CN105218705A - 一种利用双酶解法制备肝素钠的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生化行业领域，特别涉及一种利用双酶解法制备肝素钠的方法。该利用双酶解法制备肝素钠的方法包括以下步骤：采用双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。采用双酶解可以适当降低盐浓度，减轻污染，降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用，每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。
Description
（一）技术领域
本发明属于生化行业领域，特别涉及一种利用双酶解法制备肝素钠的方法。
（二）背景技术
肝素是一种广泛存在于哺乳动物组织中的黏多糖，主要存在与肥大细胞中，具有抗凝血作用，被广泛用于手术和脑血栓、心肌梗死等的治疗。肝素的分子量大约3000—37500，对商品肝素的研究提示至少有21种分子个体，肝素钠是肝素的钠盐。肝素钠作为天然抗凝血物质受到世界各国的重视．也是我国主要的出口药物之一，随着研究的深入，人们发现肝素钠不但有抗凝、抗血栓形成和调节血脂的作用，还具有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等功能。肝素钠粗品是我国的传统出口产品，在国际上占有重要的地位。但是传统生产工艺落后，肝素钠产率低，肝素钠产品质量不稳定。
（三）发明内容
本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种疗效快、治愈率高的利用双酶解法制备肝素钠的方法。
本发明是通过如下技术方案实现的：
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法，包括以下步骤：
（1）酶解:取小肠粘膜，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5-8，每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45-55℃，保温1小时后，过80目滤膜，收集过滤液，在滤液中加入2709碱性蛋白酶，保温1小时；
(2)升温:步骤（1）结束后，将步骤（1）中酶解中的滤液加热至温度60-65℃，保温5分钟，过80目滤膜，收集过滤液；
(3)树脂吸附:将步骤（2）中所得过滤液加入到吸附罐中，每40L滤液中加4-6g树脂，进行搅拌，然后降温至55℃，保温55℃并搅拌吸附8小时后过滤，放出废液；
(4)洗脱:步骤（3）结束后，收集过滤后的树脂，每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml，保持55℃洗脱，收集洗脱液；
(5)醇沉:将步骤（4）中收集的洗脱液过滤，然后移入沉淀罐中，加入乙醇沉淀肝素钠；
(6)烘干:步骤（5）结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。
其中，步骤（1）中所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4；小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2。
其中，步骤（1）中所述小肠粘膜与水的质量比1:9。
其中，步骤（1）中所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。
其中，步骤（2）中所述步骤（1）中酶解中的滤液的温度为50-55℃。
传统生产工艺在肝素钠生产过程中，往往对料渣不做处理直接倒掉。而料渣中解离不完全的肝素钠也料渣一起倒掉，致使产品收率低。本发明通过双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。采用双酶解可以适当降低盐浓度，减轻污染，降低蒸汽用量和降温水用量。大生产可以采用猪胰脏活化后使用，每6吨反应液猪胰脏成本100元左右。猪胰脏成本和蒸汽成本可以抵消。
本发明的有益效果是：本发明能解决单酶解工艺中酶解液活性低的问题，采用双酶解方法将肝素钠-蛋白复合体中的肝素钠进行解离，然后通过升温、树脂吸附、洗脱、醇沉、烘干等步骤将肝素钠完全提取出来，提高肝素钠收率。
（四）具体实施方式
实施例1：
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法，通过下述步骤实现：
（1）酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜500kg，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.5%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.8，加胰酶100g,加热至温度升至51℃，保温1小时后，过80目膜过滤，收集过滤液，加入2709碱性蛋白酶125g，保温1小时。
(2)升温:步骤（1）结束后，加热至温度升至63℃，保温5分钟，过80目膜过滤，收集过滤液。
