CN105412261A - 一种药物组合物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于预防或治疗癌症的药物组合物,其由算盘七、肿节风、白术和茯苓制成。本发明还涉及所述组合物的制备方法及其在制备用于治疗或抑制癌症的药物中的用途。本发明的组合物能够有效预防和治疗癌症,特别是消化道癌症,尤其可用于预防结肠直肠癌手术后的复发。
Description
技术领域
本发明涉及一种抗癌药物组合物及其制备方法。本发明还涉及所述药物组合物在制备用于治疗或预防癌症,尤其是消化道癌症的药物中的用途。
背景技术
癌症作为活宿主生物中的异常组织块而发生,它从宿主中接收营养而不依赖于宿主地过度增殖,并且破坏宿主机体。人体器官由大量细胞构成。当人体的正常细胞变成异常细胞并且该异常细胞不加检查地***和增殖时,就发生癌症。尽管遗传因素与癌症的发病密切相关,但环境因素也对个体是否发生癌症产生重要影响。癌症在发达国家尤其普遍。有报道称,导致癌症的原因是对农药、杀虫剂等的使用增加(因此这类物质在食品中的残留量增加),对包含添加剂(如食品防腐剂和着色剂)的加工食品的消费增加,对水、土壤和空气的污染的增加,现代生活的压力,活动的减少,油腻的饮食习惯所引起的肥胖,等等。近年来,有人指出,当正常细胞的细胞信号***发生故障,当癌症基因被激活,或当抑癌基因发生故障时,就引发癌症。
胃肠道癌症,或者说消化***癌症是一类发生在消化***中的癌症,其包括食管癌、胆囊癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、小肠癌、大肠(结肠)癌和直肠癌等。各种形式的胃肠癌占每年全部新诊出癌症的约20%。结肠直肠癌包括结肠、直肠和阑尾中的癌生长。它是当今世界中第三大最常见的癌症形式和癌相关死亡的第二大首要原因。结肠癌和直肠癌常统称为结肠直肠癌,占男性癌中的10%和女性癌中的11%。它是影响男性和女性的第二大最常见的部位特异性癌。很多结肠直肠癌被认为源自结肠中的腺瘤性息肉。这些蘑菇样的生长物通常是良性的,但其中有些可随着时间发展成癌。结肠直肠癌常常表现为转移性疾病,这妨碍了手术的治愈效果。目前其治疗普遍采用以手术切除后为主的综合治疗防止其复发,包括西医综合治疗、中医综合治疗以及中西医综合治疗,其中以中西医综合治疗在防止复发方面效果好,但仍缺乏行之有效的药物。流行病学调查显示,其手术后复发率高达50%以上,这严重威胁着患者的生命安全和生存质量。
现有技术中存在多种癌症治疗方法,如手术治疗、化学疗法和放射疗法。手术治疗方法在早期阶段有效地去除癌症,但是,缺点是有时不得不摘除器官,这会导致副作用,并且具有癌症扩散至其他器官的不确定性。放射治疗有利于有效地治疗在一个特定器官发生的癌症,但是有以下缺点:因为辐射而使患者暴露于其他癌症风险,无法防止癌细胞扩散到其他器官,并且在治疗过程中患者要承受很大的痛苦。化学疗法通常使用抗癌药物进行,但是已知抗癌药物的毒性不仅作用于癌细胞,也作用于患者的正常细胞,造成副作用。
因此,有必要寻找具有更好效果和/或更小毒性的新的抗癌药物,特别是针对消化道癌症的药物,尤其是能有效降低结肠直肠癌术后复发的药物或疗法。
发明内容
为了克服现有技术中的不足,提供消化道癌症的有效治疗方法和治疗药物,发明人进行了大量的筛选和研究。
中医认为,癌症等肿块为“有形之血”瘀结而成,故患者多呈血瘀证。对血管内众多的癌细胞等异物,血小板与纤维蛋白会迅速聚集,将其包围起来,形成体积庞大的癌栓。癌栓在血流缓慢的血液高黏状态中,极易在原发病灶区以外的某一血管壁处停留,从而形成继发转移病灶。这是癌症经血液转移、复发的重要原因,也可以说明为什么癌症的转移灶在血液丰富的肝、肺、脑等处特别多见。因此,活血化瘀是传统中医药对于癌症的重要治则。
白术和茯苓是常用的中药。肿节风(Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai),性苦、辛、平,具有活血消斑,清热凉血,祛风通络之功能。
算盘七(PolygonumsuffultumMaxim.)微苦,涩,性平;具有收敛止血,止痛生肌,止血止痢的功能。
