CN105168180A - 一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法 - Google Patents
一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105168180A CN105168180A CN201510644505.6A CN201510644505A CN105168180A CN 105168180 A CN105168180 A CN 105168180A CN 201510644505 A CN201510644505 A CN 201510644505A CN 105168180 A CN105168180 A CN 105168180A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yeast
- microcapsule
- positive charge
- empty
- concentration
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法。该***由酵母微囊和表面带正电荷的纳米粒组成；其中酵母微囊为酿酒酵母、葡萄汁有孢汉逊酵母、季也蒙有孢汉逊酵母、东方伊萨酵母、毕赤克鲁维酵母、膜璞毕赤酵母、美极梅奇酵母、红冬孢酵母和假丝酵母等酵母菌经酸、碱及有机溶剂处理后获得的表面含β-1,3-D-葡聚糖的空心结构，正电荷纳米粒包括表面带正电荷的量子点、表面带正电荷的氧化铁纳米粒、表面带正电荷的载药纳米粒、以及表面带正电荷的纳米胶束等。制备时，将酵母空微囊加入去离子水或缓冲液中，均匀分散后恒温孵育，再加入正电荷纳米粒溶液，分散均匀后继续恒温孵育，待上清液澄清后，离心水洗，干燥即得。该制备方法简单，成本低。
Description
技术领域
本发明涉及基于酵母微囊的口服靶向载体***的制备方法，即通过酵母微囊与表面带正电荷的纳米粒之间的静电作用构建口服药物靶向递送***与口服靶向成像***的方法。
背景技术
口服给药因其良好的安全性、便捷性与患者依从性是目前临床药物治疗中使用最为广泛的给药方式。然而，由于胃肠道独有的解剖学特点和生理屏障的限制，口服后大多数药物吸收较差，导致其生物利用度低，进而影响正常疗效的发挥。近年来，纳米技术、材料学、高分子化学及药学等学科交叉研究的深入发展，大大推动了口服药物递送***的研究进程。现有的口服药物微粒递送***在增强药物口服吸收、提高药物口服生物利用度、肠道粘附释放、结直肠局部靶向释放及肠道药物转运等方面已取得了诸多的进展，为大量难溶性药物的口服给药提供了较为理想的载体***。比如，利用脂质体、固体脂质纳米粒、聚合物纳米粒、聚合物胶束等微粒***，可以显著增加抗肿瘤药物的口服吸收、并提高其生物利用度。而通过调控这些微粒***的理化特性(包括粒径大小、载体材料组成、表面亲疏水性、表面电位等)，或在微粒表面引入靶向单元，可以进一步改善其吸收的速度和程度。不过，当前广泛研究的口服递送***仍大多局限于以增加药物吸收和提高生物利用度为目的的消化道靶向(如肠道粘附***、pH响应性结肠靶向递送***等)或淋巴***靶向。由于口服后吸收转运途径的复杂环境，迄今为止，针对胃肠道以外病灶部位的口服靶向药物递送***的开发依然面临巨大挑战。
另一方面，有关新型靶向药物递送***的大量研究已清楚地表明靶向释药在提高药物疗效的同时，可显著降低药物的非靶效应引起的不良反应和毒副作用。然而，与静脉给药的靶向药物递送***的快速发展相比，口服靶向药物递送***的研究相对滞后。因此，亟需新的策略来构建新型口服递送***，以实现口服后非胃肠道病灶部位的靶向。大量研究表明，沙门氏杆菌、酵母真菌等微生物可经胃肠道感染，大量分布于体内巨噬细胞。而单核/巨噬细胞与炎症、动脉粥样硬化及肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关。通过单核/巨噬细胞实现病灶部位的靶向是近年来新兴的药物靶向策略，并可基于单核/巨噬细胞在病灶局部的募集效应实现相应疾病的靶向治疗。
1996年，法国学者LePape首次采用具有巨噬细胞靶向特性的乙酰化1，3-葡聚糖经放射性元素锝标记，实现了关节炎的成像，从而开启了单核/巨噬细胞靶向递送***研究的先河。随着材料学、仿生学及分子药剂学的发展，基于单核/巨噬细胞靶向已成为新型药物靶向递送***中的重要组成部分，并因其广泛的疾病相关性而备受关注，其在炎症相关疾病的靶向治疗与成像诊断方面表现出巨大的应用潜力。
通过模拟沙门氏杆菌、酵母真菌等微生物胃肠道感染行为，有望实现口服后药物的单核/巨噬细胞靶向递送，进而实现炎症、动脉粥样硬化、肿瘤等单核/巨噬细胞相关疾病的靶向治疗。近年来的诸多研究表明，分布于酵母等真菌细胞壁表面的β-1,3-D-葡聚糖是其经消化道***感染进入体内单核/巨噬细胞过程中机体识别的重要抗原。更具突破性的研究表明，酵母来源的β-1,3-D-葡聚糖颗粒可通过沙门氏杆菌、酵母真菌等微生物胃肠道感染的途径，由集合淋巴滤泡(Peyer’spatch)部位的M细胞(Microfoldcell)转运至肠相关淋巴组织(Gut-associatedlymphoidtissue)，通过单核/巨噬细胞及树突状细胞表面Dectin-1受体对β-1,3-D-葡聚糖的识别作用吞噬并转运至机体单核/巨噬细胞。
发明内容
为实现口服后药物和造影剂的靶向递送，本发明基于仿生学原理，通过模仿微生物经消化道***性感染的途径，利用酵母微囊(Yeastcapsule)表面的β-1,3-D-葡聚糖来构建可高效负载纳米粒的新型口服靶向递送***，并基于单核/巨噬细胞的募集作用成功实现炎症、肿瘤部位等疾病的口服靶向成像与靶向治疗。该方面的工作目前未见于国内外文献报道中。鉴于此，本发明的目的是提供一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法。
本发明所述的基于酵母微囊的口服靶向载体***由酵母空微囊和表面带正电荷的纳米粒组成，其中正电荷纳米粒分布于酵母微囊内部；所述酵母空微囊与表面带正电荷的纳米粒的质量比在10:0.1到10:20之间。
所述酵母空微囊为酵母菌经酸、碱及有机溶剂处理后得到的主要由β-1,3-D-葡聚糖组成的微囊结构，其中酵母菌包括但不限于酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniasporauvarum)、季也蒙有孢汉逊酵母(Hanseniasporaguilliermondii)、东方伊萨酵母(Issatchenkiaorientalis)、毕赤克鲁维酵母(Pichiakluyver)、膜璞毕赤酵母(Pichiamembranefaciens)、美极梅奇酵母(Metschnikowiapulcherrima)、红冬孢酵母(Rhodosporidiummucilaginos)和假丝酵母(Candidazemplinina)。
具体地，所述表面带正电荷的纳米粒选自表面带正电荷的量子点、表面带正电荷的氧化铁纳米粒、表面带正电荷的载药纳米粒、以及表面带正电荷的纳米胶束，其表面电位在10mV至70mV之间，粒径在5nm至400nm之间。所述表面带正电荷的载药纳米粒包括但不限于负载了疏水药物吲哚美辛、舒林酸、甲氨喋呤、维甲酸、吉非贝齐、阿伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、紫杉醇、多西紫杉醇、长春新碱、雷帕霉素、坦罗莫司、依维莫司、地磷莫司、阿霉素或羟喜树碱的正电荷纳米粒。
