CN105548575A - 检测lambda轻链含量的试剂盒、方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品；所述试剂R1包括：第一缓冲液、第一电解质、表面活性剂、第一稳定剂、高分子加速剂和第一防腐剂；所述试剂R2包括：第二缓冲液、抗人LAMBDA轻链抗体、第二电解质和第二防腐剂；所述LAMBDA校准品包括：第三缓冲液、第三稳定剂、第三防腐剂、抗氧化剂和LAMBDA轻链抗原。本发明还公开一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途以及一种采用检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法。本发明的试剂盒及检测方法，可简洁快速检测LAMBDA轻链含量。

Description

检测LAMBDA轻链含量的试剂盒、方法及用途

技术领域

本发明属于检测LAMBDA轻链含量的技术领域，具体涉及一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒、方法及用途。

背景技术

轻链(Lightchain，L)大约由214个氨基酸残基组成，通常不含碳水化合物，分子量约为24kD。每条轻链含有两个由链内二硫键所组成的环肽。L链共有两种类型：KAPPA(κ)与LAMBDA轻链(λ)，同一个天然免疫球蛋白分子上L链的类型总是相同的。正常人血清中的κ：λ约为2：1。

细胞克隆的异常增生将导致单克隆球蛋白或游离免疫球蛋白片段(游离的轻链)的增加，这将造成κ与λ链的比例失衡，κ与λ的比值失常预示了单克隆Y球蛋白血症。在生成增加的情况下，游离轻链的滤过也增加，当超出肾小管的重吸收能力时，该测试可以定量检测结合及游离免疫球蛋白中的轻链。

定量检测不同种类的轻链含量有助于诊断巨球蛋白血症(巨型球蛋白生成增多)及***病(如类风湿性关节炎、***性红斑狼疮)等疾病。

此外，感染、急慢性肝炎、肝硬化等血中轻链也可增多，但一般均表现为κ、λ同时增多；肾病、糖尿病等患者尿也可出现κ、λ同时增多。

现有的LAMBDA检测技术存在诸多不足：如需要特殊的设备，样本需要预处理，不能上全自动生化分析仪进行批量检测分析等。酶联免疫法应用比较普遍，其原理是将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体；洗涤除去未结合的抗体及杂质；加待测样品，使之与固相抗体反应一段时间，让样品中抗原与固相载体上的抗体结合；洗涤除去未结合的物质；加酶标抗体，使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合；洗涤除去未结合的酶标抗体；此时固相载体上的酶量与样品中的待测物质的量正相关；加入底物反应显色。根据颜色反应的程度对测定物质进行定性或定量测定。该方法为非均相免疫检测***，测定过程较为繁琐，耗时长，缺少单位测试运行时间；自动化程度不高，批间差和重复性相对较大；需要配备多种专门设备，一定程度上增加了成本。

随着样本检验数量的不断增加，临床上迫切需要一种更为简便、快捷的方法来进行规模化批量操作。免疫比浊法检测LAMBDA可直接在全自动生化分析仪上完成批量样本分析，操作简单、可实现快速、高通量样本的检测。

发明内容

本发明实施例的目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，可以简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。

本发明实施例的另一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途，可用于简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。

本发明实施例的再一目的在于克服现有技术的上述不足，提供一种采用上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，可以简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。

为了实现上述发明目的，本发明实施例的技术方案如下：

一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品；所述试剂R1包括：第一缓冲液5～600mmol/L、第一电解质5～60g/L、表面活性剂1～200g/L、第一稳定剂2～50g/L、高分子加速剂1～100g/L和第一防腐剂0.5～15g/L；所述试剂R2包括：第二缓冲液5～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5～60％w/v、第二电解质5～60g/L和第二防腐剂0.5～15g/L；所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～600mmol/L、第三稳定剂2～50g/L、第三防腐剂0.5～15g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。

进一步：所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种；和/或，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种；和/或，所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种；和/或，所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种；和/或，所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种；和/或，所述高分子加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或几种；和/或，所述抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人和鸭抗人LAMBDA轻链抗体中的一种或几种；所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一种或几种。