在实验研究中,发明人偶然发现,将具有收敛止血功能的算盘七与肿节风和白术、茯苓联用,可有效治疗和预防癌症。这一结果完全是出乎发明人意料之外的。
因此,在一个方面,本发明提供了由算盘七、肿节风、白术、茯苓制得的药物组合物。所述组合物可用于治疗或预防癌症。
在一个优选实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七1~400、肿节风1~400、白术1~200、茯苓1~200。
在另一个优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七1~200、肿节风1~200、白术1~100、茯苓1~100。
在另一个优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七1~100、肿节风1~100、白术1~50、茯苓1~50。
在另一个优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七1~10、肿节风1~10、白术1~5、茯苓1~5。
在另一个优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七1~5、肿节风1~5、白术1~2、茯苓1~2。
在另一个优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七1~2、肿节风1~2、白术1~2、茯苓1~2。
在一个特别优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七360、肿节风300、白术195、茯苓195。
在一个特别优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七240、肿节风200、白术125、茯苓125。
在一个特别优选的实施方案中,本发明的药物组合物其由下列重量份的原料药制成:算盘七120、肿节风100、白术65、茯苓65。
本发明的药物组合物可以直接以粉末的形式制备。例如,在净选、清洗上述各药材后,将其切碎并相互混合。任选地,可将所述混合药材粉碎至适当粒度,所得粉末可直接施用。
优选地,本发明的药物组合物可由所述原料经提取制得。可以采用任何合适的提取方法进行提取。特别地,可以使用基于水或有机溶剂的溶剂提取法。在这种情况下,水、醇(优选乙醇)或者水和10-70%醇的混合物可以用作有机溶剂。
提取物可以浓缩并且经干燥(例如冻干或用热风吹干等方式)和任选的粉碎处理成粉末状。
通常,可以采用以下的一般提取方法。
将净选和任选洗净后的原料药材在不超过80℃的温度下在提取溶剂中浸泡适当时间(例如半小时);之后,在合适的温度下(例如80-100℃)提取1-3次,每次1-4小时,合并提取液即可。提取液可根据需要任选地进行浓缩、干燥处理,从而得到粉末形式的提取物。
可按照《中药大辞典》或《全国中药炮制规范》对本发明中所用的以下原料药材进行炮制处理:算盘七(PolygonumsuffultumMaxim.)、肿节风(Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai)、白术(AtractylodisMacrocephalae)、茯苓(RhizomaSmilacisGlabraeP.E)。
在另一个方面,本发明还涉及本发明的组合物在制备用于治疗或预防癌症的药物中的用途。
在一个优选的方面,所述癌症选自消化道癌症或消化***癌症。特别地,所述消化***癌症选自结肠直肠癌、小肠癌、胃癌、肝癌、食管癌、胆囊癌和胰腺癌。
在一个特别优选的方面,本发明涉及所述组合物在制备用于预防结肠直肠癌手术后复发的药物中的用途。在一个特别优选的方面,本发明涉及所述组合物在制备用于预防结肠癌手术后复发的药物中的用途。在一个优选的方面,所述结肠直肠癌手术或结肠癌手术为腹腔镜术。
本发明的药物组合物可以是任何合适的剂型,例如胶囊剂、片剂、散剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂等形式。
附图说明
