CN105259261A - 一种药物中苯胺含量的测定方法 - Google Patents

一种药物中苯胺含量的测定方法 Download PDF

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胡丽娜
张连庆
王庆辉
牛明玉
张沛
鹿贵花
朱琼
张毅
孙凤一
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Nanjing Hailing Pharmaceutical Co., Ltd. of Yangtze River Pharmaceutical Group
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Abstract

本发明提供了一种药物中苯胺的含量测定方法，其特点在于采用高效液相色谱法对药物中苯胺含量进行分析，该方法包括色谱条件与***适用性试验、对照品溶液配制、供试品溶液配制及含量计算方法。本方法优点在于灵敏度高，专属性强，操作简单便捷，能够准确、可靠的检测出药品中存在的微量苯胺，从而增强了对药品中基因毒性杂质苯胺的含量控制要求，提高了药品的安全性和质量可控性。

Description

一种药物中苯胺含量的测定方法
技术领域
本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种药物中苯胺含量的测定方法，尤其涉及一种药物中苯胺含量的测定方法。
背景技术
苯胺(C6H7N)又称阿尼林、氨基苯，是最重要的胺类物质之一，主要在制造染料、制药工业、树脂等领域被广泛应用。但苯胺毒性比较高，仅摄入少量就能引起中毒。主要是通过皮肤、呼吸道和消化道进入人体，从而破坏血液造成溶血性贫血，损害肝脏引起中毒性肝炎，甚至导致各种癌症。因此药物中对于苯胺这种基因毒性杂质的控制应更加严格，但苯胺在某药物中的含量测定方法未见报道，因尚无苯胺含量测定的方法，使药物中苯胺的含量一直未进行控制。
发明内容
本发明目的在于克服现有技术的不足之处，提供一种药物中苯胺含量的测定方法。
本方法确定了含量质控指标，采用高效液相色谱法进行含量测定，该方法包括色谱条件与***适用性试验、对照品溶液配制、供试品溶液配制及含量计算方法。
本发明的药物中苯胺含量的测定方法，包括如下步骤：取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积，色谱条件如下：
液相色谱仪：Agilent1260；
色谱柱：Agilentporoshell120EC-C183.0×50mm，2.7μm；
流速：0.3～1.0ml/min；
柱温：30℃；
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相A：乙腈；
流动相B：pH＝5.0～7.0磷酸二氢钾溶液；
检测波长：231nm±2nm；
进样量：10～20μl；
洗脱过程中，流动相A、B浓度配比逐渐变化的线性梯度洗脱和流动相A、B配比恒定不变的等度洗脱相结合，形成一个特定的梯度洗脱程序，所述的梯度洗脱程序如下：
对照品溶液连续进样5次，其峰面积的RSD应不得大于2.0％。
所述的对照品溶液的配制方法如下：精密称取苯胺对照品适量，置容量瓶中，加50％的乙腈溶解并稀释制成每1ml含苯胺0.09μg的溶液，作为对照品溶液。
所述的供试品溶液的配制方法如下：精密称取某药物样品适量，置容量瓶中，加50％的乙腈溶解并稀释制成每1ml含药物5mg的溶液，作为供试品溶液。
所述的药物中苯胺含量的测定方法，苯胺含量的计算：
以峰面积按外标法，苯胺含量的计算公式如下：
M s × V x × a × A x M x × V s × A s × 100 %
式中，Ax为供试品中苯胺的峰面积；
As为对照品中苯胺的峰面积；
Ms为对照品的称样量，单位mg；
Mx为供试品的称样量，单位mg；
Vs为对照品稀释倍数；
Vx为供试品稀释倍数；
a为对照品纯度。
苯胺作为基因毒性杂质，其在药品中的含量要求极其严格，故本发明采用灵敏度较高的高效液相色谱法检测药品中的痕量苯胺，以期更好的保障药品的用药安全。
本发明的技术效果：经方法学验证表明，本发明可用于一种药物中基因毒性杂质苯胺的含量检测。
附图说明
图1为实施例1典型图谱，其中：a.苯胺对照品溶液；b.供试品溶液；
图2为实施例2典型图谱，其中，c.苯胺对照品图谱；d.供试品图谱；
图3为实施例3典型图谱，其中：e.苯胺对照品图谱；f.供试品溶液图谱。
具体实施方式
下面结合实施例详细说明本发明，但下面的实施例仅为发明较佳的实施方式，本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
实施例1
本实施例的药物中苯胺的测定方法，包括如下步骤：取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积，色谱条件如下：
液相色谱仪：Agilent1260；
色谱柱：Agilentporoshell120EC-C183.0×50mm，2.7μm；
流速：1.0ml/min；
柱温：30℃；
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相A：乙腈；
流动相B：pH＝5.0磷酸二氢钾溶液；
检测波长：231nm±2nm；
进样量：10μl；
洗脱过程中，流动相A、B浓度配比逐渐变化的线性梯度洗脱和流动相A、B配比恒定不变的等度洗脱相结合，形成一个特定的梯度洗脱程序，所述的梯度洗脱程序如下：
其中，
