CN105548425A - 一种稳心颗粒的高效液相检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种稳心颗粒的高效液相检测方法,包括采用高效液相法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的步骤,该方法还包括了采用高效液相方法测定人参皂苷Rd与党参炔苷含量的步骤。本发明在利用高效液相法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的基础上增加了高效液相法测定人参皂苷Rd与党参炔苷的含量,使稳心颗粒的质量控制的指标更加全面;本发明检测方法的精密度、稳定性、重现性好。
Description
技术领域
本发明涉及一种稳心颗粒的高效液相检测方法,属于中成药检测分析领域。
背景技术
稳心颗粒是由党参、黄精、三七、琥珀、甘松等五味中药经过提取加工制成的中药制剂,其药理作用为增强心肌收缩力、改善微循环、增强窦房结功能及抗心律失常等。功能主治为:益气养阴,活血化瘀。用于气阴两虚,心脉瘀阻所致的心悸不宁、气短乏力、胸闷胸痛、室性早搏、房性早搏见上述证候者。
由于稳心颗粒在治疗心率失常疾病方面具有良好的治疗效果。然而2015年版中国药典仅对于稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量进行定量检测,而对于文献颗粒中的君药党参未做含量检测。为了进一步保证稳心颗粒内在质量,本发明在人参皂苷Rb1含量的基础上增加了高效液相法测定人参皂苷Rd与党参炔苷的含量,使稳心颗粒的质量控制的指标更加全面。
发明内容
本发明的目的是提供一种稳心颗粒的高效液相检测方法,该检测方法可以有效对稳心颗粒中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd与党参炔苷含量进行测定,进一步提高稳心颗粒质量控制标准,以保证稳心颗粒内在质量。
本发明所述稳心颗粒的高效液相检测方法,包括如下骤:
(a)混合对照品溶液的制备:取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及党参炔苷,精密称定,加甲醇溶解,配制成三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及党参炔苷的混合对照品溶液,即得;
(b)供试品溶液的制备:取稳心颗粒内容物,研细,精密称定,加水饱和的正丁醇,称定重量,浸泡,超声处理,放冷,再称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
(c)色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为A流动相,以水为B流动相;其体积配比为流动相A相:流动相B相为:22~95:78~5,进行线性梯度洗脱;进样体积10μL;流速0.8~1.2mL/min;柱温25~29℃,检测波长为210nm,理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于2000;
(d)色谱峰测定:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,计算同一保留时间下的峰面积,代入标准曲线方程,即计算出三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及党参炔苷的含量。
作为本发明的优选,所述步骤(a)混合对照品溶液的制备中,所述三七皂苷R1浓度为8~247μg/mL、人参皂苷Rg1浓度为14~422μg/mL、Rb1浓度为26.5~847μg/mL、Rd浓度为8~255μg/mL、党参炔苷浓度为1.5~42μg/mL。
作为本发明的优选,所述步骤(b)供试品溶液的制备中,取稳心颗粒内容物,研细,取约1g,精密称定,加水饱和的正丁醇50mL,密塞,称定重量,浸泡12h,超声处理,放冷,再称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
作为本发明的优选,所述步骤(c)的色谱条件中,所述流动相A相为乙腈,所述流动相B相为水,其流动相所采用的线性梯度洗脱条件为:
0-14min,流动相A相所占的体积比为:22%→30%A,流动相B相所占的体积比为:78→70%;
14-35min,流动相A相所占的体积比为:30%→38%,流动相B相所占的体积比为:70→62%;
35-45min,流动相A相所占的体积比为:38%,流动相B相所占的体积比为:62%;
45-47min,流动相A相所占的体积比为:38%→95%,流动相B相所占的体积比为:62→5%;
47-62min,流动相A相所占的体积比为:95%,流动相B相所占的体积比为:5%;
62-65min,流动相A相所占的体积比为95%→22%,流动相B相所占的体积比为:5→78%,进行线性梯度洗脱;流速1mL/min;柱温27℃。
测定法:分别精密吸取对照品溶液供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,计算同一保留时间下的峰面积,代入标准曲线方程,即计算出三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、党参炔苷、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的含量;本品每袋含三七以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的总量计,不少于17.0mg;每袋含三七以人参皂苷Rd计,不少于2.63mg;每袋含党参以党参炔苷计,不少于0.35mg。