图1示出了本发明实施例1的组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h后对线粒体细胞膜电位的影响。
图2示出了本发明实施例2的组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h后细胞色素C在细胞质内含量的变化。
图3示出了本发明实施例3的组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h后在倒置荧光显微镜下观察到的细胞形态学变化。
具体实施方式:
为了更好地理解和实施本发明,下面结合具体实施例进一步说明本发明。
本发明中所用原料药材都是现有技术中已知的药材。
算盘七,为蓼科蓼属植物支柱蓼(拉丁名:PolygonumsuffultumMaxim.),以根状茎入药。微苦,涩,性平;功能主治:收敛止血,止痛生肌,止血止痢,可用于跌打损伤,外伤出血,便血,崩漏,脱肛。
肿节风,为肿节风(拉丁名:Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai)的干燥全株。苦、辛、平;功能主治:清热凉血,活血消斑,祛风通络,可用于血热紫斑、紫癜,风湿痹痛,跌打损伤。
白术(拉丁名:RhizomaAtractylodisMacrocephalae):苦,甘,性温;功能主治:健脾益气,燥湿利水,止汗,安胎,可用于脾虚食少,腹胀泄泻,痰饮眩悸,水肿,自汗,胎动不安。
茯苓(拉丁名:RhizomaSmilacisGlabraeP.E):味甘,淡,性平;功能主治:水肿尿少,痰饮眩悸,脾虚食少,便溏泄泻,心神不安,惊悸失眠。
与现有技术相比,本发明具有如下优点:
(1)本发明的组合物,可以通过诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤细胞生长等途径调节肿瘤微环境,因此对癌症的治疗或预防均有明显效果,特别可用于消化道癌症的治疗或预防;
(2)本发明组合物易于制备,工艺简单稳定高效,适合工业化生产,成本低;
(3)本发明组合物采用天然药材为原料,安全可靠高效,无明显副作用;
(4)本发明的组合物能够明显缓解患者术后不良症状,改善生活质量,延长生存期。
通常,对于药物应用,本发明的组合物可被配制为含有本发明组合物和至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂和/或佐剂、以及任选地一种或多种其它药物活性化合物的药物制剂。
通过非限定性实例的方式,这样的制剂可以是适于口服施用、适于胃肠外使用(比如通过静脉内、肌肉内或皮下注射或静脉内输注)、适于局部施用、通过栓剂等的形式。这些合适的施用形式-其可以是固体、半固体或液体,取决于施用方式-以及用于其制备的方法和载体、稀释剂和赋形剂对于本领域技术人员而言将是清楚的;再次参考例如US-A-6,372,778、US-A-6,369,086、US-A-6,369,087和US-A-6,372,733以及标准手册,比如最新版的Remington′sPharmaceuticalSciences。
这些制剂的一些优选但非限定性的实例包括片剂、丸剂、粉末、锭剂、小袋剂(sachet)、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳液剂、溶液剂、糖浆剂、气雾剂、软膏剂、乳膏剂、洗剂、软和硬明胶胶囊、栓剂、滴眼剂、用于作为推注和/或持续施用的无菌注射溶液和无菌包装粉末(其通常在使用前再配制),其可与本身适合这些制剂的载体、赋形剂和稀释剂配制,比如乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、***胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、纤维素、(无菌)水、甲基纤维素、羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸镁、食用油、植物油和矿物油或其合适的混合物。