CN105664224A - 一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料，包括的组分及质量比为：低分子量羧甲基壳聚糖0.1～8.0％，余量为海藻酸无纺布；通过把医用级低分子量壳聚糖羧甲基化，筛选出既有抑制细菌的功效同时不产生细胞毒性浓度后，固定在海藻酸无纺布中形成。使用过程中，敷料通过与创面的组织液接触后，迅速释放出羧甲基壳聚糖发挥抑菌功效，同时海藻酸的网状拓扑结构阻止羧甲基壳聚糖完全释放，使得复合材料具有一定的持续抑菌效果，本发明敷料具有良好的透气性，力学拉伸性，吸湿性，抗菌性和生物相容性。制备工艺相对简单，规模化生产可行性强。本发明敷料适用于皮肤浅度烧伤、创伤以及创面感染溃烂，具有控制细菌感染、促进创面修复的功效。

Description

一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料及其制备方法

技术领域

本发明属于高分子生物材料医用敷料技术领域，特别是涉及一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备方法。

背景技术

甲壳素广泛存在于海洋生物(如虾、蟹)壳和真菌的细胞壁中，壳聚糖是其脱乙酰化产物，作为一种氨基多糖，在体内可生物降解，无毒副作用。甲壳素的用途日益引起众多学者的关注和兴趣。由于甲壳素和壳聚糖的水不溶性，限制了其应用范围，因此，我们对甲壳素与氯乙酸经一定工艺合成羧化物，产物羧甲基壳聚糖使具有水溶性。由于羧甲基壳聚糖具有很好的水溶性并且具有成膜、增稠、保湿、胶化等作用，且这些特性能对伤口的愈合起到很好的作用，更加有效的对创面起到到止血、抗菌、促愈、止痛的目的。研究发现羧甲基壳聚糖的抑菌性能与羧甲基取代度之间并无显著正相关，但与分子量之间的关系呈负相关，随着分子量的降低，抑菌效果显著提高，当分子量大于1×10⁶时，抑菌功能不明显，当分子量小于10⁵时，抑菌活性明显增强。可以选择低分子量羧甲基壳聚糖应用于创面。

海藻酸是一种天然多糖，主要来源于海洋植物褐藻纲。海藻酸的化学组成由G单元与M单元通过1,4-糖苷键连接，在连接的过程中形成了单一MMM或GGG或MGGGMM交替组合。许多研究发现，海藻酸盐能促进巨噬细胞和人浆细胞的许多免疫学功能，具有增强其细胞的溶解活性和刺激这些细胞分泌大量的白细胞介素L和白细胞介素6等生物学性能。在医药卫生领域，海藻酸盐作为一种功能性生物医用材料，我国***颁布了一份海藻酸盐敷料的部颁标准(WS1-128-89)。随着大力开发利用海洋资源，海藻酸盐类越来越多作用于人类健康领域。

人体的皮肤受到外界的损伤其防御功能严重受损，进而造成机体免疫功能严重下降，容易引发创面感染。在烧伤患者的创面感染中，金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌为最常见的病原菌。研究表明低分子量羧甲基壳聚糖对上述病原菌均具有显著的抑制功效，且人体不易产生耐药性。

因此，开发一种以低分子量羧甲基壳聚糖为主要功能成分，且利用海藻酸纤维材料本身具有的功效，协同起到抗菌促愈功能的新型复合材料，是现代医学急救功能材料领域发展的趋势，预计此类功能性复合敷料具有良好的市场前景。

发明内容

针对上述现有创面敷料技术，本发明提供了一种低分子量羧甲基壳聚糖和复合海藻酸敷料及其制备方法，是通过以氯乙酸为改性剂，对低分子量医用级壳聚糖进行化学修饰，制备的低分子量羧甲基壳聚糖通过浸渍搌压等工艺与海藻酸纤维材料复合形成新型复合敷料。本发明敷料适用于皮肤浅度烧伤、创伤以及创面感染溃烂，具有控制细菌感染、促进创面修复的功效。

为了解决上述技术问题，本发明提出的一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备方法，包括以下步骤：