进一步：所述抗人LAMBDA轻链抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。

进一步：所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均为磷酸盐缓冲液；和/或，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均为叠氮钠；和/或，所述第一电解质和所述第二电解质均为氯化钠；和/或，所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均为乙二胺四乙酸二钠；和/或，所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚；和/或，所述高分子加速剂为聚乙二醇6000；和/或，所述抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链单克隆抗体；和/或，所述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。

进一步，所述试剂R1包括：第一缓冲液20～400mmol/L、第一电解质6～45g/L、表面活性剂2～80g/L、第一稳定剂2～40g/L、高分子加速剂3～80g/L和第一防腐剂1.5～9g/L；所述试剂R2包括：第二缓冲液20～450mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体15～30％w/v、第二电解质6～48g/L和第二防腐剂1.5～9g/L；所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液15～100mmol/L、第三稳定剂2～45g/L、第三防腐剂4～8.5g/L、抗氧化剂0.4～9g/L和LAMBDA轻链抗原。

进一步，所述试剂R1包括：第一缓冲液10～100mmol/L、第一电解质5～15g/L、表面活性剂1～50g/L、第一稳定剂5～15g/L、高分子加速剂50～100g/L和第一防腐剂1～5g/L；和/或，所述试剂R2包括：第二缓冲液10～100mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5～60％w/v、第二电解质5～15g/L和第二防腐剂1～5g/L；和/或，所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～100mmol/L、第三稳定剂5～15g/L、第三防腐剂1～5g/L、抗氧化剂0.01～0.8g/L和LAMBDA轻链抗原。

进一步，所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液5～600mmol/L、第三稳定剂2～50g/L、第三防腐剂0.5～15g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原0～1000mg/dL。

进一步：所述LAMBDA轻链校准品中，所述LAMBDA轻链抗原的浓度为0～800mg/dL。

一种如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途。

以及，一种采用如上所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，包括：向待测样品中加入所述试剂R1，所述待测样品的体积为5μL，所述试剂R1的体积为250μL，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度OD1；向所述第一混合液中加入所述试剂R2，所述试剂R2的体积为50μL，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光度OD2；使用所述LAMBDA轻链校准品得到标准曲线，根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中LAMBDA轻链的含量。

本发明实施例的有益效果如下：

1、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，操作简单，使用简便快速，可简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量。

2、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，能够满足临床快速高通量检测样本的要求，检测效率明显提高，在临床应用上具有广阔的前景。

3、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，还具有特异性强、灵敏度高、重复性好、批间差异小、试剂稳定等优点。

4、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒使其具有检测LAMBDA轻链含量的用途。

5、本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，检测效率较高，在临床应用上具有广阔的前景。

附图说明

图1是本发明的检测LAMBDA轻链含量的方法的流程图；

图2是本发明的实施例3的LAMBDA轻链含量的检测方法的流程示意图；

图3是本发明的实施例3的检测LAMBDA轻链含量的标准曲线；

图4是本发明的实施例4的检测LAMBDA轻链含量试剂盒与国外对比试剂盒的比较结果示意图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明提供了一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒。该试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。

其中，试剂R1包括：第一缓冲液5～600mmol/L、第一电解质5～60g/L、表面活性剂1～200g/L、第一稳定剂2～50g/L、高分子加速剂1～100g/L和第一防腐剂0.5～15g/L。试剂R1中，其余为纯化水。

试剂R2包括：第二缓冲液5～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5～60％w/v、第二电解质5～60g/L和第二防腐剂0.5～15g/L。试剂R2中，其余为纯化水。本发明中，w/v表示的意思是单位体积的溶液中所含的溶质质量。

LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～600mmol/L、第三稳定剂2～50g/L、第三防腐剂0.5～15g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。LAMBDA轻链校准品中，其余为纯化水。

优选的，试剂R1包括：第一缓冲液20～400mmol/L、第一电解质6～45g/L、表面活性剂2～80g/L、第一稳定剂2～40g/L、高分子加速剂3～80g/L和第一防腐剂1.5～9g/L。试剂R2包括：第二缓冲液20～450mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体15～30％w/v、第二电解质6～48g/L和第二防腐剂1.5～9g/L。LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液15～100mmol/L、第三稳定剂2～45g/L、第三防腐剂4～8.5g/L、抗氧化剂0.4～9g/L和LAMBDA轻链抗原。