所述制剂可任选地包含其它药物活性物质(其可以导致或不导致与本发明化合物的协同作用)和通常用于药物制剂中的其它物质,比如润滑剂、润湿剂、乳化剂和助悬剂、分散剂、崩解剂、增容剂、填充剂、防腐剂、甜味剂、调味剂、流动调节剂(flowregulator)、释放剂(releaseagent)等。所述组合物也可配制为用于提供其中包含的一种或多种活性化合物的快速释放、持续释放或延迟释放,例如使用脂质体或基于天然凝胶或合成聚合物的亲水性聚合物基质。为提高根据本发明的药物组合物的化合物的溶解度和/或稳定性,可以有利地使用α-、β-或γ-环糊精或其衍生物。此外,共溶剂比如醇可改善所述化合物的溶解度和/或稳定性。在水性组合物的制备中,加入本发明化合物的盐可能更合适,这归因于其增加的水溶解度。
本发明所述中药均可按照《中药大辞典》或《全国中药炮制规范》进行炮制。本发明药物其特征在于由以下重量份数的中药原料配制而成:算盘七(拉丁名:PolygonumsuffultumMaxim.)120-360、肿节风(拉丁名:Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai)100-300、白术(拉丁名:RhizomaAtractylodisMacrocephalae)65-195、茯苓(拉丁名:RhizomaSmilacisGlabraeP.E)65-195。
优选的,该中药组合物由如下重量份的原料药制成:
算盘七360、肿节风300、白术195、茯苓195
或
算盘七240、肿节风200、白术125、茯苓125
或
算盘七120、肿节风100、白术65、茯苓65
优选的,所述中药组合物所用原料药中,白术为生白术。
在一个优选的实施方案中,本发明的药物组合物可以通过以下步骤制成:
(1)、按照原料药重量比例称取中药材,净选;
(2)、算盘七、肿节风加6-10倍量的50-90%乙醇提取1-3次,每次1-4小时,合并提取液,过滤,滤液回收乙醇至无醇味,滤液及药渣备用;
(3)、白术加4-8倍量的水提取挥发油,收集挥发油,另器收集,残渣及水溶液备用;
(4)、茯苓粉碎成细粉;
(5)、步骤(2)中所得算盘七、肿节风的醇提后残渣与步骤(3)中所得白术提油后残渣合并,加7-10倍量水,加热煎煮1-3次,每次1-3小时,合并煎煮液,加入步骤(2)中所得算盘七、肿节风滤液和步骤(3)中的水溶液,浓缩至药液在70℃测时相对密度为1.09-1.31,干燥,粉碎,备用;
步骤(4)所得粉碎粉、步骤(3)所得挥发油与步骤(5)所得的干膏粉合并,共同构成本发明的药物组合物。
本发明药物的剂型可以是任何适于应用的形式,例如为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂。
在本发明的一个实施方案中,本发明的药物剂型是胶囊剂,其由以下步骤制成:
(1)、按照原料药重量比例称取中药材,净选;
(2)、算盘七、肿节风,加8倍量的60%乙醇回流提取2次,第一次3小时,第二次2小时,合并提取液,回收乙醇至无醇味,滤液和算盘七、肿节风残渣备用;
(3)、白术提取挥发油,提取时间为6-12小时,挥发油另器收集,残渣及水溶液备用;
(4)、茯苓粉碎成细粉;
(5)、步骤(2)中所得算盘七、肿节风的醇提后残渣,及步骤(3)中所得的白术提油后残渣合并,加9倍量水,加热煎煮2次,每次2小时,合并煎煮液,加入步骤(2)中所得算盘七、肿节风醇提液和步骤(3)所得水溶液,浓缩成相对密度1.20-1.25的清膏,干燥,粉碎,备用;
向步骤(5)所得干膏粉中加入适当的药学上可接受的辅料制粒;
(6)、将步骤(3)中所得挥发油喷入步聚(4)中所得茯苓的细粉中,混匀,并进一步与步骤(5)所得的颗粒混匀,密闭半小时,装胶囊即得。
