CN105461736A - 具有锌结合位的磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供式I化合物，

Description

具有锌结合位的磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂

本申请是2012年3月30日递交的申请号为201280026400.9，发明名称为“具有锌结合位的磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂”的分案申请。

相关申请

本申请要求享有2011年4月1日提交的美国临时专利申请号61/470,849、和2011年11月14日提交的美国临时专利申请号61/559,489的优先权。上述申请中所有公开的内容通过引证并入本文。

发明的背景技术

磷脂酰肌醇(PIs)，作为磷脂酰肌醇的磷酸化衍生物，是真核细胞中调节细胞核反应过程、细胞骨架动态、信号和膜传递所必需的。在涉及PI代谢的酶中，PI3-激酶(PI3K)由于其致癌特性和可能作为药物靶点而受到特别的重视。PI3-激酶磷酸化磷脂酰肌醇或PIs的肌醇环的第3位(Lindmoet.al.JournalofCellScience119,608-614,2006)。由于PI3K活性所产生的3-磷酸化磷脂能结合于蛋白激酶B(PKB)的pleckstrin同源(PH)结构域，导致PKB转移到细胞膜，以及后续的PKB磷酸化。磷酸化PKB抑制细胞凋亡诱导蛋白，例如FKHR、Bad和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)，并且被认为在癌症的进展中具有重要作用。PI3K被划分为I-III类，I类由进一步再分类为Ia和Ib类。在这些亚型中，Ia类酶被认为在回应生长因子酪氨酸激酶路径活化的细胞增殖方面扮演最重要的角色(Hayakawaetal.,Bioorganic&MedicinalChemistry146847-6858,2006)。癌症中3个常规突变固有的活化了PI3Ka，并且在细胞中被表达时，这些突变通过例如PKB、S6K和4Ebpl的在癌症细胞中常见的分子而驱动致癌转化和长期活化下游信号(Stephensetal.,CurrentOpinioninPharmacology,5(4)357-365,2005)。如此，PI3-激酶是用于增殖性疾病治疗方面的令人重视的靶点。

几种已知的PI3-激酶抑制剂，包括Wortmannin和LY294002。虽然Wortmannin是一种低纳摩尔IC₅₀值的有效PI3K抑制剂，但是其体内的抗肿瘤活性低(Hayakawaetal.,Bioorg.Med.Chem.14(20),6847-6858(2006))。近期，已经有人报告一组由吗啉取代的喹唑啉、吡啶并嘧啶以及噻吩并嘧啶的化合物，对于抑制PI3激酶p110α有效(Hayakawa,6847-6858)。口服剂量的吗啉取代的噻吩并嘧啶化合物(GDC-0941)显示出在体内对于神经胶质母细胞瘤异体移植物具有肿瘤抑制作用(Folkesetal.,JournalofMedicinalChemistry,51,5522-5532,2008)。下述公开文献中揭示了一系列的基于噻吩并嘧啶、吡啶并嘧啶以及喹唑啉的PI3-激酶抑制剂：WO2008/073785；WO2008/070740；WO2007/127183；美国专利公开文献20080242665。

组蛋白乙酰化作用是一种可逆的修饰作用，去乙酰化是由一组被称为组蛋白脱乙酰基酶(HDACs)的酶类家族所催化的。人体的HDAC是由18个基因所代表，并且被划分为4个截然不同的类别(JMolBiol,2004,338:1,17-31)。在哺乳动物中，I类HDAC(HDAC1-3和HDAC8)是与酵母RPD3HDAC相关，2类(HDAC4-7、HDAC9和HDAC10)是与酵母RPD3HDA1相关，4类(HDAC11)和3类(包括涉及到酵母Sir2的沉默调节蛋白sirtuins的一个截然不同的类别)。

Csordas,Biochem.J.,1990,286:23-38教导组蛋白在N末端赖氨酸残基的ε-氨基被转译后乙酰基化，该反应是由组蛋白乙酰基转移酶(HAT1)催化的反应。乙酰基化会中和赖氨酸侧链的正电荷，并且被认为会影响染色体结构。的确，转录因子接近染色体模板的作用会由于组蛋白高度乙酰基化而增强，并且已经发现在基因体的转录沉默区有乙酰基化不足的组蛋白H4的富集现象(Tauntonetal.,Scinece,1996,272:408-411)。在所述的肿瘤抑制性基因的情形中，由于组蛋白修饰所造成的转录沉默可能会造成致癌转化和癌症。

目前已有数种类型的HDAC抑制剂由临床研究人员在评估中。实例包括羟肟酸衍生物、辛二酰基苯胺异羟肟酸(SAHA)、PXD101以及LAQ824，正处于临床研发中。苯甲酰胺类的HDAC抑制剂，已有MS-275、MGCD0403和CI-994进入临床试验阶段。Mourne等人(摘要#4725，AACR2005)，证明了对苯甲酰胺进行的噻吩基修饰作用会显著增强HDAC抑制剂抗HDAC1的活性。

某些癌症已经利用如此组合方法而有效受到治疗；然而，使用细胞毒性药物的鸡尾酒治疗策略经常受限于剂量限制性毒性和药物与药物之间的交互作用。分子靶向药物的最新进展已经提供针对癌症的组合治疗的一种新的途径，其能够同时使用多种多靶点药物，或者将这些新疗法与标准的化疗或放疗进行组合，以在不达到剂量限制毒性的前提下改善结果。但是，使用此种组合方式的能力目前受限于显示出可相容性的药理学和药动学性质的药物。此外，与相应的单一药物的实验相比，证明组合疗法安全性和有效性的法规要求可能会更昂贵和更耗时。一旦被批准，组合的策略对于受试者而言也可能带来成本的增加，以及由于所需的更精密复杂的给药方案而造成受试者的顺应性降低。

发明概述

本发明涉及式I化合物

和其药学上可接受的盐，其中R为氢或酰基。该酰基优选为R₁C(O)-，其中R₁为被取代或未被取代的C₁-C₂₄烷基，优选为C₁-C₁₀烷基，更优选为C₁-C₆烷基；被取代或未被取代的C₂-C₂₄烯基，优选为C₂-C₁₀烯基，更优选为C₂-C₆烯基；被取代或未被取代的C₂-C₂₄炔基，优选为C₂-C₁₀炔基，更优选为C₂-C₆炔基；被取代或未被取代的芳基，优选为被取代或未被取代的苯基；或被取代或未被取代的杂芳基。

本发明也涉及一种药物组合物，其包含式I化合物或其药学上可接受的盐，以及在药学上接受的赋形剂或载体。

式I化合物，特别是化合物1，具有作为治疗剂的优势特性，例如用于治疗癌症和其它与PI3激酶活性和/或HDAC活性相关的疾病或病症。化合物1，例如，对于分子靶点PI3K和HDAC具有有效的抑制活性，并且在体内对于许多癌症细胞株有抗增殖的有效活性。化合物1在动物模型中被观察到有显著的口服生物利用度。经口服或静脉内向具有异体移植肿瘤的小鼠给药，该化合物显示出经由肿瘤组织显著的摄入，以及在肿瘤组织中有显著的药效活性。化合物1在经口服或静脉内给药之后的小鼠异体移植肿瘤模型中，也显示出实质上的抗肿瘤活性。该化合物也具有有利的安全性曲线，例如在使用Ames测试的基因毒性检测中。

本发明进一步涉及本发明化合物在治疗如癌症的与PI3K相关的疾病和病症中的应用。这些化合物通过其结合锌离子能力的优势，也被当作HDAC抑制剂。此类化合物在多重治疗靶点上有活性，并且治疗多种疾病有效。再者，在一些案例中，已经发现与分别具有PI3-激酶抑制活性和HDAC抑制活性的分子的组合活性相比较，这些化合物的活性更高。换而言之，在单一分子中具有PI3-激酶和HDAC抑制活性的组合，相比于分别的PI3-激酶和HDAC抑制剂，可提供协同效应。

再者，单一试剂的PI3K途径抑制剂的功效，受限于存在的先天/后天的基因改变，以及多重促存活的活化和生长途径(Engelman(2009)NatureReviewsCancer，9：550-562)。经由单一试剂PI3K途径抑制剂的PI3K抑制，能够通过释放负反馈途径而实际上上调RAF-MEK-ERK途径的信号。本发明的化合物，通过其整合的PI3K/HDAC抑制性活性，提供了克服以单一试剂PI3K抑制剂治疗癌症的限制的潜力。本发明的化合物，由于较长时间抑制PI3K-AKT-mTOR途径、抑制RAF-MEK-ERK途径，以及下调酪氨酸激酶(RTK)受体蛋白质水平，而在体内和体外实验中干扰癌症网络。此外，本发明的化合物，在体外通过上调肿瘤细胞株中的肿瘤抑制因子p53和p21而诱导细胞周期终止和细胞凋亡。所以，本发明的化合物具有克服先天和后天的抗药性的潜力，并且可能比临床应用中单独以单一试剂PI3K途径抑制剂进行的治疗更加有效。

本发明的另一个方面提供了抑制PI3K激酶活性的方法，通过使PI3K激酶和有效抑制量的式I化合物或其药学上可接受的盐相接触。

附图的简介

图1是口服给予带有H2122异体移植肿瘤的裸体小鼠后，血浆和肿瘤组织中化合物1的浓度相对于时间的变化图。

图2A是以口服剂量25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg给药于带有Daudi异体移植肿瘤的Scid小鼠后，化合物1的血浆浓度相对于时间的变化图。

图2B是以口服剂量25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg给药于带有Daudi异体移植肿瘤的Scid小鼠后，化合物1的肿瘤浓度相对于时间的变化图。

图2C是以口服剂量100mg/kg给药于带有Daudi异体移植肿瘤的Scid小鼠后，血浆、肿瘤组织中化合物1的浓度相对于时间的变化图。

图3显示带有Daudi异体移植肿瘤的Scid小鼠的对照组和化合物1治疗组(25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg)的肿瘤组织提取物的Westernblots图。

图4是口服或静脉内给药后，在毕尔格猎犬中化合物1的血浆浓度相对于时间的变化图。

图5A是用化合物1或载体治疗的带有H2122异体移植肿瘤的裸体小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图5B是用化合物1或载体治疗的带有Daudi异体移植肿瘤的裸体小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图5C是用化合物1或载体治疗的带有OPM2异体移植肿瘤的裸体小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图6是显示用化合物1或载体治疗后，血液循环中的T和B淋巴细胞的水平的图。

图7A至图7G显示从对照组和经化合物1治疗的H460(Kras,PI3K)细胞中提取的提取物的Westernblots图。GDC是GDC-094；LBH是LBH-589。

图8A至8C显示从对照组和经化合物1治疗的H1975(EGFR、PI3K)、BT474(HER2、PI3K)、H1975(EGFR、PI3K)、A375(B-Raf)和RPMI-882(p53^-)细胞中提取的提取物的Westernblots图。

图9是用化合物1或载体口服治疗的带有Daudi异体移植肿瘤小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图10是用载体、化合物1、SAH、GDC-0941或SAHA与GDC-0941的组合物治疗的带有Daudi异体移植肿瘤小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图11是用化合物1或载体治疗的带有SU-DHL4异体移植肿瘤裸体小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图12是用化合物1或载体治疗的带有OPM2异体移植肿瘤裸体小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图13是用化合物1或载体治疗的带有MM1S异体移植肿瘤SCID小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图14是用化合物1或载体治疗的带有MM1R异体移植肿瘤SCID小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图15显示从经化合物1治疗的带有Daudi、SuDHL-4、HS-Sultan、OHH-2、OPM-2、MM1R或MM1S异体移植肿瘤SCID小鼠中提取的肿瘤提取物的Westernblots图。

图16是用化合物1、CAL-101或载体治疗的带有Daudi肿瘤SCID小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图17是用化合物1，环磷酰胺，化合物1和环磷酰胺的组合物或载体治疗的带有Daudi肿瘤SCID小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

图18是用化合物1、来那度胺，化合物1和来那度胺的组合物或载体治疗的带有MM1S肿瘤SCID小鼠中，肿瘤生长相对于时间的变化图。

发明的详细描述

在一个优选的实施方案中，式I化合物如下所示：

(以下“化合物1”也指N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺或其药学上可接受的盐。

本发明也提供预防或治疗涉及细胞异常增殖、分化或存活的疾病或病症的方法。在一个实施方案中，本发明还提供使用本发明的一种或多种化合物在制造用于阻止或减少涉及细胞异常增殖、分化或存活的疾病。在一个优选的实施方案中，该疾病为癌症。在一个实施方案中，本发明涉及一种在有治疗需求的受试者中治疗癌症的方法，包括给予所述受试者治疗有效量的本发明化合物。

术语“癌症”指的是由恶性新生细胞的增殖而引发的任意癌症，如肿瘤、赘生物、肉瘤、白血病、淋巴瘤等。例如，癌症包括但不限于，间皮瘤、白血病和淋巴瘤，例如皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)、非皮肤外周T细胞淋巴瘤、与人类T细胞淋巴瘤病毒(HTLV)相关的淋巴瘤，例如成人T细胞白血病/淋巴瘤(ATLL)、B细胞淋巴瘤、急性非淋巴性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、慢性骨髓性白血病、急性骨髓性白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、急性淋巴性白血病(ALL)、慢性淋巴性白血病(CLL)、霍奇金氏淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、成人T细胞白血病淋巴瘤、急性骨髓性白血病(AML)、慢性骨髓性白血病(CML)、或肝细胞癌。进一步的实例包括骨髓造血不良综合症、儿童期实体瘤，例如脑瘤、神经母细胞瘤、视网膜母细胞瘤、肾母肿瘤、骨瘤和软组织肉瘤，成人常见的实体瘤，例如头颈癌(例如，口腔癌、喉癌、鼻咽癌和食道癌)、泌尿生殖***癌(例如***癌、膀胱癌、肾癌、子宫癌、卵巢癌、睾丸癌)、肺癌(例如小细胞和非小细胞癌)、乳腺癌、胰腺癌、恶性黑色素瘤和其它皮肤癌、胃癌、脑瘤、与Gorlins综合症相关的肿瘤(例如成神经管细胞瘤、脑膜瘤等)和肝癌。可通过主题化合物治疗的癌症的其它范例性形式包括但不限于，骨骼肌或平滑肌的肿瘤、胃癌、小肠癌、直肠癌、唾液腺癌、子宫内膜癌、肾上腺癌、***癌、直肠癌、副甲状腺癌和垂体癌。

在此所述的化合物可用于预防、治疗和研究的其它癌症是，例如，结肠癌、家族性结直肠息肉癌和遗传性非息肉病结肠直肠癌、或恶性黑色素瘤。再者，癌症包括但不限于唇癌、喉癌、喉咽癌、舌癌、唾液腺癌、胃癌、腺癌、甲状腺癌(骨髓性和乳突状甲状腺癌)、肾癌、肾脏软组织癌、子***、子宫体癌、子宫内膜癌、绒毛膜癌、睾丸癌、膀胱癌、恶性黑色素瘤、脑瘤，例如神经母细胞瘤、星形细胞瘤、脑膜瘤、成神经管细胞瘤和外周神经外胚层肿瘤、胆囊癌、支气管癌、多发性骨髓瘤、基底细胞癌、畸胎瘤、视网膜母细胞瘤、脉络膜恶性黑色素瘤、***瘤、横纹肌肉瘤、脑咽管瘤、骨肉瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、脂肪肉瘤、纤维肉瘤、尤文氏肉瘤和浆细胞瘤。在本发明的一个方面，本发明提供使用本发明的一种或多种化合物制造用于治疗癌症的药物的用途。

在一个实施方案中，本发明的化合物用于治疗血液性癌症或血液性癌前病况。血液性癌症包括白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤。实例包括淋巴细胞性白血病，如急性淋巴细胞性白血病，包括母细胞B急性淋巴细胞性白血病、母细胞T急性淋巴细胞性白血病、Burkitt白血病和急性双表型白血病；和慢性淋巴细胞性白血病，包括母细胞B慢性淋巴细胞性白血病；和骨髓性白血病，例如急性骨髓生成性白血病，包括急性早幼粒细胞性白血病、急性髓性母细胞性白血病和急性巨核母细胞性白血病；慢性骨髓生成性白血病，包括慢性单细胞性白血病；急性单细胞性白血病。其它白血病包括毛(样)细胞白血病；母细胞T细胞淋巴细胞性白血病；大颗粒淋巴细胞性白血病；和成人T细胞白血病。淋巴瘤包括霍奇金氏淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，包括B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤，如皮肤性T细胞淋巴瘤和NK细胞淋巴瘤。血液性癌前病况包括骨髓生成不良综合症和骨髓增殖性病症，例如原发性骨髓纤维化症、真性红细胞增多症和原发性血小板增多症。

本发明化合物已经显示出可逆性诱导淋巴细胞减少，因此可用于移除或减少淋巴细胞循环中的癌细胞水平。此类化合物也用于治疗自身免疫性疾病或调节免疫反应。

在一个实施方案中，本发明提供一种用于减少受试者体内循环的淋巴细胞数目的方法，包括给予受试者有效量的本发明的化合物。在一个优选的实施方案中，所减少的淋巴细胞数目是可逆的，即，当本发明化合物的给药停止之后，循环的淋巴细胞数目会回到正常范围。在一个实施方案中，所减少的循环的淋巴细胞数低于正常范围，该受试者处于淋巴细胞减少的状态。优选的，该受试者可以从减少的循环的淋巴细胞数而获得治疗性或预防性的益处。此类受试者包括患血液性疾病的受试者，例如血液性癌症，患有自身免疫性疾病的受试者，和需要调节免疫反应的受试者，如患有糖尿病的受试者或器官移植的接受者。在人类受试者中，该循环的淋巴细胞数，例如，B-淋巴细胞、T-淋巴细胞或者两者，可以从正常范围降低到淋巴细胞减少的范围。在某些疾病中，循环的淋巴细胞数是异常的高。在此类疾病中，该循环的淋巴细胞数可以被减少到正常范围或淋巴细胞减少的状态。

在一个实施方案中，本发明包括使用本发明的一种或多种化合物用于制造进一步预防细胞异常增殖、分化或存活的药物的用途。例如，本发明的化合物可以被用于防止肿瘤的大小增加或达到转移状态。给予的主题化合物可阻止癌症的进展或进化，或诱导癌症细胞凋亡或抑制肿瘤血管新生。此外，本发明包括使用该主题化合物用于预防癌症再复发。

本发明也包括治疗或预防细胞增殖性病症，例如增生、生长不良和癌前病变。生长不良是病理学家通过生理切片可以辨认出癌前病变的最早的形式。给予该主题化合物以预防增生、生长不良或癌前病变持续扩大或转变成癌症。癌前病变的实例可发生于皮肤、食道组织、***和子宫颈内上皮组织。

“组合疗法”包括将该主题化合物进一步组合于其它生物活性成分(例如但不限于，第二种和不同的抗肿瘤药物)和非药物疗法(例如但不限于手术或放射性疗法)。例如本发明化合物可以和其它药学上有活性的化合物组合，优选为能够增强本发明化合物功效的化合物。本发明化合物可以和其它药物疗法同时(作为单一制剂或单独的制剂)或顺序给予。一般而言，组合疗法期望在单一治疗周期中给予两种或多种药物。

在本发明的一个方面，主题化合物可以与一种或多种单独的试剂组合给予，该一种或多种分离的试剂为涉及多种疾病状态的蛋白激酶。此类激酶的实例可以包括但不限于：丝氨酸/苏氨酸特异性激酶、酪氨酸受体特异性激酶、和非酪氨酸受体特异性激酶。丝氨酸/苏氨酸激酶包括有丝***原活化的蛋白激酶(MAPK)、减数***特异性激酶(MEK)、RAF和aurora激酶。激酶受体家族的实例包括表皮生长因子受体(EGFR)(例如HER2/neu、HER3、HER4、ErbB、ErbB2、ErbB3、ErbB4、Xmrk、DER、Let23)；纤维母细胞生长因子(FGF)受体(例如FGF-R1、GFF-R2/BEK/CEK3、FGF-R3/CEK2、FGF-R4/TKF、KGF-R)；肝细胞生长/扩散因子受体(HGFR)(例如MET、RON、SEA、SEX)；胰岛素受体(例如IGFI-R)；Eph(例如CEK5、CEK8、EBK、ECK、EEK、EHK-1、EHK-2、ELK、EPH、ERK、HEK、MDK2、MDK5、SEK)；Axl(例如Mer/Nyk、Rse)；RET；和血小板衍生的生长因子受体(PDGFR)(例如PDGFα-R、PDGβ-R、CSF1-R/FMS、SCF-R/C-KIT、VEGF-R/FLT、NEK/FLK1、FLT3/FLK2/STK-1)。非酪氨酸受体激酶家族包括但不限于,BCR-ABL(例如p43^abl、ARG)；BTK(例如ITK/EMT、TEC)；CSK、FAK、FPS、JAK、SRC、BMX、FER、CDK和SYK。