制备时，首先称取一定量的酵母空微囊，并加入一定体积的去离子水或缓冲液中，超声至均匀分散后恒温孵育一定时间；待酵母空微囊完全溶胀后，加入表面带正电荷的纳米粒溶液，分散均匀后恒温孵育0.5～72小时，然后离心、并水洗，干燥后即得到内部负载了表面带正电荷纳米粒的酵母微囊。
上述制备方法中，所述恒温孵育的温度在4℃到80℃之间。
所述恒温培养的时间在0.5小时到72小时之间。
所述酵母空微囊混悬液浓度在1mg/mL到100mg/mL之间。
所述正电荷纳米粒溶液浓度在0.05mg/mL到100mg/mL之间。
本发明的优点如下:
1.本发明所使用的酵母菌为商品化的食品添加剂，价格相对低廉，安全性较高；
2.本发明所采用的酵母微囊的制备方法简单，重复性好，易于实现相应制剂的规模化生产；
3.本发明在负载纳米粒的酵母微囊***的制备过程中未使用有机试剂，保证了最终负载***的安全性，且符合制药领域绿色环保的宗旨；
4.本发明所制备的酵母微囊载体***可高效负载不同的正电荷纳米粒；
5.负载量子点和氧化铁等具有造影功能的酵母微囊载体***，可通过单核巨噬细胞的募集作用，靶向至关节炎、肿瘤和动脉粥样硬化斑块部位，实现口服后对应不同疾病的造影；
6.本发明所制备的酵母微囊***中负载的正电荷载药纳米粒可以靶向至关节炎、肿瘤和动脉粥样硬化斑块部位，有效提高病灶局部药物的浓度，实现靶向治疗的目的。
附图说明
图1为由酿酒酵母菌制备获得的未负载正电荷纳米粒的酵母空微囊的透射电镜图片，标尺大小为1μm；
图2为采用钙荧光白染料对酵母空微囊表面β-1,3-葡聚糖染色后的的激光共聚焦图片，标尺大小为5μm；
图3为负载有发射波长分别为620nm、540nm、525nm和450nm量子点的酵母微囊的激光共聚焦图片，标尺大小为5μm；
图4为负载有氧化铁纳米粒的酵母微囊的透射电镜图片，标尺大小为500nm；
图5为负载有表面带正电荷的吲哚美辛/聚乙烯亚胺聚合物纳米粒的酵母微囊的透射电镜照片，箭头所指为吲哚美辛/聚乙烯亚胺聚合物纳米粒，标尺大小为1μm。
图6为负载了发射波长为620nm的量子点的酵母微囊(QD620/YC)口服后在急性炎症模型小鼠足趾肿胀部位聚集的活体荧光成像图。
图7为负载了氧化铁纳米粒的酵母微囊(IONP/YC)口服后在急性炎症模型大鼠足趾肿胀部位聚集的核磁共振图。
图8为负载了氧化铁纳米粒的酵母微囊(IONP/YC)口服后在荷Walker256异位瘤的大鼠体内的肿瘤部位聚集的核磁共振图。
图9为负载吲哚美辛(IND)/聚乙烯亚胺纳米粒的酵母微囊口服后在急性炎症局部，即小鼠足趾肿胀部位聚集。
图10为负载了紫杉醇/熊去氧胆酸/聚乙烯亚胺纳米粒(PTX-UDCANP)的酵母微囊口服后在荷B16F10黑色素瘤小鼠肿瘤局部的靶向富集。
具体实施方式
尽管有文献报道将酵母微囊用于负载核酸类药物，以靶向巨噬细胞，从而实现***炎症的治疗或介导机体免疫应答。但将其用于纳米粒的负载和递送面临诸多限制。首先，目前文献报道的方法仅仅将不同纳米粒吸附于酵母微囊表面，该方法的负载效率低，且在生理条件下易于解吸附，口服后无法实现预期效果。同时，纳米粒在酵母微囊表面吸附时，其对纳米粒理化性能的依赖性也不明确。其次，国内外尚无研究证明完整的纳米粒(包括无机和贵金属纳米粒、自组装纳米粒、聚合物胶束等)可以扩散进入酵母微囊内部。本发明创新性地提出基于酵母微囊与正电荷纳米粒之间的静电作用，通过正电荷纳米粒的自发沉积过程来制备纳米粒负载型酵母微囊***；其中除核后酵母微囊内部残留的部分物质带有负电荷，而待负载的纳米粒(包括纳米造影剂和载药纳米粒)表面带有正电荷；通过简单的孵育即可将正电荷纳米粒负载于酵母微囊内部，进而实现口服靶向造影剂或口服靶向给药***。
更具体地说，本发明采取的措施如下：首先称取一定量的酵母空微囊，将其加入一定体积的去离子水或pH在5.0到11.0之间的缓冲液中，超声至均匀分散，得到酵母空微囊浓度在1mg/mL到100mg/mL之间的混悬液，于4℃到80℃孵育一定时间；待酵母空微囊完全溶胀后，加入浓度在0.05mg/mL到100mg/mL之间的表面带正电荷的纳米粒溶液，分散均匀后于4℃到80℃孵育0.5～72小时，然后离心、并水洗，干燥后即得到内部负载了正电荷纳米粒的酵母微囊***。
下面结合非限定性的实施例对本发明做详细说明。
实施例1
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化钠溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH6.0的磷酸缓冲液中制得浓度为1mg/mL的空微囊混悬液，20℃下恒温孵育0.5小时，再加入50μL浓度为0.05mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的最大发射波长在450nm的量子点，分散均匀后于20℃继续孵育1小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有发射波长450nm的量子点的酿酒酵母微囊，其中量子点的包封率为46.5％。
实施例2
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化钠溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的硫酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH9.4的碳酸盐缓冲液中制得浓度为5mg/mL的空微囊混悬液，25℃孵育0.5小时，再加入50μL浓度为0.1mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的最大发射波长在525nm的量子点，分散均匀后于25℃继续孵育8小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有发射波长525nm的量子点的酿酒酵母微囊，其中量子点的包封率为70.8％。
实施例3
首先，取1g葡萄汁有孢汉逊酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化钠溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的硫酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得葡萄汁有孢汉逊酵母空微囊。
然后，将葡萄汁有孢汉逊酵母空微囊分散于100μL的pH9.4的碳酸盐缓冲液中制得浓度为10mg/mL的空微囊混悬液，30℃孵育1小时，再加入50μL浓度为0.3mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的、粒径15nm的、最大发射波长在540nm的量子点，分散均匀后于30℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有发射波长540nm的量子点的葡萄汁有孢汉逊酵母微囊，其中量子点的包封率为71.5％。
实施例4
首先，取1g季也蒙有孢汉逊酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化钠溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得季也蒙有孢汉逊酵母空微囊。
