CN105403654A - 一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，具体步骤如下：(1)首先将黄芪研磨为粉末，用称量天平精确称取该粉末2-3g，加入三氯甲烷-正丁醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液皂化处理，再次加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液，加热回流0.5-1h，蒸干，残渣加水30ml使溶解，超声提取30min-40min后，再加入乙酸乙酯萃取两次这个作为供试样，点样于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂，先展开，再取出，再晾干，置JL-P10A观片灯下或日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，解决了黄芪甲苷在色谱中的清晰度不高的问题，是一种准确、清晰而又快速的鉴别黄芪的方法。

Description

一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法。
背景技术
本品为豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根，春、秋二季采挖，除去须根和根头，冲洗干净，润透，趁鲜切厚片，干燥，称为“黄芪片”，本品表面淡棕黄色或淡棕褐色，有不整齐的纵沟纹或纵沟。质硬而韧，断面纤维性强，并显粉性，皮部黄白色，木部淡黄色，有放射状纹理和裂隙。气微，味微甜，嚼之微有豆腥味。
中药质量标准的工作现已全面展开，中医药学者结合当前质量标准研究中有关问题，提出了一些看法。首先是标题的拟定，最好能体现出检验方法的建立和标准规格的制定两项内容，其次重要的是鉴别实验，主要解决被检药物的真伪问题，有性状鉴别、显微鉴别和理化鉴别等。理化鉴别中除一般的化学实验如颜色反应外，当前大量应用的是层析法，而又以薄层层析应用最广泛，因其简便、易行、灵敏度高、专属性强，具有分离与鉴定双重功能，特别适用于成分复杂的中药及其制剂的鉴别，只要一些特征斑点具再现性，就可作为确认依据，在薄层实验中可以选用化学单体、提取物、药材对照品等来做对照鉴别。
中国药典2010，(附录ⅥB)，提供了照薄层色谱法试验，通过对样品加热回流，滤过，滤液加于中性氧化铝柱，收集洗脱液，蒸干，残渣溶解，提取、洗涤等步骤完成，作为供试品溶液，进行点样，但是其需要过中性氧化铝柱，成本高，其色谱清晰度不高。
发明内容
本发明为了克服现有技术中上述不足问题，提供一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，在回流过滤后的残渣中加入了皂化液皂化，方法简单，除杂质效果明显且提高了黄芪甲苷在色谱中的清晰度。
为了实现上述目的，本发明一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法包括以下步骤：
(1)首先将黄芪研磨为粉末，用称量天平精确称取该粉末2-3g，加入三氯甲烷-正丁醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液，置于60℃-65℃恒温水浴30min-40min；滤过，再次加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液，置100℃水浴加热回流0.5-1h，蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄芪残渣充分溶解后，超声提取30min-40min后，再加入乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，这个作为供试样；
(2)吸取5μl上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂，先展开，再取出，再晾干，置JL-P10A观片灯下或日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，在薄板上可以很稳定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内橙黄色显色较为稳定，即可判断为黄芪。
所述的步骤(1)中三氯甲烷与正丁醇体积比为2：1。
所述的步骤(1)中超声提取功率为40-90W，超声温度是4℃-10℃，提取1-4次。
所述的步骤(1)中所述的中KOH-甲醇皂化液质量浓度：20％。
所述的步骤(2)中所述的展开剂为：三氯甲烷与正己烷，其中三氯甲烷：正己烷＝3：1。
所述的步骤(2)中所述的展开剂为：石油醚与乙酸乙酯，其中石油醚：乙酸乙酯＝7：1。
本发明的有益效果：与现有技术相比，本发明在初次回流过滤后的残渣中加入了造化液皂化，方法简单，除杂质效果明显，解决了黄芪甲苷在色谱中的清晰度不高的问题，是一种准确、清晰而又快速的鉴别黄芪的方法。
附图说明
图1为日光灯黄芪片薄层色谱鉴别图，S-黄芪甲苷对照品，1-10号为黄芪样品。
图2为紫外光灯黄芪片薄层色谱鉴别图，S-黄芪甲苷对照品，1-10号为黄芪样品。
具体实施方式
以下通过具体实施例对本发明作进一步说明，但是本发明所保护的权利范围不仅限于以下实施例。
本发明的实验方法及参数：
1.主要材料：
2.主要试剂：
三氯甲烷，正丁醇，KOH，甲醇，乙酸乙酯，正己烷，石油醚，乙酸乙酯。硅胶G薄层板、聚酰胺薄板，蒸馏水，90％乙醇溶液等。
实施例1
(1)首先将10种产地不同的黄芪材料研磨为粉末，过200目的筛，用称量天平精确称取该粉末2g，加入体积比为2：1的三氯甲烷-正丁醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入质量分数为20％，8mL的KOH-甲醇皂化液，置于60℃恒温水浴30min；滤过，再次加入8mL的KOH-甲醇皂化液，置100℃水浴加热回流1h，蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄芪残渣充分溶解后，超声提取30min，超声功率为50W，超声温度是4℃提取2次后，再加入乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，这个作为供试样；
(2)吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂为三氯甲烷：正己烷＝3：1，先展开，再取出，再晾干，置JL-P10A观片灯下，最后拍照，在薄板上可以很稳定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内橙黄色显色较为稳定，即可判断为黄芪。参见图1。
实施例2
(1)首先将10种产地不同的黄芪材料研磨为粉末，过200目的筛，用称量天平精确称取该粉末2g，加入体积比为2：1的三氯甲烷-正丁醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入质量分数为20％，8mL的KOH-甲醇皂化液，置于60℃恒温水浴30min；滤过，再次加入8mL的KOH-甲醇皂化液，置100℃水浴加热回流1h，蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄芪残渣充分溶解后，超声提取30min，超声功率为50W，超声温度是4℃提取2次后，再加入乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，这个作为供试样；
(2)吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂为三氯甲烷：正己烷＝3：1，先展开，再取出，再晾干，日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，在薄板上可以很稳定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内橙黄色显色较为稳定，即可判断为黄芪。参见图2。
实施例3
(1)首先将10种产地不同的黄芪材料研磨为粉末，过200目的筛，用称量天平精确称取该粉末3g，加入体积比为2：1的三氯甲烷-正丁醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入质量分数为20％，10mL的KOH-甲醇皂化液，置于60℃恒温水浴30min；滤过，再次加入10mL的KOH-甲醇皂化液，置100℃水浴加热回流1h，蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄芪残渣充分溶解后，超声提取30min，超声功率为50W，超声温度是4℃提取2次后，再加入乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，这个作为供试样；
(2)吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂为石油醚：乙酸乙酯＝7：1，先展开，再取出，再晾干，置JL-P10A观片灯下，最后拍照，在薄板上可以很稳定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内橙黄色显色较为稳定，即可判断为黄芪，同样能够得到清晰的色谱鉴定图。