优选的，试剂R1包括：第一缓冲液10～100mmol/L、第一电解质5～15g/L、表面活性剂1～50g/L、第一稳定剂5～15g/L、高分子加速剂50～100g/L和第一防腐剂1～5g/L。试剂R2包括：第二缓冲液10～100mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5～60％w/v、第二电解质5～15g/L和第二防腐剂1～5g/L。LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～100mmol/L、第三稳定剂5～15g/L、第三防腐剂1～5g/L、抗氧化剂0.01～0.8g/L和LAMBDA轻链抗原。

优选的，LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液5～600mmol/L、第三稳定剂2～50g/L、第三防腐剂0.5～15g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原0～1000mg/dL。

更优选的，LAMBDA轻链校准品中，LAMBDA轻链抗原的浓度为0～800mg/dL。

应用该试剂盒时，该LAMBDA轻链校准品可以配制成高浓度单点校准品，在使用时用生理盐水稀释成多个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成多个不同浓度的参考校准品。

优选的，试剂R1中，第一缓冲液选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。第一电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚系列表面活性剂(例如聚氧乙烯月桂醚)、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种。第一稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种。高分子加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或几种。第一防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。

优选的，试剂R2中，第二缓冲液选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。抗人LAMBDA轻链抗体选鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人和鸭抗人LAMBDA轻链抗体中的一种或几种。更优选的，抗人LAMBDA轻链抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。第二电解质选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种。第二防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。

优选的，LAMBDA轻链校准品中，第三缓冲液选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种。第三稳定剂选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种。第三防腐剂选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种。抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一种或几种。

更优选的，试剂R1中，第一缓冲液为磷酸盐缓冲液。第一电解质为氯化钠。表面活性剂为聚氧乙烯辛基苯醚。第一稳定剂为乙二胺四乙酸二钠。高分子加速剂为聚乙二醇6000。第一防腐剂为叠氮钠。

更优选的，试剂R2中，第二缓冲液为磷酸盐缓冲液。抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链单克隆抗体。第二电解质为氯化钠。第二防腐剂为叠氮钠。

更优选的，LAMBDA轻链校准品中，第三缓冲液为磷酸盐缓冲液。第三稳定剂为乙二胺四乙酸二钠。第三防腐剂为叠氮钠。抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。

本发明实施例的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，操作简单，使用简便快速，可简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量；能够满足临床快速高通量检测样本的要求，检测效率明显提高在临床应用上具有广阔的前景；还具有特异性强、灵敏度高、重复性好、批间差异小、试剂稳定等优点。

本发明实施例还提供了一种上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途，可以用于简洁快速地检测样本中LAMBDA轻链的含量，具有较高的准确度和很好的特异性。该试剂盒特别适合用于检测尿液样本中LAMBDA轻链的含量。

本发明实施例还提供了一种采用上述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法。本发明方法为免疫比浊法，其是一种抗原抗体结合动态测定方法。其基本原理是：样本中的LAMBDA轻链抗原和试剂R2中的抗人LAMBDA轻链抗体发生相应的抗原抗体反应，形成不溶性的抗原-抗体复合物，使反应液产生一定的浊度。反应液中抗人LAMBDA轻链抗体过量时，形成的免疫复合物的量随着样本中LAMBDA轻链抗原量的增加而增加，反应液的浊度也相应增加。在特定波长下测定该复合物的吸光值，与校准品标定的校准曲线比较，即可计算出样本中的LAMBDA轻链的含量。如图1所示，为本发明的检测LAMBDA轻链含量的方法的流程图。该方法包括如下的步骤：