然后，将季也蒙有孢汉逊酵母空微囊分散于100μL的pH11.0的碳酸盐缓冲液中制得浓度为10mg/mL的空微囊混悬液，37℃孵育1小时，再加入50μL浓度为0.2mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的、粒径20nm的、最大发射波长在620nm的量子点，分散均匀后于37℃继续孵育24小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有发射波长620nm的量子点的季也蒙有孢汉逊酵母微囊，其中量子点的包封率为76.7％。
实施例5
首先，取1g东方伊萨酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化钾溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得东方伊萨酵母空微囊。
然后，将东方伊萨酵母空微囊分散于100μL的pH9.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为1mg/mL的酵母空微囊混悬液，40℃下恒温孵育1小时，再加入10μL浓度为10mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的、粒径5nm的氧化铁纳米粒,分散均匀后于40℃继续孵育36小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有氧化铁纳米粒的东方伊萨酵母微囊，酵母微囊的氧化铁纳米粒负载率为12.4％。
实施例6
首先，取1g毕赤克鲁维酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化钾溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得毕赤克鲁维酵母空微囊。
然后，将毕赤克鲁维酵母空微囊分散于100μL的pH11的碳酸盐缓冲液中制得浓度为2mg/mL的酵母空微囊混悬液，45℃下孵育1小时，再加入10μL浓度为25mg/mL的聚乙烯亚胺表面修饰的、粒径10nm的氧化铁纳米粒,分散均匀后于40℃继续孵育48小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有氧化铁纳米粒的毕赤克鲁维酵母微囊，酵母微囊的氧化铁纳米粒负载率为14.9％。
实施例7
首先，取1g膜璞毕赤酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化钠溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得膜璞毕赤酵母空微囊。
然后，将膜璞毕赤酵母空微囊分散于100μL的pH10.0的碳酸盐缓冲液中制得浓度为10mg/mL的空微囊混悬液，37℃下恒温孵育1小时，再加入20μL浓度为1.0mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的最大发射波长在620nm的量子点，分散均匀后于37℃继续孵育72小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有发射波长620nm的量子点的膜璞毕赤酵母微囊，其中量子点的包封率为80.2％。
实施例8
首先，取1g美极梅奇酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得美极梅奇酵母空微囊。
然后，将美极梅奇酵母空微囊分散于100μL的pH9.4的碳酸盐缓冲液中制得浓度为15mg/mL的酵母空微囊混悬液，50℃下恒温孵育0.5小时，再加入10μL浓度为30mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的、粒径30nm的氧化铁纳米粒,分散均匀后于50℃继续孵育48小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有氧化铁纳米粒的美极梅奇酵母微囊，酵母微囊的氧化铁纳米粒负载率为24.8％。
实施例9
首先，取1g红冬孢酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得红冬孢酵母空微囊。
然后，将红冬孢酵母空微囊分散于100μL的pH11的碳酸盐缓冲液中制得浓度为10mg/mL的酵母空微囊混悬液，60℃下恒温孵育0.5小时，再加入20μL浓度为20mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的、粒径50nm的氧化铁纳米粒,分散均匀后于60℃继续孵育48小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有氧化铁纳米粒的红冬孢酵母微囊，酵母微囊的氧化铁纳米粒负载率为35.4％。
实施例10
首先，取1g假丝酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得假丝酵母空微囊。
然后，将假丝酵母空微囊分散于200μL的pH9.2的磷酸盐缓冲液中制得浓度为5mg/mL的酵母空微囊混悬液，40℃下恒温孵育1小时，再加入20μL浓度为10mg/mL的聚二烯丙基二甲基氯化铵表面修饰的氧化铁纳米粒,分散均匀后于40℃继续孵育48小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有氧化铁纳米粒的假丝酵母微囊，酵母微囊的氧化铁纳米粒负载率为30.8％。
实施例11
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将10mg吲哚美辛和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于0.5mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为150nm、表面电位为20mV的吲哚美辛/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于500μL的去离子水中制得浓度为40mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入1000μL浓度为20mg/mL的上述吲哚美辛/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育24小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有吲哚美辛/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的吲哚美辛负载量为26.9％。
实施例12
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将25mg吲哚美辛和10mg分子量为2kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为210nm、表面电位为28mV的吲哚美辛/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的去离子水中制得浓度为50mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入250μL浓度为20mg/mL的上述吲哚美辛/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有吲哚美辛/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的吲哚美辛负载量为27.3％。