***适用性试验方法如下：取对照品溶液连续进样5次，采用自动积分，其峰面积的RSD不得大于2.0％。
对照品溶液配制方法如下：精密称取苯胺对照品适量，加50％乙腈(V/V％)溶解并定量稀释制成每1ml含苯胺0.09μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液配制方法如下：精密称取某药物约50mg置10ml量瓶中，加乙腈适量超声使溶解，用50％乙腈(V/V％)稀释至制成每1ml含5mg的溶液，作为供试品溶液。
计算苯含量：按上述色谱条件取苯胺对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中如有苯胺色谱峰，以峰面积按外标法计算，苯胺含量不得过18ppm，计算公式如下：
36.46 × 10 × 1.00 × 0.55 50.32 × 400000 × 7.33 × 100 %
式中，
0.55为供试品中苯胺的峰面积；
7.33为对照品中苯胺的峰面积；
36.46为对照品的称样量，单位mg；
50.32为供试品的称样量，单位mg；
400000为对照品稀释倍数；
10为供试品稀释倍数；
1.00为对照品纯度。
计算结果：苯胺含量为1.36ppm。
实施例2
本实施例的药物中苯胺的测定方法，包括如下步骤：取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积，色谱条件如下：
液相色谱仪：Agilent1260；
色谱柱：Agilentporoshell120EC-C183.0×50mm，2.7μm；
流速：0.5ml/min；
柱温：30℃；
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相A：乙腈；
流动相B：pH＝6.0磷酸二氢钾溶液；
检测波长：231nm±2nm；
进样量：15μl；
洗脱过程中，流动相A、B浓度配比逐渐变化的线性梯度洗脱和流动相A、B配比恒定不变的等度洗脱相结合，形成一个特定的梯度洗脱程序，所述的梯度洗脱程序如下：
其中，
***适用性试验方法如下：取对照品溶液连续进样5次，采用自动积分，其峰面积的RSD不得大于2.0％。
对照品溶液配制方法如下：精密称取苯胺对照品适量，加50％乙腈(V/V％)溶解并定量稀释制成每1ml含苯胺0.09μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液配制方法如下：精密称取某药物约50mg置10ml量瓶中，加乙腈适量超声使溶解，用50％乙腈(V/V％)稀释至制成每1ml含5mg的溶液，作为供试品溶液。
计算苯含量：按上述色谱条件取苯胺对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中如有苯胺色谱峰，以峰面积按外标法计算，苯胺含量不得过18ppm，计算公式如下：
36.46 × 10 × 1.00 × 0.69 50.32 × 400000 × 9.51 × 100 %
式中，
0.69为供试品中苯胺的峰面积；
9.51为对照品中苯胺的峰面积；
36.64为对照品的称样量；
50.32为供试品的称样量；
400000为对照品稀释倍数；
10为供试品稀释倍数；
1.00为对照品纯度。
计算结果：苯胺含量为1.31ppm。
实施例3
本实施例的药物中苯胺的测定方法，包括如下步骤：取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积，色谱条件如下：
液相色谱仪：Agilent1260；
色谱柱：Agilentporoshell120EC-C183.0×50mm，2.7μm；
流速：0.3ml/min；
柱温：30℃；
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相A：乙腈；
流动相B：pH＝7.0磷酸二氢钾溶液；
检测波长：231nm±2nm；
进样量：20μl；
洗脱过程中，流动相A、B浓度配比逐渐变化的线性梯度洗脱和流动相A、B配比恒定不变的等度洗脱相结合，形成一个特定的梯度洗脱程序，所述的梯度洗脱程序如下：
时间(min) 洗脱方式 流动相A在洗脱液中的体 流动相B在洗脱液中的体
积百分比(％) 积百分比(％)
0～5 等度洗脱 20 80
5～10 梯度洗脱 20→80 80→20
10～15 等度洗脱 80 20
15～21 梯度洗脱 80→20 20→80
其中，
***适用性试验方法如下：取对照品溶液连续进样5次，采用自动积分，其峰面积的RSD不得大于2.0％。
对照品溶液配制方法如下：精密称取苯胺对照品适量，加50％乙腈(V/V％)溶解并定量稀释制成每1ml含苯胺0.09μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液配制方法如下：精密称取某药物约50mg置10ml量瓶中，加乙腈适量超声使溶解，用50％乙腈(V/V％)稀释至制成每1ml含5mg的溶液，作为供试品溶液。
计算苯含量：按上述色谱条件取苯胺对照品溶液和供试品溶液注入液相色谱仪，供试品溶液色谱图中如有苯胺色谱峰，以峰面积按外标法计算，苯胺含量不得过18ppm，计算公式如下：
36.46 × 10 × 1.00 × 1.15 50.32 × 400000 × 15.02 × 100 %
式中，
1.15为供试品中苯胺的峰面积；
15.02为对照品中苯胺的峰面积；
36.64为对照品的称样量；
50.32为供试品的称样量；
400000为对照品稀释倍数；
10为供试品稀释倍数；
1.00为对照品纯度。
计算结果：苯胺含量为1.39ppm。

