CN103804526A - 一种肝素钠粗品的提纯方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种肝素钠粗品的提纯的方法，该方法采用健康猪的小肠粘膜为主要原料，经过解离(酶解)、过滤、酶解蛋白、去除蛋白、沉淀脱水干燥即获得肝素钠粗品，本方法生产具有周期短、生产成本低、收率高，不产生毒害物质，有利于环境保护。

Description

一种肝素钠粗品的提纯方法
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体地说涉及肝素钠的提取方法，是一种以猪小肠粘膜为原料，通过生物酶解技术，从而提纯肝素钠的方法。
背景技术
肝素钠是粘多糖硫酸酯类抗凝血药，是由猪或牛的肠粘膜中提取的硫酸氨基葡聚糖的钠盐，属粘多糖类物质，因其具有强抗凝作用，是防治深层静脉血栓形成等血栓栓塞性疾病的首先药物，随着研究的不断深入，人们发现肝素钠不仅有抗凝、抗血栓形成和调整血脂的作用，还有抗炎、抗过敏、抗病毒、抗癌等多种生物学功能。
目前，肝素钠粗品的提取一般来说都是将动物小肠进行刮取，刮取后得到的粘液先进行酶解，过滤，然后用肝素钠专用树脂进行吸附，洗脱，然后经酒精沉淀，脱水后，在将所得物进行烘干。这种传统工艺处在着收率低，收成不稳定，损失大，且废液排放浓度高，污染严重的缺陷。
发明内容
针对现有生产工艺中存在的不足，本发明的目的在于提供一种肝素钠粗品的提纯方法，是一种简化工艺，提高收率、节能节时为目的而开发的新方法，且此方法有利于工业化生产。
本发明的技术解决方案是该制备方法包括下列步骤：
1、解离(酶解)：将称取的健康猪的小肠粘膜液(固液比约为1：9)抽入反应罐中，用工业碱调PH9.0-10.0，加入3％-5％(重量比)的氯化钠，按原料重量的0.5％加入活性酶，混匀后升温至45-55℃，恒温搅拌，解离1-3小时，解离过程保持PH不变，升温至83-91℃，保温10-15分钟，然后立即冷却。
2、过滤：将冷却液用抽滤机过滤2次，先后利用2μm和0.22μm的微孔滤膜进行过滤，以除去杂质，得过滤液。
3、酶解蛋白质：将滤液调节PH7.5-9.5，然后升温至40-55℃，按原料重量的0.5％加入活性酶，保持温度40-55℃搅拌4-7小时，酶解过程中控制反应体系的PH值，然后将酶解液急升温至90-95℃，维持10-15分钟，然后立即冷却。
4、除蛋白：用微滤膜浓缩器或蒸馏或树脂对滤液中的肝素钠进行过滤以除蛋白质并浓缩，得浓缩液。
5、沉淀脱水干燥：用浓度为85-90％的等体积的乙醇加入到上述浓缩液中，搅拌均匀后沉淀10-12小时，然后除去上清液，收集沉淀，再加入等体积的无水乙醇脱水，脱水后干燥即得肝素钠粗品。
本发明的优点为：本发明中用于调节PH值的酸和碱分别为盐酸和氢氧化钠固体。
与现有技术相比，本发明的优点为：(1)、剔除了传统工艺中使用树脂吸附的繁琐操作，工艺简单。(2)、采用微孔滤膜过滤，能有效的去除肝素钠中的杂质。
具体实施方式
实施例1
(1)解离(酶解)：称取的健康猪的小肠粘膜液1kg(固液比约为1：9)抽入反应罐中，用工业碱调PH9.5，加入40g的氯化钠，加入活性酶5g，混匀后升温至48℃，恒温搅拌，解离2小时，解离过程保持PH不变，升温至85℃，保温12分钟，然后立即冷却。
(2)过滤：将冷却液用抽滤机过滤2次，先后利用2μm和0.22μm的微孔滤膜进行过滤，以除去杂质，得过滤液。
(3)酶解蛋白质：将滤液调节PH8.0，然后升温至48℃，加入活性酶5g，保持温度48℃搅拌6小时，酶解过程中控制反应体系的PH值，然后将酶解液急升温至92℃，维持12分钟，然后立即冷却。
(4)除蛋白：用微滤膜浓缩器或蒸馏或树脂对滤液中的肝素钠进行过滤以除蛋白质并浓缩，得浓缩液。
(5)沉淀脱水干燥：用浓度为90％的等体积的乙醇加入到上述浓缩液中，搅拌均匀后沉淀12小时，然后除去上清液，收集沉淀，再加入等体积的无水乙醇脱水，脱水后干燥即得肝素钠粗品9g。

Claims (2)

1.一种肝素钠粗品的提纯方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)解离(酶解)：将称取的健康猪的小肠粘膜液(固液比约为1：9)抽入反应罐中，用工业碱调PH9.0-10.0，加入3％-5％(重量比)的氯化钠，按原料重量的0.5％加入活性酶，混匀后升温至45-55℃，恒温搅拌，解离1-3小时，解离过程保持PH不变，升温至83-91℃，保温10-15分钟，然后立即冷却。
(2)过滤：将冷却液用抽滤机过滤2次，先后利用2μm和0.22μm的微孔滤膜进行过滤，以除去杂质，得过滤液。
(3)酶解蛋白质：将滤液调节PH7.5-9.5，然后升温至40-55℃，按原料重量的0.5％加入活性酶，保持温度40-55℃搅拌4-7小时，酶解过程中控制反应体系的PH值，然后将酶解液急升温至90-95℃，维持10-15分钟，然后立即冷却。
(4)除蛋白：用微滤膜浓缩器或蒸馏或树脂对滤液中的肝素钠进行过滤以除蛋白质并浓缩，得浓缩液。
(5)沉淀脱水干燥：用浓度为85％-90％的等体积的乙醇加入到上述浓缩液中，搅拌均匀后沉淀10-12小时，然后除去上清液，收集沉淀，再加入等体积的无水乙醇脱水，脱水后干燥即得肝素钠粗品。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：(1)步中加入原料重量0.5％的活性酶，以增强肝素钠的解离效果。
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