实施例13
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将30mg舒林酸和10mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为230nm、表面电位为35mV的舒林酸/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为50mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为30mg/mL的上述舒林酸/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育24小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有舒林酸/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的舒林酸负载量为12.7％。
实施例14
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将25mg甲氨喋呤和10mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为180nm、表面电位为38mV的甲氨喋呤/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为50mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入200μL浓度为25mg/mL的上述甲氨喋呤/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育18小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有甲氨喋呤/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的甲氨喋呤负载量为13.4％。
实施例15
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将20mg维甲酸和10mg分子量为800Da的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为270nm、表面电位为29mV的维甲酸/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为50mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入200μL浓度为25mg/mL的上述维甲酸/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有维甲酸/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的维甲酸负载量为17.8％。
实施例16
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将20mg吉非贝齐和10mg分子量为1200Da的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为190nm、表面电位为36mV的吉非贝齐/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为50mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入200μL浓度为25mg/mL的上述吉非贝齐/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育10小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有吉非贝齐/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的吉非贝齐负载量为13.0％。
实施例17
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将10mg阿伐他汀和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为220nm、表面电位为41mV的阿伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述阿伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有阿伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的阿伐他汀负载量为15.9％。
实施例18
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将10mg普伐他汀和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为180nm、表面电位为38mV的普伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述普伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育20小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有普伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的普伐他汀负载量为12.8％。
实施例19
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将10mg氟伐他汀和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为200nm、表面电位为35mV的氟伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2.5小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述氟伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育16小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有氟伐他汀/枝化聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的氟伐他汀负载量为17.3％。
实施例20
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将10mg紫杉醇、10mg吲哚美辛和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为70nm、表面电位为63mV的含有紫杉醇的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH6.5的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有紫杉醇的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有紫杉醇/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的紫杉醇负载量为11.0％。
