂B为正丁醇和叔丁基甲基醚的混合物，正丁醇和叔丁基甲基醚的体积比为1:3，溶剂B的用量为枣仁原料质量的80wt％；
(7)在分离釜Ⅰ中分离时间为2.5h，在分离釜Ⅱ中分离时间为1.5h，将分离釜Ⅰ和分离釜Ⅱ得到枣仁挥发油合并；
(8)柱层析分离纯化步骤(7)中得到的枣仁挥发油，a)色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱，2.1mm×50mm,1.7μm；b)流动相由A相和B相组成：A相为：甲醇，B相为：1mmol/L甲酸铵水溶液；c)梯度洗脱条件：初始时A相与B相体积比为10:1,1分钟时A相与B相体积比为8:3,3分钟时A相与B相体积比为7:4，6分钟时A相与B相体积比为6:5，9分钟时A相与B相体积比为5:6，12分钟时A相与B相体积比为4:7，15分钟时A相与B相体积比为3:8，18分钟时A相与B相体积比为1:10，开始收集时间：1min，结束收集时间：18min；d)柱温：35℃；e)流速：0.6mL/分钟；除去流动相得到枣仁挥发油纯品。
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