CN105532448A - 一种滇黄精组织培养的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种滇黄精组织培养的方法，(1)每年2、3月份选择优良的块茎进行脱毒，脱毒后的块茎分切，接入无任何激素的MS培养基中培养；(2)在MS培养基中培养18-22天，把没有污染的黄精块茎转接到增值培养基中培养；(3)在增值培养基中培养35-45天之后，黄精块茎在增值培养基中生成大量愈伤组织；(4)在促芽培养基中培养23-25天之后，把促芽培养基中的黄精嫩芽分切，转接到生根培养基中培养；(5)在生根培养基中培养中50-60天之后，生根培养基中的黄精苗生根完成，转入到晒苗大棚；(6)晒苗30-35天之后黄精幼苗出瓶。本发明将滇黄精从种子到出苗的时间有两年，降低到半年，并且滇黄精苗成活率在98％以上，有效的提高了滇黄精的繁育速度。
Description
技术领域
本发明属中药材种植技术领域，特别涉及一种滇黄精组织培养的方法。
背景技术
滇黄精是百合科黄精属草本植物，是常用中药黄精三种基原植物之一。黄精作为常用中药，在我国已有2000多年的用药历史，其性味甘平，入肺、脾、肾经。功效补中益气，润心肺，强筋骨。治虚损寒热，肺痨咯血，病后体虚食少，筋骨软弱，风湿疼痛，风癞癣疾，为补阴之品。近年来药理研究表明，除上述功效外，黄精还有抗菌作用，尤其是对结核杆菌和真菌有显著的效果，同时又有降低血压的作用。近期研究结果还表明黄精对增加冠状动脉血流量，减轻动脉粥样硬化程度，提高肝脏中超氧化物歧化酶(SOD)活性有明显的作用。长期以来，由于人工栽培量较小，黄精药材来源主要以野生采集为主。随着市场对药材黄精需求量的增加和野生资源的急剧减少，采集野生黄精不但不能满足市场需求，更破坏了生态环境和黄精野生资源。由于黄***子在自然条件下发芽率较低，自然条件下，黄***子要经历2个冬季休眠后，才能长出一片真叶，目前在黄精人工栽培中多采用块茎进行无性繁殖。繁殖周期长、繁殖系数低。
申请号为：201210085056.2，名称为“九华黄精的组培快繁方法”的中国专利申请公开了一种黄精组培繁殖方法，具体为：以黄精根状茎为外植体，经过不定芽的诱导阶段，丛芽增殖阶段，生根阶段和炼苗移栽阶段，调配和优选各培养阶段的培养基配方和培养条件，形成了每年扩繁速度为106倍的组培技术，实现了九华黄精的组织培养和快速稳定繁殖，可以有效解决九华黄精的优质种苗供应问题。
申请号为：201310532853.5，名称为“黄精根茎的组织培养基及离体再生方法”的中国专利申请公开了一种黄精根茎的组织培养基及离体再生方法；该黄精根茎的组织培养基包括诱导培养基、增殖培养基和生根培养基；使用所述黄精根茎的组织培养基进行黄精根茎离体再生的方法，包括芽的诱导、芽的增殖培养和生根培养三个步骤。该发明利用植物组织培养技术建立了黄精离体再生体系，并对涉及的诱导培养基、增殖培养基和生根培养基进行了选择优化，具有芽诱导率高、增殖系数高、生根率高、芽苗健壮、叶形叶色正常等优点，能够满足市场对优质黄***苗的需要。
申请号201510420973.5，发明名称：一种滇黄***子一步成苗的组培方法，方法包括滇黄精果实选取，滇黄***子处理、滇黄***子一步成苗培养，炼苗移栽。选取8成熟果实，置于4℃冰箱中7天；将经处理的种子接种于盛有MS+BA0.5mg/L培养基的培养瓶中，在温度为25℃±2℃，光照时间为12-14h/天，光照强度为150lx条件下培养至黄***子萌发2片真叶时，将培养瓶置于培养温度为25℃±2℃，光照时间为12h/天，光照强度为1500lx条件下继续培养至生根。该发明方法从种子接种一步培养成苗仅需90-99天，萌芽期从两个冬季缩短到1个月，繁育周期大大缩短，种子萌芽率达到90～95％，炼苗成活率达100％。
上述方法虽然在一定程度上解决了黄精繁殖慢、时间长等问题，但是依然存在繁殖速度慢、成活率低等问题。
发明内容
本发明提供了一种滇黄精组织培养的方法，解决了现有滇黄精繁殖速度慢、成活率低等问题。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
一种滇黄精组织培养的方法，包括以下步骤：
(1)每年2、3月份选择优良的块茎进行脱毒，脱毒后的块茎分切，接入无任何激素的MS培养基中培养；
(2)在MS培养基中培养18-22天，把没有污染的黄精块茎转接到增值培养基中培养；
(3)在增值培养基中培养35-45天之后，黄精块茎在增值培养基中生成大量愈伤组织，一部分再次转接到增值培养基中增值培养，一部分转入促芽培养基中培养；
(4)在促芽培养基中培养23-25天之后，把促芽培养基中的黄精嫩芽分切，转接到生根培养基中培养；
(5)在生根培养基中培养中50-60天之后，生根培养基中的黄精苗生根完成，转入到晒苗大棚；
(6)晒苗30-35天之后黄精幼苗出瓶。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的脱毒包括以下步骤：
A、先用清水洗净带芽块茎，再用清洁剂清洗块茎；
B、用0.1％的次氯酸钠溶液浸泡8-12分钟，然后清水洗净；