实施例21
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将15mg多西紫杉醇、10mg吲哚美辛和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为135nm、表面电位为55mV的含有多西紫杉醇的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH6.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有多西紫杉醇的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育10小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有多西紫杉醇/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的多西紫杉醇负载量为12.4％。
实施例22
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将10mg长春新碱、10mg舒林酸和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为165nm、表面电位为32mV的含有长春新碱的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH6.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育3小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有长春新碱的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有长春新碱/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的长春新碱负载量为13.2％。
实施例23
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将15mg雷帕霉素、10mg吲哚美辛和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为155nm、表面电位为70mV的含有雷帕霉素的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH6.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有雷帕霉素的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育16小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有雷帕霉素/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的雷帕霉素负载量为9.2％。
实施例24
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将15mg坦罗莫司、10mg舒林酸和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为205nm、表面电位为37mV的含有坦罗莫司的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.5的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育3小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有坦罗莫司的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有坦罗莫司/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的坦罗莫司负载量为9.8％。
实施例25
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将15mg依维莫司、10mg熊去氧胆酸和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为265nm、表面电位为43mV的含有依维莫司的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.5的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育3小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有依维莫司的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有依维莫司/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的依维莫司负载量为7.9％。
实施例26
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将15mg地磷莫司、10mg鹅去氧胆酸和5mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为230nm、表面电位为38mV的含有地磷莫司的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有地磷莫司的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育24小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有地磷莫司/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的地磷莫司负载量为8.3％。
实施例27
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将15mg阿霉素、10mg猪去氧胆酸和5mg分子量为20kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为250nm、表面电位为40mV的含有阿霉素的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有阿霉素的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育10小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有阿霉素/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的阿霉素负载量为10.8％。
实施例28