步骤S10：向待测样品中加入试剂R1，待测样品的体积为5μL，试剂R1的体积为250μL，得到第一混合液，并得到第一混合液的吸光度OD1。

步骤S20：向第一混合液中加入试剂R2，试剂R2的体积为50μL，得到第二混合液，并得到第二混合液的吸光度OD2。

步骤S30：使用LAMBDA轻链校准品得到标准曲线，根据吸光度OD1和吸光度OD2在标准曲线上得到待测样品中LAMBDA轻链的含量。

其中，标准曲线的拟合模式包括：Spline、二次方程、logit-log3p、logit-log4p、logit-log5p或Polygonal。

下面以具体实施例对本发明的技术方案做进一步说明。

实施例1

该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。

其中，试剂R1包括如下的成分：

试剂R2包括如下的成分：

LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：

按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中，混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品，在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品，其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。

实施例2

该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。

其中，试剂R1包括如下的成分：

试剂R2包括如下的成分：

LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：

按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中，混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品，在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例选用的是高浓度单点参考校准品，LAMBDA轻链抗原浓度为800mg/dL，将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品。LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。

实施例3

1.试剂盒制备

该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。

其中，试剂R1包括如下的成分：

试剂R2包括如下的成分：

LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：

按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中，混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品，在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品，其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。

2.检测方法

采用上述实施例3的试剂盒，通过全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析，分析方法为两点终点法。如图2所示，为本发明的实施例3的LAMBDA轻链含量的检测方法的流程示意图。向待测样品中加入试剂R1，待测样品的体积为5μL，试剂R1的体积为250μL，混合得到第一混合液，并在37℃保温5分钟，然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2，试剂R2体积为50μL，得到第二混合液，并在37℃保温5分钟，读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2。检测的主波长为340nm，副波长为700nm。

3.标准曲线绘制

使用LAMBDA轻链校准品在全自动生化分析仪上测得不同浓度LAMBDA标准品的标准曲线。如图3所示，为本发明的实施例3的检测LAMBDA轻链含量的标准曲线，X轴代表LAMBDA轻链含量，Y轴代表吸光度值。该标准曲线可以用于检测标本LAMBDA轻链的含量。

4.不同浓度样本精密性检测

随机取3份临床样本，采用实施例3的试剂盒，通过日立全自动生化分析仪对3份样本分别重复检测10次，检测结果如表1所示。

表1三份样本的LAMBDA轻链含量(10次)及变异系数

结果显示，三份样本测得的变异系数分别为1.8％、2.1％、2.2％，均小于3％，表明本发明的试剂盒具有较高精密度。

实施例4

1.试剂盒制备

该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。

其中，试剂R1包括如下的成分：

试剂R2包括如下的成分：

LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：

按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中，混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品，在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例配制5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品，其LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。

2.检测方法

采用实施例4的试剂盒，通过全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析，分析方法为两点终点法。向待测样品中加入试剂R1，待测样品的体积为5μL，试剂R1的体积为250μL，混合得到第一混合液，并在37℃保温5分钟，然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2，试剂R2体积为50μL，得到第二混合液，并在37℃保温5分钟，读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2。检测的主波长为340nm，副波长为700nm。

3.不同试剂对比

采用实施例4的试剂盒绘制标准曲线，其方法与实施例3绘制标准曲线的方法相同。分别采用本发明实施例4的试剂盒和进口对比试剂(ROCHE公司试剂)，通过日立全自动生化分析仪对50份临床标本按各自参数同时进行测定，对测定值进行线性回归。线性回归得到的回归方程为Y＝0.9832X+1.3965，相关系数R²＝0.9972。如图4所示，为本发明实施例4的检测LAMBDA轻链含量试剂盒与国外对比试剂盒的比较结果示意图。图4示出相关性。其中X为本发明试剂，Y为对比试剂。结果表明本发明的试剂盒与对比试剂相关性很好，说明本发明的试剂盒具有很好的特异性和准确度。本发明试剂盒可以适用于日立、奥林巴斯、贝克曼等系列的全自动和半自动生化分析仪，分析方法和参数可以根据不同机型进行适当调整。