为使上述剂型能够实现,可能需在制备这些剂型时加入药学可接受的辅料,例如:填充剂、崩解剂、润滑剂、助悬剂、防腐剂、粘合剂、甜味剂、矫味剂、基质等。填充剂包括:淀粉、预胶化淀粉、乳糖、甘露醇、甲壳素、微晶纤维素、蔗糖等;崩解剂包括:淀粉、预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚乙烯吡咯烷酮、低取代羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素钠等;润滑剂包括:硬脂酸镁、十二烷基硫酸钠、滑石粉、二氧化硅等;助悬剂包括:聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素、蔗糖、琼脂、羟丙基甲基纤维素等;防腐剂包括:苯甲酸钠、尼泊金类、苯甲酸、山梨酸及其盐类、苯扎溴铵、醋酸氯乙定、桉叶油等;粘合剂包括:淀粉浆、甲基纤维素、羟丙纤维素、羟丙甲纤维素、羟甲基纤维素钠、乙基纤维素、聚维酮、明胶、聚乙二醇等;甜味剂包括:糖精钠、阿斯帕坦、蔗糖、甜蜜素、甘草次酸等;矫味剂包括:甜味剂及各种香精;基质包括:PEG6000,PEG4000,虫蜡等。为使上述剂型能够实现中药药剂学,需在制备这些剂型时加入药学可接受的其它辅料([英]R.C.罗[美]P.J.舍斯基[英]P.J.韦勒编,郑俊民主译《药用辅料手册》,化学工业出版社2005年1月第1版中记载的辅料)。
本发明药物的其他剂型按比例称取原料药后,采用常规的制备方法制备,例如,杨桂明《中药药剂学》(人民卫生出版社2010年9月第2版)记载的制备工艺,制成药剂学可接受的常规剂型。
为了更好地理解和实施本发明,下面结合具体实施例进一步说明本发明。
制备例1
原料药配方为:
取算盘七360g、肿节风300g、白术195g、茯苓195g。
制备方法为:
(1)按照原料药重量比例称取中药材,净选;
(2)算盘七、肿节风,加8倍量60%乙醇回流提取2次,第一次3小时,第二次2小时,合并提取液,回收乙醇至无醇味,滤液和算盘七、肿节风残渣备用;
(3)白术提取挥发油,提油时间8小时,挥发油另器收集,残渣及水溶液备用;
(4)茯苓粉碎成200目细粉,于6KGY60CO-γ辐射灭菌后备用;
(5)步骤(2)中所得算盘七、肿节风的醇提后残渣,及步骤(3)中所得白术提油后残渣合并,加9倍量水,加热煎煮2次,每次2小时,合并煎煮液,加入步骤(2)中所得算盘七、肿节风醇提液和步骤(3)所得水溶液,浓缩成相对密度1.20-1.25的清膏,干燥,粉碎,备用;
向步骤(5)所得干膏粉中加入淀粉120g,用75%乙醇制粒;
(6)将步骤(3)中所得挥发油喷入步聚(4)中所得茯苓的细粉中,混匀,并与步骤(5)中所得的颗粒混匀,密闭半小时,装胶囊即得。
制备例2
原料药配方为:
取算盘七240g、肿节风200g、白术125g、茯苓125g。
制备方法为:
(1)按照原料药重量比例称取中药材,净选;
(2)算盘七、肿节风,加8倍量85%乙醇回流提取2次,第一次3小时,第二次2小时,合并提取液,回收乙醇至无醇味,滤液和算盘七、肿节风残渣备用;
(3)白术提取挥发油,提油时间10小时,挥发油另器收集,残渣及水溶液备用;
(4)茯苓粉碎成200目细粉,于6KGY60CO-γ辐射灭菌后备用;
(5)将步骤(2)中所得算盘七、肿节风的醇提后残渣以及步骤(3)中所得白术提油后残渣合并,加9倍量水,加热煎煮2次,每次2小时,合并煎煮液,加入步骤(2)中所得算盘七、肿节风醇提取液和步骤(3)所得水溶液,浓缩成相对密度1.20-1.25的清膏,干燥,粉碎,备用;
向步骤(5)所得干膏粉中加入淀粉115g,用72%乙醇制粒;
(6)将步骤(3)中所得挥发油用85%乙醇溶解,喷入步骤(4)中所得茯苓的细粉中,混匀,并与步骤(5)中所得的颗粒混匀,按常规制剂方法制成2000片片剂。
制备例3
原料药配方为:
取算盘七120g、肿节风100g、白术65g、茯苓65g。
制备方法为:
(1)按照原料药重量比例称取中药材,净选;
(2)算盘七、肿节风,加10倍量50%乙醇回流提取2次,第一次3小时,第二次2小时,合并提取液,回收乙醇至无醇味,滤液与算盘七、肿节风残渣备用;
(3)白术提取挥发油,提油时间10小时,挥发油另器收集,残渣及水溶液备用;
(4)茯苓粉碎成200目细粉,于6KGY60CO-γ辐射灭菌后备用;
(5)步骤(2)中所得算盘七、肿节风的醇提后残渣以及步骤(3)中所得白术提油后残渣合并,加9倍量水,加热煎煮2次,每次2小时,合并煎煮液,加入步骤(2)中所得算盘七、肿节风醇提取液和步骤(3)所得水溶液,浓缩成相对密度1.20-1.25的清膏,干燥,粉碎,备用;
(6)将步骤(3)中所得挥发油用85%乙醇溶解,喷入步骤(4)中所得茯苓的细粉中,混匀,并与步骤(5)中所得的干膏粉混匀,按常规制剂方法制成2000丸丸剂。
