CN106370766A - 一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法 - Google Patents

一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种采用薄层色谱法鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，其中薄层色谱法为：吸取供试品溶液5～20μl，对照品溶液5～20μl，分别点于薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂展开，取出，晾干，喷以显色剂，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与对照品、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。本方法操作简便，分离效果快速、准确，重现性良好，专属性强，为驴胶补血制剂的进一步质量控制提供依据。

Description

一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法
技术领域
本发明属于中药制剂检测技术领域，具体涉及一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法。
背景技术
白术具有健脾益气，燥湿利水，止汗，安胎的功效，用于脾虚食少，腹胀泄泻，痰饮眩悸，水肿，自汗，胎动不安等症，为中医补脾要药。白术的主要成分有苍术酮、白术内酯等，现代药理研究证明，苍术酮以及内酯类成分为白术抗炎、健脾的有效成分。
2010年版《中国药典》一部中，驴胶补血颗粒的鉴别项下，采用薄层色谱法，对当归和黄芪进行了定性鉴别，未对白术进行鉴别，故不能较好的控制其质量。目前，已有较多中药复方制剂对其中的白术进行了定性鉴别，如消脂通脉颗粒(马秋菊,孙萍.消脂通脉颗粒的质量标准研究[J].中国药房,2013,35:3325-3327.)、香砂理中丸(金鸣.香砂理中丸质量标准改进研究[J].中国药房,2010,47:4489-4491.)等。但是这些TLC方法的检识结果基本都是：供试品色谱中，在于对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点(苍术酮)。
苍术酮属于挥发性成分，且在驴胶补血制剂中，白术药材需经过提取浓缩、干燥等工艺过程，制剂中的挥发性成分含量已然很低。另外，苍术酮很不稳定，遇热、见光会向白术内酯Ⅲ转化(叶燕,程雪梅,侴桂新.白术药材的薄层色谱研究[J].时珍国医国药,2009,20(7):1702-1703.)。故用苍术酮来鉴别驴胶补血制剂甚至相关中药复方制剂中的白术的方法是不合适的。
发明内容
本发明提供了一种采用薄层色谱法鉴别驴胶补血制剂中白术的方法。该方法操作简便，分离效果快速、准确，重现性良好，专属性强，为驴胶补血制剂的进一步质量控制提供依据，本发明技术方案如下：
一种采用薄层色谱法鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品15～25g，研匀，加***50ml，加热回流1-2小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1-2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5-1g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5-1mg，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含0.05-0.1mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5-20μl，分别点于薄层板上，以体积比为8.5～9.5:3.5～4.5:0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液或10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
本发明所述鉴别驴胶补血制剂中白术的方法优选为：
(1)供试品溶液的制备：
取本品20g，研匀，加***50ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于薄层板上，以体积比为8.5～9.5:3.5～4.5:0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液或10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
进一步的，所述薄层板为硅胶G薄层板或硅胶GF254薄层板。
进一步的，所述展开剂正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液的体积比为9:4:0.1。
进一步的，所述显色剂优选为2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液。
本发明所述鉴别驴胶补血制剂中白术的方法中所述驴胶补血制剂为颗粒剂或胶囊剂或片剂。
本发明中“2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液”可以用如下方法配制：
(1)40％硫酸乙醇溶液的配制：量取40ml硫酸，缓缓加入60ml乙醇中，并不断搅拌，放冷，即得40％硫酸乙醇溶液；
(2)2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液的配制：取对二甲氨基苯甲醛2g，称定，加入100mL40％硫酸乙醇溶液中使溶解，即得。
本发明的有益效果：
(1)白术在处方中含量较低，工艺较为复杂，有水蒸馏和水煎煮二个工艺阶段，薄层鉴别成份复杂，且不稳定，各组分间成分互相影响，如当归中蒿本内酯、党参中党参内酯等，因而在薄层鉴别时易造成斑点拖尾，分离不完全或出现杂质成分干扰；本方法中供试品的制备采用“加***50ml，加热回流1-2小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1-2ml使溶解”的方法，展开剂选用“正己烷、乙酸乙酯、甲酸以体积比为8.5～9.5:3.5～4.5:0.1的比例得到的混合溶液”，使白术内酯Ⅲ得到有效分离；
(2)选用2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液或10％硫酸乙醇溶液作为显色剂，使得白术内酯Ⅲ斑点在紫外光灯(365nm)下能够清晰的辨认；
(3)本方法操作简便，分离效果快速、准确，重现性良好，专属性强，为驴胶补血制剂的进一步质量控制提供依据。
附图说明
图1是实施例1-3的白术薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-白术对照药材样品；3-对照品白术内酯Ⅲ；4-实施例1供试品溶液样品；5-实施例2供试品溶液样品；6-实施例3供试品溶液样品。
图2是实施例4的白术薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-白术对照药材样品；3-对照品白术内酯Ⅲ；4-实施例4供试品溶液样品①；5-实施例4供试品溶液样品②；6-实施例4供试品溶液样品③。
图3是实施例5的白术薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-白术对照药材样品；3-对照品白术内酯Ⅲ；4-实施例5供试品溶液样品①；5-实施例5供试品溶液样品②；6-实施例5供试品溶液样品③。
图4是对比例5的白术薄层鉴别图，其中1-阴性样品；2-白术对照药材样品；3-对比例5供试品溶液样品①；4-对比例5供试品溶液样品②；5-对比例5供试品溶液样品③；6-对照品白术内酯Ⅲ。
具体实施方式
以下实施例和对比例中驴胶补血制剂以驴胶补血颗粒为例，所用驴胶补血颗粒为《中国药典》2010版第一部795页收载的驴胶补血颗粒。其中每个实施例或对比例中均设置一个阴性对照样品(按驴胶补血颗粒项下【处方】称取缺白术的其他药材，制成缺白术的阴性对照样品，按每个实施例或对比例中供试品溶液制备方法同法制成缺白术的阴性对照溶液，与供试品溶液、对照品溶液、对照药材溶液等体积量点于薄层板上进行薄层鉴别)。通过阴性对照样的薄层鉴别结果，可表明本发明方法阴性无干扰，专属性强。
实施例1
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品20g，研匀，加***50ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶GF254薄层板上，以体积比为9：4：0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例2
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品15g，研匀，加***50ml，加热回流2小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶GF254薄层板上，以体积比为9：4：0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例3
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品25g，研匀，加***50ml，加热回流1.5小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶GF254薄层板上，以体积比为9：4：0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
实施例4
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品25g，研匀，加***50ml，加热回流1.5小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材1g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ1mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.1mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各20μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比为8.5：4.5：0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本实施例中用步骤(1)方法制备三批供试品，同时进行薄层鉴别，即附图2中的4-实施例4供试品溶液样品①，5-实施例4供试品溶液样品②，6-实施例4供试品溶液样品③。
实施例5
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品25g，研匀，加***50ml，加热回流1.5小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材1g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ1mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.1mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各10μl，分别点于硅胶G薄层板上，以体积比为9.5：3.5：0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
本实施例中用步骤(1)方法制备三批供试品，同时进行薄层鉴别，即附图3中的4-实施例5供试品溶液样品①，5-实施例5供试品溶液样品②，6-实施例5供试品溶液样品③。
对比例1
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
步骤(1)-(3)同实施例1，
步骤(4)：吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为10：3：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，白术内酯Ⅲ斑点的Rf值偏大，接近展开剂前沿，不利于检视。
对比例2
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
步骤(1)-(3)同实施例1，
步骤(4)：吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为8：5：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，白术内酯Ⅲ斑点的Rf值偏小，接近原点处，基本未展开，不利于检视。
对比例3
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品20g，研匀，加三氯甲烷-正丁醇(2:1)振摇提取3次，每次40ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶GF254薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为9：4：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，供试品中白术内酯Ⅲ斑点不清晰，难以检出。
对比例4
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品20g，研匀，加三氯甲烷-正丁醇(2:1)振摇提取3次，每次40ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为5：3：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，供试品中白术内酯Ⅲ斑点不清晰，难以检出。
对比例5
一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品适量，研匀，加适量水溶解后取10ml，加稀盐酸调节PH值2～3，加三氯甲烷-正丁醇(2:1)振摇提取3次，每次40ml，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比为5：3：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱、对照药材色谱相应的位置上，白术内酯Ⅲ斑点不能检出，且阴性样品干扰大。
本对比例中用步骤(1)方法制备三批供试品，同时进行薄层鉴别，即附图4中的3-对比例5供试品溶液样品①，4-对比例5供试品溶液样品②，5-对比例5供试品溶液样品③。