本发明的另一个方面，该主题化合物可以与一种或多种单独的试剂组合给予，该一种或多种分离的试剂调节非激酶生物靶点或进程。此类靶点包括组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)、DNA甲基转移酶(DNMT)、热休克蛋白(例如HSP90)、hedgehog途径相关蛋白(例如sonichedgehog、patched、moothened)和蛋白体。

一个优选的实施方案中，主题化合物可以与抗肿瘤药(例如小分子、单克隆抗体、反义RNA和融合蛋白)组合，该抗肿瘤药抑制一种或多种生物学靶点，例如伏立诺他、特罗凯、易瑞沙、拉帕替尼、伊马替尼、舒尼替尼、达沙替尼、多吉美、索拉非尼、CNF2024、RG108、BMS387032、Affinitak、阿瓦斯汀、赫赛汀、爱必妥、AG24322、PD325901、ZD6474、PD184322、Obatodax、ABT737、GDC-0449、IPI-926、BMS833923、LDE225、PF-04449913和AEE788。此类组合能够增强治疗效果，所得到的治疗效果超过了任何一种试剂单独取得的效果，并且能够预防或者延缓产生抗药性突变的突变体。

在某些优选的实施方案中，本发明化合物与一种化学治疗试剂组合给药。化学治疗试剂包括了在癌症领域中宽范围的治疗方法。这些药物在疾病的各种不同的阶段被施用，以缩小肿瘤、摧毁外科手术之后残留的剩余的癌细胞、诱导缓解作用、维持缓解作用和/或减轻与所述的癌症及其治疗相关的症状。这类试剂的例子包括，但不局限于，烷基化试剂例如芥子气衍生物(二氯甲基二乙胺、环磷酰胺、苯丁酸氮芥、美法仑、异环磷酰胺)，乙撑亚胺(噻替派、六甲基三聚氰胺)，烷基磺酸盐(白消安)，肼类以及三嗪(六甲基嘧胺、甲基苄肼、达卡巴仁和替莫唑胺)，亚硝基脲(卡莫司汀、洛莫司汀和链脲霉素)，异环磷酰胺及其金属盐(卡铂、顺铂和奥沙利铂)；植物生物碱例如鬼臼毒素(依托泊甙和替尼泊甙)，紫杉烷类(紫杉醇和多西他赛)，长春花生物碱(长春新碱、长春碱、长春地辛以及长春瑞滨)，和喜树碱类类似物(伊立替康和拓扑替康)；抗肿瘤性抗生素例如色霉素(更生霉素和光神霉素)，蒽环类(多柔比星、柔红霉素、表柔比星、米托蒽醌、戊柔比星和伊达比星)，和其它抗生素例如丝裂霉素、放线菌素和博来霉素；抗代谢物例如叶酸拮抗剂(甲氨蝶呤、培美曲塞、雷替曲塞、氨基蝶呤)，嘧啶拮抗剂(5-氟尿嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、卡培他滨和吉西他滨)，嘌呤拮抗剂(6-巯基嘌呤和6-硫代鸟嘌呤)和腺苷脱氨酶抑制剂(克拉利宾、氟达拉滨、巯基嘌呤、氯法拉滨、硫代鸟嘌呤、奈拉滨和喷司他丁)；拓扑异构酶抑制剂例如拓扑异构酶I抑制剂(伊立替康、拓扑替康)和拓扑异构酶II抑制剂(安吖啶、依托泊苷、磷酸依托泊甙、替尼泊苷)；单克隆抗体(阿仑单抗、吉妥珠单抗奥唑米星、利妥昔单抗、曲妥珠单抗、伊莫替康、西妥昔单抗、帕尼单抗、托西莫单抗、贝伐单抗)；和其它抗肿瘤剂例如核糖核苷酸还原酶抑制剂(羟基脲)；肾上腺皮质类固醇抑制剂(米托坦)；酶类(天冬酰胺酶和培门冬酶)；抗微管试剂(雌氮芥)；和视黄醇类(视黄醛、异维A酸、维A酸(ATRA)，和来那度胺。

在某些优选的实施方案中，本发明化合物与一种化学保护试剂组合施用。化学保护试剂的作用是保护所述的机体或者使所述化学疗法的副作用最小化。此类试剂的例子包括，但不局限于，阿米福汀、美司那和右雷佐生。

在本发明中的一个方面，将所述的主题化合物与放射性治疗进行组合施用。放射物通常是从使用光子(X射线或者γ射线)放射或者粒子放射的机器中进行内部传递(在癌症位点附近植入放射性原料)或者外部传递的。当该组合疗法进一步包括放射性治疗时，该放射性治疗可以在任何适当的时机实施，只要治疗试剂以及放射性治疗的组合的共同作用能够得到有益的效果。例如，在适宜的情形下，当将放射性治疗从治疗剂的施用过程中暂时停止时，仍然能够取得有益效果，其中所述的停止可能是几天或甚至几周。

可以预期的是，本发明化合物与一种免疫治疗试剂进行组合使用。免疫治疗的一种形式是通过在远离肿瘤的位点处施用一种疫苗组合物，从而产生一种起源于宿主的活性全身性肿瘤特异性免疫应答。已经有人提出使用各种不同类型的疫苗，包括经过分离的肿瘤抗原疫苗和抗遗传性型疫苗。另外一种方法是使用来自于需要接受治疗的宿主的肿瘤细胞，或者使用这些细胞的衍生物细胞(在Schirrmacheretal.，(1995)J.CancerRes.Clin.Oncol.121：487中的评论)。在美国专利No.5484596中，HannaJr等人请求保护一种治疗可切除性癌以防止其复发或者转移的方法，包括以手术方法除去该肿瘤，使用胶原蛋白酶将该细胞分散，照射该细胞，并且以大约10⁷个细胞的至少三个连续剂量对该受试者进行接种疫苗。

可以预期的是，本发明化合物可能有利地与一种或者多种附属的治疗试剂进行联合使用。用于附属治疗的适合试剂的例子包括5-羟色胺激动剂，例如曲坦类(例如，舒马曲坦或者那拉曲坦)；腺苷A1激动剂；EP配体；N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)调节剂，例如甘氨酸拮抗剂；钠通道阻滞剂(例如，拉莫三嗪)；基质P拮抗剂(例如，神经激肽(NK₁)拮抗剂)；***类；对乙酰氨基酚或者非那西汀；5-脂氧合酶抑制剂；白三烯受体拮抗剂；缓解病情抗风湿药(DMARD)(例如，甲氨蝶呤)；加巴喷丁及其相关化合物；三环类抗抑郁药(例如，阿密曲替林)；神经元稳定化抗癫痫药物；单胺能吸收抑制剂(例如，文拉法辛)；基质金属蛋白酶抑制剂；一氧化氮合酶(NOS)抑制剂，例如诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂或者神经元型一氧化氮合酶(nNOS)抑制剂；肿瘤坏死因子α的释放抑制剂或者活化抑制剂；抗体疗法，例如单克隆抗体疗法；抗病毒试剂，例如核苷抑制剂(例如，拉米夫定)或者免疫***调节剂(例如，干扰素)；阿片样止痛剂；局部麻醉剂；刺激物，包括咖啡因；H₂-拮抗剂(例如，雷尼替丁)；质子泵抑制剂(例如，奥美拉唑)；抗酸剂(例如，氢氧化铝或者氢氧化镁)；排气剂(例如，二甲基硅油)；解充血药(例如，苯肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱、羟甲唑啉、肾上腺素、萘甲唑啉、塞洛唑啉、丙己君或者左旋脱氧麻黄碱)；止咳药(例如，可待因、氢可酮、卡腊米芬、喷托维林或者右美沙芬)；利尿剂；或者镇静剂类或非镇静剂类抗组胺剂。

此类化合物还可以用于治疗包括、涉及或相关于组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)失调的病症。已经已知或者已经暗示有许多症状至少在一定程度上受到组蛋白脱乙酰基酶活性的调节，在此类症状中已知组蛋白脱乙酰基酶活性在触发疾病的发作发面发挥了作用，或者已知此类病症的症状被组蛋白脱乙酰基酶抑制剂进行了缓解，或者已经表现出组蛋白脱乙酰基酶对所述病症的症状进行了缓解。可预期能够以本发明化合物治疗的此类型病症包括但不局限于：抗增殖性病症(例如癌症)；神经元退行性疾病包括亨廷顿舞蹈症、聚谷氨酰胺疾病、帕金森氏病、阿尔茨海默氏症、癫痫、纹状体黑质变性、进行性核上性麻痹、扭转性肌张力障碍、痉挛性斜颈和运动功能障碍、家族性震颤、抽动秽语综合症、弥漫性路易体病、进行性核上性麻痹、匹克氏病、颅内出血、原发性脊侧索硬化症、脊髓性肌肉萎缩症、肌萎缩性脊侧索硬化症、肥大性间质性多发性神经病、视网膜色素变性、遗传性视神经萎缩、遗传性痉挛性截瘫、进行性共济失调和Shy-Drager综合症；代谢性疾病包括2型糖尿病；眼部的退行性病变包括青光眼、与年龄相关的黄斑变性、新生血管性青光眼；炎性疾病和/或免疫***病症包括类风湿性关节炎(RA)、骨关节炎、青少年慢性关节炎、移植物抗宿主疾病、牛皮癣、哮喘、脊柱关节病、克罗恩氏病、炎性肠疾病溃疡性大肠炎、酒精性肝炎、糖尿病、干燥综合症、多发性硬化症、强直性脊柱炎、膜状肾小球病、椎间盘源性疼痛、***性红斑狼疮；涉及到血管增生的疾病包括癌症、牛皮癣、类风湿性关节炎；心理性障碍包括双向性疾病、精神***症、狂躁症、抑郁症和老年痴呆症；心血管疾病包括预防和治疗缺血相关或再灌注相关的血管和心肌组织损害、心力衰竭、再狭窄和动脉硬化症；纤维化疾病包括肝纤维化、囊性纤维化和血管纤维瘤；传染性疾病包括真菌性感染，例如念珠菌感染或念珠菌，细菌性感染、病毒性感染，例如单纯疱疹病毒、脊髓灰质炎病毒、犀牛病毒和柯萨奇病毒病毒、原生动物性感染，例如疟疾、利什曼原虫性感染、布氏锥虫性感染、弓形体病和球虫病，以及造血性障碍包括地中海贫血症、贫血症和镰刀状细胞贫血症。

本发明化合物同样可以被用于治疗涉及、关于或相关于PI3失调的病症。PI3激酶活性已经涉及或显示涉及到各种不同的病症。在某些情形中，PI3激酶活性参与了触发疾病的发作，而在其他的情形中，已经知晓或者已经表现出所述的症状可以被PI3激酶活性抑制剂缓解。可以预期能够以本发明化合物治疗的此类型病症包括但不局限于癌症，包括白血病、皮肤癌、膀胱癌、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌、***癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、肾癌、胃癌和脑癌；再狭窄、动脉粥样硬化、骨障碍、关节炎、糖尿病性视网膜病变、牛皮癣、良性***肥大、动脉粥样硬化、炎症、血管增生、免疫功能紊乱、胰腺炎和肾脏疾病。

在一种实施方案中，本发明化合物可用于诱导或者抑制细胞凋亡，细胞凋亡是一种对于正常发展和自我平衡有关键影响的生理学的细胞死亡过程。细胞凋亡途径的改变构成了各种不同的人类疾病的发病机理。本发明化合物，作为细胞凋亡的调节剂，将可以被有效的用于治疗许多存在异常的细胞凋亡的各种不同的人类疾病，包括癌症(尤其是但不局限于，滤泡性淋巴瘤、有p53突变的癌症、乳腺、***和卵巢的激素依赖性肿瘤，以及癌前病变，例如家族性腺瘤性息肉病)，病毒性感染(包括但不局限于，疱疹病毒、痘病毒、EB病毒、辛德毕斯病毒和腺病毒)，自身免疫性疾病(包括但不局限于，***性红斑狼疮、免疫介导性肾小球肾炎、风湿性关节炎、牛皮癣、炎性肠道疾病、和自身免疫性糖尿病)、神经元退行性障碍(包括但不局限于，阿尔茨海默氏症、与获得性免疫缺乏综合症相关的老年痴呆症、帕金森氏病、肌萎缩性脊侧索硬化症、视网膜色素变性、脊髓肌肉萎缩症和小脑退行性病变)、获得性免疫缺乏综合症、骨髓增生异常综合症、再生障碍性贫血、与缺血性脑损伤相关的心肌梗塞、脑卒中和再灌注损伤、心律失常、动脉粥样硬化、毒性诱导的或者酒精诱导的肝脏疾病、血液性疾病(包括但不局限于，慢性贫血和再生障碍性贫血)，肌肉骨骼***的退行性病变(包括但不局限于，骨质疏松症和关节炎)、阿司匹林敏感型鼻窦炎，囊肿性纤维化，多发性硬化症，肾脏疾病，和癌症疼痛。

在一个方面，本发明提供了本发明化合物用于治疗和/或预防免疫应答或者免疫介导的应答以及疾病的用途，例如用于对排斥反应进行预防或者治疗，其中所述排斥反应是在移植人造器官的移植材料、细胞、器官或者组织的移植之后产生的，所述的移植用以代替该组织的全部功能或者部分功能，该组织是例如心脏、肾脏、肝脏、骨髓、皮肤、角膜、血管、肺、胰腺、肠、四肢、肌肉、神经组织、十二指肠、小肠、胰腺的胰岛细胞，所述的移植包括异体移植物等；用于治疗或者预防移植物抗宿主疾病、自身免疫性疾病，例如风湿性关节炎、***性红斑狼疮、甲状腺炎、桥本氏甲状腺炎、多发性硬化症、重症肌无力、I型糖尿病葡萄膜炎、青少年发作型或者近期发作型糖尿病、葡萄膜炎、甲状腺机能亢进、牛皮癣、过敏性皮炎、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、脉管炎、自身抗体介导的疾病、再生障碍性贫血症、伊文氏症候群、自身免疫性溶血性贫血等；并且进一步用于治疗能够引起异常的免疫应答和/或活化作用的感染性疾病，包括例如B型肝炎和C型肝炎感染、人类免疫缺陷性病毒感染、金黄色葡萄球菌感染、病毒性脑炎、败血症、寄生虫性疾病，其中所述的损伤是由炎性应答(例如麻风病)诱导的；并且用于预防或者治疗循环性疾病，例如动脉硬化、动脉粥样硬化、脉管炎，结节性多动脉炎和心肌炎。此外，本发明可用于预防/抑制与基因疗法相关的免疫应答，所述的基因疗法是例如将外源基因导入自身同源性细胞中并且表现该编码产物。因此在一种实施方案中，本发明涉及一种需要接受治疗的受试者治疗免疫应答性疾病或者病症或者由免疫介导的应答或者病症的方法，包括为所述的受试者施用治疗有效量的本发明化合物。

在一个方面，本发明提供了使用本发明化合物在治疗各种不同的神经元退行性疾病中的用途，非穷举性的列表包括：I.在不存在其他突变的神经性表征的情况下，以进行性痴呆为特征的病症，例如阿尔茨海默氏症、阿尔茨海默氏症型的老年性痴呆；匹克氏病(脑叶萎缩)；II.结合进行性痴呆与其他突出的神经性异常的综合症，例如A)主要在成人中出现的综合症(例如亨廷顿舞蹈症、痴呆与共济失调相结合的多发性***性萎缩和/或帕金森氏病、进行性核上性麻痹(Steel-Richardson-Olszewski)、弥散性路易小体病、以及皮质基底节变性；和B)主要在儿童或者青少年中出现的综合症(例如，苍白球黑质红核色素变性和进行性家族性肌阵挛性癫痫)；III.姿势以及运动逐渐形成的异常的综合症，例如震颤麻痹(帕金森氏病)、纹状体黑质变性、进行性核上性麻痹、扭转性肌张力障碍(扭转性痉挛、变形性肌张力不全)、痉挛性斜颈和其它运动功能障碍、家族性震颤、和抽动秽语综合症；IV.进行性共济失调综合症，例如小脑退行性病变(例如小脑皮质退行性病变和橄榄桥小脑萎缩(OPCA))；和脊髓小脑退行性病变(Friedreich氏共济失调及其相关疾病)；V.中枢自主神经***衰竭综合症(特发性直立性低血压)；VI.肌肉弱化和无感官变化的消瘦综合症(运动神经元疾病，例如肌萎缩性脊侧索硬化症、脊髓性肌肉萎缩症(例如婴儿脊髓性肌肉萎缩(韦德尼格-霍夫曼综合症)、青少年脊髓肌肉萎缩症(WohlfartKugelbergWelander)和其他类型的家族性脊髓肌肉萎缩症)、原发性脊侧索硬化症、遗传性痉挛性截瘫；VII.结合肌肉弱化和无感官变化的消瘦综合症(进行性神经***肌肉萎缩症；慢性家族性多发性神经病)例如腓骨肌肉萎缩症(Charcot-Marie-Tooth)、肥大性间质性多发性神经病(Dejerine-Sottas)，和各种混杂形式的慢性进行性神经病；VIII.进行性视觉缺损综合症，例如视网膜色素性病变(视网膜色素变性)、遗传性视神经萎缩(Leber氏病)。再者，本发明化合物可用于染色质的重新模建中。

本发明的药物组合物包括如上所述的本发明化合物的药学可接受的盐。本发明也包括本发明化合物的溶剂化物和包括此种溶剂化物的药物组合物，例如水合物、甲醇化物或者乙醇化物。术语“溶剂化物”指的是的是固体形式的化合物，优选的是晶体形式，其中所述的化合物的形式包括所述在晶格中存在的溶剂分子。包括一种给定溶剂的化合物的溶剂化物，一般是通过所述化合物在该溶剂中结晶而制备得到。溶剂化物可以包括许多溶剂，包括水、甲醇和乙醇。术语“水合物”指的是溶剂是水的溶剂化物，包括但不局限于，半水合物、一水合物，二水合物、三水合物等。本发明进一步涵盖了包括本发明化合物的任意固体或者液体形式的药物组合物，包括晶体和晶体溶剂化物的形式。例如，所述的化合物可以是晶体形式、无定形形式和是具有任意的颗粒尺寸。所述的颗粒可以是经过微粉化的，或者可以是聚集的，微粒、粉末、油、油状悬浮液或者任何其他类型的固体或者液体物理形式。

本发明化合物和其衍生物、片段、类似物、同源物、药学上可接受的盐或者溶剂化物，可以与药学上可接受的载体或者赋形剂一起纳入到适合进行施用的药物组合物中。此种组合物一般包括：治疗有效量的上述化合物中的任何一种，和一种药学上可接受性载体。优选的，当用于治疗癌症时，该有效剂量是能够有效的选择性诱导适当的新生细胞发生末端分化的剂量，并且该剂量低于能够在受试者体内引发毒性的剂量。

本发明化合物可以以任何适当的方式进行施用，包括但不局限于：肠胃外、静脉内、肌肉内、皮下、植入、口服、舌下、口腔、鼻腔、肺部、透皮、局部、***、直肠和透黏膜施用等。局部施用也可以涉及使用透皮给药，例如透皮贴剂或离子导入疗法装置。药物制剂包括含有本发明化合物作为活性成分的固体制剂、半固体制剂或者液体制剂(片剂、丸剂、药片、胶囊剂、栓剂、乳膏、软膏、气雾剂、粉末、液体、乳液、悬浮液、糖浆、注射剂等)，以适合选择的施用模式。在一种实施方案中，该药物组合物是通过口服施用的，因此将其配制成适合口服施用的形式，即固体制剂或者液体制剂。适当的固体口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、丸粒、袋装剂和泡腾片、粉末等。适当的液体口服制剂包括；溶液、悬浮液、分散液、乳液、油等。在本发明的一种实施方案中，该组合物被配制成为胶囊剂。根据这种实施方案，本发明的组合物包括该活性化合物和惰性载体或者稀释剂和硬的明胶胶囊。