步骤一、制备医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖，备用；

步骤二、由海藻酸盐纤维通过针刺工艺制备获得医用级海藻酸无纺布，备用；

步骤三、将步骤一获得的医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖固定在步骤二获得的医用海藻酸无纺布里，从而获得低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料，其中，低分子量羧甲基壳聚糖的质量百分比为0.1％～8.0％，其优选为1.2％；余量为医用海藻酸无纺布。

进一步讲，步骤一的具体过程如下；

步骤1-1、在105℃干燥低分子量壳聚糖粉末4h，按照壳聚糖与异丙醇质量体积为0.1g/ml的比例放入烧瓶中，室温搅拌4h；

步骤1-2、向上述体系中加入35wt％的氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液与上述体系的体积比为2:1，室温搅拌均匀，-20℃下进行碱化膨胀10h；60℃水浴中按照1ml/3min的速度滴加质量体积浓度为2g/ml的分析纯氯乙酸的异丙醇溶液，分析纯氯乙酸的异丙醇溶液与氢氧化钠溶液的体积比1：1，在60℃水浴中反应6h，进行羧甲基化，得到产物A；

步骤1-3、按照蒸馏水与产物A的体积比为100:1配比，将产物A充分溶解，用50％醋酸水溶液进行中和至3pH＝7.0，布氏漏斗抽滤分离，滤液用无水乙醇充分沉淀后用普通中速滤纸过滤，将过滤后的固体产物用丙酮反复洗涤5次后装入截流分子量14000的透析袋中；

步骤1-4、将透析袋浸在蒸馏水中透析24h，将透析袋取出后放入95％乙醇水溶液中透析24h后再次将透析袋取出；重复步骤1-4的过程3～4次；

步骤1-5、把透析袋中的羧甲基壳聚糖水溶液用无水乙醇沉淀，抽滤后取出固体产物置于60℃真空干燥，真空度-0.1MPa，时间5h，分装密封后，在温度为115℃、压力为0.15MPa下灭菌30min，即可得医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖。

制备得到的所述医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖分子量介于1W-2W，外观呈类白色或淡黄色粉末，可自由流动，无异味，直径介于100um-200um，pH＝7.5，黏度60mpa.s，羧甲基取代度90.2％。

步骤三的具体过程是：取步骤一获得的医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖，配置质量分数为0.32～3.2wt％的低分子量羧甲基壳聚糖水溶液，室温下以120r/min的转速磁力搅拌1h；将步骤二获得的医用级海藻酸无纺布裁剪为所需规格尺寸的片材后浸渍于上述低分子量羧甲基壳聚糖水溶液中，60℃水浴40-50r/min震荡1h，取出后平铺于玻璃上，用碾子压平整后，后置于60℃真空干燥，真空度-0.1MPa，时间6h，取出后包装于药用低密度聚乙烯袋，抽真空后密封，⁶⁰Co辐照剂量25kGy灭菌24h，制得低分子量羧甲基壳聚糖的复合海藻酸敷料。

由本发明制备方法获得的低分子量羧甲基壳聚糖的复合海藻酸敷料，

具有如下性能：水蒸气透过率为3027.75g/(m²·24h)±54.63；吸湿性为6.33g/g±0.03；力学拉伸性能，其中：断裂强力纵向为55.17N±0.02，横向为74.68N±0.27；断裂伸长率纵向为81.15％±2.66，横向为72.61％±1.37。

具有的理化指标如下：灰分为0.26％±0.05；重金属含量为2.23ug/g±0.10；荧光物质为阴性；水浸液酸碱度为7.63±0.22；表面活性物质为阴性；水中可溶物为5.71％±1.24；***中可溶物为0.23％±0.02；

具有的抗菌性能如下：抑菌带宽度2.6mm±0.06，去除覆盖面后的接触区的细菌无繁殖情况；

具有的生物相容性：样品浸提液细胞相对增值率RGR达92.5％，细胞毒性反应为Ⅰ级；72h浸提液的细胞形态呈正常梭状，且密度分布均匀。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