(3)树脂吸附:步骤（2）结束后，将上述所得过滤液加入到吸附罐中，搅拌，降温至55℃，加500g树脂，保温55℃，搅拌吸附8小时，过滤，放出废液。
(4)洗脱:步骤（3）结束后，收集过滤树脂，各加饱和盐水694.4ml，保持55℃洗脱。
(5)醇沉:步骤（4）结束后，反复冲洗过滤后的树脂，将冲洗干净的树脂，倒入到洗脱器，收集洗脱液，将洗脱液过滤移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素钠。
(6)烘干:步骤（5）结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。
实施例2：
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法，通过下述步骤实现：
（1）酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜600kg，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5，加胰酶120g,加热至温度升至45℃，保温1小时后，过80目膜过滤，收集过滤液，加入2709碱性蛋白酶300g，保温1小时。
(2)升温:步骤（1）结束后，加热至温度升至60℃，保温5分钟，过80目膜过滤，收集过滤液。
(3)树脂吸附:步骤（2）结束后，将上述所得过滤液加入到吸附罐中，搅拌，降温至55℃，加650g树脂，保温55℃，搅拌吸附8小时，过滤，放出废液。
(4)洗脱:步骤（3）结束后，收集过滤树脂，各加饱和盐水903ml，保持55℃洗脱。
(5)醇沉:步骤（4）结束后，反复冲洗过滤后的树脂，将冲洗干净的树脂，倒入到洗脱器，收集洗脱液，将洗脱液过滤移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素钠。
(6)烘干:步骤（5）结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。
实施例3：
一种利用双酶解法制备肝素钠的方法，通过下述步骤实现：
（1）酶解:取猪肝素车间得小肠粘膜800kg，加入肠衣专用盐至料液的盐度为4.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH8，加胰酶160g,加热至温度升至55℃，保温1小时后，过80目膜过滤，收集过滤液，加入2709碱性蛋白酶300g，保温1小时。
(2)升温:步骤（1）结束后，加热至温度升至65℃，保温5分钟，过80目膜过滤，收集过滤液。
(3)树脂吸附:步骤（2）结束后，将上述所得过滤液加入到吸附罐中，搅拌，降温至55℃，加1200g树脂，保温55℃，搅拌吸附8小时，过滤，放出废液。
(4)洗脱:步骤（3）结束后，收集过滤树脂，各加饱和盐水1667ml，保持55℃洗脱。
(5)醇沉:步骤（4）结束后，反复冲洗过滤后的树脂，将冲洗干净的树脂，倒入到洗脱器，收集洗脱液，将洗脱液过滤移入沉淀罐中，加入酒精沉淀肝素钠。
(6)烘干:步骤（5）结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。
Claims (5)
1.一种利用双酶解法制备肝素钠的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）酶解:取小肠粘膜，加入肠衣专用盐至料液的盐度为3.0-4.0%，与水一起置于酶解罐中，调节PH7.5-8，每4kg小肠粘膜加入胰酶0.8g,加热至温度45-55℃，保温1小时后，过80目滤膜，收集过滤液，在滤液中加入2709碱性蛋白酶，保温1小时；
(2)升温:步骤（1）结束后，将步骤（1）中酶解中的滤液加热至温度60-65℃，保温5分钟，过80目滤膜，收集过滤液；
(3)树脂吸附:将步骤（2）中所得过滤液加入到吸附罐中，每40L滤液中加4-6g树脂，进行搅拌，然后降温至55℃，保温55℃并搅拌吸附8小时后过滤，放出废液；
(4)洗脱:步骤（3）结束后，收集过滤后的树脂，每克树脂中加入质量分数为24%的饱和盐水20ml，保持55℃洗脱，收集洗脱液；
(5)醇沉:将步骤（4）中收集的洗脱液过滤，然后移入沉淀罐中，加入乙醇沉淀肝素钠；
(6)烘干:步骤（5）结束后，将收集的沉淀物过滤干净进行烘干脱水，即可得到肝素钠。
2.根据权利要求1所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法，其特征在于：步骤（1）中所述小肠粘膜与肠衣专用盐的质量比例为100:3-4；小肠粘膜与2709碱性蛋白酶的质量比为4000:1-2。
3.根据权利要求1所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法，其特征在于：步骤（1）中所述小肠粘膜与水的质量比1:9。
4.根据权利要求1所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法，其特征在于：步骤（1）中所述胰酶与2709碱性蛋白酶的重量比4:5-10。
5.根据权利要求1或2所述的利用双酶解法制备肝素钠的方法，其特征在于：步骤（2）中所述步骤（1）中酶解中的滤液的温度为50-55℃。
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