在本发明的制剂中可以使用任何常用的作为载体或者稀释剂的惰性赋形剂，所述的惰性赋形剂是例如胶体、淀粉、糖，纤维素材料、丙烯酸盐或其混合物。一种优选的稀释剂是微晶纤维素。所述的组合物中可以进一步包括一种崩解剂(例如，交联羧甲基纤维素钠)以及一种润滑剂(例如硬脂酸镁)，并且可以额外包括一种或者多种选自下述物质中的添加剂：粘合剂、缓冲剂、蛋白酶抑制剂、表面活性剂、增溶剂、增塑剂、乳化剂、稳定剂、增稠剂、甜味剂、成膜剂或者是上述物质的任意组合。再者，本发明的组合物可以是控释制剂的形式或者立即释放的制剂形式。

对于液体制剂而言，药学上可接受的载体可以是水溶液或者非水溶液、悬浮液、乳液或者油。非水溶剂的例子是丙二醇、聚乙二醇和可注射的有机酯例如油酸乙酯。水性载体包括水、乙醇/水溶液、乳液或者悬浮液，包括生理盐水以及缓冲介质。油的例子是那些来源于石油、动物、植物或人造来源的油，例如，花生油、大豆油、矿物油、橄榄油、向日葵油和鱼肝油。溶液或者悬浮液也可以包括下述的组分：无菌稀释剂例如注射用水、生理盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或者其他的合成溶剂；抗细菌试剂例如苯甲醇或者对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或者亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸(EDTA)；缓冲剂例如醋酸盐、柠檬酸盐或者磷酸盐，以及用于调节张力的试剂，例如氯化钠或者葡萄糖。可以使用酸或者碱对所述的pH值进行调整，例如盐酸或者氢氧化钠。

除此之外，所述组合物中可以进一步包括粘合剂(例如，***树胶、玉米淀粉、凝胶、卡波姆、乙基纤维素、瓜尔胶、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷)；崩解剂(例如，玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸、二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、瓜尔胶、羟基乙酸淀钠、羧甲基淀粉钠)；具有各种不同的pH和离子强度的缓冲剂(例如，Tris-HCl、醋酸盐、磷酸盐)；能够防止被吸收至表面的添加剂例如白蛋白或者明胶；洗涤剂(例如，吐温20、吐温80、谱卢兰尼克F68、胆酸盐)；蛋白酶抑制剂；表面活性剂(例如，十二烷基硫酸钠)、渗透促进剂、增溶剂(例如，甘油、聚乙烯甘油、聚乙二醇)、助流剂(例如胶体二氧化硅)；抗氧化剂(例如，抗坏血酸、偏亚硫酸氢钠、丁基化羟基苯甲醚)、稳定剂(例如，羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素)；增稠剂(例如，卡波姆、胶体二氧化硅、乙基纤维素、瓜尔胶)；甜味剂(例如，蔗糖、阿斯巴甜、柠檬酸)；风味剂(例如，薄荷油、水杨酸甲酯或者橙味香精)；防腐剂(例如，硫柳汞、苯甲醇、对羟基苯甲酸酯)；润滑剂(例如硬脂酸、硬脂酸镁、聚乙二醇、十二烷基硫酸钠)、助流剂(例如胶体二氧化硅)；增塑剂(例如酞酸二乙酯、柠檬酸三乙酯)；乳化剂(例如卡波姆、羟丙基纤维素、十二烷基硫酸钠)、聚合物涂层(例如泊洛沙姆或者泊洛沙胺)；涂布和成膜剂(例如乙基纤维素、丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯)；和/或佐剂。

在一种实施方案中，该活性化合物与载体一同进行制备，其中所述的载体能够避免所述的化合物从所述的机体中迅速的消除，例如一种控释制剂，包括植入和微胶囊化的递送***。可以使用生物可降解性聚合物，例如乙烯醋酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙二醇酸、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此种制剂的方法对于本领域技术人员而言将是显而易见的。所述的原料同样可以从Alza公司和Nova(诺华)制药公司处购买获得。脂质体悬浮液(包括以被感染细胞作为靶点的脂质体，其中被感染细胞带有针对病毒抗原的单克隆抗体)也可以被用作为药物可接受的载体。这样的脂质体悬浮液可以依照本领域技术人员已知的方法来制备，例如，按照美国专利No.4,522,811中所描述的方法。

为了便于进行施用并且保持剂量的均一，以剂量单元的形式配制口服组合物是特别有利的。本发明中所使用的剂量单元形式指的是适合于单次供受治疗的受试者使用的在物理上不连续的单元；每个单元中含有经过计算能够产生所期望的治疗效果的预定量的有效化合物和所需的药学上的载体。本发明的剂量单元形式的具体规格由下列的因素决定并且直接依赖于下列因素：活性化合物的独特性质和所要达到的所述特定的治疗效果，以及将这样一种活性化合物用于组成对所述个体的治疗本身所固有的限制。

用于口服使用的本发明的制剂可以包含一种或多种渗透增强剂，包括长链脂肪酸或其盐，例如癸酸和癸酸钠。

在一个优选的实施方案中，该化合物可以配制为水溶液供静脉内注射。在一个实施方案中，可以适当采用溶剂。特别优选的溶剂包括环糊精和修饰后的环糊精，如磺酸取代的β-环糊精衍生物或其盐，包括磺丁基衍生的β-环糊精，如磺丁基醚-7-β-环糊精，其由CyDex公司以商品名出售。

该药物组合物可以与施用说明书一起被容纳在容器、包裹，或者分配器中。

每日施用可以连续性的重复进行几天至几年的时间。口服治疗可以持续一周至受试者的一生。优选的是给药连续进行五天，然后对该受试者进行评估以决定是否需要接受进一步的给药。该给药可以是连续性的或者是间歇性的，例如连续治疗数天，接着进行停歇期。本发明化合物可以在治疗的第一天时通过静脉内的方式给药，在第二天和之后的连续各天通过口服给药。

含有活性组分的药物组合物的制备是所述领域中是为人已知的。例如通过混合、造粒或者形成片剂的过程。该活性治疗成分通常与药学可接受的和与该活性成分具有相容性的赋形剂进行混合。为了通过口服施用，将该活性试剂与惯用于实现该目的的添加剂进行混合，该添加剂例如载体、稳定剂或者惰性稀释剂，并且利用惯常的方法将其转化成适合进行施用的形式，例如片剂、包衣片剂、硬明胶胶囊或者软明胶胶囊、水溶液、醇溶液或者油性溶液以及在上文中详细描述的类似形式。

给受试者施用的化合物的剂量是低于能够在该受试者体内引发毒性的剂量。在某些实施方案中，给受试者施用的化合物的剂量低于能够使得在该受试者血浆中的化合物的浓度等于或者高于化合物的毒性水平的剂量。优选的，该化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约10nM。在一种实施方案中，化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约25nM。在一种实施方案中，化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约50nM。在一种实施方案中，化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约100nM。在一种实施方案中，化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约500nM。在一种实施方案中，化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约1000nM。在一种实施方案中，化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约2500nM。在一种实施方案中，化合物在受试者血浆中的浓度维持在大约5000nM。在本发明的实践中应当向受试者施用化合物的最佳剂量，取决于所使用的特定化合物和需要治疗的癌症的类型。

定义

下文中列出的是被用于描述本发明的各种不同术语所具有的定义。除非在具体的情形中进行另外的限定，这些定义将应用于在整个说明书以及权利要求中所使用的这些术语中，无论所述的术语是单独使用还是作为更大的词组中的一部分来进行使用的。

术语“酰基”指的是被氢、烷基、部分饱和的或者完全饱和的环烷基、部分饱和的或者完全饱和的杂环、芳基以及杂芳基取代的羰基。例如，酰基包括以下基团，例如(C₁-C₆)烷酰基(例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、己酰基、叔丁基乙酰基等)；(C₃-C₆)环烷基羰基(例如环丙基羰基、环丁基羰基、环戊基羰基、环己基羰基等)；杂环羰基(例如吡咯烷基羰基、吡咯烷-2-酮-5-羰基、哌啶基羰基、哌嗪基羰基、四氢呋喃基羰基等)；芳酰基(例如苯甲酰基)和杂芳酰基(例如噻吩基-2-羰基、噻吩基-3-羰基、呋喃基-2-羰基、呋喃基-3-羰基、1H-吡咯基-2-羰基、1H-吡咯基-3-羰基、苯并[b]噻吩基-2-羰基等)。此外该酰基基团中的烷基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基部分，可以是在上述基团的各自定义中所描述的任何一种基团。当被记载为“任选被取代的”时，该酰基可以是未被取代的或者是任选的被一个或者多个取代基(一般为1个至3个取代基)进行取代的，其中所述的取代基各自独立的选自下述对于“被取代的”的定义中所列出的取代基基团，或者所述的酰基基团中的烷基、环烷基、杂环、芳基和杂芳基部分可以经上文中分别在取代基的优选列表以及更优选列表中记载的取代基所取代。

术语“烷基”包含具有1个至约20个碳原子的直链或支链基团，优选为具有1个至约12个碳原子的直链或支链基团。更加优选的烷基基团是具有1个至约10个碳原子的“低级烷基”基团。最优选的是具有1个至约8个碳原子的低级烷基基团。这些基团的例子包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。

术语“烯基”包含了具有至少一个碳-碳双键的2个至约20个碳原子的直链或支链基团，优选的是具有2个至约12个碳原子的直链或支链基团。更加优选的烯基基团是具有2个至约10个碳原子，又更加优选的具有约2个至约8个碳原子的“低级烯基”自由基。烯基基团的实例包括乙烯基、烯丙基、丙烯基、丁烯基和4-甲基丁烯基。术语“烯基”和“低级烯基”包含具有“顺式”和“反式”方向，或者“E”和“Z”方向的基团。

术语“炔基”包含了具有至少一个碳-碳三键的2个至约20个碳原子的直链或支链基团，或者优选的是具有2个至约12个碳原子的直链或支链基团。更加优选的炔基基团是具有2个至约10碳原子，又更加优选的具有约2个至约8个碳原子的“低级炔基”基团。炔基基团的实例包括炔丙基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔、2-丁炔基和1-戊炔基。

单独使用或者组合使用的术语“芳基”指的是的含有1、2或3个环的碳环芳香族体系，其中所述的环可以以一种未定的方式连接在一起，或者可以是稠和的。术语“芳基”包含芳香族基团，例如苯基、萘基、四氢萘基、茚满基和联苯基。

术语“杂环基”、“杂环”、“杂环”或“杂环”包含了含有杂原子的饱和的、部分不饱和的和不饱和的环形基团，其也可以相应的被称为“杂环烷基”、“杂环烯基”和“杂芳基”，其中所述的杂原子可以选自氮、硫和氧。饱和的杂环基基团的实例包括含有1至4个氮原子的饱和的含有3至6个成员的杂单环基团(例如吡咯烷基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基等)；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的饱和的含有3至6个成员的杂单环基团(例如吗啉基等)；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的饱和的含有3至6个成员的杂单环基团(例如噻唑基等)。部分不饱和的杂环基基团的实例包括二氢噻吩、二氢吡喃、二氢呋喃和二氢噻唑。杂环基基团可以包括一个五价的氮，例如在四唑鎓以及吡啶鎓基团中。术语“杂环”也包含与芳基或者环烷基基团发生稠和的杂环基基团。此种稠和的双环基团的实例包括苯并呋喃、苯并噻吩等。

术语“杂芳基”包含不饱和的杂环基团。杂芳基基团的实例包括不饱和的含有3至6个成员、优选为5或6元的，含有1至4个氮原子杂单环基团，例如：吡咯基、吡咯啉基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、***基(例如4H-1,2,4-***基、1H-1,2,3-***基、2H-1,2,3-***基等)；四唑基(例如1H-四唑基、2H-四唑基等)等；不饱和的含有1至5个氮原子稠和的杂环基基团，例如吲哚基、异吲哚基、吲哚啉基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、吲唑基、苯并***基、四唑基哒嗪基(例如四唑基[1,5-b]哒嗪基等)等；不饱和的含有3至6个，优选的含5或6元的，含有1个氧原子的杂单环基团，例如吡喃基、呋喃基等；含有1个硫原子的不饱和的含有3至6元的杂单环基团，例如噻吩基等；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和的含有3至6元，优选的是含5至6元的杂单环基团，例如噁唑基、异噁唑基、噁二唑基(例如1,2,4-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基等)等；含有1至2个氧原子和1至3个氮原子的不饱和的稠和的杂环基基团(例如苯并噁唑基、苯并噁二唑基等)；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和的含有3至6元，优选的是含5或6元的杂环基基团，例如噻唑基、噻二唑基(例如1,2,4-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基等)等；含有1至2个硫原子和1至3个氮原子的不饱和的稠和的杂环基基团(例如苯并噻唑基、苯并噻二唑基等)等。

术语“杂环烷基”包含具有杂环取代的烷基基团。更加优选的杂环烷基基团是杂环基团中具有1个至6个碳原子的“低级杂环烷基”基团。

术语“被取代的”指的是使用指定的取代基基团对一个给定结构中的一个或者多个氢原子进行替代，该取代基包括但不局限于：卤素、烷基、烯基、炔基、芳基、杂环、硫基、烷基硫基、芳基硫基、烷基硫基烷基、芳基硫基芳基、烷基磺酰基、烷基磺酰基烷基、芳基磺酰基烷基、烷氧基、芳氧基、芳基烷氧基、氨基羰基、烷基氨基羰基、芳基氨基羰基、烷氧基羰基、芳氧基羰基、卤烷基、氨基、三氟甲基、氰基、硝基、烷基氨基、芳基氨基、烷基氨基烷基、芳基氨基烷基、氨基烷基氨基、羟基、烷氧基烷基、羧基烷基、烷氧基羰基烷基、氨基羰基烷基、酰基、芳基烷氧基羰基、羧酸、磺酸、磺酰基、膦酸、芳基、杂芳基、杂环和脂肪族。可以理解的是，该取代基可以进一步被取代。

出于简便的目的，在适宜的结构情况中被定义的以及所指的化学结构可以是单价的化学结构(例如烷基、芳基等)或者是多价的化学结构，其中所述的适宜的结构情况是本领域技术人员所熟悉的。例如，“烷基”结构可以指单价基团(例如CH3-CH2-)，或者在其他的情形中，“烷基”可以是一个二价的连接结构，在这种情况下本领域技术人员将能够理解所述的烷基是一种二价的基团(例如-CH2-CH2-)，其等价于术语“烯基”。类似的，某些需要二价结构的情况，记载为“烷氧基”、“烷基氨基”、“芳氧基”、“烷基硫基”、“芳基”、“杂芳基”、“杂环”、“烷基”、“烯基”、“炔基”、“脂肪族基”或者“环烷基”，本领域技术人员将能够理解术语“烷氧基”、“烷基氨基”、“芳氧基”、“烷基硫基”、“芳基”、“杂芳基”、“杂环”、“烷基”、“烯基”、“炔基”、“脂肪族基”或者“环烷基”，指的是相应的二价结构。

此处使用的术语“卤素”或“卤基”指的是选自氟、氯、溴和碘的原子。

此处使用的术语“异常增殖”指的是异常的细胞生长。

术语“附属的治疗”包含使用能够减轻或者避免相关于本发明组合疗法的副作用的试剂治疗受试者的方法，包括但不局限于例如那些能够减轻抗癌症药物的毒性作用的试剂，例如骨再吸收抑制剂、心脏保护试剂；预防或者减轻与化学治疗、放射性治疗或者手术相关的恶心和呕吐的发生率的试剂；或者减轻与骨髓抑制性抗癌症药物的施用相关的感染发生率的试剂。

在此使用的术语“血管新生”指的是血管的形成。具体而言，血管新生是一种多步骤的过程，其中上皮细胞在病灶降解和经由其本身的基底膜而侵入，经由间质基质向血管生成刺激因子源迁移，在距离迁移末梢的最接近段进行增殖，编组进血管内，并且再度附着于新合成的基底膜(参见Folkmanetal.,Adv.CancerRes.,Vol.43,pp175-203(1985))。抗血管新生试剂会干扰这个过程。能够对这些步骤中的几个步骤产生干扰的试剂包括血小板反应素-1、血管抑素、内皮抑素、干扰素α和例如基质金属蛋白酶(MMP)抑制剂的化合物，其中所述的酶的作用是能够为新形成的血管清除并且创建途径；能够对血管细胞用于在母本血管和肿瘤之间建立桥接的分子进行干扰的化合物，例如α.v.β3抑制剂；能够防止所述的细胞生长直至形成新血管的试剂，例如特异性的环氧化物酶-2(COX-2)抑制剂；以及能够同时对这些靶向中的几种同时产生干扰的蛋白质化合物。

此处使用的术语“细胞凋亡”指的是由具有正常机能的人类细胞和动物细胞的细胞核发出信号的程序细胞的死亡，所述的信号的发出是由细胞的年龄或者细胞的健康以及病症状况所指定的。“细胞凋亡诱导试剂”能够触发该程序化细胞死亡的过程。

此处使用的术语“癌症”表示的是一种类型的疾病或者病症，其特征在于细胞分化的失控和这些细胞有能力侵袭其他组织，其侵袭是通过侵袭作用直接在邻近的组织内部进行生长，或者通过转移作用植入在远端的位点处。

在此使用的术语“化合物”和“本发明的化合物”，指的是式I化合物以及其在药学上可接受的盐。本发明的化合物可以通过不同形式获得，包括结晶形式和无定型形式。这些化合物也可以为溶剂化物，例如水合物或有机溶剂的溶剂化物，优选的是药学上可接受的的溶剂的溶剂化物。这些化合物也可以是多晶型或多态形式。本发明化合物进一步包括式I化合物的药学上可接受的的前药和酯类。

“装置”指的是被设计用来完成一种特定的功能的任意的器具，该器具通常是机械性的或者是电的。

此处使用的术语“生长不良”指的是异常的细胞生长，通常情况下指的是病理学家从活体组织切片中能够识别出来的最早形式的癌前损伤。

此处使用的术语“主题化合物的有效量”，涉及主题的治疗方法，指的是所述的主题化合物所具有的这样的剂量：当将其作为期望的剂量方案中的一部分进行递送时，其能够为例如所述的细胞增殖速率和/或细胞的分化状态和/或细胞的存活速率带来改变，使其达到临床可接受性的标准。这种剂量可能进一步的在一定程度上对所述的瘤形成病症中的一种或者多种症状进行缓解，包括但不局限于：1)减少癌细胞的数量；2)减小肿瘤的大小；3)抑制(即减慢到某种程度，优选为停止)癌细胞向外周器官中的渗透；4)抑制(即减慢到某种程度，优选为停止)肿瘤的转移；5)在一定程度上抑制肿瘤的生长；6)在一定程度上缓解或者减轻与该病症相关的一种或者多种症状；和/或7)缓解或者减轻与抗癌症试剂的施用相关的副作用。

在此使用的术语“过度增生”指的是过度的细胞分化或者生长。

术语“免疫治疗试剂”指的是通过接种作用将例如另外一个人或者动物的免疫供体的免疫性转移至宿主所使用的试剂。术语包含下述物质的使用：由另外一个个体或者动物生成的抗体的血清或者γ球蛋白；非特异性全身性刺激；佐剂；主动特异性免疫治疗；和被动的免疫治疗。被动的免疫治疗指的是通过对宿主接种致敏淋巴细胞、转移因子、免疫RNA或者存在于血清或者γ球蛋白中的抗体治疗疾病。

在瘤形成、肿瘤生长或者肿瘤细胞生长的上下文使用的术语“抑制”，可以通过延迟出现原发性肿瘤和次生性肿瘤，减慢发生原发性肿瘤或者次生性肿瘤，降低原发性肿瘤或者次生性肿瘤的发病率，减慢或者减轻疾病的次生效应的严重性，停止肿瘤生长和肿瘤的衰退等来描述。最极端的情况下，本发明的完全抑制指的是预防或者化学性保护。

在此使用的术语“转移”指的是癌细胞从原始肿瘤位点处经由血液和淋巴导管发生迁移，从而在其他的组织中形成癌症。转移也被用于描述次生性癌症在一个远端位点处的生长。

在此使用的术语“瘤”指的是由过度的细胞分化所产生的组织异常肿块。瘤可以是良性的(非癌性的)或者是恶性的(癌性的)，并且还可以被称为肿瘤。术语“瘤形成”是导致肿瘤形成的病理学过程。