C、到超净工作台上，先用75％的酒精泡10s，用无菌水冲洗一次后再用浓度为的0.1％升汞溶液浸泡12分钟，用无菌水冲洗8次，用滤纸吸干水分，即完成脱毒。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的MS培养基的培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的增值培养基的培养条件为：先暗培养10d，温度为20-25℃，再在光照为3000lux的条件下培养6-8小时。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的促芽培养基的培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％，培养10-12小时。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的生根培养基中培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％，培养时间为12-14小时。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的晒苗的条件为：温度25-30℃，光照自然光，湿度60-65％。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的增值培养基为：MS+2,4-D1mg/L+6-BA3mg/L。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的促芽培养基为MS+6-BA3mg/L+NAA1mg/L。
进一步，本发明的一种优选方案：所述的生根培养基为1/2MS+NAA0.25mg/L+1BA0.5mg/L+香蕉50g/L+AC0.5g/L。
本发明的有益效果：
本发明的方法通过组织培养解决了现有滇黄精繁殖时间长、出芽率低，以及现有组织培养激素多、出芽率低、成活率低等问题，将滇黄精从种子到出苗的时间有两年，降低到半年，并且滇黄精苗成活率在98％以上，有效的提高了滇黄精的繁育速度。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种滇黄精组织培养的方法，包括以下步骤：
(1)每年2、3月份选择优良的块茎进行脱毒，脱毒后的块茎分切，接入无任何激素的MS培养基中培养；
所述的脱毒包括以下步骤：
A、先用清水洗净带芽块茎，再用清洁剂清洗块茎；
B、用0.1％的次氯酸钠溶液浸泡8-12分钟，然后清水洗净；
C、到超净工作台上，先用75％的酒精泡10s，用无菌水冲洗一次后再用浓度为的0.1％升汞溶液浸泡12分钟，用无菌水冲洗8次，用滤纸吸干水分，即完成脱毒；
(2)在MS培养基中培养18-22天，把没有污染的黄精块茎转接到增值培养基中培养；
(3)在增值培养基中培养35-45天之后，黄精块茎在增值培养基中生成大量愈伤组织，一部分再次转接到增值培养基中增值培养，一部分转入促芽培养基中培养；
(4)在促芽培养基中培养23-25天之后，把促芽培养基中的黄精嫩芽分切，转接到生根培养基中培养；
(5)在生根培养基中培养中50-60天之后，生根培养基中的黄精苗生根完成，转入到晒苗大棚；
(6)晒苗30-35天之后黄精幼苗出瓶，晒苗的条件为：温度25-30℃，光照自然光，湿度60-65％。
MS培养基的培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％。
增值培养基的培养条件为：先暗培养10d，温度为20-25℃，再在光照为3000lux，温度为20-25℃的条件下培养6-8小时。
促芽培养基的培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％，培养10-12小时。
生根培养基中培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％，培养时间为12-14小时。
增值培养基为：MS+2,4-D1mg/L+6-BA3mg/L。
促芽培养基为MS+6-BA3mg/L+NAA1mg/L。
生根培养基为1/2MS+NAA0.25mg/L+1BA0.5mg/L+香蕉50g/L+AC0.5g/L。
对比例1
与实施例1基本相同，不同之处在于：
增殖培养基：MS+2,4-D0.8mg/L+6-BA2.5mg/L。
对比例2
与实施例1基本相同，不同之处在于：
增殖培养基：MS+2,4-D1.2mg/L+6-BA3.5mg/L。
增殖培养基培养结果见下表1。
表1
| 接种数 | 增值系数 | 备注 | ||
| 实施例1 | MS+2,4-D1mg/L+6-BA3mg/L | 100 | 1.5 | 增值多长势好 |
| 对比试验1 | MS+2,4-D0.8mg/L+6-BA2.5mg/L | 100 | 0.6 | 增值少，长势若 |
| 对比试验2 | MS+2,4-D1.2mg/L+6-BA3.5mg/L | 100 | 1.5 | 长势若 |
由表1可知，本发明的增殖培养基增值多，长势好。
对比例3
与实施例1基本相同，不同之处在于：
促芽生长培养基：MS+6-BA2mg/L+NAA0.8mg/L。
对比例4