生物活性实验
实施例1本发明的药物组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h后线粒体细胞膜电位
所需仪器和试剂:流式细胞仪(BeckmanMoFloXDP)、高速离心机(BeckmanAllegraX-15R)、CO2培养箱、1.5mLMicrotube、载玻片、盖玻片(荧光显微镜观察需用)、PBS、灭菌去离子水。HT29人结肠癌细胞株购自上海酶研生物科技有限公司,保存于液氮中。
HT29细胞用含10%Gibco胎牛血清DMEM培养基培养,置于37℃饱和湿度、含5%CO2的恒温箱中培养,以1×104细胞/孔的密度接种于96孔板内,每孔100μL。贴壁24h后吸去60μL培养基,加配置好相应浓度的本发明药物组合物样品(制备例1中所得胶囊的内容物)50μL,终浓度分别为0.5mg/mL、0.1mg/mL、0.02mg/mL,10μLBMP2调整至终浓度200ng/mL。用PBS洗涤细胞二次(离心2000rpm,5min),收集不多于1×106的细胞;取100μL10×IncubationBuffer加900μL灭菌去离子水稀释成1×IncubationBuffer,混匀并预热至37℃;4.吸取500μL1×IncubationBuffer,加入1μLJC-1,涡旋混匀配成JC-1工作液;取500μLJC-1工作液将细胞均匀悬浮,37℃,5%CO2的培养箱中孵育15-20min室温离心(2000rpm,5min)收集细胞,用1×IncubationBuffer洗两次吸取500μL1×IncubationBuffer重新悬浮细胞,最后用流式细胞仪分析。
实验结果如图1所示。结果表明,本发明的药物组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h后,HT29人结肠癌细胞的线粒体细胞膜电位显著降低。已经知道,线粒体跨膜电位DYmt的下降,被认为是细胞凋亡(Apoptosis)级联反应过程中最早发生的事件,它发生在细胞核凋亡特征(染色质浓缩、DNA断裂)出现之前,一旦线粒体DYmt崩溃,则细胞凋亡(Apoptosis)不可逆转。本发明的药物组合物显著降低HT29人结肠癌细胞的线粒体细胞膜电位,从而诱导癌症细胞的凋亡,发挥抗肿瘤活性。
实施例2本发明的药物组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h后,细胞色素C在细胞质内及线粒体中的含量分布。
用本发明的药物组合物(制备例2所得)的相应浓度样品50μL处理HT29细胞,用PBS(pH7.4)涤1次后,然后加入5倍体积的缓冲液-培养基(含有70mM蔗糖,220mM甘露醇,2.5mMHEPEs,pH7.4,2mMEDTA,1mMDTT,and0.1mMPMSF),用杜恩斯匀浆器(20strokes)进行匀浆,600g,10min离心2次以除去细胞核及碎片。得到的上清继续在12000rpm离心15min,收集细胞沉淀即得到线粒体碎片,将其重悬于缓冲液-培养基中,此时的上清液即为细胞质碎片,将上述得到的线粒体碎片和细胞质碎片用蛋白检测试剂盒测定其蛋白含量。用12%SDS-聚丙烯凝胶,按50μg/孔的量进行电泳(western-blot),实验结束后将凝胶进行转膜实验。
实验结果如图2所示。结果表明,本发明的药物组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h,在不同时间观察细胞色素C在细胞质和线粒体中的浓度变化,在细胞质中细胞色素C的浓度逐渐升高,而线粒体中细胞色素C的浓度逐渐降低。在正常细胞中,细胞色素C只存在于线粒体中,是参与细胞凋亡不可或缺的重要因子,在多种细胞的凋亡过程中起着关键的凋亡信号放大作用,在细胞凋亡时才会从细胞核中转移到胞浆中。实验结果表明,本发明的药物组合物引起细胞色素C在HT29人结肠癌细胞胞质中的释放,诱导癌症细胞的凋亡,从而发挥抗肿瘤活性。
实施例3本发明的药物组合物对HT29人结肠癌细胞作用48h后,在倒置荧光显微镜下观察细胞的形态学。