此处使用的术语“癌前”指的是不是恶性的，但是如果不治疗可能会成为恶性的状况。

术语“增殖”指的是细胞经历有丝***。

术语“与PI3激酶相关的疾病或者病症”指的是以不恰当的磷酸肌醇-3-激酶活性或者是以磷酸肌醇-3-激酶的过度活化为特征的疾病或者病症。不恰当的活性指的是：(i)在正常情况下不表达PI3激酶的细胞中表达了PI3激酶；(ii)PI3激酶的表达增加，导致了不期望的细胞增殖、分化和/或生长；或者(iii)PI3激酶的表达减少，导致了不期望的细胞增殖、分化和/或生长方面的减少。PI3激酶的过度活化指的是编码特定的PI3激酶的基因扩增，或者一定程度的PI3激酶活性的产生，可能与一种细胞增殖、分化和/或生长病症相关(即，当PI3激酶的水平增加时，细胞性病症的一种或者多种症状的严重程度增加)。

术语“放射性治疗试剂”指的是使用电磁或者粒子放射物治疗瘤形成。

此处使用的术语“复发”指的是癌症在经过一段时间的康复之后的回复。这可能由于没有完全除去来自于初始癌症中的细胞，并且作为转移的结果可能在局部(与初始癌症相同的位点处)、区域内(在初始癌症的附近，可能存在于***或者组织中)、和/或远端发生。

术语“治疗”指的是任何的过程、作用、应用、治疗等，其中目的在于直接或者间接地改善哺乳动物的病症而对哺乳动物包括人类施以医学辅助。

术语“疫苗”包括能够诱导受试者的免疫***产生针对肿瘤的免疫应答的试剂，其中是通过对表达肿瘤相关性抗原(Tea)的细胞进行攻击来实现诱导的。

此处使用的术语“药学可接受的盐”指的是存在于合理的医学判断的范围之内，适合与人类组织以及低等动物的组织进行接触使用而不会产生不适当的毒性、刺激性、过敏性应答以及类似现象，并且具有等值的利益/风险比的盐类。药学可接受的盐是本领域所熟知的。例如S.M.Berge等人(1977年)在J.PharmaceuticalSciences，66：1-19发表的文章中对药学可接受的盐进行了详细的描述。这些盐可以在本发明化合物的最终分离和纯化的过程中在原位制备，或者通过将游离碱单独与一种适当的有机酸或者无机酸发生反应来制备所述的盐。药学可接受的无毒性加成盐的例子包括但不局限于，由氨基基团与无机酸形成的盐，例如盐酸、氢溴酸、磷酸、硫酸和高氯酸，或者与有机酸形成的盐，有机酸例如醋酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、乳糖酸或者丙二酸，或者通过本领域中的其他方法，例如离子交换法。其他的药学可接受的盐包括，但不局限于：己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙烷磺酸盐、甲酸盐、延胡索酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙烷磺酸盐、乳糖酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂醇硫酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲烷磺酸盐、2-萘基磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、磷酸盐、苦味酸盐、三甲基乙酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、十一酸盐、戊酸盐等。代表性的碱金属盐或者碱土金属盐包括钠盐、锂盐、钾盐、钙盐、镁盐等。进一步的药学上可接受的盐，当适当时，包括无毒铵盐、季铵盐，以及使用相对离子形成的胺阳离子盐，例如卤化物、氢氧化物、羧酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐，具有1至6个碳原子的烷基磺酸盐和芳基磺酸盐。有些盐例如钠盐、钾盐和胆碱盐和酸性盐例如硫酸盐和甲烷磺酸盐发现可以改善式I化合物在药学上可接受的的溶剂中的溶解度。在一个实施方案中，化合物1的药学上可接受的的盐为氯盐。化合物1的优选盐包括钠盐和钾盐。其他优选的盐包括硫酸盐和甲烷磺酸盐。

此处使用的术语“药学上可接受的酯”指的是在体内进行水解的酯，并且包括那些在人体内容易被分解以保留该母本化合物或其盐的酯。适合的酯基包括例如，那些由药学上可接受的脂肪族羧酸衍生物，特别是烷酸、烯酸、环烷酸和烷二酸，其中每个烷基或者烯基结构优选为不超过6个碳原子。具体的酯的实例包括但不局限于甲酸酯、醋酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯和乙基琥珀酸酯。

此处使用的术语“药学上可接受的前体药物”指的是在合理的医学判断的范围之内，适合与人类和低等动物的组织进行接触使用而不会产生不适当的毒性、刺激性、过敏性应答等，并且具有合理的利益/风险比值的本发明化合物的此类前体药物，并且在可能的情形下，所述的前体药物为本发明化合物的两性离子形式。在此使用的“前体药物”指的是在体内通过代谢方式(例如通过水解作用)可以转化为本发明化合物。前体药物所具有的各种不同的形式是本技术领域已知的，例如已讨论于：Bundgaard,(ed.),DesignofProdrugs,Elsevier(1985)；Widder,etal.(ed.),MethodsinEnzymology,Vol.4,AcademicPress(1985)；Krogsgaard-Larsen,etal.,(ed)."DesignandApplicationofProdrugs,TextbookofDrugDesignandDevelopment,Chapter5,113-191(1991)；Bundgaard,etal.,JournalofDrugDeliverReviews,8:1-38(1992)；Bundgaard,J.ofPharmaceuticalSciences,77:285etseq.(1988)；HiguchiandStella(eds.)ProdrugsasNovelDrugDeliverySystems,AmericanChemicalSociety(1975)；andBernardTesta&JoachimMayer,“HydrolysisInDrugAndProdrugMetabolism:Chemistry,BiochemistryAndEnzymology,JohnWileyandSons,Ltd.(2002)。

在此使用的“药学上可接受的载体”意在包括所有的相容于药学上给予的任意的以及全部的溶剂、分散介质、涂层、抗细菌试剂和抗真菌试剂、等渗和吸收延迟试剂等，例如无菌的不含致热原的水。适合的载体描述在最新版本的Remington'sPharmaceuticalSciences中，其是所属领域的标准参考手册，该手册在本发明中被引入作为参考。这样的载体或者稀释剂的优选的例子包括但不局限于：水、生理盐水、林格氏溶液、葡萄糖溶液和5％的人类血清白蛋白。也可以使用脂质体和非水性溶剂，例如不挥发性油。这样的介质以及试剂在药学上活性物质中的用途是本领域所熟知的。除了与所述的活性化合物不相容的介质或者试剂的范围之外，任何常规的介质或者试剂在组合物中的用途都是可以预期的。也可以将附属的活性化合物导入到所述的组合物之中。

在此使用的术语“癌前”指的是非恶性的，但如果不对其进行治疗而有可能变成恶性的状况。

在此使用的术语“宿主”指的是任意动物。优选的是哺乳动物。更加优选的是人类。宿主同样指的是例如，狗、猫、马、母牛、猪、豚鼠、鱼、鸟等。

本发明的化合物也可以通过添加适当的官能团的方式进行修饰，从而增强化合物的选择性生物学性质。这样的修饰作用是本领域已知的并且可以包括例如能够增加向一个给定的生物学***(例如血液、淋巴***、中枢神经***)的生物学渗透性、增加口服的可利用率、增加溶解性而能进行注射施用、改变代谢和改变***速率。

该合成的化合物可以从反应混合物分离，并且进一步通过例如柱层析、高效液相色谱或者重结晶等方法对其进行进一步的纯化。正如熟练的本领域技术人员所能够认知的，具有所述结构式的化合物的合成对于本领域普通技术人员而言是显而易见的。除此之外，可以以一种交替或者顺序的次序实施各种合成步骤以获得所期望的化合物。用于合成在本发明中所描述的化合物的合成化学转化以及保护基团的方法(保护和去保护)是本领域已知的并且包括例如，描述于下述文章中：R.Larock,ComprehensiveOrganic Transformations,VCHPublishers(1989)；T.W.GreeneandP.G.M.Wuts,Protective GroupsinOrganicSynthesis,2d.Ed.,JohnWileyandSons(1991)；L.FieserandM.Fieser,FieserandFieser'sReagentsforOrganicSynthesis,JohnWileyandSons(1994)；andL.Paquette,ed.,EncyclopediaofReagentsforOrganicSynthesis,JohnWileyandSons(1995),及其之后的版本。

药物组合物

本发明的药物组合物包括治疗有效量的本发明化合物，以及与所述的化合物配制在一起的一种或者多种药学上可接受的载体或者赋形剂。

如此处所使用的术语“药学上可接受的载体或者赋形剂”指的是任意类型的无毒的、惰性的固体、半固体或者液体填充剂、稀释剂、胶囊材料或者制剂辅助剂。可以作为药学上可接受的载体的材料的实例例如糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；环糊精例如α环糊精、β环糊精和γ环糊精；淀粉例如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；黄芪胶粉末；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，例如可可脂和栓剂蜡；油类，例如花生油、棉花籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇类，例如丙二醇；酯类，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，例如氢氧化镁和氢氧化铝；藻酸；不含致热原的水；等渗生理盐水；林格氏液；乙醇，和磷酸缓冲液，以及其他无毒的可相容性的润滑剂，例如月桂醇硫酸钠和硬脂酸镁，以及着色剂、释放剂、涂覆剂、甜味剂、风味剂和香味剂、防腐剂以及抗氧化剂，依照所述配方设计师的判断，也可以存在于所述的组合物中。

本发明的药物组合物可以通过下列方式进行施用：口服、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠内、鼻内、口腔内、***内或者经由植入泵的方式进行施用，优选的通过口服施用或者通过注射施用。本发明的药物组合物中可以含有任意常规的无毒的药学上可接受的载体、佐剂或者溶剂。在某些情况中，可以使用药学可接受的酸、碱或者缓冲剂对制剂的pH进行调整，从而增强所配制化合物或其递送形式的稳定性。在此使用的术语肠胃外包括皮下、皮内、静脉内、肌肉内、关节内、动脉内、滑膜腔内、胸骨内、鞘内、病灶内和颅内注射技术或者输液技术。

用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、微乳剂、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。除了该活性化合物之外，所述的液体制剂可以包括在所属技术领域中普遍使用的惰性稀释剂，例如水或者其他溶剂、增溶剂和乳化剂例如酒精、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苯甲酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉花籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢糠醇、聚乙二醇和山梨糖醇酐的脂肪酸酯，及其混合物。除了惰性稀释剂之外，所述的口服组合物中还可以包括佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、风味剂和香味剂。

注射型制剂，例如无菌注射水性或者油性悬浮液，可以根据已知的方法利用适当的分散剂或者润湿剂和悬浮剂而进行配制。该无菌注射型制剂也可以是存在于无毒的肠胃外可接受的稀释剂或者溶剂之中的无菌注射型溶液、悬浮液或者乳液，例如为1,3-丁二醇的溶液。可以使用的可接受的载体和溶液，是水、林格氏溶液、U.S.P.和等渗的氯化钠溶液。除此之外，无菌的不挥发性油通常作为溶剂或者悬浮介质被使用。为了达到这一目的，可以使用温和的不挥发性油，包括单甘油酯或者甘油二酯。此外，在该注射型制剂中可以使用脂肪酸例如油酸。

所述的注射型制剂可以是灭菌的，例如，通过经由细菌截留性过滤器的过滤作用，或者通过将灭菌试剂导入无菌固体形式的组合物中，该组合物可以在使用之前将其溶解或者分散在无菌水中或者其他的无菌注射型介质中。

为了延长药物的效果，通常希望减慢药物从皮下注射或者肌肉注射的吸收。该目的可以通过使用水溶性不佳的结晶或者无定形材料的液体悬浮液而实现。药物的吸收速率取决于它的溶解速率，进而可能取决于晶体的大小和结晶的类型。或者可以通过将药物溶解或者悬浮于油性载体而达到肠胃外施用的制剂的延迟吸收。可注射的存储形式的剂型可通过在生物可降解性聚合物中生成药物的微胶囊基质来制备的，其中所述的生物可降解性聚合物例如是聚丙交酯-聚乙交酯。可以控制药物的释放速率，这取决于药物与聚合物的比例以及所使用的具体聚合物的性质。其他的生物可降解性聚合物，例如：聚(原酸酯)和聚(酸酐)。存储注射型制剂还可以通过将药物包埋在与机体组织具有相容性的脂质体或者微乳液中的方式来制备。

用于直肠内施用或者***内施用的组合物优选的是栓剂，其可以通过将本发明化合物与适当的无刺激性的赋形剂或者载体混合而制备，其中所述的赋形剂或者载体是例如可可脂、聚乙二醇或者栓剂蜡，它们在常温下是固体但是在机体温度下为液体，因此在直肠腔或者***腔内发生融化并且释放所述的活性化合物。

口服施用的固体剂型包括胶囊、片剂、丸剂、粉末和颗粒。在这样的固体制剂中，活性化合物与至少一种惰性的、药学上可接受的赋形剂或者载体混合，该赋形剂或者载体例如柠檬酸钠或者磷酸二钙和/或：a)填充剂或者膨胀剂，例如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合剂，例如羧甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和***树胶；c)湿润剂例如甘油；d)崩解剂，例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或者木薯淀粉、藻酸、某些硅酸盐和碳酸钠；e)溶液阻滞剂，例如石蜡；f)吸收促进剂例如季铵化合物；g)润湿剂，例如十六烷醇和单硬脂酸甘油酯；h)吸收剂，例如高岭土和皂土粘土；和i)润滑剂，例如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂醇硫酸钠，及其混合物。在胶囊剂、片剂和丸剂的情况中，该剂型中还可以包括缓冲剂。

相似类型的固体组合物还可以使用如乳糖或牛奶糖以及高分子量的聚乙二醇的赋形剂填充于软和硬明胶胶囊中。

片剂、糖衣丸、胶囊、丸剂和颗粒剂的固体剂型可以被制备成有包衣层和壳，例如肠衣涂层以及在药物制剂领域中为人所熟知的其他包衣层。它们可以选择性的包含有乳浊剂，并且可能是仅仅或者优先于所述的肠道内的某一部分选择性地中以延迟的方式释放出活性成分的组合物。可以使用的包埋组合物的例子，包括聚合性物质和蜡。

局部施用或者透皮施用的本发明化合物剂型包括药膏、糊剂、霜剂、乳液、凝胶、粉末、溶液、喷雾、吸入剂或者贴片剂。在无菌条件下将活性组分与药学上可接受的载体和可能需要的任意必需的防腐剂或者缓冲剂混合。眼科制剂、耳滴液、眼药膏、粉末和溶液也可以被包含在本发明所述的范围之内加以考虑。

除了本发明的活性化合物之外，所述的药膏、糊剂、霜剂和凝胶中也可以含有赋形剂例如动物油和植物油、油、蜡、石蜡、淀粉、黄芪胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、皂土粘土、硅酸、滑石和氧化锌，或其混合物。

除了本发明的化合物之外，粉末和喷雾剂中也可以含有赋形剂例如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末或者这些物质的混合物。喷雾剂中还可以额外含有常用的推进剂，例如氯氟代烃。

透皮贴剂具有以受控递送的方式向所述的机体提供化合物的优点。此种剂型可以通过将化合物溶解于或者分散于适当的介质中而制备。还可以使用吸收促进剂以增加该化合物穿越皮肤的通量。可以通过提供速率控制膜的方式或者将化合物分散于聚合物基质或者凝胶中的方式而控制速率。

为了进行肺部递送，本发明的治疗组合物进行配制并且通过直接施用的方式(例如吸入至呼吸***)将固体或者液体微粒形式的组合物施用于受试者。制备以实施本发明的固体或者液体微粒形式的化合物，包括可吸入的大小的微粒：即微粒的尺寸足够小以在吸入时能通过口和喉咙，并且进入到支气管以及肺泡中。气雾剂化的治疗剂的递送，特别是气雾剂化的抗生素的递送，是本技术领域中已知的(参见，例如U.S.Pat.No.5,767,068toVanDevanteretal.,U.S.Pat.No.5,508,269toSmithetal.,andWO98/43650byMontgomery，上述文献全部在本发明中被引入作为参考)。在美国专利No.6,014,969中也可以发现有关于抗生素的肺部递送的讨论，上述文献在本发明中被引入作为参考。

本发明化合物的“治疗有效量”指的是化合物的剂量，其能够为接受治疗的受试者以医学治疗上合理的利益/风险比提供治疗功效。该疗效可以是客观的(即，可以由某种测试或者标记测定的)或者是主观的(即，由受试者提供对于效果的指示或者感觉)。上述化合物的有效量可以在约0.1mg/kg至约500mg/kg的范围之内，优选的在约1至约50mg/kg的范围。有效剂量也取决于给药途径，以及可否与其他试剂的共同使用。然而，应当被理解的是，本发明的化合物以及组合物的每日总使用量将由主治医师在合理的医学判断的范围内决定。对于特定受试者而言，特定治疗上的有效剂量水平将取决于许多因素，包括接受治疗的病症和病症的严重程度；所使用的具体化合物的活性；所使用的特定组合物；受试者的年龄、体重、一般健康、性别以及饮食；所使用的化合物的施用时间、施用途径和吸收速率；治疗持续时间；与特定化合物组合使用或者同时使用的药物；以及在医学领域中为人所熟知的可能因素。

向人类或者其他动物进行施用的本发明化合物以单次或者分次的剂量形式施用的每日总剂量可以是，例如从0.01至50mg/kg体重，或者更通常是从0.1至25mg/kg体重。单次给药的组合物可以含有这样的剂量或者这种剂量的约数，从而组成所述的每日剂量。一般而言，依照本发明的治疗方案，包括每天以单次或者多次的剂量形式向需要进行这种治疗的受试者施用大约10mg至大约1000mg本发明的化合物。

具有本发明中所描述制剂的化合物，可以经由注射、静脉内、动脉内、真皮下、腹膜内、肌肉内或者皮下给药；或者口服、口腔内，鼻内、透过黏膜、局部、以眼科制剂的形式、或者通过吸入进行给药，剂量为每4至120小时在大约0.1至大约500mg/kg体重的范围之内，或者剂量在1mg至1000mg/剂量之间，或者依据特定药物的需求而定。在本发明中所述的方法能够预期的是，施用有效剂量的化合物或者化合物的组合物，能够取得所期望的或者所声称的效果。通常情况下，本发明的药物组合物可以每天施用约1次至约6次，或者连续输液。这样的施用方式可以用来作为慢性治疗或者急性治疗。取决于接受治疗的受试者和特定的给药模式，可以与药学上的赋形剂或者载体进行组合以制备单一剂量形式的活性成分的剂量。典型的制剂中将含有大约5％至大约95％的活性化合物(重量/重量)。或者，这样的制剂中可以含有约20％至约80％的活性化合物。

可能会需要比上文中阐述的剂量更低或者更高的剂量。对于任意特定的受试者而言，具体的剂量和治疗方案将取决于许多因素，包括所使用特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用时间、***速率、药物的组合、所述疾病、病症或者症状的严重程度以及过程、受试者对于该疾病、病症或者症状的意向，以及治疗医师的判断。

为了改善受试者的病症，如果需要的话，可以施用维持剂量的本发明化合物、组合物或者组合。随后，当症状已经被缓解到所期望的水平时，所述的施用剂量或者施用频率或者两者，因为症状的减少，可以降低到能够保持改善的状态的水平上。然而，当疾病症状出现任何程度的复发时，受试者可能需要进行长期性的间歇性治疗。

实施例

结合下述的实施例，能够对本发明中所述的化合物以及方法进行更好的理解，其中所述的实施例仅仅意在进行描述，并且并不构成对本发明所具有的范围的限制。对于上述公开的实施方案所进行的各种改变合修饰，对于本领域技术人员而言将是显而易见的，并且这种改变和修饰包括但不局限于，在不背离本发明的精神和由附带的权利要求所限定的范围的前提下，那些涉及本发明所述的化学结构、取代基、衍生物、制剂和/或方法的改变和修饰。

化合物1及其甲烷磺酸盐、钠盐、钾盐和氯盐的制备示例如下。

中间产物107-1或107-2可以通过使106与R-2-1或R-2-2分别反应而制备。所述合成R-2-1或R-2-2的合成方法，例示如下：

或经过另一种替代方法：

中间产物108-1和108-2，可以通过107-1或107-2，与R-3-1或R-3-2的偶联反应而制备，其中R-3-1和R-3-2可以按照以下的方案制备：

实施例1：N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩骈[3,2-d]嘧啶- 6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺(化合物1)

步骤a：(Z)-乙基-2-(乙氧基甲基)-3-甲氧基丙烯酸酯(化合物202)