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将15mg羟喜树碱、10mg熊去氧胆酸和5mg分子量为15kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为270nm、表面电位为37mV的含有羟喜树碱的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于100μL的pH5.0的磷酸盐缓冲液中制得浓度为20mg/mL的酵母空微囊混悬液，37℃下恒温孵育2小时，再加入100μL浓度为20mg/mL的上述含有羟喜树碱的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于37℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有羟喜树碱/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的羟喜树碱负载量为8.8％。
实施例29
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将20mg紫杉醇、30mg吲哚美辛和10mg分子量为25kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于1.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为120nm、表面电位为15mV的含有紫杉醇的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于1mL的去离子水中制得浓度为100mg/mL的酵母空微囊混悬液，80℃下恒温孵育1小时，再加入500μL浓度为50mg/mL的上述含有紫杉醇的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于60℃继续孵育3小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载有紫杉醇/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的紫杉醇负载量为10.5％。
实施例30
首先，取1g酿酒酵母分散于15mL浓度为1M的氢氧化纳溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心10分钟，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酿酒酵母空微囊。
然后，将400mg吲哚美辛和100mg分子量为8kDa的枝化聚乙烯亚胺溶于10.0mL二甲基亚砜中，在去离子水中透析去除有机溶剂，得到粒径为400nm、表面电位为10mV的含有吲哚美辛的聚乙烯亚胺纳米粒。
最后，将酿酒酵母空微囊分散于2mL的去离子水中制得浓度为100mg/mL的酵母空微囊混悬液，80℃下恒温孵育1.5小时，再加入1mL浓度为100mg/mL的上述含有吲哚美辛的聚乙烯亚胺纳米粒，分散均匀后于4℃继续孵育12小时，至上清液澄清后，离心水洗，干燥后即得到负载吲哚美辛/聚乙烯亚胺纳米粒的酿酒酵母微囊，酵母微囊的吲哚美辛负载量为28.8％。
同理，还可以将以上实施例中的表面带正电荷的氧化铁纳米粒或表面带正电荷的载药纳米粒替换为表面带正电荷的纳米胶束。
显然，上述描述的所有实施例是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于发明保护的范畴。
主要参考文献
1.Veiseh,O.,Tang,B.C.,Whitehead,K.A.,Anderson,D.G.&Langer,R.Managingdiabeteswithnanomedicine:challengesandopportunities.Nat.Rev.DrugDiscov.14,45-57(2015).
2.Lobatto,M.E.,Fuster,V.,Fayad,Z.A.&Mulder,W.J.M.Perspectivesandopportunitiesfornanomedicineinthemanagementofatherosclerosis.Nat.Rev.DrugDiscov.10,835-852(2011).
3.Qian,X.M.etal.Invivotumortargetingandspectroscopicdetectionwithsurface-enhancedRamannanoparticletags.Nat.Biotechnol.26,83-90(2008).
4.Park,K.Facingthetruthaboutnanotechnologyindrugdelivery.ACSNano24,7442-7447(2013).
5.Cheng,Z.L.,AlZaki,A.,Hui,J.Z.,Muzykantov,V.R.&Tsourkas,A.Multifunctionalnanoparticles:costversusbenefitofaddingtargetingandimagingcapabilities.Science338,903-910(2012).
6.Bakhru,S.H.,Furtado,S.,Morello,A.P.&Mathiowitz,E.Oraldeliveryofproteinsbybiodegradablenanoparticles.Adv.DrugDeliv.Rev.65,811-821(2013).
7.Zhu,Q.etal.Largeintestine-targeted,nanoparticle-releasingoralvaccinetocontrolgenitorectalviralinfection.Nat.Med.18,1291-1296(2012).
8.Pridgen,E.M.etal.TransepithelialtransportofFc-targetednanoparticlesbytheneonatalfcreceptorfororaldelivery.Sci.Transl.Med.5,213ra167(2013).
9.Forbes,N.S.Engineeringtheperfect(bacterial)cancertherapy.Nat.Rev.Cancer10,784-793(2010).
10.Chen,G.etal.Oraldeliveryoftumor-targetingSalmonellaexhibitspromisingtherapeuticefficacyandlowtoxicity.CancerSci.100,2437-2443(2009).
11.Loessner,H.&Weiss,S.Bacteria-mediatedDNAtransferingenetherapyandvaccination.ExpertOpin.Biol.Ther.4,157-168(2004).
12.Miot-Noirault,E.Perin,F.Routledge,L.Normier,G.LePape,A.Macrophagetargetingwithtechnetium-99mlabelledJ001acylatedpoly-galactosideforscintigraphyofinflammation:optimizationandassessmentofimagingspecificityinexperimentalarthritis.Eur.J.Nucl.Med.23,61-68(1996).