由于复合材料中的海藻酸具有较强的吸液能力，能够使材料表面的低分子量羧甲基壳聚糖迅速的释放出，所以能够快速有效的抑制细菌繁殖。同时，海藻酸的网状拓扑结构阻止羧甲基壳聚糖完全释放，使得复合材料具有一定的持续抑菌效果，有效时间可以达到48h。

其中，复合材料的持续抑菌效果结果见表1；

表1不同倍数最小杀菌浓度(minimumbactericidalconcentration，MBC)复合海藻酸敷料的抗菌性能(n＝6)；

附图说明

图1是本发明敷料中所含有的低分子量羧甲基壳聚糖的SEM图；

图2(a)是本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料表面的SEM图；

图2(b)是本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料横截面的SEM图；

图3(a)是本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料体外24h抑菌带抑菌性能；

图3(b)是本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料体外接触区的细菌繁殖情况；

图4是本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料体外细胞毒性试验NCTCclone929细胞(小鼠成纤维细胞)×40光镜照片。

具体实施方式

本发明中提供的一种制备医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖，主要步骤包括：制备医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖；由海藻酸盐纤维通过针刺工艺制备获得医用级海藻酸无纺布；将上述获得的医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖固定(如采用浸渍真空干燥法)在上述的医用海藻酸无纺布里(该海藻酸移用无纺布里的制备工艺不受限制)，从而获得低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料，其中，低分子量羧甲基壳聚糖的质量百分比为0.1％～8.0％，余量为医用海藻酸无纺布。

其中，制备医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖的过程如下；

在105℃干燥低分子量壳聚糖粉末，按照壳聚糖与异丙醇质量体积为0.1g/ml的比例放入烧瓶中，室温搅拌4h，使其充分溶胀；加入2倍于上述体系体积的35wt％的氢氧化钠溶液，室温搅拌均匀，-20℃下进行碱化膨胀10h；60℃水浴中按照1ml/3min的速度，滴加质量体积浓度为2g/ml的分析纯氯乙酸的异丙醇溶液，分析纯氯乙酸的异丙醇溶液与氢氧化钠溶液的体积比1：1，，在60℃水浴中反应6h，进行羧甲基化反应，得到产物A；反应结束后，加入100倍于产物A的蒸馏水，将产物A充分溶解，用50％醋酸水溶液进行中和至pH＝7.0，布氏漏斗抽滤分离，滤液用无水乙醇充分沉淀，用普通滤纸过滤，将初产物低分子量羧甲基壳聚糖反复洗涤5次后装入截流分子量14000的透析袋中，浸在蒸馏水中透析24h，取出放入95％乙醇水溶液中透析24h，再次取出放入蒸馏水中，如此反复7d纯化；最后把透析袋中的羧甲基壳聚糖水溶液用无水乙醇沉淀，把沉淀物抽滤，取出后放入60℃真空干燥，真空度-0.1MPa，时间5h，分装密封后，在温度为115℃、压力为0.15MPa下灭菌30min，即可得医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖。

对复合海藻酸敷料加载的上述医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖的浓度进行筛选，参照GB/T20944.3-2008纺织品抗菌性能的评价第3部分：振荡法，37℃培养24h和48h后，测定一系列不同质量浓度的低分子量羧甲基壳聚糖在波长475nm吸光度，确定了上述医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖对伤口常见三种混合菌落(包括金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠埃氏菌8099和铜绿假单胞菌CMCC(B)10010，且三种混合菌落的浓度为1*10⁸)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)，结果质量浓度为0.156％和0.3125％。

本发明医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖分子量介于1W-2W，外观呈类白色或淡黄色粉末，可以自由流动，无异味，直径介于100um-200um，Ph值7.5，黏度60mpa.s，羧甲基取代度90.2％。

本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料中，低分子量羧甲基壳聚糖占复合海藻酸敷料质量百分比为0.1％～8.0％。并按照以下步骤制备：取适量按照上述制备方法制得的医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖，配置0.32～3.2wt％的医用级低分子量羧甲基壳聚糖水溶液，室温下磁力搅拌120r/min约1h直到溶液呈现澄清透明为止；将上述获得的海藻酸无纺布剪裁各种有效规格的海藻酸无纺布片材后浸渍于上述低分子量羧甲基壳聚糖水溶液中，60℃水浴40-50r/min震荡1h，使海藻酸无纺布与羧甲基壳聚糖溶液充分接触，取出后平铺于玻璃上，用碾子压平后，放置于真空干燥箱60℃真空干燥，真空度-0.1MPa，约5h；取出后包装于药用低密度聚乙烯袋，抽真空后密封，采用⁶⁰Co-γ射线辐照灭菌，剂量25kGy，灭菌时间24h，最后制备出低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料。