将钠(40.9g，1.78mol)小心的分次加入到乙醇(750mL)中，浓缩该溶液，在所有的钠金属消失后获得NaOEt粉末。在搅拌下，添加己烷(1.0L)，将该混合物在冰水浴中冷却。在0-5℃下滴加201(130g，0.89mol)和甲酸乙酯(131g，1.78mol)的混合物。将反应混合物在室温下搅拌过夜。在冰水浴冷却的状态下，滴加硫酸二甲酯(224g，1.78mol)。将获得的混合液在50℃下加热2小时。再向混合物中添加三乙基氯化铵(122g)和氢氧化钠(20g)。然后将混合物在室温下搅拌4小时后过滤。用水洗涤滤液，并经Na₂SO₄干燥。浓缩后可以获得无色油状的标题化合物(140g，37％)，该化合物不需进一步的纯化即可用于下一步骤中。

步骤b：乙基2-氧基-1,2,3,4-四氢嘧啶-5-羧酸酯(化合物203)

将化合物202(140g，0.745mol)、尿酸(40.0g，0.697mol)和含浓盐酸(34mL)的乙醇(500mL)混合物，加热回流过夜。蒸除～50％体积的反应物之后，将得到的悬浮液过滤，用少量的乙醇洗涤，干燥后获得白色固体形式的化合物203(47g，37％)。LCMS:171[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ1.19(t,J＝7.2Hz,3H),3.92(s,2H),4.08(q,J＝7.2Hz,2H),7.0(s,1H),7.08(d,J＝6.0Hz,1H),8.83(d,br,J＝4.8Hz,1H)。

步骤c：乙基2-氧基-1,2-二氢嘧啶-5-羧酸酯(化合物204)

向化合物203(47g，280mmol)的乙酸(500mL)溶液，添加溴(49.0g，307mmol)。将混合物加热回流2小时后，冷却至室温。再在0-5℃下冷却并且过滤，以获得黄色固体形式的标题化合物204(38g，54％)。LCMS:169[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,D₂O):δ1.28(t,J＝7.2Hz,3H),4.32(q,J＝7.2Hz,2H),9.00(br,s,2H)。

步骤d：乙基2-氯嘧啶-5-羧酸酯(化合物R-2-1)

将化合物204(38.0g，153mmol)、三氯磷酸(300mL)和N,N-二甲基苯胺(3mL)的混合物加热回流2小时，冷却至室温，并且浓缩。将残渣小心的用冰水淬灭，用碳酸钠调节pH至7-8，再用EtOAc萃取。合并的有机层用冰水和卤水洗涤，经Na₂SO₄干燥，蒸发并通过柱层析纯化(用10％的EtOAc/己烷洗脱)以获得白色固体形式的化合物R-2-1(15g，52％)。LCMS:187[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ1.36(t,J＝7.5Hz,3H),4.39(q,J＝7.5Hz,2H),9.08(s,2H)。

步骤e：(Z)-2-(二甲氧基甲基)-3-甲氧基-3-氧基丙-1-烯-1-酸钠(化合物206)

将含NaH(27g,在60％矿物油中，0.675mol)的无水1,2-二甲氧基乙烷(300mL)的混合物，加热至40-50℃，并且滴加3,3-二甲氧基丙酸甲酯(205)(100g，0.675mol)。将获得的混合物搅拌0.5小时，并在40-50℃下滴加甲酸甲酯(81g，1.35mol)。获得的混合物在冷却至0℃之前在40-50℃(内温)下搅拌2小时。将反应混合物缓慢回温到25℃，并搅拌过夜。添加Et₂O(150mL)并搅拌30min。过滤所获得的悬浮液。将该固体用Et₂O(100mL)洗涤，收集并且干燥以获得灰白色固体形式的标题化合物。LCMS(m/z):130.8[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ3.36(s,6H),3.60(s,3H),5.34(s,1H),8.92(s,1H)。

步骤f：2-氨基嘧啶-5-羧酸甲酯(化合物207)

向含盐酸胍(42.2g，0.44mol)的DMF(300mL)混合物中添加化合物206(80g，0.40mol)。将获得的混合物在100℃下加热1小时。在反应混合物冷却之前过滤。用50mLDMF洗涤滤饼，将合并的滤液浓缩，残渣悬浮于冷的EtOH中并且用冷的EtOH洗涤，以获得黄色固体形式的化合物207(38g，61.5％)。LCMS(m/z):154.2[M+1]⁺,195.1[M+42]⁺.¹HNMR(400MHz,CD₃OD):δ3.88(s,3H),8.77(s,2H)。

步骤g：甲基2-氯嘧啶-5-羧酸酯(化合物R-2-2)

将化合物207(7g，0.046mol)添加到浓盐酸(15.2mL)和CH₂Cl₂(60mL)的混合物中。冷却后，在15-20℃下添加ZnCl₂(18.6g，0.138mol)。将该混合物在15-20℃下搅拌0.5小时，冷却至5-10℃。为了维持内温为5-10℃的状态，分次加入NaNO₂(9.5g，0.138mol)。反应持续约～2小时。将反应混合物倒入冰水(50mL)中。分离有机层，用CH₂Cl₂(30mL*2)萃取水相。浓缩合并的有机相萃取物，以获得粗产物(4.2g)。将该粗制化合物悬浮于己烷(20mL)中，在60℃下加热30分钟后过滤。浓缩滤液，以获得灰白色固体形式的标题化合物R-2-2(3.5g，44.4％)。LCMS(m/z):214.1[M+42]⁺.¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ4.00(s,3H),9.15(s,2H)。

步骤h：5-溴-2-甲氧基吡啶(化合物303)

将2-甲氧基-吡啶(100g，0.92mol)、NBS(180g，1.0mol)的乙腈(1.0L)溶液，搅拌回流21小时。TLC显示该反应完成。将反应混合物冷却至室温并且浓缩。收集约～900mL溶剂。将获得的悬浮液过滤，用正己烷洗涤(～400mL)。再次浓缩滤液，以获得粗产物。将该粗产物经由减压蒸馏(30℃/～0.3mmHg)以获得澄清油状的标题化合物(146g，84％)。LCMS(m/z):190.0[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,CDCl₃):δ3.90(s,3H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),7.62(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),8.19(s,1H)。

步骤i：6-甲氧基吡啶-3-基有机硼酸(R-3-1)

向化合物303(20g，0.11mol)的无水THF(180mL)溶液中，在-78℃下滴加n-BuLi(59mL，2M的TMF)，搅拌获得的混合物1小时。在-78℃下添加硼酸异丙酯(37mL)，将该反应混合物回温到室温，并持续搅拌过夜。TLC(己烷/乙酸乙酯＝5：1)显示反应完全。用4NHCl(90mL)将反应物调整为pH3-4。过滤收集沉淀物，以获得粗制化合物R-3-1(21g,128％)。将该粗制化合物R-3-1(21g)溶于水(200mL)中，用浓氨水调节溶液pH至8-9，经由过滤收集沉淀物，以获得纯的白色固体形式的标题化合物R-3-1(11g,67％)。LCMS(m/z):154.1[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.86(s,3H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),7.99(dd,J＝8.4Hz,2.0Hz,1H),8.05(br,2H),8.52(d,J＝2.0Hz,1H)。

步骤j：2-甲氧基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶(化合物R-3-2)

将化合物303(55g，0.29mol)、4,4,4',4',5,5,5',5'-八甲基-2,2'-双(1,3,2-二氧杂硼烷)(90g,0.35mol)、乙酸钾(2.2g，3mmol)的无水二噁烷(500mL)混合物，在氮气环境下于108℃加热过夜。浓缩反应混合物，经由柱层析，用己烷/乙酸乙酯洗脱提纯，以获得标题化合物R-3-2(58g，84％)。¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ1.30(s,12H),3.88(s,3H),6.81(d,J＝8.0Hz,1H),7.88(dd,J＝8.0Hz,2.0Hz,1H),8.41(d,J＝2.0Hz,1H)。

步骤k：噻吩并[3,2-d]嘧啶-2,4(1H,3H)-二通(化合物102)

尿素法：将3-氨基噻吩-2-羧酸甲酯(101)(90.0g，573mmol，1.0eq)和尿素(277.6g，4.6mol，8.0eq)的混合物，在190℃下加热3-4小时，并且冷却至室温。向该反应混合物中添加NaOH水溶液(10％，800mL)。在室温下搅拌1小时之后，经过滤移除固体。将滤液用HCl酸化为pH3-4，经过滤收集沉淀的固体，用水洗涤，并且经真空干燥，以获得灰白色固体形式的所期望的化合物产物102(87g，89％)。m.p.:280-285℃.LCMS(m/z):169.0[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ6.92(d,J＝5.2Hz,1H),8.05(d,J＝5.2Hz,1H),11.0-11.5(br,2H)。

KOCN法：向3-氨基噻吩-2-羧酸酯(101)(100.0g，686.9mmol，1.0eq)、乙酸(705mL)和水(600mL)的混合物中，1小时内缓慢添加氰酸钾(154.8g，1.91mol，3.0eq)的水(326mL)溶液。在室温下搅拌获得的混合物20小时，过滤并且用水(500mL)洗涤。将滤饼放入适当大小的反应器中，添加2M氢氧化钠水溶液(1.65L)，搅拌浆体2小时，并用LCMS确认形成了所期待的产物。将该混合物冷却至10℃，添加3M盐酸水溶液(1.29L)直至pH＝5.0-6.0。将浆体过滤，用水(700mL)洗涤，于50℃下在真空干燥箱中干燥24小时，以获得灰白色固体形式的化合物102(100g，94％)。LCMS(m/z):169.1[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ6.92(d,J＝5.2Hz,1H),8.04(d,J＝5.2Hz,1H),11.14(s,1H),11.51(s,1H)。

步骤l：2,4-二氯噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物103)

缓慢添加羟基氯化磷(152ml，1.67mol，7.0eq)到冷的化合物102(40g，238mmol，1.0eq)与N,N-二甲基苯胺(22.5mL，179mmol，0.75eq)的乙腈(250mL)的溶液中，并且维持温度在20℃以下。然后将该混合物加热到85℃，搅拌24小时。将反应混合物冷却至15℃，缓慢倾倒在冰和冷水(360mL)的混合物上。过滤获得的浆体，用冷水(200mL)洗涤。滤饼在真空干燥箱中于40℃下干燥24小时，以获得灰白色固体形式的化合物103(40.5g，83％)。M.p.:245-250℃.LCMS(m/z):205.0[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ7.75(d,J＝5.2Hz,1H),8.71(d,J＝5.2Hz,1H)。

步骤m：2-氯-4-吗啉并噻吩并[3,2-d]嘧啶(化合物104)

向化合物103(34.2g，167mmol，1.0eq)和甲醇(500mL)的混合物中缓慢添加吗啉(31.2mL，367mmol，2.2eq)。将该反应混合物在室温下搅拌过夜。通过过滤收集沉淀物，用甲醇洗涤，并且经真空干燥以获得淡黄色固体形式的所期望的产物化合物104(39g，91％)。M.p.:250-255℃.LCMS(m/z):256.0[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.76(t,J＝5.2Hz,4H),3.92(t,J＝5.2Hz,4H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),8.32(d,J＝5.2Hz,1H)。

步骤n：2-氯-4-吗啉并噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-甲醛(化合物105)

向化合物104(20g，78.4mmol，1.0eq)的THF(无水，320mL)的悬浮液中，在-78℃的氮气环境下缓慢添加n-BiLi(在己烷中，2.4M，40.8mL，102mmol，1.3eq)。将获得的浆液升温到-60℃，转变为澄清的棕色溶液。将反应混合物再次冷却到-78℃，缓慢添加DMF(无水，9.1mL，118mmol,1.5eq)。在-78℃下搅拌获得的溶液0.5小时，约1小时后回温到0℃，缓慢倒入到HCl水溶液(0.25M，660mL)和冰水(320mL)的溶液中。将得到的浆体在0-10℃下搅拌0.5小时，用冷水洗涤，然后经真空干燥以获得黄色固体形式的化合物105(22g，98％)。M.p.:260-265℃.LCMS(m/z):284.0[M+1]⁺¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.77(t,J＝5.2Hz,4H),3.96(t,J＝5.2Hz,4H),8.30(s,1H),10.21(s,1H)。

步骤o：(2-氯-4-吗啉-4基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基)-甲基-胺(化合物106)

向化合物105(20.0g，70.4mmol，1.0eq)的甲醇(125mL)的溶液中，在氮气环境下添加甲胺的甲醇(27％v/v,75mL,563.2mmol)溶液。将反应混合物在室温下搅拌过夜，经减压蒸馏移除溶剂，获得粗制固体产物。在氮气环境下，将其溶于甲醇(550mL)和THF(220mL)，分次加入硼氢化钠(8g，211.2mmol)，在室温下搅拌过夜。将反应混合物减压蒸馏，再加入水(300mL)。用二氯甲烷萃取水溶性混合物，将合并的萃取物用Na2SO4干燥并且浓缩。将残渣溶于6MHCl(230mL)，搅拌30min。用二氯甲烷洗涤该水溶液数次，然后用NaOH(4N)调整pH为9-10。经过滤收集沉淀的固体，干燥，获得淡黄色固体(18g，85％)。M.p.:240-245℃.LCMS(m/z):299[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ2.32(s,3H),3.74(t,J＝5.2Hz,4H),3.88(t,J＝5.2Hz,4H),3.96(s,2H),7.24(s,1H)。

步骤p(a)：2-[(2-氯-4-吗啉-4基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基)-甲基-胺基]-嘧啶-5-羧酸乙酯(化合物107-1)

在室温下，向化合物106(10g，33.6mmol)和R-2-1(6.8g，36.4mmol)的CH3CN(400mL)的混合物中添加二异丙基乙胺(220mL，1.26mol)。将获得的混合物在室温下搅拌过夜。浓缩该混合物后，再添加二氯甲烷(300mL)。用水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥，经真空浓缩以留下残渣。向该残渣中添加乙酸乙酯，所获得的混合物在冰/水浴温度下搅拌50分钟。经过滤收集所获得固体，以获得白色固体形式的标题产物107-1(10.6g，70％)。LCMS:449[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ1.30(t,J＝7.2Hz,3H),3.25(s,3H),3.71(t,J＝5.2Hz,4H),3.83(t,J＝4.8Hz,4H),4.29(m,2H),5.21(s,2H),7.39(s,1H),8.87(s,2H)。

步骤p(b)：2-[(2-氯-4-吗啉-4基-噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基甲基)-甲基-胺基]-嘧啶-5-羧酸甲酯(化合物107-2)

将化合物106(25g，84mmol)、CH3CN(500mL)和R-2-2在室温下搅拌。添加二异丙基乙胺(DIPEA)(500mL，2.9mol)。将该溶液搅拌过夜并且浓缩。添加二氯甲烷(500mL)之后，用水洗涤有机层，用Na₂SO₄干燥，然后经真空浓缩。向该残渣中添加乙酸乙酯(200mL)，并将该混合物在冰/水浴下搅拌50分钟。所收集到的标题化合物为白色固体形式(29.4g，81％)。LCMS(m/z):435.2[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):3.25(s,3H),3.71(t,J＝5.2Hz,4H),3.82-3.84(m,7H),5.21(s,2H),7.39(s,1H),8.87(s,2H)。

步骤q(a)：2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉代4噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酸乙酯(化合物108-1)

方法A：化合物107-1(12g，26.7mmol)、R-3-1(4.9g，32mmol)、NaHCO₃(6.7g，80.1mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(II)(188g，0.267mmol)的甲苯(80mL)、乙醇(50mL)和水(10mL)的混合溶剂的混合物，在108℃和氮气环境下，加热4.5小时。TLC显示反应完成。然后将反应混合物冷却至室温，加入水(20mL)。经过滤收集获得的固体，然后悬浮于乙醇(100mL)中。将该悬浮液在室温下搅拌30分钟后过滤。用乙醇清洗收集的固体，在真空中干燥，以获得白色固体形式的标题化合物108-1(10g，72％)。

方法B：化合物107-1(1.5g，3.34mmol)、R-3-2(1.6g，6.68mmol)、NaHCO3(0.84g，10.0mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(II)(118g，0.167mmol)的甲苯(24mL)、乙醇(15mL)和水(3mL)的混合溶剂的混合物，在108℃和氮气环境下加热过夜。该反应混合物在二氯甲烷和水之间分层。分离有机层，用盐水洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤，并且在真空中干燥，以获得残渣。将所述残渣经柱层析精制(用己烷/乙酸乙酯洗脱)以获得白色固体形式的化合物108-1(1.7g，98％)。

m.p.198-202℃.LCMS:522.30[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ1.31(t,J＝7.2Hz,3H),3.28(s,3H),3.76(t,J＝4.4Hz,4H),3.93(t,J＝4.4Hz,4H),3.94(s,3H),4.30(q,J＝7.2Hz,2H),5.24(s,2H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),7.47(s,1H),8.57(dd,J＝8.8Hz,2.0Hz,1H),8.88(s,2H),9.15(d,J＝2.0Hz,1H)。

步骤q(b)：甲基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉代噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酸酯(化合物108-2)

向化合物107-2(20g，46.0mmol)、B-3-1(9.2g，60.2mmol，1.3eq)的二噁烷(540mL)的混合物中，在室温下添加固体NaHCO₃(11.6g，138.1mmol，3eq)，再加入水(40mL)。通过向溶液表面通入氮气使该反应混合物脱气。然后添加双(三苯基膦)氯化钯(II)(323mg，0.46mmol，0.01eq)，所获得的反应混合物在108℃下加热15小时。TLC和LCMS显示反应完成。趁热(>90℃)用硅藻土过滤该反应混合物，用二噁烷(70mL)洗涤。将滤液逐渐冷却到室温，在冷却期间产生了白色的微小晶体。将该悬浮液过滤并用二噁烷(80mL)洗涤以获得白色固体形式的标题化合物108-2(18g，78％)。LCMS(m/z):508.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.28(s,3H),3.76(t,J＝4.8Hz,4H),3.82(s,3H)；3.92(m,4H),3.93(s,3H),5.20(s,2H),6.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.47(s,1H),8.57(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),8.88(s,2H),9.15(d,J＝2.0Hz,1H)。

步骤r：N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩并[3,2-d]嘧啶-6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺(化合物1)

制备羟基胺甲醇溶液

将NH₂OH·HCl(80g，1.12mol)的MeOH(400mL)的混合物在60-65℃下加热1小时以形成澄清溶液。然后在冰水浴中冷却。向该冷的混合物中滴加KOH(96g，1.68mol)的MeOH(240mL)溶液，同时维持反应温度为0-10℃。在0℃下搅拌获得的混合物30分钟，然后经由无水Na₂SO₄填充的恒压滤斗过滤。在冰浴下收集该滤液，保存在冰箱中供将来之用。

从化合物108-1制备化合物1

将化合物108-1(10g，19mmol)悬浮于上述新鲜制备的羟基胺甲醇溶液(1.79M，350mL)。向该混合物中添加二氯甲烷(100mL)。密封反应烧瓶，在室温下搅拌5小时，将该混合物变成澄清溶液。再搅拌9小时，过滤移除任何不溶的固体。添加乙酸调整滤液的pH为6-7，以形成固体沉淀。将过滤收集固体，并用水和少量甲醇洗涤，在60℃下真空干燥5小时以获得白色固体形式的化合物1(9.2g，96％)。m.p.177-180℃.LCMS:509.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.24(s,3H),3.76(t,J＝5Hz,4H),3.92(t,J＝5Hz,4H),3.92(s,3H),5.20(s,2H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),7.44(s,1H),8.57(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),8.75(s,2H),9.01(s,1H),9.14(d,J＝2.0Hz,1H),11.08(s,1H)。

从化合物108-2制备化合物1

将化合物108-2(31g，61.1mmol)的二氯甲烷(310mL)的悬浮液，在室温下加入上述新鲜制备的羟基胺甲醇溶液(1.79M，744mL)。密封反应烧瓶，在室温下搅拌反应混合物5小时。反应混合物变成澄清溶液。将反应溶液过滤以移除任何不溶的固体。然后向该滤液添加水(310mL)，添加时没有固体形成。在搅拌下添加乙酸(18.5mL)以调整滤液的pH为10.20(以pH计持续监控)。在添加乙酸的时候，内温没有变化。过滤该悬浮液，并以少量甲醇洗涤(100mL×3)。收集的白色固体再次悬浮于甲醇(620mL)和水(124mL)中形成悬浮液。向上述悬浮液中添加额外的乙酸(11g)，以调节pH为5-6。可观察到该固体形式有所改变。将悬浮液再次持续搅拌2小时，经滤纸过滤，并用少量甲醇洗涤(100mL×3)。将收集的白色固体在干燥箱中干燥(50℃)12小时以获得白色固体形式的标题化合物1(23.6g，76.0％)。m.p.:255-259℃.LCMS(m/z):509.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.24(s,3H),3.76(t,J＝5.2Hz,4H),3.92(t,J＝5.2Hz,4H),3.92(s,3H),5.20(s,2H),6.91(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(s,1H),8.57(dd,J＝8.4Hz,2.4Hz,1H),8.75(s,2H),9.07(s,1H),9.14(d,J＝2.4Hz,1H),11.14(s,1H)。