所述标准曲线方程的绘制:将上述制备的对照品溶液稀释0、2、4、8、16、32倍,分别注入进入工作状态的HPLC装置的色谱柱,进样量为10μL,分别计算同一保留时间下的峰面积,以浓度x为横坐标,以峰面积y为纵坐标绘制标准曲线,做出标准曲线方程:y=f(x)。
本发明的有益效果:
1.本发明在高效液相法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的基础上增加了测定人参皂苷Rd与党参炔苷的含量,使稳心颗粒的质量控制指标更加全面有力于保证稳心颗粒内在质量。
2.本发明所建立的高效液相法的精密度(RSD%<1.61%)、稳定性(RSD%<1.56%)、重现性(RSD%<1.67%),该实验结果,表明该检测方法具有测定准确,操作简便,稳定性好的优点。
附图说明
图1-为供试品(稳心颗粒)的高效液相色谱图:其中1-三七皂苷R1;2-人参皂苷Rg1;3-党参炔苷;4-人参皂苷Rb1;5-人参皂苷Rd;
图2-为混合标准品的高效液相色谱图:其中1-三七皂苷R1;2-人参皂苷Rg1;3-党参炔苷;4-人参皂苷Rb1;5-人参皂苷Rd。
具体实施方式
为了使本领域的技术人员更好的理解本发明的技术方案,下面结合附图及具体实施方式对本发明所述技术方案作进一步的详细说明。
通过下面的实施案例用来说明本发明,但是不用来限制本发明的范围。本领域的专业人员能够理解,在不背离本发明的精神和范围的前提下,可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的,但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。在本发明中,稳心颗粒样品由山东步长制药股份有限公司提供,方法学考察样品批号:1412042。
实施例1
测定稳心颗粒中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、党参炔苷、人参皂苷Rb1与人参皂苷Rd的含量。
1、仪器与试剂
仪器:Angilent1260高效液相色谱仪,DAD检测器。
试剂:乙腈为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯。对照品:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1与人参皂苷Rd购买于中检所,纯度为95%;党参炔苷购买于一方科技,纯度为98%。
2、色谱条件的选择:
色谱柱:AmethystC18-H(4.6×250mm,4μm);流动相:乙腈为A流动相,水为B流动相;
本发明采用梯度洗脱方法,洗脱顺序为:0-14min,22%-30%A;14-35min,30%-38%A;35-45min,38%-38%A;45-47min,38%-95%A;47-62min,95%-95%A;62-65min,95%-22%A;进样体积10μL;流速1.0mL/min;柱温27℃。
3、线性范围的考察
对照品溶液的制备:取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Rb1、Rd和党参炔苷适量,精密称定,加甲醇配制成每1mL含有三七皂苷R10.247mg、人参皂苷Rg10.422mg、党参炔苷0.042mg、人参皂苷Rb10.847mg和人参皂苷Rd0.255mg的混合溶液,即得。
测定:将混合对照品溶液稀释0、2、4、8、16、32倍,分别注入液相色谱仪,分别计算同一保留时间下的峰面积,以浓度X为横坐标,以峰面积Y为纵坐标绘制标准曲线。回归方程:三七皂苷R1:Y=984.18X-0.5463,r=0.9999,对照品在8-247μg/mL线性关系良好;人参皂苷Rg1:Y=1298.9X+6.8292,r=0.9999,对照品在14-422μg/mL线性关系良好;党参炔苷:Y=38187X-16.383,r=0.9999,对照品在1.5-42μg/mL线性关系良好;人参皂苷Rb1:Y=441.49X-1.8388,r=0.9999,对照品在26.5-847μg/mL线性关系良好;人参皂苷Rd:Y=1009.8X+1.3961,r=0.9996,对照品在8-255μg/mL线性关系良好。
4、供试品溶液的制备
取装量差异项下的本品(无蔗糖),研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加水饱和的正丁醇50mL,密塞,称定重量,浸泡12h,超声处理(功率300W,频率40kHz)1h,放冷,再称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
5、精密度试验
取本品(批号1412042,无蔗糖)适量,按照正文供试品溶液制备方法制备供试品溶液,进样10μL,重复进样6次,测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、党参炔苷、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的峰面积,结果见表1。
表1为精密度实验结果
以上实验结果表明,所用液相色谱仪的精密度良好。
6、稳定性试验
取供试品溶液(批号1412042,无蔗糖),在室温下保存,分别于0、1、2、4、8、12、24、48h的时间间隔,精密吸取10μL,注入液相色谱仪,测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、党参炔苷、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的峰面积值,结果见表2。
表2稳定性试验结果
实验结果表明,供试品溶液在48小时内测定,其相对偏差分别为1.56%、0.46%、0.94%、0.82%、1.21%,说明供试品溶液在48小时内测定,结果保持稳定。