本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料具有良好的水蒸气透过率，吸湿性，力学拉伸性能，其中：

水蒸气透过率：测得数据为3027.75g/(m2·24h)±54.63；

吸湿性：测得数据为6.33g/g±0.03；

力学拉伸性能：测得数据为断裂强力纵向55.17N±0.02，横向74.68N±0.27；断裂伸长率纵向81.15％±2.66，横向72.61％±1.37；

本发明复合创面敷料的各项理化指标均符合行业内标准，其中：

灰分：测得数据为0.26％±0.05；

重金属含量：测得数据为2.23ug/g±0.10；

荧光物质：测得数据为阴性；

水浸液酸碱度：测得数据为7.63±0.22；

表面活性物质：测得数据为阴性；

水中可溶物：测得数据为5.71％±1.24；

***中可溶物：测得数据为0.23％±0.02；

本发明复合创面敷料具有良好的抗菌性能和生物相容性，其中：

抗菌性能：抑菌带宽度2.6mm±0.06，去除覆盖面后的接触区的细菌无繁殖情况

生物相容性：样品浸提液细胞相对增值率RGR可以达到92.5％，细胞毒性反应为Ⅰ级。其72h浸提液的细胞形态呈正常梭状，且密度分布均匀，

综上，通过工艺制备过程优化和创伤敷料分析检测表明，本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料具有良好的吸液性能，能够高效吸收创面的组织液，同时，具有一定的水蒸气透过率，平衡创面的生理性湿度，加速促进伤口愈合。其中的天然生物材料通过优化复合等工艺，对创面常见细菌具有显著的抑制功效，同时通过海藻酸无纺布的拓扑结构可以使本发明的复合敷料具有48h的抑菌作用。可以适当的减缓敷料的更换频率，从而减轻患者的经济负担。

本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料原材料来源广泛，制备工艺简单易实现，产品综合效果显著，解决的现有创面的敷料在实际生产应用中的一些不足之处，具有一定的经济和社会价值。本发明低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料综合了两种天然高分子多糖的生物性优势，具有良好的透气性，力学拉伸性，吸湿性，抗菌性和生物相容性，能够合理模拟创面的湿润性生理环境，有效促进伤口愈合。制备工艺相对简单，规模型生产可行性强。

下面结合附图和具体实施例对本发明技术方案作进一步详细描述，所描述的具体实施例仅对本发明进行解释说明，并不用以限制本发明。

实施例一：低分子量羧甲基壳聚糖的制备及粒径分布

取1g干燥医用级低分子量壳聚糖粉末放入烧瓶中，加入10ml异丙醇室温搅拌使其充分溶胀，约4h；加入20ml35wt％氢氧化钠溶液室温搅拌均匀，-20℃进行碱化膨胀，约10h。60℃水浴中1h滴完20ml质量体积浓度为2g/ml的分析纯氯乙酸的异丙醇溶液，在60℃水浴中反应6h，进行羧甲基化；反应结束后加入50mL蒸馏水，将产物充分溶解，用50％醋酸进行中和，使pH值达到7.0，布氏漏斗抽滤分离，滤液用无水乙醇充分沉淀，普通滤纸过滤，反复洗涤5次，装入透析袋(截流分子量14000)中，浸在蒸馏水中透析24h，取出放入95％乙醇中透析24h，再次取出放入蒸馏水中，如此反复7d纯化，最后把透析袋中的羧甲基壳聚糖水溶液用无水乙醇沉淀，抽率后取出后真空干燥60℃，真空度-0.1MPa，时间5h，分装密封后高温高压115℃，30min灭菌，即可得医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖。