实施例2：N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩骈[3,2-d]嘧啶- 6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺甲烷磺酸酯(化合物2)的制备

方法A：在0℃下，向化合物1(300mg，0.59mmol)和MeOH/Et₂O(3/1，40mL)的混合物中，添加甲烷磺酸(114mg，1.18mmol)的MeOH(3mL)的溶液。将获得的混合物在0℃下搅拌3小时。经过滤收集沉淀，用Et₂O洗涤以获得白色固体形式的化合物2(260mg，73％)。

方法B：向化合物1(1.5g，2.95mmol)的二氯甲烷/甲醇(40mL/10mL)的悬浮液中，在室温(15℃)添加甲烷磺酸(341mg，3.55mmol)的2mLMeOH以形成澄清溶液。在室温下搅拌该反应混合物过夜。反应混合物仍然澄清。向该混合物中添加乙酸乙酯(40mL)，在室温下持续搅拌3小时。经过滤收集获得的沉淀，以获得白色固体形式的化合物2(1.45g，83％)。

m.p.:179-185℃.LCMS:509.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ2.35(s,3H),3.26(s,3H),3.78(t,J＝9.6Hz,4H),3.95(s,3H),4.03(t,J＝9.2Hz,4H),5.24(s,2H),6.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.50(s,1H),8.54(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),8.76(s,2H),9.12(d,J＝2.4Hz,1H),11.11(br,1H)。

实施例3：N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩骈[3,2-d]嘧啶- 6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺钠盐(化合物3)的制备

向化合物1(300mg，0.59mmol)的甲醇(40mL/10mL)的悬浮液中，在0℃下缓慢添加t-BuONa(85mg，0.88mmol)。将获得的反应物回温到室温，持续搅拌2小时。浓缩反应物，将残渣磨碎，用乙酸洗涤并且经过滤以获得白色固体形式的化合物3(230mg，73％)。m.p.:178-183℃.LCMS:509.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.17(s,3H),3.75(s,4H),3.92(s,7H),5.16(s,2H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.42(s,1H),8.57(d,J＝8.0Hz,1H),8.65(s,2H),9.14(s,1H)。

实施例4：N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩骈[3,2-d]嘧啶- 6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺钾盐(化合物4)的制备

向化合物1(400mg，0.78mmol)的甲醇(50mL)的混合物中，在0℃下氮气环境中添加t-BuOK(132mg，1.17mmol)。将反应物在0℃下搅拌1小时，然后在室温下持续搅拌1.5小时。经过滤移除不溶固体，并将滤液冷却至-20℃。将该滤液中添加Et₂O(100mL)。将获得的混合物在-20℃搅拌1小时。添加己烷(70mL)，将混合物在-20℃搅拌2小时。经过滤收集固体，在真空中干燥以获得白色固体形式的化合物4(150mg，35％)。m.p.:174-179℃.LCMS:509.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.16(s,3H),3.74-3.76(m,4H),3.90-3.93(m,7H),5.15(s,2H),6.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(s,1H),8.39(br,1H),8.58(d,J＝8.8Hz,1H),8.62(s,2H),9.15(s,1H)。

实施例5：N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩骈[3,2-d]嘧啶- 6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺氯盐(化合物5)的制备

向化合物1(200mg，0.39mmol)的DCM/MeOH(60mL/12mL)的溶液中，添加氢氧化胆碱(106mg，0.39mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，然后浓缩以除去～30mL的溶剂。添加乙酸乙酯(60mL)，在室温下搅拌该混合物2小时。产生少量的沉淀之后，浓缩该混合物以除去～40mL的溶剂，并且再次添加乙酸乙酯(60mL)。在室温下搅拌该混合物2小时，并且经过滤以获得白色固体形式的化合物5(180mg，76％)。m.p.:181-185℃.LCMS:509.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.11(s,9H),3.17(s,3H),3.40(t,J＝4.8Hz,2H),3.75(t,J＝4.8Hz,4H),3.84(br,2H),3.90-3.93(m,7H),5.15(s,2H),6.89(d,J＝8.8Hz,1H),7.41(s,1H),8.57(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),8.64(s,2H),9.14(d,J＝2.0Hz,1H)。

实施例6：N-羟基-2-(((2-(6-甲氧基吡啶-3-基)-4-吗啉并噻吩骈[3,2-d]嘧啶- 6-基)甲基)(甲基)胺基)嘧啶-5-羧酰胺硫酸盐(化合物6)的制备

向化合物1(200mg，0.39mmol)的DCM/MeOH(30mL/7.5mL)的悬浮液中添加硫酸(77mg，0.79mmol，于1mLMeOH中)以形成澄清溶液。在室温下搅拌反应混合物过夜。产生沉淀之后，添加叔丁基甲醚(60mL)。在室温下持续搅拌该反应混合物1小时。经过滤收集该固体以获得白色固体形式的化合物6(180mg，76％)。M.p.:243-246℃.LCMS:509.3[M+1]⁺.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆):δ3.26(s,3H),3.78(t,J＝4.8Hz,4H),3.96(s,3H),4.03(t,J＝4.4Hz,4H),5.24(s,3H),6.98(d,J＝8.4Hz,1H),7.50(s,1H),8.54(dd,J＝8.8Hz,2.4Hz,1H),8.76(s,2H),9.12(d,J＝2.0Hz,1H),11.06(br,1H)。

实施例7：PI3激酶活性检测

下述的检测被用于测定化合物1抑制PI3K的各种同工异构体和突变体的能力。

PI3Kα

PI3Kα活性是使用ADP-Glo荧光激酶试验测量的。PIK3α，是由N-末端带有组氨酸标签的重组的全长人类p110α与未带有标签的重组的全长人类p85α所形成的复合物，上述的人类p110α以及人类p85α在一种经过杆状病毒感染的Sf9细胞的表达***中进行了共表达(GenBankAccessionNo.p110α：U79143；p85α：XM_043865)。通过使用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲和层析法对所述的蛋白质进行纯化。使用竞争性检测法以测量由二磷酸磷脂酰肌醇(PIP2)所生成的三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)的剂量，其中所述的生成是在存在于经过纯化的重组的PI3Kα(p110α/p85α)的条件下进行的。PI3Kα和20μMPIP2基质一起在反应缓冲液(20mmolHEPES，pH7.4，150mMNaCl，4mMMgCl2，3μM矾酸钠，1mMDTT，10μM超纯ATP和0.5％DMSO)中在30℃下温育30分钟。然后用ADP-Glo试验法测量反应中产生的ADP。此试验法通过两个步骤实施：首先加入等体积的ADP-GLO^TMReagent(Promega)，以中止激酶反应，并且耗尽残余的ATP。在第二个步骤中，添加激酶测试试剂，其能同时转换ADP为ATP。使用偶合的luciferase/luciferin反应测量新合成的ATP。在此试验法中测量的化合物1的IC₅₀低于100nM。

也可以使用上述程序测量化合物1抑制PI3Kα变异体H1047R和E545K的能力。所测量的两种突变体的IC₅₀低于100nm。

PI3Kβ

PI3Kβ的活性是使用时间分辨的荧光共振能量传递(TR-FRET)检测法进行检测的，其中该检测法利用到均相时间分辨荧光(HTRF)技术。PIK3β是由N-末端带有组氨酸标签的重组的全长人类p110β与未带有标签的重组的全长人类p85α所形成的复合物，上述的人类p110β以及人类p85α在一种经过杆状病毒感染

的Sf21细胞的表达***中进行了共表达(GenBankAccessionNo.p110β：NM_006219；p85α：XM_043865)。通过使用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲和层析法对所述的蛋白质进行纯化。使用竞争性检测法以测量由PIP2所生成的PIP3的剂量，其中所述的生成是在存在于经过纯化的重组的PI3Kβ(p110β/p85α)的条件下进行的。PI3Kβ和10μMPIP2基质一起在反应缓冲液(20mMHEPES，pH7.5，10mMNaCl，4mMMgCl2，2mMDTT，10μMATP和1％DMSO)中在30℃下温育30分钟。然后将一种PIP3检测蛋白质、铕标记的抗体、生物素标记的PIP3探针和别藻蓝蛋白标记的链霉亲和素与所述的反应产物进行混合。形成了一种传感器复合物，用以在所述的反应混合液中生成一种稳定的时间分辨的荧光共振能量转移(TR-FRET)信号。PIP3显示出生物素标记的探针与所述的PIP3检测剂发生结合时，这种信号的强度减弱，并且存在于混合液中的未经结合的生物素标记的PIP3探针的数量增加，其中所述的PIP3是通过酶的作用而制备得到的。使用带有背景相减的微培养板阅读器对时间分辨的荧光共振能量转移(TR-FRET)信号进行测量。

在本试验法中所测定的化合物1的IC₅₀介于100与1000nm之间。

PI3Kδ

PI3Kδ的活性是使用荧光偏振检测进行测量的。PIK3δ，是由N-末端带有组氨酸标签的重组的全长人类p110δ与未带有标签的重组的全长人类p85α所形成的复合物，上述的人类p110δ以及人类p85α在一种经过杆状病毒感染的Sf9细胞的表达***中进行了共表达(GenBankAccessionNo.p110δ：NM_005026)。通过使用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲和层析法对所述的蛋白质进行纯化。使用竞争性检测法以测量由PIP2所生成的PIP3的剂量，其中所述的生成是在存在于经过纯化的重组的PI3Kδ(p110δ/p85α)的条件下进行的。PI3Kδ和10μMPIP2基质一起在反应缓冲液(20mMHEPES(pH7.5)，10mMNaCl，4mMMgCl₂，2mMDTT，10μMATP和1％DMSO)中在30℃下温育1小时。然后利用一种PIP3检测蛋白质和所述的荧光PIP3探针与反应产物进行混合。当PIP3显示出荧光探针与PIP3检测剂发生结合时，偏振(mP)数值减小，并且存在于所述的混合液中的未经结合的荧光探针的数量增加，其中所述的PIP3是通过酶的作用而制备得到的。使用带有背景相减的微培养板阅读器对偏振程度(mP)的数值进行测量。

在本试验测量的化合物的IC₅₀低于100nM。

PI3Kγ

PI3Kγ的活性是使用时间分辨的荧光共振能量传递(TR-FRET)检测法进行检测的，其中该检测法利用到均相时间分辨荧光(HTRF)技术。PI3Kγ是由N-末端带有组氨酸标签的人类PI3Kγ在一种经过杆状病毒感染的Sf9细胞的表达***中进行了表达(GenBankAccessionNo.AF327656)。通过使用谷胱甘肽-琼脂糖的一步亲和层析法对所述的蛋白质进行纯化。使用竞争性检测法以测量由PIP2所生成的PIP3的剂量，其中所述的生成是在存在于经过纯化的重组的PI3Kγ(p120γ)的条件下进行的。PI3Kβ和10μMPIP2基质一起在反应缓冲液(20mMHEPES，pH7.5，10mMNaCl，4mMMgCl₂，2mMDTT，10μMATP和1％DMSO)中在30℃下温育30分钟。然后将一种PIP3检测蛋白质、铕标记的抗体、生物素标记的PIP3探针和别藻蓝蛋白标记的链霉亲和素与所述的反应产物进行混合。形成了一种传感器复合物，用以在所述的反应混合液中生成一种稳定的时间分辨的荧光共振能量转移(TR-FRET)信号。PIP3显示出生物素标记的探针与所述的PIP3检测剂发生结合时，这种信号的强度减弱，并且存在于混合液中的未经结合的生物素标记的PIP3探针的数量增加，其中所述的PIP3是通过酶的作用而制备得到的。使用带有背景相减的微培养板阅读器对时间分辨的荧光共振能量转移(TR-FRET)信号进行测量。

在本试验法中所测定的化合物1的IC₅₀介于100与1000nM之间。

实施例8：HDAC活性检测

组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)抑制活性是使用BiomolColordeLys***(组蛋白脱乙酰化酶荧光光度检测试剂盒)(AK-500，Biomol，PlymouthMeeting，PA)进行测量的。简而言之，Hela细胞核提取物被用作HDAC的来源。利用二甲基亚砜(DMSO)对不同浓度的测试化合物进行梯度稀释，并且在存在有一种比色性的人造底物的条件下，添加到试验用的Hela细胞核提取物中。最终的检测条件包括50mMTris/Cl、pH8.0、137mMNaCl、2.7mMKCl和1mMMgCl₂。在室温(25℃)下反应1小时，然后添加显影剂终止反应。利用WALLACVictorII1420微培养板阅读器测量用荧光强度(激发波长：350-380nm；发射波长：440-460nm)表示的相对酶活性。使用GraphPadPrism(版本4.0a)对数据进行分析，并且使用S形剂量应答曲线拟合运算法则对IC₅₀值进行计算。在此试验法中测量的化合物1的IC₅₀低于100nM。

测量HDAC同型化合物1的活性。HDAC特异性是在BPSBioscience(SanDiego，CA)中按照其标准操作程序实施的。简而言之，经过纯化的带有标签的-(人类HDAC-1)、NCOR2-(人类HDAC3)、GST-(人类HDAC4、6、7、10和11)或His-(人类HDAC2、5、8和9)标签化的酶在Sf9昆虫细胞中表达，并且在使用前纯化。用于HDAC1、2、3、6、7、8、9和11的基质是BPSBioscience开发的HDAC基质3。对于其它HDAC酶类，使用HDAC第2a类基质。所有的酶反应是在37℃进行30分钟，重复两次，例外的是HDAC11酶的测量，其是在室温下进行3小时。

下表显示各HDAC1-11的结果，IC₅₀值按照如下的方式提供：I>1000nM；100nM<II<1000nM；10nM<III<100nM；IV<10nM。

HDAC	1	2	3	8	4	5	6	7	9	10	11
												IC50	IV	IV	IV	II	II	II	III	II	II	IV	IV

实施例9：细胞增殖作用检测

人类癌细胞系是从美国典型培养物收集中心(AmericanTypeCultureCollection)(Manassas，VA)购买，并且将癌细胞系以每孔5000至10000个细胞的水平接种在含有按照提供者的建议的培养基的96孔平底培养板中，在含有0.5％(v/v)的胎牛血清(FBS)的培养板中，所述细胞和各种不同浓度的化合物培养72小时。使用PerkinElmerATPlite试剂盒，通过三磷酸腺苷(ATP)含量的检测对生长抑制作用进行评价。PromegaCellTiter-Glo试剂盒是一种TPlite是一种基于萤火虫荧光素酶的三磷酸腺苷(ATP)监测***。简而言之，将16μl的哺乳动物细胞溶解物和基质添加到含有84μl的培养基的每个孔中以溶解细胞，并且稳定ATP。振荡该混合物并且温育30分钟，然后检测发光。IC₅₀值是使用有S形剂量应答曲线拟合运算法则的PRISM(GraphPadSoftware)计算的。

表1显示在化合物1和对照化合物SAHA、GDC-0941和SAHA与GDC-0941的组合的细胞系试验法中的抗增殖活性。在此类试验法中使用以下的分级：IC₅₀I>10000nM，10000nM≧II≧1000nM，1000nM>III≧100nM，100nM>IV≧10nM，和V<10nM。

表1

实施例10：化合物1的配制

a.化合物1在30％Captisol中(10mg/mL)：

向含有化合物1(10mg)的小玻璃瓶中添加30％的Captiso(0.937ml)。超声波振荡混合物2分钟。然后向该混合物中加入氢氧化钠(1N，39.3μl，2eq.)，并且超声波振荡/漩涡振荡以获得澄清溶液(pH＝12)。然后用盐酸(1N，23.6μl，1.2eq.)调节溶液pH为10。

b.化合物1在30％Captisol中(7.5mg/mL)：

向含有化合物1(7.5mg)的小玻璃瓶中添加30％的Captiso(0.941ml)。超声波振荡混合物2分钟。然后向该混合物中加入氢氧化钠(1N，29.5μl，2eq.)，并且超声波振荡/漩涡振荡以获得澄清溶液(pH＝12)。然后用盐酸(1N，29.5μl，2eq.)调节溶液pH为5。

c.化合物1在C10/PEG1450/PEG400中(5mg/mL)：

向含有化合物1(5mg)、癸酸钠(20mg)、PEG400(40μl)和PEG1450(40mg)的小玻璃瓶中，添加水(0.88ml)和NaOH(1N，24.6μl，2.5eq.)。超声波振荡/漩涡振荡该混合物以获得澄清溶液，然后用盐酸(1N，7.4μl，0.75eq.)调节为pH＝10。

实施例11：在肿瘤小鼠中药动学和药效学的研究

患有H2122肿瘤的裸体小鼠

使用患有H2122(人类非小细胞肺癌细胞株)异种移植肿瘤的裸鼠供药动学研究。化合物1与癸酸钠和PEG400(5mg/mL)在水中配制，并以50mg/kg的剂量经胃管口服(PO)给予各个动物。在化合物给予之后的不同时间点，在各个时间点将3只小鼠以CO2使其安乐死，并收集血液和肿瘤组织。将血液收集到含有肝素钠的试管中。离心分离血浆。将血浆和组织保存在-80℃下以供之后的分析使用。使用PESciexAPI-3000LC-MS/MS***(AppliedBiosystems，Inc.，FosterCity，CA)分析血浆和肿瘤组织中化合物的浓度。

研究结果整理在图1和下表2中。图1是在口服给予之后，血浆和肿瘤组织中的化合物1随时间的变化。结果显示化合物1优先累积在肿瘤组织中。此现象得到表3中结果的支持，其显示在肿瘤组织中比在血浆中有显著较长的化合物1的半衰期，并且肿瘤对于化合物1的暴露明显较高(AUC)。

表2

参数	血浆	肿瘤
			半衰期(小时)	5.9	10.1
Cmax(ng/mL)	186	154
			曲线下面积(ng/mL*hr)	478	2126
生物利用度(％)	7.8	14.8

患有Daudi肿瘤的SCID小鼠

将Daudi(非霍奇金氏淋巴瘤细胞株)细胞植入雌性Scid(严重复合型免疫不全)小鼠中。建立肿瘤之后，向动物以口服方式，经胃管给药25、50或100mg/kg化合物1，pH10的浓度为1.875、3.75或7.5mg/mL的该化合物的30％Captisol制剂。

在化合物给予之后的各个时间点，将3只小鼠以CO2使其安乐死，收集血液和肿瘤组织。将血液收集到含有肝素钠的试管中。离心分离血浆。将血浆和组织保存在-80℃供之后的分析。使用PESciexAPI-3000LC-MS/MS***(AppliedBiosystems，Inc.，FosterCity，CA)分析血浆中化合物的浓度。

研究结果整理在图2A、2B和2C以及下表3中。图2A是在口服给予之后，血浆中的化合物1浓度随时间的变化图，显示对于该化合物的剂量依赖性。图2B是在口服给予之后，肿瘤组织中的化合物1浓度随时间的变化图。结果显示化合物1以剂量依赖的方式优先累积与肿瘤组织中。图2C比较了给药100mg/kg之后，在血浆和肿瘤中的浓度，显示肿瘤组织会优先摄取化合物1。此现象得到表3中结果的支持，其显示在肿瘤组织中比在血浆中有显著较长的化合物1的半衰期，并且肿瘤对于化合物1的暴露明显较高(AUC)。

表3

参数	血浆	肿瘤
			半衰期(小时)	7.73	12.62
Cmax(ng/mL)	2285.39	1044.7
			曲线下面积(ng/mL*hr)	1899.26	3973.56
Tmax(hr)	0.24	0.10

药效学

收集肿瘤以供以25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg的单一剂量的化合物1治疗之后的PD评估。使用Tissuelyser(Qiagen，Valencia，CA)按照制造商的说明书从肿瘤组织中提取蛋白质。30μg蛋白质被常规用于如上所述WB分析。将细胞溶解物溶解于NuPAGENovex4-12％Bis-Tris凝胶上，并且转移到硝基纤维素膜(Bio-RadLaboratories，Hercules，CA)。将这些印迹用各种不同的初级抗体在4℃下探查过夜。GAPDH(-磷酸甘油醛脱氢酶，1：30000，Abcam，Cambridge，MA)被用作每个试验中的内部对照。然后将膜与-IRDye-800(RocklandImmunochemicals，Inc.Gilbertsville，PA)偶联或-Alexa680(Invitrogen)偶联的红外标记的的次级抗体一起温育。使用OdysseyInfraredImagingSystem(Li-CorBiotechnology，Lincoln，NE)将膜造影。