与实施例1基本相同，不同之处在于：
促芽生长培养基：MS+6-BA4mg/L+NAA1.2mg/L。
促芽生长培养基结果见表2。
表2
| 接种数 | 愈伤组织分化能力 | 备注 | ||
| 实施例1 | MS+6-BA3mg/L+NAA1mg/L | 120 | 强 | 形成的芽个数多且壮 |
| 对比试验1 | MS+6-BA2mg/L+NAA0.8mg/L | 120 | 若 | 形成的芽数少 |
| 对比试验2 | MS+6-BA4mg/L+NAA1.2mg/L | 120 | 适中 | 形成的芽数适中但芽长势若 |
由表2可知，本发明的促芽生长培养基形成的芽个数多且壮。
对比例5
与实施例1基本相同，不同之处在于：
生根培养基：1/2MS+NAA0.7mg/L+香蕉30g/L+AC0.5g/L。
对比例6
与实施例1基本相同，不同之处在于：
生根培养基：1/2MS+NAA0.3mg/L+1BA0.6mg/L+香蕉50g/L+AC0.5g/L。
对比例7
与实施例1基本相同，不同之处在于：
生根培养基：1/2MS+NAA0.2mg/L+1BA0.3mg/L+香蕉50g/L+AC0.5g/L。
生根培养基结果见表3。
表3
由表3可知，本发明的生根培养基生根数在10-12，根多粗长。
由上表本发明的方法是各个因素综合得到的结果，改变任何一个因素都会影响组织培养的出芽数。出根数和苗成活率等。
采用本发明的方法将滇黄精从种子到出苗的时间有两年，降低到半年，并且滇黄精苗成活率在98％以上，有效的提高了滇黄精的繁育速度。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的保护范围内所作的任何修改、等同替换等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)每年2、3月份选择优良的块茎进行脱毒，脱毒后的块茎分切，接入无任何激素的MS培养基中培养；
(2)在MS培养基中培养18-22天，把没有污染的黄精块茎转接到增值培养基中培养；
(3)在增值培养基中培养35-45天之后，黄精块茎在增值培养基中生成大量愈伤组织，一部分再次转接到增值培养基中增值培养，一部分转入促芽培养基中培养；
(4)在促芽培养基中培养23-25天之后，把促芽培养基中的黄精嫩芽分切，转接到生根培养基中培养；
(5)在生根培养基中培养中50-60天之后，生根培养基中的黄精苗生根完成，转入到晒苗大棚；
(6)晒苗30-35天之后黄精幼苗出瓶。
2.根据权利要求1所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于，所述的脱毒包括以下步骤：
A、先用清水洗净带芽块茎，再用清洁剂清洗块茎；
B、用0.1％的次氯酸钠溶液浸泡8-12分钟，然后清水洗净；
C、到超净工作台上，先用75％的酒精泡10s，用无菌水冲洗一次后再用浓度为的0.1％升汞溶液浸泡12分钟，用无菌水冲洗8次，用滤纸吸干水分，即完成脱毒。
3.根据权利要求1所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的MS培养基的培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％。
4.根据权利要求1所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的增值培养基的培养条件为：先暗培养10d，温度为20-25℃，再在光照为3000lux的条件下培养6-8小时。
5.根据权利要求1所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的促芽培养基的培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％，培养10-12小时。
6.根据权利要求1所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的生根培养基中培养条件为：温度20-25度，光照12-14小时，强光3000lux，湿度70-80％，培养时间为12-14小时。
7.根据权利要求1所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的晒苗的条件为：温度25-30℃，光照自然光，湿度60-65％。
8.根据权利要求1-7任一项所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的增值培养基为：MS+2,4-D1mg/L+6-BA3mg/L。
9.根据权利要求1-7任一项所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的促芽培养基为MS+6-BA3mg/L+NAA1mg/L。
10.根据权利要求1-7任一项所述的一种滇黄精组织培养的方法，其特征在于：所述的生根培养基为1/2MS+NAA0.25mg/L+1BA0.5mg/L+香蕉50g/L+AC0.5g/L。
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