用球磨机或研钵把上述羧甲基壳聚糖磨碎呈粉末状，取适量均匀分布在粘有导电胶的硅片上，固定在样品铜台上，真空喷金10min，扫描电镜观察样品的形态，大小以及表面，结果见图1，表明样品呈片状，直径介于100um-200um，表面有一定的凹凸褶皱存在。

实施例二：低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备

利用实施例1制备得到的医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖配置质量浓度为3.0％的低分子量羧甲基壳聚糖水溶液，25℃室温磁力搅拌120r/min约1h直到溶液呈现澄清透明为止；剪裁2.5cm*2.5cm的海藻酸无纺布浸渍于上述溶液中，60℃水浴40-50r/min震荡1h，使海藻酸无纺布与羧甲基壳聚糖充分接触，取出后平铺于玻璃上，用碾子压平后，放置于真空干燥箱60℃，真空度-0.1MPa，约5h；后取出包装于药用低密度聚乙烯袋，抽真空后密封，采用⁶⁰Co-γ射线辐照灭菌，剂量25kGy，时间24h，最后制备出低分子量羧甲基壳聚糖的复合海藻酸敷料。

本发明制备获得的低分子量羧甲基壳聚糖的复合海藻酸敷料须避光保存。

实施例二制得的低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的SEM扫描电镜照片表面和横截面如图2(a)和图2(b)所示。

参照国家标准和行业标准对实施例二获得的复合海藻酸敷料的理化性能进行检测，具体如下：

水蒸气透过率参照“YY/T0471.2-2004接触性创面敷料试验方法第2部分：透气敷料水蒸气透过率”，测得数据为3027.75g/m²·24h±54.63。

吸湿性参照“YY/T0471.2-2004接触性创面敷料试验方法第1部分：液体吸收性”，测得数据为6.33g/g±0.03。

力学拉伸性能参照“FZ/T60005-90非织造布断裂强力及断裂伸长率的测定”，测得数据为断裂强力纵向55.17N±0.02，横向74.68N±0.27；断裂伸长率纵向81.15％±2.66，横向72.61％±1.37。

灰分参照“05版CP一部附录ⅨK”，测得数据为0.26％±0.05。

重金属含量参照“GB/T11593-1998纺织品重金属离子检测方法”，测得数据为2.23ug/g±0.10。

荧光物质参照“YY/T0471.2-2004接触性创面敷料试验方法”，测得数据为阴性。

水浸液酸碱度参照“YY/T0471.2-2004接触性创面敷料试验方法”，测得数据为7.63±0.22。

表面活性物质参照“YY/T0471.2-2004接触性创面敷料试验方法”，测得数据为阴性。

水中可溶物参照“YY/T0471.2-2004接触性创面敷料试验方法”，测得数据为5.71％±1.24。

***中可溶物参照“YY/T0471.2-2004接触性创面敷料试验方法”，测得数据为0.23％±0.02。

参照标准“GB/T20944.1-2007纺织品抗菌性能的评价第1部分：琼脂平皿扩散法”操作对实施例二获得的辅料进行体外抗菌性能评价，结果显示本发明敷料对于创面常见受试菌种金黄色葡萄球菌ATCC6538、大肠埃氏菌8099和铜绿假单胞菌CMCC(B)10010的同比例混合的24h的抑菌带宽度可以达到2.6mm±0.06，并且去除覆盖面后的接触区的细菌无繁殖情况，效果好，参见图3(a)和图3(b)。

对实施例二获得的辅料进行生物相容性分析：参照标准“GB/T16886.5-2003医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验”采用其中的MTT法，样品浸提液细胞相对增值率RGR可以达到92.5％，细胞毒性反应为Ⅰ级。其72h浸提液的细胞形态呈正常梭状，且密度分布均匀，参见图4。

尽管上面结合图对本发明进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨的情况下，还可以作出很多变形，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (6)

1.一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一、制备医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖，备用；

步骤二、由海藻酸盐纤维通过针刺工艺制备获得医用级海藻酸无纺布，备用；

步骤三、将步骤一获得的医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖固定在步骤二获得的医用海藻酸无纺布里，从而获得低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料，其中，低分子量羧甲基壳聚糖的质量百分比为0.1％～8.0％，余量为医用海藻酸无纺布。