该研究的结果如图3所示，其呈现从3组剂量获得的肿瘤提取物的westblot图。这些结果显示化合物1抑制PI3K-AKT-mTOR路径，压制RAF-MEK-ERK路径，下调RTK蛋白水平，以及上调肿瘤抑制子p53和p21水平。

实施例12：在犬中的药动学研究

也通过使用静脉内以5mg/kg给予含有癸酸钠/PEG400(5mg/ml)的水溶液，和以5mg/kg口服给予含癸酸钠/PEG4000/PEG1450(pH10)的肠溶胶囊，实施化合物1在米格鲁犬中的药动学研究。在各个时间点收集血浆，并且通过LC-MS/MS分析化合物1的浓度。研究的结果如图4和下表4所示。图4是口服和静脉内给药的血药浓度随时间的变化图。经由口服给药可以达到血浆中化合物1的显著水平。

表4

实施例13：对大鼠的药动学研究

本研究的目的在于检测在雄性Sprague-Dawley大鼠中，口服给予化合物1之后的化合物1的血浆药动学。

将化合物1溶于30％的Captisol水溶液，以获得10mg/mL(pH＝10)的名义上的浓度以供口服给药。将获得的澄清黄色溶液在室温下保存直至给药。

将来自CharlesRiverLaboratories的3只雄性Sprague-Dawley大鼠用于该研究中。在本研究的活体部分，来自ResearchDietsInc.的高脂肪饲料(VHFD，D12492i)以任意数量供给。化合物1以20mg/kg的剂量经由胃管单次剂量(OP)给予。

在给药后0.25、0.5、1、2、6和24小时之后，从尾静脉采集血液样本(体积约150μL)。将血液样本置于含肝素钠的试管中，在4℃下8000rpm离心6分钟，以便从样本中分离出血浆。离心之后，将获得血浆转移到洁净的试管中，然后在-80℃下冷冻保存，等待生物分析。

使用PESciexAPI-3000LC-MS/MS***(PE-Sciex.，FosterCity,CA),检测血浆样本中的化合物1和其初级代谢产物的浓度。

药动学参数是由受试个体的平均浓度-时间数据所测量的。使用Professional5.2.房室模型被用于计算参数。在定量限以下(定量下限＝1ng/mL)，计算各动物中的参数时忽略不计。

在口服给予化合物1之后，化合物1的Cmax和Tmax的平均值分别是39.5μg/L和0.1hr。AUC_(0-∞)的平均值为163.6μg/L*hr。半衰期(T_1/2)为11.7hr。

实施例14：在异体移植肿瘤模型中评估化合物1

A.SU-DHL4、H2122、Daudi和OPM2异体移植肿瘤模型

将SU-DHL4(弥散性大B细胞淋巴瘤细胞系)、H2122(人类NSCLC细胞株)、Daudi(非霍奇金氏淋巴瘤细胞株)和OPM2(多发性骨髓瘤肿瘤细胞株)细胞植入裸体小鼠或Scid(严重复合型免疫缺陷)小鼠。在建立肿瘤之后，将患有足够大小的肿瘤的动物随机分配为活性组(化合物1)和对照组(载体)。口服给予化合物1的实施例7(b)配方，并且根据各个动物的体积，经由胃管口服传递。对照组使用如同对应的活性组相同的给药程序给予载体。

H2122肿瘤组(裸小鼠)，开始时每天2次接受75mg/kg剂量的化合物1，然后由于在75mg/kg剂量时出现体重减轻，从第11天起每天2次，每周5天给药50mg/kg。在一个研究中，Daudi肿瘤组(Scid小鼠)每周5天接受化合物1，剂量为25、50或100mg/kg。在另一个研究中，Daudi肿瘤组每天2次，每周5天给药50mg/kg。在另一个研究中，将在Daudi肿瘤模型中口服给予化合物1的效力与经口服GDC-0941和经口服伏立诺他(vorinostat)单独给予或组合给予的效力相比较。OPM2肿瘤组每天2次，一周5天接受化合物1，剂量为50mg/kg。SU-DHL4肿瘤组，经口服给药100mg/kg，或经静脉内给药50mg/kg。

在研究期间，使用电子卡尺测量肿瘤，并且每周2次测量体重。下式用于计算肿瘤体积：

肿瘤体积＝(长度×宽度²)/2

肿瘤体积的变化百分比，用于描述在治疗期间化合物的活性。

研究的结果整理在图5A至5C，和图9至12中，其显示针对各种肿瘤类型的活性组和对照组的肿瘤大小对时间的变化。图5A、5B、5C和12显示化合物1在H2122、Daudi和OPM2肿瘤模型中有效。如图9所示，化合物1以剂量依赖方式抑制肿瘤生长。图10比较了100mg/kg剂量的化合物1和GDC-0941或伏立诺他(vorinostat)单独或组合时的抗肿瘤活性。显示的剂量是各种治疗的最大耐受量(MTD)，并且治疗前的肿瘤大小为157±65mm³(mean±SE)。数据显示化合物1相比于伏立诺他(vorinostat)、GDC-0941或两者的组合更加有效。最后，在静脉内(IV)给药50mg/kg或口服(PO)给予100mg/kg的化合物1之后，在SU-DHL4弥散性大B细胞淋巴瘤异体移植模型中，强烈抑制肿瘤生长(图11)。治疗前的肿瘤大小为147±21mm³。

MM1S异体移植模型

将4周龄的雌性SCID/Beige小鼠，在受控的气候下，饲养在通气的小型隔离笼(IVC，InnoviveInc.,SanDiego,CA),任意喂食无菌的高脂肪饲料(Problab-RMH2000)，并且提供无菌水。所有的SCID/Beige用的笼舍和补给品在使用前先用高压蒸汽灭菌。由受过训练的动物设施人员和检查人员每天包括周末/假日检查小鼠。所有的动物步骤，是在生物安全室(注射时)或层流罩(针对动物饲养和非侵入性步骤)内无菌条件下实施的。

MM1S人类MM细胞(Goldman-LeikinRE，etal.,JLabClinInvest.1980；113:335–345)是来源于多发性骨髓瘤受试者的外周血液。将冷冻保存的细胞在37℃水浴中解冻，并且在RPMI培养基+10％胎牛血清(FBS)中，5％CO2的组织培养箱中培养。将细胞送到外部供应商检查污染物和筛检啮齿类的病原，以排除支原体(利用PCR)和/或病毒(利用MAP试验，MouseAntibodyProduction)的污染。当培养物中的细胞足够植入时，将其用无血清的Hank氏平衡盐溶液洗涤(HBSS)。最后，将该细胞在HBSS中稀释以用于植入。仅使用存活率大于90％(利用胎盘排除法)的单一细胞悬浮液注射，并且在最少7天的适应期之后，使用1CC针管和26G皮下注射器，小心的避开血管，在小鼠右后肢外侧区以每只动物2000万个细胞悬浮于0.2mlHBSS的注射液经由皮下注射。如果在皮下出现圆形凸起的肿块，则代表已经成功植入。每天对该已经植入的小鼠监控常规健康状况和肿瘤进展状况。

在植入约2周之后，可以检测到肿瘤。用卡尺测量肿瘤的大小。下式用于计算肿瘤体积：

肿瘤体积＝(长度×宽度²)/2

肿瘤植入3周之后，肿瘤达到平均194.6±37.9mm³。使用排序软件，肿瘤大小和形状可接受的动物被随机分配给每组含8个动物的2个群组，一组为载体对照组，一组为治疗组。

将化合物1按照如下调配和给药：7.5mg/ml溶于30％Captisol+2当量的NaOH和HCl，并且经胃管口服，按照每只小鼠的体重，每天给药，每周5天。对照组使用相同的给药方案，以载体(30％Captisol)给药。

在研究各个动物时，用卡尺测量肿瘤，用上式检测肿瘤大小，并计算肿瘤大小的变化百分比。每周用体重计测量小鼠的体重。研究持续进行到：a)研究设计所预定的最后日期；或b)产生健康问题，以两者先发生者为准。此外，以下列肿瘤相关参数作为安乐死的依据：(1)肿瘤载重超过2500mm³和/或(2)减少≥20％的起始体重。除了检测肿瘤大小的变化，最后的肿瘤测量值是被用于生成肿瘤重量变化比(T/C值)，其是由国家癌症研究机构(NCI)发展的用于异体移植肿瘤评估的标准。T/C是使用下式计算：％T/C＝100×ΔT/ΔC，如果ΔT>0。如果发生肿瘤退化，使用下式：％T/T₀＝100×ΔT/T₀，如果ΔT<0。

治疗期为15天。在本研究的最后一天，再次测量肿瘤大小和体重。

如图13所示，在MM1S皮下肿瘤模型中，化合物1的单一试剂抑制肿瘤生长。基于第14天的数据，T/C值经计算为27.37％(p<0.0001，ANOVA)。在化合物1单一试剂的治疗组中，没有观察到体重减轻或者其它副作用。

MM1R异体移植模型

将4周龄的雌性SCID/Beige小鼠，在受控的气候下，饲养在通气的小型隔离笼(IVC，InnoviveInc.,SanDiego,CA),任意喂食无菌的高脂肪饲料(Problab-RMH2000)，并且提供无菌水。所有的SCID/Beige用的笼舍和补给品在使用前先用高压蒸汽灭菌。由受过训练的动物设施人员和检查人员每天包括周末/假日检查小鼠。所有的动物步骤，是在生物安全室(注射时)或层流罩(针对动物饲养和非侵入性步骤)内无菌条件下实施的。

MM1R人类MM细胞(Goldman-LeikinRE，etal.,JLabClinInvest.1980；113:335–345)是来源于多发性骨髓瘤受试者的外周血液。将冷冻保存的细胞在37℃水浴中解冻，并且在RPMI培养基+10％胎牛血清(FBS)中，5％CO2的组织培养箱中培养。将细胞送到外部供应商检查污染物和筛检啮齿类的病原，以排除支原体(利用PCR)和/或病毒(利用MAP试验，MouseAntibodyProduction)的污染。当培养物中的细胞足够植入时，将其用无血清的Hank氏平衡盐溶液洗涤(HBSS)。最后，将该细胞在HBSS中稀释以用于植入。仅使用存活率大于90％(利用胎盘排除法)的单细胞悬浮液注射，并且在最少7天的适应期之后，使用1CC针管和26G皮下注射器，小心的避开血管，在小鼠右后肢外侧区以每只动物1000万个细胞悬浮于0.1mlHBSS的注射液经由皮下注射。如果在皮下出现圆形凸起的肿块，则代表已经成功植入。每天对该已经植入的小鼠监控常规健康状况和肿瘤进展状况。

在植入约2周之后，可以检测到肿瘤。用卡尺测量肿瘤的大小。下式用于计算肿瘤体积：

肿瘤体积＝(长度×宽度²)/2

肿瘤植入3周之后，肿瘤达到平均131.7±28.7mm³。使用排序软件，肿瘤大小和形状可接受的动物被随机分配给每组含8个动物的2个群组，一组为载体对照组，一组为治疗组。

将化合物1按照如下调配和给药：7.5mg/ml溶于30％Captisol+2当量的NaOH和HCl，并且经胃管口服，按照每只小鼠的体重，每天给药，每周5天。对照组使用相同的给药方案，以载体(30％Captisol)给药。

在研究各个动物时，用卡尺测量肿瘤，用上式检测肿瘤大小，并计算肿瘤大小的变化百分比。每周2次用体重计测量小鼠的体重。研究持续进行到：a)研究设计所预定的最后日期；或b)产生健康问题，以两者先发生者为准。此外，以下列肿瘤相关参数作为安乐死的依据：(1)肿瘤载重超过2500mm³和/或(2)减少≥20％的起始体重。除了检测肿瘤大小的变化，最后的肿瘤测量值是被用于生成肿瘤重量变化比(T/C值)，其是由国家癌症研究机构(NCI)发展的用于异体移植肿瘤评估的标准。T/C是使用下式计算：％T/C＝100×ΔT/ΔC，如果ΔT>0。如果发生肿瘤退化，使用下式：％T/T₀＝100×ΔT/T₀，如果ΔT<0。

治疗期为15天。在本研究的最后一天，再次测量肿瘤大小和体重。

治疗期为18天。在本研究的最后一天，再次测量肿瘤大小和体重。

如图14所示，在MM1R皮下肿瘤模型中，化合物1的单一试剂抑制肿瘤生长。基于第17天的数据，T/C值经计算为21.15％(p<0.0001，ANOVA)。在化合物1单一试剂的治疗组中，没有观察到体重减轻或者其它副作用。

实施例15：化合物1对循环淋巴细胞的作用

在CD1野生型小鼠中，研究化合物1对循环T和B淋巴细胞的作用。5只小鼠被如化合物1的实施例8(b)(5mg/mL)配方以100mg/kg的剂量口服连续给予5天。另外5只小鼠用载体处理。在各个时间点从下颌的静脉采集血液(包括给药前、给药中和给药后)。使用流式细胞计数仪定量分析血液中的T和B细胞。

化合物1对淋巴器官、脾脏和***中的T和B淋巴细胞水平的效应也被评估。将小鼠用化合物1以100mg/kg剂量口服处理连续5天。处死这些动物，收集淋巴器官。将细胞从组织中物理性分离，并用流式细胞计数仪分析。分别使用抗CD3和-CD19抗体染色T和B细胞。

这些研究结果如图6所示，其显示血液淋巴细胞随时间的变化。化合物1显示T和B淋巴细胞在血液水平相对于对照组有明显的可逆性减少。类似的效果可见在脾脏和***的淋巴细胞水平。这些器官都显示在给予化合物1之后，相对于对照组，T和B淋巴细胞有明显的减少。

实施例16：化合物1对骨髓中造血细胞的作用

从实施例12中处死的小鼠中移除骨髓。从小鼠的长骨中收集骨髓内容物，并用流式细胞计数仪分析。使用淋巴细胞母细胞和成熟淋巴细胞的各种标记。这些结果显示：经化合物1处理，其造成外周T和B淋巴细胞数量的减少，相比于对照组会诱导骨髓淋巴细胞母细胞的代偿性增加。

实施例17：迷你沙门氏菌/哺乳动物-微粒体回复突变试验

本研究是用于评估化合物1在2株Salmonellatyphimurium(TA98和TA100)的基因型的组氨酸的哺乳动物微粒体酶(S9-mix)存在或者缺失下，诱导回复突变的能力。

在致突变试验中使用的受试菌株是Salmonellatyphimurium测试株TA98(用于检测移码回复突变)和TA100(用于检测点回复突变)。该试验在存在或不存在S9混合物和并行的载体(DMSO，20μl/孔)的情况下实施，并且使用阳性对照组，一式两份，在6孔平板中。这些化合物的每一个，在经2X连续稀释的从1000至62.5μg/孔范围内(相当于在标准Ames试验中5000至312.5μg/孔)的5个浓度下，被测试。在37℃下温育48-72小时之后，观察平板以获知化合物的不溶性和细胞毒性，并且经扫描以对回复突变的菌落数进行计数。可再现的超过日平均对照值2倍的增加(>2倍载体对照值)的回复突变的菌落，被认为是各菌株基因突变的正反应。

将化合物1溶于二甲亚砜(DMSO)，其被作为阴性(载体)对照组。2-硝基芴和叠氮化钠分别作为在缺乏TA98和TA100的S9时的阳性对照组。2-氨基蒽作为在存在TA98和TA100的S9时的阳性对照组。

结果

当以50mg/ml的浓度溶于DMSO时，化合物1形成了褐红色的溶液，其是最浓缩的原液溶液。直到以2X连续稀释到3.125mg/ml时，该测试品仍然相对于无色溶液维持为淡褐红色。当该测试品以250μg/孔和上述的浓度与软琼脂混合在一起时，观察到该测试品的沉淀。温育48-72小时之后，仅当缺乏S9混合物并且含有TA98和TA100的250μg/孔中，在解剖显微镜下观察到轻微的测试品沉淀，当存在和缺乏S9混合物并且含有TA98和TA100的500和1000μg/孔中，观察到轻微至中度的测试品沉淀和背景坪的微量减少。当存在和缺乏S9混合物和菌株TA98和TA100测试时，相比于平均对照组，没有回复突变菌落的平均数显著增加的证据(表5)。

目前的研究结果显示：当测试品的浓度上至最高浓度1000μg/孔(相当于标准Ames试验法中的5000μg/平板)时,在存在或缺乏微粒体酶时，化合物1不会引起菌株TA98和TA100的正突变回应。

表5：化合物1的致突变试验结果

实施例18：在肿瘤细胞株中的药效学研究

培养肿瘤细胞株H460(Kras、PI3K)、BT474(HER2、PI3K)、A375(B-Raf)和H1975(EGFR、PI3K)，并经DMSO单独处理(载体对照组)或0.1μmol/L化合物1或参考化合物处理16小时。在SDS和2-巯基乙醇存在下，制备细胞提取物，并且用聚丙烯酰胺凝胶解析。将蛋白质转移到硝基纤维素滤纸上，并使用含指示初级抗体的阻断溶液(Li-CorBioscience)的标准程序以实施杂交。从CellSignalingTechnology购买抗p-EGFR、EGFR、p-HER2、HER2、p-HER3、HER3、p-MET、MET、p-bRaf、p-cRaf、pMEK、MEK、p-ERK、ERK和微管蛋白的初级抗体。使用结合IRdye680、800CW的次级抗体和以Li-CorOdysseyImager检测信号。

免疫细胞化学是对单层培养的生长细胞实施的，其被视为在图例中的指示，然后用4％(v/v)的聚甲醛固定。在用1×PBS清洗之后，用含有指示的初级抗体和IRDye680-或800CW-结合的次级抗体的Li-Cor阻断溶液进行免疫染色。对于细胞内的western法，使用Li-CorOdyssey红外线相机造影检测和定量结果。

为了药效学标记的组织学检验，收集肿瘤异体移植物并且用石蜡包埋，制备4-5-mm的切片。将切片固定于载玻片上，与初级抗体反应之后，与辣根过氧化物酶结合的次级抗体反应(Envisionpolymer-HRP,Dako,Glostrup,Denmark)。然后如供应商建议的条件使用二氨基联苯胺(DAB)以实施呈色反应。使用苏木紫进行切片的负染色。

本研究的结果整理在图7A-7g和8A-8C中。化合物1抑制KRAS-和PI3KCA-突变的H460非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的HDAC活性和PI3K信号通道。在实施Westernblot法或细胞内的western法之前，用DMSO单独(载体对照组)或含有测试化合物的DMSO处理细胞1小时。图7A显示化合物1在1μmol/L时会增加乙酰基化组蛋白3(Ac-H3)、微管蛋白(Ac-Tub)和p53(Ac-p53)的水平。该化合物也可以上调总p53和p21的含量。图7B-7E的数据显示化合物1以剂量依赖方式增加乙酰基化微管蛋白(图7B)、乙酰基化组蛋白3(图7C)、乙酰基化p53(图7D)和乙酰基化p21(图7E)的水平。获得的IC50值提示在检测的癌细胞中，化合物1有可比与HDAC对LBH589的抑制能力。在1μmol/L时，化合物1抑制AKT的活化和下游的信号蛋白4EBP-1和p70S6(图7F)。化合物1也持续而有效地以剂量依赖的方式抑制Akt的磷酸化(图7G)。

PI3K抑制剂治疗癌症的主要限制在于RAF-MEK-ERK路径的活化。HDAC抑制剂能够经epigenetic修饰抑制癌细胞中该信号途径的激酶水平。在有各种突变的癌细胞中，如H460细胞中的KRAS和PI3K突变、A375细胞中的B-Raf突变、BT-474细胞中的HER2和PI3K突变，和H1975细胞中的EGFR突变，100nM的化合物1抑制Raf、MEK和ERK的活化。该有效的HDAC抑制剂LBH589在一些此等的Westernblot试验法中显示了类似的活性(图8A)。

除了抑制PI3K和MEK途径之外，用1μM化合物1处理RPMI-8226骨髓瘤细胞16小时会抑制p-STAT3(Y-705)和p-Src(图8B)。

对于EGFR-L858R-T790M双突变的H1975NSCLC细胞核HER2-过表达BT-474乳腺癌细胞，在温育16小时之后，化合物1显示出会降低酪氨酸激酶受体EGFR、HER2、HER3和MET的磷酸化水平和总量。用LBH589处理这些细胞之后，可以观察到类似的激酶下调的现象(图8C)。