13.Aouadi,M.etal.OrallydeliveredsiRNAtargetingmacrophageMap4k4suppressessystemicinflammation.Nature458,1180-1184(2009).
14.DeSmet,R.etal.beta-Glucanmicroparticlesaregoodcandidatesformucosalantigendeliveryinoralvaccination.J.Control.Release172,671-678(2013).
15.Tesz,G.J.etal.GlucanparticlesforselectivedeliveryofsiRNAtophagocyticcellsinmice.Biochem.J.436,351-362(2011).
16.Yoo,J.W.,Irvine,D.J.,Discher,D.E.&Mitragotri,S.Bio-inspired,bioengineeredandbiomimeticdrugdeliverycarriers.Nat.Rev.DrugDiscov.10,521-535(2011).
17.Soto,E.R.&Ostroff,G.R.CharacterizationofmultilayerednanoparticlesencapsulatedinyeastcellwallparticlesforDNAdelivery.Bioconjug.Chem.19,840-848(2008).
18.Brown,G.D.&Gordon,S.Anewreceptorforbeta-glucans.Nature413,36-37(2001).
19.Swirski,F.K.etal.Identificationofsplenicreservoirmonocytesandtheirdeploymenttoinflammatorysites.Science325,612-616(2009)。
Claims (10)
1.一种基于酵母微囊的口服靶向载体***，其特征在于：该口服靶向载体***由酵母空微囊和表面带正电荷的纳米粒组成，其中正电荷纳米粒分布于酵母微囊内部；所述酵母空微囊与表面带正电荷的纳米粒的质量比在10:0.1到10:20之间。
2.根据权利要求1所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***，其特征在于：所述酵母空微囊为酵母菌经酸、碱及有机溶剂处理后得到的主要由β-1,3-D-葡聚糖组成的微囊结构；按照如下制备方法制备，首先取1g酵母菌分散于15mL浓度为1M的氢氧化钠或氢氧化钾溶液中，于80℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心，弃上清，双蒸水洗涤2次后，加入15mL双蒸水分散均匀；再用浓度为2.5M的盐酸或硫酸溶液调节pH至4-5，60℃恒温孵育1小时后转速3000rpm离心，水洗2次，去上清，再加入100mL异丙醇洗涤4次后，用100mL丙酮洗2次，离心弃上清，真空干燥后即得酵母菌空微囊。
3.根据权利要求1或2所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***，其特征在于：制备所述酵母空微囊的酵母菌选自酿酒酵母、葡萄汁有孢汉逊酵母、季也蒙有孢汉逊酵母、东方伊萨酵母、毕赤克鲁维酵母、膜璞毕赤酵母、美极梅奇酵母、红冬孢酵母和假丝酵母。
4.根据权利要求1或2所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***，其特征在于：所述表面带正电荷的纳米粒选自表面带正电荷的量子点、表面带正电荷的氧化铁纳米粒、表面带正电荷的载药纳米粒、以及表面带正电荷的纳米胶束，其表面电位在10mV至70mV之间，粒径在5nm至400nm之间。
5.根据权利要求4所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***，其特征在于：所述表面带正电荷的载药纳米粒包括但不限于负载了疏水药物吲哚美辛、舒林酸、甲氨喋呤、维甲酸、吉非贝齐、阿伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、紫杉醇、多西紫杉醇、长春新碱、雷帕霉素、坦罗莫司、依维莫司、地磷莫司、阿霉素或羟喜树碱的正电荷纳米粒。
6.一种制备权利要求1所述基于酵母微囊的口服靶向载体***的方法，其特征在于：制备时，首先称取一定量的酵母空微囊，并加入一定体积的去离子水或缓冲液中，超声至均匀分散后恒温孵育一定时间；待酵母空微囊完全溶胀后，加入表面带正电荷的纳米粒溶液，分散均匀后恒温孵育0.5～72小时，然后离心、并水洗，干燥后即得到负载了表面带正电荷纳米粒的酵母微囊。
7.根据权利要求6所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***的制备方法，其特征在于：所述恒温孵育的温度在4℃到80℃之间。
8.根据权利要求6所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***的制备方法，其特征在于：所述酵母空微囊混悬液的浓度在1mg/mL到100mg/mL之间。
9.根据权利要求6所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***的制备方法，其特征在于：所述表面带正电荷纳米粒溶液的浓度在0.05mg/mL到100mg/mL之间。
10.根据权利要求6所述一种基于酵母微囊的口服靶向载体***的制备方法，其特征在于：所述缓冲液溶液的选自磷酸盐缓冲液和碳酸盐缓冲液，pH在5.0到11.0之间。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510644505.6A CN105168180A (zh) | 2015-09-30 | 2015-09-30 | 一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510644505.6A CN105168180A (zh) | 2015-09-30 | 2015-09-30 | 一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105168180A true CN105168180A (zh) | 2015-12-23 |
Family
ID=54890956