2.根据权利要求1所述一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备方法，其特征在于，步骤一包括以下步骤：

步骤1-1、在105℃干燥低分子量壳聚糖粉末4h，按照壳聚糖与异丙醇质量体积为0.1g/ml的比例放入烧瓶中，室温搅拌4h；

步骤1-2、向上述体系中加入35wt％的氢氧化钠溶液，所述氢氧化钠溶液与上述体系的体积比为2:1，室温搅拌均匀，-20℃下进行碱化膨胀10h；60℃水浴中按照1ml/3min的速度滴加质量体积浓度为2g/ml的分析纯氯乙酸的异丙醇溶液，分析纯氯乙酸的异丙醇溶液与氢氧化钠溶液的体积比1：1，在60℃水浴中反应6h，进行羧甲基化，得到产物A；

步骤1-3、按照蒸馏水与产物A的体积比为100:1配比，将产物A充分溶解，用50％醋酸水溶液进行中和至3pH＝7.0，布氏漏斗抽滤分离，滤液用无水乙醇充分沉淀后用普通中速滤纸过滤，将过滤后的固体产物用丙酮反复洗涤5次后装入截流分子量14000的透析袋中；

步骤1-4、将透析袋浸在蒸馏水中透析24h，将透析袋取出后放入95％乙醇水溶液中透析24h后再次将透析袋取出；重复步骤1-4的过程3～4次；

步骤1-5、把透析袋中的羧甲基壳聚糖水溶液用无水乙醇沉淀，抽滤后取出固体产物置于60℃真空干燥，真空度-0.1MPa，时间5h，分装密封后，在温度为115℃、压力为0.15MPa下灭菌30min，即可得医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖。

3.根据权利要求1或2所述一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备方法，其特征在于，所述医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖分子量介于1W-2W，外观呈类白色或淡黄色粉末，可自由流动，无异味，直径介于100um-200um，pH＝7.5，黏度60mpa.s，羧甲基取代度90.2％。

4.根据权利要求1或2所述一种低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备方法，其特征在于，步骤三包括以下步骤：

取步骤一获得的医用级无菌低分子量羧甲基壳聚糖，配置质量分数为0.32～3.2wt％的低分子量羧甲基壳聚糖水溶液，室温下以120r/min的转速磁力搅拌1h；

将步骤二获得的医用级海藻酸无纺布裁剪为所需规格尺寸的片材后浸渍于上述低分子量羧甲基壳聚糖水溶液中，60℃水浴40-50r/min震荡1h，取出后平铺于玻璃上，用碾子压平整后，后置于60℃真空干燥，真空度-0.1MPa，时间6h，取出后包装于药用低密度聚乙烯袋，抽真空后密封，⁶⁰Co辐照剂量25kGy灭菌24h，制得低分子量羧甲基壳聚糖的复合海藻酸敷料。

5.根据权利要求1或2任一所述低分子量羧甲基壳聚糖复合海藻酸敷料的制备方法获得的低分子量羧甲基壳聚糖的复合海藻酸敷料，具有如下性能：

水蒸气透过率为3027.75g/(m²·24h)±54.63；

吸湿性为6.33g/g±0.03；

力学拉伸性能，其中：断裂强力纵向为55.17N±0.02，横向为74.68N±0.27；断裂伸长率纵向为81.15％±2.66，横向为72.61％±1.37。

6.根据权利要求5所述低分子量羧甲基壳聚糖的复合海藻酸敷料，其特征在于，

具有的理化指标如下：灰分为0.26％±0.05；重金属含量为2.23ug/g±0.10；荧光物质为阴性；水浸液酸碱度为7.63±0.22；表面活性物质为阴性；水中可溶物为5.71％±1.24；***中可溶物为0.23％±0.02；

具有的抗菌性能如下：抑菌带宽度2.6mm±0.06，去除覆盖面后的接触区的细菌无繁殖情况；

具有的生物相容性：样品浸提液细胞相对增值率RGR达92.5％，细胞毒性反应为Ⅰ级；72h浸提液的细胞形态呈正常梭状，且密度分布均匀。