实施例5

1.试剂盒制备

该检测LAMBDA轻链含量的试剂盒包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品。

其中，试剂R1包括如下的成分：

试剂R2包括如下的成分：

LAMBDA轻链校准品包括如下的成分：

按照需要的校准品浓度将相应量的LAMBDA轻链抗原添加到上述其他试剂的混合液中，混合得到LAMBDA轻链校准品。该LAMBDA轻链校准品可以是高浓度单点校准品，在使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的参考校准品，也可以直接制备成5个不同浓度的参考校准品。本实施例选用的是高浓度单点参考校准品，LAMBDA轻链抗原浓度为800mg/dL，将LAMBDA轻链校准品用0.22μm的滤膜过滤除菌，在2～8℃下保存。使用时用生理盐水稀释成5个不同浓度的LAMBDA轻链校准品。LAMBDA轻链抗原的浓度分别为：0mg/dL、100mg/dL、200mg/dL、400mg/dL和800mg/dL。

2.检测方法

采用实施例5的试剂盒，通过全自动生化分析仪对待测样品进行检测分析，分析方法为两点终点法。向待测样品中加入试剂R1，待测样品的体积为5μL，试剂R1的体积为250μL，混合得到第一混合液，并在37℃保温5分钟，然后读取该第一混合液的吸光度OD1。再向第一混合液中进一步加入试剂R2，试剂R2体积为50μL，得到第二混合液，并在37℃保温5分钟，读取第二混合液的吸光度OD2。根据第一混合液的吸光度OD1和第二混合液的吸光度OD2。检测的主波长为340nm，副波长为700nm。

3.不同实施例试剂盒检测结果对比

绘制标准曲线。配制一份LAMBDA轻链浓度为136mg/dL的样本，分别用实施例3、4、5的试剂盒对样本重复检测10次，检测结果如表2所示。

表2实施例3～5试剂盒的LAMBDA轻链含量检测结果对比

由表2可见，三种实施例试剂盒测得的LAMBDA轻链含量均接近真实值，并且三种试剂盒测得的变异系数均小于5％，说明本发明的试剂盒性能稳定，测量准确。

4.线性范围检测

将LAMBDA轻链含量参考标准品用生理盐水稀释，其浓度从0～800mg/dL均分10个浓度，按照实施例5的检测方法，每个浓度样本重复测定3次，结果如表3所示，将测定浓度的平均值与实际浓度进行回收率分析，结果显示偏差均小于10％的，表示线性能达到800mg/dL。

表3本发明试剂盒线性范围检测结果

5.精密度测定

通过2个不同含量的LAMBDA轻链尿液来测定本发明试剂盒(采用实施例5的试剂盒)批内精密度以及批间精密度，结果如表4和表5所示，本发明的试剂盒批内精密度是2.6％和2.1％，批间精密度是4.7％和3.2％。

表4本发明试剂盒批内精密度

样品浓度	80mg/dL	300mg/dL
			测定均值	83.91mg/dL	329.44mg/dL
标准差	2.1938	6.8554
			批内精密度	2.6％	2.1％

表5本发明试剂盒批间精密度

样品浓度	80mg/dL	300mg/dL
			测定均值	82.97mg/dL	328.50mg/dL
标准差	3.9185	10.5956
			批间精密度	4.7％	3.2％

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于，包括：试剂R1、试剂R2和LAMBDA轻链校准品；所述试剂R1包括：第一缓冲液5～600mmol/L、第一电解质5～60g/L、表面活性剂1～200g/L、第一稳定剂2～50g/L、高分子加速剂1～100g/L和第一防腐剂0.5～15g/L；所述试剂R2包括：第二缓冲液5～600mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5～60％w/v、第二电解质5～60g/L和第二防腐剂0.5～15g/L；所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～600mmol/L、第三稳定剂2～50g/L、第三防腐剂0.5～15g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原。

2.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：

所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均选自磷酸盐PBS缓冲液、三羟甲基氨基甲烷TRIS缓冲液、硼酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸CAPSO缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES缓冲液中的一种或几种；和/或，

所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均选自叠氮钠、苯酚、对羟基苯甲酸、对羟基苯甲酸乙酯和乙基汞硫代硫酸钠中的一种或几种；和/或，

所述第一电解质和所述第二电解质均选自氯化钠、硫酸镁、氯化镁和氯化钾中的一种或几种；和/或，

所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均选自乙二胺四乙酸二钠、甘露糖醇、葡萄糖、海藻糖和牛血清蛋白中的一种或几种；和/或，