Claims (5)

1.一种采用薄层色谱法鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品15～25g，研匀，加***50ml，加热回流1-2小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1-2ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5-1g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5-1mg，精密称定，加甲醇溶解制成每1ml含0.05-0.1mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液等体积量，各吸取5-20μl，分别点于薄层板上，以体积比为8.5～9.5:3.5～4.5:0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液或10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)供试品溶液的制备：
取本品20g，研匀，加***50ml，加热回流1小时，取出，放冷，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；
(2)对照药材溶液的制备：
取白术对照药材0.5g，同步骤(1)方法制成对照药材溶液；
(3)对照品溶液的制备：
取白术内酯Ⅲ0.5mg，精密称定，加甲醇10ml溶解，制成每1ml含0.05mg白术内酯Ⅲ的对照品溶液；
(4)薄层色谱法鉴别：
吸取步骤(1)-(3)中供试品溶液、对照药材溶液、对照品溶液各5μl，分别点于薄层板上，以体积比为8.5～9.5:3.5～4.5:0.1的正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％对二甲氨基苯甲醛的40％硫酸乙醇溶液或10％硫酸乙醇溶液，置105℃烘烤至斑点显色清晰，置365nm紫外光灯下检视。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述薄层板为硅胶G薄层板或硅胶GF254薄层板。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述展开剂正己烷-乙酸乙酯-甲酸混合溶液的体积比为9:4:0.1。
5.根据权利要求1所述一种采用薄层色谱法鉴别驴胶补血制剂中白术的方法，其特征在于，所述驴胶补血制剂为颗粒剂或胶囊剂或片剂。
CN201510437697.3A 2015-07-23 2015-07-23 一种鉴别驴胶补血制剂中白术的方法 Active CN106370766B (zh)

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