Claims (6)

1.一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)首先将黄芪研磨为粉末，用称量天平精确称取该粉末2-3g，加入三氯甲烷-正丁醇75ml，加热回流，3h后，过滤，然后将滤液蒸干，残渣再加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液，置于60℃-65℃恒温水浴30min-40min；滤过，再次加入8mL-10mL的KOH-甲醇皂化液，置100℃水浴加热回流0.5-1h，蒸干，残渣加水30ml使溶解，移至分液漏斗中；再加入2mL甲醇使黄芪残渣充分溶解后，超声提取30min-40min后，再加入乙酸乙酯萃取两次，每次30mL，蒸干萃取液，加入甲醇使之溶解，这个作为供试样；
(2)吸取5μL上述溶液分别点于同一硅胶G薄层板上，同一展开剂，先展开，再取出，再晾干，置JL-P10A观片灯下或日光紫外光灯365nm下检视，最后拍照，在薄板上可以很稳定的显示出清晰条带，且样品中条带呈现出规律的一致性，在3小时内橙黄色显色较为稳定，即可判断为黄芪。
2.根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤1)中三氯甲烷与正丁醇体积比为2：1。
3.根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤1)中超声提取功率为40-90W，超声温度是4℃-10℃提取1-4次。
4.根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤1)中所述的中KOH-甲醇皂化液质量浓度：20％。
5.根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤1)中的展开剂为：三氯甲烷与正己烷，其中三氯甲烷：正己烷＝3：1。
6.根据权利要求1所述的一种提高黄芪薄层色谱鉴定的方法，其特征在于，所述步骤1)中所述的展开剂为：石油醚与乙酸乙酯，其中石油醚：乙酸乙酯＝7：1。
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