Claims (4)

1.一种药物中苯胺含量的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：取对照品溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，记录峰面积，色谱条件如下：
液相色谱仪：Agilent1260；
流速：0.3～1.0ml/min；
柱温：30℃；
填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；
流动相A：乙腈；
流动相B：pH＝5.0～7.0磷酸二氢钾溶液；
检测波长：231nm±2nm；
进样量：10～20μl；
洗脱过程中，流动相A、B浓度配比逐渐变化的线性梯度洗脱和流动相A、B配比恒定不变的等度洗脱相结合，形成一个特定的梯度洗脱程序，所述的梯度洗脱程序如下：
2.根据权利要求1所述的药物中苯胺含量的测定方法，其特征在于，所述的对照品溶液的配制方法如下：精密称取苯胺对照品适量，置容量瓶中，加50％的乙腈溶解并稀释制成每1ml含苯胺0.09μg的溶液，作为对照品溶液。
3.根据权利要求1所述的药物中苯胺含量的测定方法，其特征在于，所述的供试品溶液的配制方法如下：精密称取某药物样品适量，置容量瓶中，加50％的乙腈溶解并稀释制成每1ml含药物5mg的溶液，作为供试品溶液。
4.根据权利要求1所述的药物中苯胺含量的测定方法，其特征在于，苯胺含量的计算方法如下：
以峰面积按外标法，苯胺含量的计算公式如下：
M s × V x × a × A x M x × V s × A s × 100 %
式中，Ax为供试品中苯胺的峰面积；
As为对照品中苯胺的峰面积；
Ms为对照品的称样量，单位mg；
Mx为供试品的称样量，单位mg；
Vs为对照品稀释倍数；
Vx为供试品稀释倍数；
a为对照品纯度。
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