7、重现性试验
取同一批号(批号1412042,无蔗糖)的稳心颗粒6份,分别依法制备供试品溶液,分别测得峰面积,结果见表3。
表3重现性实验结果
以上实验结果表明,方法重现性好。
8、加样回收率试验
取与重现性试验同一批号的稳心颗粒(含量测定结果为三七皂苷R10.8297mg·g-1,人参皂苷Rg13.3072mg·g-1,党参炔苷0.0897mg·g-1,人参皂苷Rb15.4643mg·g-1,人参皂苷Rd0.7874mg·g-1)约0.5g,平行6份,精密称定,分别精密加入三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd适量依法制备加样回收供试品溶液,测定结果,以下列公式计算回收率,结果见表4、表5、表6、表7。
表4三七皂苷R1加样回收实验结果
表5人参皂苷Rg1加样回收实验结果
表6党参炔苷加样回收实验结果
表7人参皂苷Rb1加样回收实验结果
表8人参皂苷Rd加样回收实验结果
实验结果表明:回收率在95%-106%之间,加样回收良好。
9、样品测定
按照上述发明内容的方法测定6批稳心颗粒(无蔗糖)中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、党参炔苷、人参皂苷Rb1和人参皂苷Rd的含量,测定结果见表9。
表9稳心颗粒6批含量测定结果
根据以上测定结果,所测得共6批稳心颗粒(无蔗糖)中党参炔苷的波动范围为0.086~0.089mg·g-1平均含量为0.0875mg·g-1;人参皂苷Rd的波动范围为0.64-0.69mg·g-1,平均含量为0.657mg·g-1;为避免装量差异、操作等因素造成的含量波动,以平均含量的80%制定限度,故含量限度暂定为:本品每袋含三七以人参皂苷Rd计,不得少于2.63mg;本品每袋含党参以党参炔苷计,不得少于0.35mg。
Claims (4)
1.一种稳心颗粒的高效液相检测方法,其特征在于,所述检测方法包括如下骤:
(a)混合对照品溶液的制备:取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及党参炔苷,精密称定,加甲醇溶解,配制成三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及党参炔苷的混合对照品溶液,即得;
(b)供试品溶液的制备:取稳心颗粒内容物,研细,精密称定,加水饱和的正丁醇,称定重量,浸泡,超声处理,放冷,再称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得;
(c)色谱条件:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以乙腈为A流动相,以水为B流动相;其体积配比为流动相A相:流动相B相为:22~95:78~5,进行线性梯度洗脱;进样体积10μL;流速0.8~1.2mL/min;柱温25~29℃,检测波长为210nm,理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于2000;
(d)色谱峰测定:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μL,注入液相色谱仪,计算同一保留时间下的峰面积,代入标准曲线方程,即计算出三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及党参炔苷的含量。
2.如权利要求1所述高效液相检测方法,其特征在于,所述步骤(a)混合对照品溶液的制备中,所述三七皂苷R1浓度为8~247μg/mL、人参皂苷Rg1浓度为14~422μg/mL、Rb1浓度为26.5~847μg/mL、Rd浓度为8~255μg/mL、党参炔苷浓度为1.5~42μg/mL。
3.如权利要求1所述高效液相检测方法,其特征在于,所述步骤(b)供试品溶液的制备中,取稳心颗粒内容物,研细,精密称定,加水饱和的正丁醇50mL,密塞,称定重量,浸泡12h,超声处理,放冷,再称定重量,用水饱和的正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液25mL,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇溶解并转移至10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,即得。
4.如权利要求1所述高效液相检测方法,其特征在于,所述步骤(c)的色谱条件中,所述流动相A相为乙腈,所述流动相B相为水,其流动相所采用的线性梯度洗脱条件为:
0-14min,流动相A相所占的体积比为:22%→30%A,流动相B相所占的体积比为:78→70%;
14-35min,流动相A相所占的体积比为:30%-38%,流动相B相所占的体积比为:70→62%;
35-45min,流动相A相所占的体积比为:38%,流动相B相所占的体积比为:62%;
45-47min,流动相A相所占的体积比为:38%→95%,流动相B相所占的体积比为:62→5%;
47-62min,流动相A相所占的体积比为:95%,流动相B相所占的体积比为:5%;
62-65min,流动相A相所占的体积比为95%→22%,流动相B相所占的体积比为:5→78%,进行线性梯度洗脱;流速1mL/min;柱温27℃。
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PB01 | Publication | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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