所述表面活性剂选自Triton系列表面活性剂、Tween系列表面活性剂、月桂醚系列表面活性剂、聚氧乙烯烷基苯基醚、聚氧乙烯壬基苯基醚和聚氧乙烯辛基苯醚中的一种或几种；和/或，

所述高分子加速剂选自聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000和聚乙二醇8000中的一种或几种；和/或，

所述抗人LAMBDA轻链抗体选自鼠抗人、兔抗人、羊抗人、鸡抗人和鸭抗人LAMBDA轻链抗体中的一种或几种；

所述抗氧化剂选自丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、苯多酚、甘草抗氧化物和硫代二丙酸二月桂酯中的一种或几种。

3.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：所述抗人LAMBDA轻链抗体为单克隆抗体和/或多克隆抗体。

4.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：

所述第一缓冲液、所述第二缓冲液和所述第三缓冲液均为磷酸盐缓冲液；和/或，

所述第一防腐剂、所述第二防腐剂和所述第三防腐剂均为叠氮钠；和/或，

所述第一电解质和所述第二电解质均为氯化钠；和/或，

所述第一稳定剂和所述第三稳定剂均为乙二胺四乙酸二钠；和/或，

所述表面活性剂为聚氧乙烯月桂醚；和/或，

所述高分子加速剂为聚乙二醇6000；和/或，

所述抗人LAMBDA轻链抗体为羊抗人LAMBDA轻链单克隆抗体；和/或，

所述抗氧化剂为丁基羟基茴香醚。

5.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于，

所述试剂R1包括：第一缓冲液20～400mmol/L、第一电解质6～45g/L、表面活性剂2～80g/L、第一稳定剂2～40g/L、高分子加速剂3～80g/L和第一防腐剂1.5～9g/L；

所述试剂R2包括：第二缓冲液20～450mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体15～30％w/v、第二电解质6～48g/L和第二防腐剂1.5～9g/L；

所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液15～100mmol/L、第三稳定剂2～45g/L、第三防腐剂4～8.5g/L、抗氧化剂0.4～9g/L和LAMBDA轻链抗原。

6.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于，

所述试剂R1包括：第一缓冲液10～100mmol/L、第一电解质5～15g/L、表面活性剂1～50g/L、第一稳定剂5～15g/L、高分子加速剂50～100g/L和第一防腐剂1～5g/L；和/或，

所述试剂R2包括：第二缓冲液10～100mmol/L、抗人LAMBDA轻链抗体5～60％w/v、第二电解质5～15g/L和第二防腐剂1～5g/L；和/或，

所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液10～100mmol/L、第三稳定剂5～15g/L、第三防腐剂1～5g/L、抗氧化剂0.01～0.8g/L和LAMBDA轻链抗原。

7.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于，所述LAMBDA轻链校准品包括：第三缓冲液5～600mmol/L、第三稳定剂2～50g/L、第三防腐剂0.5～15g/L、抗氧化剂0.01～10g/L和LAMBDA轻链抗原0～1000mg/dL。

8.如权利要求1所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒，其特征在于：所述LAMBDA轻链校准品中，所述LAMBDA轻链抗原的浓度为0～800mg/dL。

9.一种如权利要求1～8任一项所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒在检测LAMBDA轻链含量中的用途。

10.一种采用如权利要求1～8任一项所述的检测LAMBDA轻链含量的试剂盒检测LAMBDA轻链含量的方法，其特征在于，包括：

向待测样品中加入所述试剂R1，所述待测样品的体积为5μL，所述试剂R1的体积为250μL，得到第一混合液，并得到所述第一混合液的吸光度OD1；

向所述第一混合液中加入所述试剂R2，所述试剂R2的体积为50μL，得到第二混合液，并得到所述第二混合液的吸光度OD2；

使用所述LAMBDA轻链校准品得到标准曲线，根据所述吸光度OD1和所述吸光度OD2在所述标准曲线上得到所述待测样品中LAMBDA轻链的含量。