取对数生长期2×105个HT29细胞(1ml细胞悬液)接种于6孔板,24h后,待细胞长满6孔板,用终浓度50μg/ml的样品(制备例2中的样品)对细胞处理48h。收集对照组细胞及经样品处理的细胞,1000rpm×10min离心后用PBS洗两遍,再加入1ml1%的多聚甲醛溶液,室温固定细胞1h,用毛细管吸取少量细胞液滴片,使细胞液在载玻片上均匀散开,自然晾干。待固定液挥发后,滴加Hoechst33258工作液直至将玻片全部覆盖,室温避光染色20min,去除染色液后,三蒸水冲净,室温下避光干燥,盖上盖玻片,用封片液封片,荧光显微镜下观察。
实验结果如图3所示。结果表明,倒置显微镜下观察到HT29人结肠癌细胞的形态学改变,对照组细胞保持贴壁生长,细胞内质均匀,透明发亮,细胞颗粒较少,胞间界限清楚,细胞核隐约可见,状态良好。而经本发明样品处理后的HT29人结肠癌细胞形态有所改变,表现为贴壁细胞减少,细胞颗粒增加,少量细胞体积变小,细胞透光性减弱,实验表明本发明的药物组合物引起HT29人结肠癌细胞生长形态变化,诱导癌症细胞的凋亡,从而发挥抗肿瘤活性。
需要指出的是,可以通过将本发明的药物组合物(粉末或提取物)通过常规工艺制成药剂学上的各种剂型,用于制备具有辅助抑制结肠癌功效的中药,剂型可以为胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围。
临床观察
1、一般资料
发明人2010年6月-2012年5月间共收集75例接受结肠癌手术(腹腔镜)的门诊患者,其中男33例,女42例。随机分为:治疗组50例,对照组25例。两组性别、年龄、病情等资料均无显著性差异,具有可比性。
2、试验方法
对照组口服甲酰四氢叶酸钙和5-氟尿嘧啶,按照说明书使用。15天为一个疗程,持续3个月。
治疗组口服本发明按照具体实施例2制得的散剂,每日分2次服用。15天为一个疗程,持续3个月。
3、疗效标准与治疗结果
疗效标准
痊愈:临床症状全部消失,停药两个月未见复发。好转:临床症状减轻。无效:临床症状无明显好转或加重。
3.2治疗统计结果见表1
组别 | 例数 | 痊愈 | 好转 | 无效 | 不良反应例 | 总有效率(%) |
治疗组 | 50 | 37 | 6 | 7 | 0(0%) | 86% |
对照组 | 25 | 0 | 15 | 4 | 6 | 60% |
附两例随访观察结果:
病例1:林某某,女,63岁,恩施州巴东县人,2010年7月确认结肠癌早期,住院接受结肠癌腹腔镜手术,20天出院,服用本发明的药物,3个月后无复发。随访一年无复发。
病例2:李某,男,57岁,恩施州来凤县人,2011年4月确认结肠癌早期,接受结肠癌腹腔镜手术,术后服用本发明药物,6个月后无复发。随访一年无复发。
由以上结果可见,本发明的药物组合物能够安全有效地预防结肠癌手术后的复发。
本发明内容仅仅举例说明了要求保护的一些具体实施方案,其中一个或多个技术方案中所记载的技术特征可以与任意的一个或多个技术方案相组合,这些经组合而得到的技术方案也在本申请保护范围内,就像这些经组合而得到的技术方案已经在本发明公开内容中具体记载一样。
Claims (5)
1.由以下原料药制成的药物组合物在制备用于治疗或预防结肠直肠癌手术后复发的药物中的用途:算盘七、肿节风、白术、茯苓。
2.根据权利要求1所述的用途,其中所述药物组合物由下列重量份的原料药制成:
算盘七1~400、肿节风1~400、白术1~200、茯苓1~200。
3.根据权利要求1所述的用途,其中所述药物组合物由下列重量份的原料药制成:
算盘七360、肿节风300、白术195、茯苓195;或者算盘七240、肿节风200、白术125、茯苓125;或者算盘七120、肿节风100、白术65、茯苓65。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的用途,其为胶囊剂、片剂、散剂、口服液、丸剂、酊剂、糖浆剂、栓剂、凝胶剂、喷雾剂或注射剂的形式。
5.权利要求1至4中任一项所述的用途,其中所述结肠直肠癌手术是结肠直肠癌腹腔镜术。
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