实施例19：PI3K110α、β、γ、δ在血液性异体移植肿瘤模型中的表现

将6-8周龄的雌性免疫缺陷小鼠(Beige/SCID)，饲养在通气的微型隔离笼中，在受控的环境下，任意喂食无菌高脂肪饲料(Problab-RMH2000)，并提供无菌饮用水。SCIDbeige小鼠的所有笼舍和补给品均是一次性的，并且在购买使用之前用Innovive照射。由经过训练的动物设施人员和检查人员每天检查小鼠，包括周末/假日。所有的动物程序均是在生物实验室(注射时)或层流罩(针对动物饲养和非侵入性程序)的无菌条件下实施的。

人类血液癌症细胞株是来源于人类癌症受试者。将冷冻保存的细胞在37℃水浴中解冻，并且在5％CO2的组织培养箱内培养在额外添加10-15％胎牛血清(FBS)的RPMI培养基中。细胞被送到外部供应商检测污染物和啮齿类的病原筛检，以排除支原体(利用PCR)和/或病毒(利用MAP试验，MouseAntibodyProduction)的污染。

当培养基中的细胞达到所期望的数目时，收集并且用无血清的Dulbecco氏磷酸盐缓冲液(DPBS)洗涤。最后用DPBS稀释细胞以供植入。只使用存活率大于90％(利用台盼蓝排除法)的单细胞悬浮液用于注射。在7天的适应期之后，使用0.5CC针管和26G皮下注射器，小心的避开血管，在小鼠右后肢外侧区以每只动物1000-2000万个细胞悬浮于0.1mlDPBS的注射液经由皮下(SC)注射。如果在皮下出现圆形凸起的肿块，则代表已经成功植入。每天对该已经植入的小鼠监控常规健康状况和肿瘤进展状况。

在植入约2周半之后，可以检测到肿瘤。用卡尺测量肿瘤的大小。下式用于计算肿瘤体积：

肿瘤体积＝(长度×宽度²)/2

当肿瘤大小达到约150-300mm³时，将小鼠分为4组，包括3个治疗组(25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg)和1个对照组。在给予化合物1之后，在第15分钟，第1、3、6、24小时收集肿瘤(每个时间点3只小鼠)。肿瘤是将小鼠用CO2安乐死之后，按照上述时间点收集的。样本被放置在干冰中直到移送至-80℃冷冻库以供Westernblot法分析。

按照制造商的说明书使用均质机(Tissuelyser，Qiagen，Valencia，CA)，从肿瘤中提取蛋白质。将保存组织的管子的转接器冷冻在-20℃，溶菌缓冲液和珠子在使用前在4℃下解冻。

将100-200μg的组织在额外补充磷酸酶抑制剂(1:100v/v,Tyr&Ser/Thrphosphataseinhibitorcocktails,Upstate)的300μlT-PERMammalianTissueProteinExtraction试剂(Pierce,Rockford,IL)中均质。每一个循环之后以目测检查样本(时间：0.15分钟；频率：30Hz)直至组织完全被均质为止。在多数情况下，约需要4个循环。在4℃下以14,000rpm将组织溶解物离心10分钟。收集200μl上清液并保存在-80℃下。按照制造商的说明书，使用BCAProteinAssay试剂盒(Pierce，Rockford，IL)测量蛋白质浓度。

将30μg的总蛋白提取物在NuPAGENovex4-12％Bis-Tris凝胶(Invitrogen)上解析，并且使用Bio-RadSemi-DryTransferMachine转移到硝基纤维素膜(Bio-Rad)上。将这些印迹与10ml阻断缓冲液(OdysseyInfraredImagingSystem)一起温育1小时，然后与初级抗体的探针一起在4℃下过夜。初级抗体包括PI3激酶p110α(#4249，1:1000，CellSignaling)、PI3激酶p110β(#3011,1:1000,CellSignaling)、PI3激酶p110γ(#5405,1:1000,CellSignaling)、PI3激酶p110δ(SC-7176(1:1000,SantaCruzBiotechnology,SantaCruz,CA)。在每个试验中，GAPDH(甘油醛3-磷酸脱氢酶，1/30,000，Abcam，Cambridge，MA)被用作内部对照。

用Tris磷酸盐缓冲Tween-20(TBST；DAKO)冲洗该膜4次，然后在室温下和红外线结合的次级抗体(1：1000)：抗兔结合-IRDye800(Rockland)，或抗小鼠结合-Alexa680(MolecularProbes)温育1小时。用TBST清洗该膜，然后放置在OdysseyInfraredImagingSystem中造影和分析。

结果如图15所示，其显示PI3Kp110同型异构体、AKT和来源于数种非霍奇金氏淋巴瘤和多发性骨髓瘤异体移植物的pAKT。其结果显示AKT的活化是由多重PI3Kp110同型异构体所驱动的。

实施例20：在Daudi异体移植肿瘤模型中化合物1和CAL-101的比较

将6-8周龄的雌性SCIDbeige小鼠(CD-1BeigeSCID)，饲养在通气的微型隔离笼中，在受控的环境下，任意喂食无菌高脂肪饲料(Problab-RMH2000)，并提供无菌饮用水。SCIDbeige小鼠的所有笼舍和补给品均是一次性的，并且在购买使用之前用Innovive照射。由经过训练的动物设施人员和检查人员每天检查小鼠，包括周末/假日。所有的动物程序均是在生物实验室(注射时)或层流罩(针对动物饲养和非侵入性程序)的无菌条件下实施的。

Daudi人类Burkitt氏淋巴瘤细胞是来源于人类Burkitt氏淋巴瘤受试者的。将冷冻保存的细胞在37℃水浴中解冻，并且在5％CO2的组织培养箱内培养在额外添加15％胎牛血清(FBS)、1％Penstrep和1％Glutamax的RPMI培养基中。细胞被送到外部供应商检测污染物和啮齿类的病原筛检，以排除支原体(利用PCR)和/或病毒(利用MAP试验，MouseAntibodyProduction)的污染。当培养基中的细胞达到所期望的数目时，通过离心收集。收集之后，用无血清的Dulbecco氏磷酸盐缓冲液(DPBS)洗涤细胞。最后用DPBS稀释细胞以供植入。只使用存活率大于90％(利用台盼蓝排除法)的单细胞悬浮液用于注射。在至少7天的适应期之后，使用0.5CC针管和26G皮下注射器，小心的避开血管，在小鼠右后肢外侧区以每只动物2000万个细胞悬浮于0.1mlDPBS的注射液经由皮下(SC)注射。如果在皮下出现圆形凸起的肿块，则代表已经成功植入。每天对该已经植入的小鼠监控常规健康状况和肿瘤进展状况。

在植入约2周之后，可以检测到肿瘤。用卡尺测量肿瘤的大小。下式用于计算肿瘤体积：

肿瘤体积＝(长度×宽度²)/2

当肿瘤植入4周之后，肿瘤平均尺寸达到约300±126mm³。使用排序软件，将带有可接受肿瘤大小和形状的小鼠随机分为3组，包括1组载体对照组和2个治疗组。

*Qd＝每日给药1次，**PO＝口服胃管给药，***BID，每日2次

将化合物如下配制和给药：将化合物1溶于含有2当量NaOH的30％Captisol，然后用2当量的HCl平衡，并且以口服胃管方式从周一至周五每日给药。对照组使用如同100mg/kg体积(6.67μl/kg)的相同的给药方案，以载体(30％Captisol)给药。

在研究各个动物时，用卡尺测量肿瘤，用上式检测肿瘤大小，并计算肿瘤大小的变化百分比。每周用体重计测量小鼠的体重2次。研究持续进行到：a)研究设计所预定的最后日期；或b)产生健康问题，以两者先发生者为准。此外，以下列肿瘤相关参数作为安乐死的依据：(1)肿瘤载重超过2500mm³和/或(2)减少≥20％的起始体重。除了检测肿瘤大小的变化，最后的肿瘤测量值是被用于生成肿瘤重量变化比(T/C值)，其是由国家癌症研究机构(NCI)发展的用于异体移植肿瘤评估T/C值的标准。T/C是使用下式计算：％T/C＝100×ΔT/ΔC，如果ΔT>0。如果发生肿瘤退化，使用下式：％T/T₀＝100×ΔT/T₀，如果ΔT<0。

针对载体组和CAL-101组，治疗期为15天，其是由于肿瘤大小超过体重的10％而提前结束，针对化合物1的治疗期为18天。在本研究的最后一天，再次测量肿瘤大小和体重。

研究结果如图16所示，其将活性组和对照组的肿瘤生长以治疗时间的函数方式显示。化合物1组相比于CAL-101组合对照组，显示显著降低肿瘤生长。

实施例21：在Daudi异体移植肿瘤模型中化合物1和环磷酰胺的组合

将6-8周龄的雌性SCIDbeige小鼠(CD-1BeigeSCID)，饲养在通气的微型隔离笼中，在受控的环境下，任意喂食无菌高脂肪饲料(Problab-RMH2000)，并提供无菌饮用水。SCIDbeige小鼠的所有笼舍和补给品均是一次性的，并且在购买使用之前用Innovive照射。由经过训练的动物设施人员和检查人员每天检查小鼠，包括周末/假日。所有的动物程序均是在生物实验室(注射时)或层流罩(针对动物饲养和非侵入性程序)的无菌条件下实施的。

Daudi人类Burkitt氏淋巴瘤细胞是来源于人类Burkitt氏淋巴瘤受试者的。将冷冻保存的细胞在37℃水浴中解冻，并且在5％CO2的组织培养箱内培养在额外添加15％胎牛血清(FBS)、1％Penstrep和1％Glutamax的RPMI培养基中。细胞被送到外部供应商检测污染物和啮齿类的病原筛检，以排除支原体(利用PCR)和/或病毒(利用MAP试验，MouseAntibodyProduction)的污染。当培养基中的细胞达到所期望的数目时，通过离心收集。收集之后，用无血清的Dulbecco氏磷酸盐缓冲液(DPBS)洗涤细胞。最后用DPBS稀释细胞以供植入。只使用存活率大于90％(利用台盼蓝排除法)的单细胞悬浮液用于注射。在至少7天的适应期之后，使用0.5CC针管和26G皮下注射器，小心的避开血管，在小鼠右后肢外侧区以每只动物2000万个细胞悬浮于0.1mlDPBS的注射液经由皮下(SC)注射。如果在皮下出现圆形凸起的肿块，则代表已经成功植入。每天对该已经植入的小鼠监控常规健康状况和肿瘤进展状况。

在植入约2周之后，可以检测到肿瘤。用卡尺测量肿瘤的大小。下式用于计算肿瘤体积：

肿瘤体积＝(长度×宽度²)/2

当肿瘤植入4周之后，肿瘤平均尺寸达到约189±47mm³。使用排序软件，将带有可接受肿瘤大小和形状的小鼠随机分为4组，包括1组载体对照组和3个治疗组。

*Qd＝每日给药1次，**PO＝口服胃管给药，***BID，每日2次

将化合物如下配制和给药：将化合物1(7.5mg/ml)溶于含有2当量NaOH的30％Captisol，然后用2当量的HCl平衡，并且以75mg/kg口服胃管方式从周一至周五每日给药。对照组使用如同100mg/kg体积(6.67μl/kg)的相同的给药方案，以载体(30％Captisol)给药。将环磷酰胺(“CTX”)以5mg/ml溶于0.9％NS中，并且在第0天以50mg/kg的剂量经静脉内给予动物(尾部静脉注射)。化合物1和CTX两者组合物组使用相同的给药方案给药。对照组使用与组合物组相同的给药方案，给予载体(30％Captisol)和0.9％NS。

在研究各个动物时，用卡尺测量肿瘤，用上式检测肿瘤大小，并计算肿瘤大小的变化百分比。每周用体重计测量小鼠的体重2次。研究持续进行到：a)研究设计所预定的最后日期；或b)产生健康问题，以两者先发生者为准。此外，以下列肿瘤相关参数作为安乐死的依据：(1)肿瘤载重超过2500mm³和/或(2)减少≥20％的起始体重。除了检测肿瘤大小的变化，最后的肿瘤测量值是被用于生成肿瘤重量变化比(T/C值)，其是由国家癌症研究机构(NCI)发展的用于异体移植肿瘤评估T/C值的标准。T/C是使用下式计算：％T/C＝100×ΔT/ΔC，如果ΔT>0。如果发生肿瘤退化，使用下式：％T/T₀＝100×ΔT/T₀，如果ΔT<0。

治疗期为2周。在本研究的最后一天，再次测量肿瘤大小和体重。

研究结果如图17所示，其针对对照组和治疗组，将肿瘤生长以治疗时间的函数方式显示。对于单一试剂，化合物1和环磷酰胺在该模型中具有类似的活性。化合物1和环磷酰胺的组合物组显示出比任意单一试剂单独使用时具有实质上较高的效力。

实施例22：在MM1S异体移植模型中化合物1和来那度胺的组合

将4周龄的雌性SCID/Beige小鼠，饲养在通气的微型隔离笼(IVC，InnoviveInc.，SanDiego，CA)中，在受控的环境下，任意喂食无菌高脂肪饲料(Problab-RMH2000)，并提供无菌饮用水。SCIDbeige小鼠的所有笼舍和补给品均是一次性的，并且在购买使用之前经高压灭菌蒸汽法消毒。由经过训练的动物设施人员和检查人员每天检查小鼠，包括周末/假日。所有的动物程序均是在生物安全室(注射时)或层流罩(针对动物饲养和非侵入性程序)的无菌条件下实施的。

将冷冻保存的MM1S人类MM细胞在37℃水浴中解冻，并且在5％CO2的组织培养箱内培养在额外添加10％胎牛血清(FBS)的RPMI培养基中。细胞被送到外部供应商检查污染物和啮齿类的病原筛检，以排除支原体(利用PCR)和/或病毒(利用MAP试验，MouseAntibodyProduction)的污染。当培养基中的细胞足以供植入时，将其用无血清的Hank氏经平衡的盐溶液(HBSS)洗涤。最后用HBSS稀释细胞以供植入。只使用存活率大于90％(利用台盼蓝排除法)的单细胞悬浮液用于注射。在至少7天的适应期之后，使用1CC针管和26G皮下注射器，小心的避开血管，在小鼠右后肢外侧区以每只动物2000万个细胞悬浮于0.2mlHBSS的注射液经由皮下(SC)注射。如果在皮下出现圆形凸起的肿块，则代表已经成功植入。每天对该已经植入的小鼠监控常规健康状况和肿瘤进展状况。

在植入后约2周，可以检测到肿瘤。用卡尺测量肿瘤的大小。下式用于计算肿瘤体积：

肿瘤体积＝(长度×宽度²)/2

当肿瘤植入3周之后，肿瘤平均尺寸达到约192±32mm³。使用排序软件，将带有可接受肿瘤大小和形状的小鼠随机分为6组，包括1组载体对照组和6个治疗组，每组7只动物。

*Qd＝每日给药1次，**PO＝口服胃管给药，***BID，每日2次

将化合物以如下方式配制和给药：将化合物1(7.5mg/ml)溶于含有2当量NaOH的30％Captisol，然后用2当量的HCl平衡，并且以75mg/kg口服胃管方式从周一至周五每日给药。将来那度胺(Selleck，2.5mg/ml)配制在MCT(0.5％甲基纤维素和0.2％Tween80)中，并且以12.5mg/kg或25mg/kg的剂量给药。在两个组合物组中，以75mg/kg的化合物1加上一种剂量水平的来那度胺(12.5或25mg/kg)给药。对照组使用与组合物组相同的给药方案，以载体(30％Captisol)合MCT给药。

在研究各个动物时，用卡尺测量肿瘤，用上式检测肿瘤大小，并计算肿瘤大小的变化百分比。每周用体重计测量小鼠的体重2次。研究持续进行到：a)研究设计所预定的最后日期；或b)产生健康问题，以两者先发生者为准。此外，以下列肿瘤相关参数作为安乐死的依据：(1)肿瘤载重超过2500mm³和/或(2)减少≥20％的起始体重。除了检测肿瘤大小的变化，最后的肿瘤测量值是被用于生成肿瘤重量变化比(T/C值)，其是由国家癌症研究机构(NCI)发展的用于异体移植肿瘤评估T/C值的标准。T/C是使用下式计算：％T/C＝100×ΔT/ΔC，如果ΔT>0。如果发生肿瘤退化，使用下式：％T/T₀＝100×ΔT/T₀，如果ΔT<0。

治疗期为17天。在本研究的最后一天，再次测量肿瘤大小和体重。

研究结果如图18所示，其将肿瘤生长以治疗时间的函数方式显示。结果显示对于单一试剂，口服75mg/kg的化合物1比口服12.5或25mg/kg的来那度胺更加有效。结果也显示化合物1和来那度胺的组合物组比任意单一试剂单独使用时具有显著较高的效力。

本发明中所提及的所述的专利文献以及科学文献建立了本领域技术人员可以获得的知识。在本发明中所引用的全部的美国专利以及公开的或者未被公开的美国专利申请均被引入作为参考。在本发明中所引用的全部的外国专利以及专利申请均被引入作为参考。在本发明中所引用的全部的其他公开参考书，文献，手稿以及科学文献均被引入作为参考。

尽管本发明参照其优选的实施方案被进行了特别的表示以及描述，本领域技术人员将能够理解的是，在不背离由后附的权利要求所涵盖的本发明的范围的前提下，可以进行各种形式上以及细节上的改变。

Claims (20)

1.式(I)化合物，

或其药学上可接受的盐，其中R为氢或酰基。

2.权利要求1的化合物，其中R为R₁C(O)-，R1是被取代的或未被取代的C₁-C₂₄-烷基；被取代的或未被取代的C₂-C₂₄-烯基，优选C₂-C₂₄-烯基，和更优选C₂-C₆-烯基；被取代的或未被取代的C₂-C₂₄-炔基；被取代的或未被取代的芳基；或被取代的或未被取代的杂芳基。

3.权利要求1的化合物，其中R为H或乙酰基。

4.由式表示的权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。

5.一种药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求1的化合物和药学上可接受载体。

6.一种用于口服给药的药物组合物，包括作为活性成分的权利要求1的化合物和药学上可接受载体。

7.一种药物组合物，其包含作为活性成分的权利要求4的化合物和药学上可接受载体。

8.一种用于口服给药的药物组合物，包括作为活性成分的权利要求4的化合物和药学上可接受载体。

9.一种用于在有此需求的受试者中治疗PI3K相关性疾病或病症的方法，该方法包括给予该受试者治疗有效量的权利要求5的药物组合物。

10.根据权利要求9的方法，其中所述PI3K相关性疾病或病症是细胞增殖性病症。

11.根据权利要求10的方法，其中细胞增殖性病症是癌症。

12.根据权利要求11的方法，其中该癌症选自由***状瘤、胚神经胶质瘤、卡波济氏肉瘤、恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、***癌、鳞状细胞癌、星形细胞瘤、头癌、颈癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、大肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、白血病、淋巴瘤、霍奇金氏病和伯基特氏病组成的组。

13.一种用于治疗HDAC-介导的疾病的方法，包括给予有此需求的受试者权利要求5的药物组合物。

14.一种用于治疗由PI3K和HDAC两者-介导的疾病的方法，包括给予有此需求的受试者权利要求5的药物组合物。

15.一种用于在有此需求的受试者中治疗PI3K相关性疾病或病症的方法，该方法包括给予该受试者治疗有效量的权利要求7的药物组合物。

16.根据权利要求13的方法，其中所述PI3K相关性疾病或病症是细胞增殖性病症。

17.根据权利要求16的方法，其中细胞增殖性病症是癌症。

18.根据权利要求17的方法，其中该癌症选自由***状瘤、胚神经胶质瘤、卡波济氏肉瘤、恶性黑色素瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、***癌、鳞状细胞癌、星形细胞瘤、头癌、颈癌、膀胱癌、乳腺癌、肺癌、大肠癌、甲状腺癌、胰腺癌、胃癌、肝癌、白血病、淋巴瘤、霍奇金氏病和伯基特氏病组成的组。

19.一种用于治疗HDAC-介导的疾病的方法，包括给予有此需求的受试者权利要求7的药物组合物。

20.一种用于治疗由PI3K和HDAC两者-介导的疾病的方法，包括给予有此需求的受试者权利要求7的药物组合物。