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510644505.6A Pending CN105168180A (zh) | 2015-09-30 | 2015-09-30 | 一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105168180A (zh) |
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108743545A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-11-06 | 大连大学附属中山医院 | 一种海藻酸盐-载药纳米粒-聚阳离子微胶囊及其制备和应用 |
| CN110201234A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-09-06 | 山东百多安医疗器械有限公司 | 一种组织工程用***细胞微囊及其制备方法 |
| CN112402628A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-02-26 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种仿生靶向巨噬细胞光学成像剂的制备方法及其在巨噬细胞相关疾病诊断的应用 |
| CN112791068A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-05-14 | 郑州大学 | 一种co2响应性微纳米给药***的制备方法及其应用 |
| CN114425088A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-03 | 深圳先进技术研究院 | 一种酵母仿生免疫微纳生物机器人及其制备方法和应用 |
| CN114425089A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-03 | 深圳先进技术研究院 | 一种酵母仿生微纳生物机器人及其制备方法 |
| CN114470227A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-13 | 深圳先进技术研究院 | 一种矿化载药酵母仿生微纳机器人及其制备方法和应用 |
| CN114470228A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-13 | 深圳先进技术研究院 | 一种载凝血药酵母免疫微纳生物机器人及其制备和应用 |
| CN114469888A (zh) * | 2022-03-14 | 2022-05-13 | 辽宁大学 | 一种载药酵母微囊药物制剂及其制备方法 |
| CN114796150A (zh) * | 2021-01-18 | 2022-07-29 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 酵母细胞膜封装的细菌及应用 |
| WO2023104058A1 (zh) * | 2021-12-08 | 2023-06-15 | 深圳先进技术研究院 | 一种基于巨噬细胞的活细胞载药***及其制备方法与应用 |
| CN117844643A (zh) * | 2024-03-06 | 2024-04-09 | 天津中逸安健生物科技有限公司 | 一种基于转基因小球藻制备的重组流感疫苗的制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05138010A (ja) * | 1991-11-15 | 1993-06-01 | Mitsubishi Paper Mills Ltd | マイクロカプセルの製造方法 |
| CN101147855A (zh) * | 2007-07-01 | 2008-03-26 | 石国荣 | 一种利用酵母细胞制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材的方法 |
-
2015
- 2015-09-30 CN CN201510644505.6A patent/CN105168180A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05138010A (ja) * | 1991-11-15 | 1993-06-01 | Mitsubishi Paper Mills Ltd | マイクロカプセルの製造方法 |
| CN101147855A (zh) * | 2007-07-01 | 2008-03-26 | 石国荣 | 一种利用酵母细胞制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 周兴等: "基于巨噬细胞β-葡聚糖识别作用的口服靶向药物递送***研究", 《第十一届全国博士生学术年会生物医药专题论文集》 * |
| 车玲: "含羧基小分子药物介导亲水聚合物自组装构建纳米给药***研究", 《中国博士学位论文全文数据库医药卫生科技辑》 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108743545A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-11-06 | 大连大学附属中山医院 | 一种海藻酸盐-载药纳米粒-聚阳离子微胶囊及其制备和应用 |
| CN108743545B (zh) * | 2018-04-23 | 2021-04-06 | 大连大学附属中山医院 | 一种海藻酸盐-载药纳米粒-聚阳离子微胶囊及其制备和应用 |
| CN110201234A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-09-06 | 山东百多安医疗器械有限公司 | 一种组织工程用***细胞微囊及其制备方法 |
| CN112402628A (zh) * | 2020-11-16 | 2021-02-26 | 华中科技大学同济医学院附属协和医院 | 一种仿生靶向巨噬细胞光学成像剂的制备方法及其在巨噬细胞相关疾病诊断的应用 |
| CN114796150A (zh) * | 2021-01-18 | 2022-07-29 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 酵母细胞膜封装的细菌及应用 |
| CN112791068A (zh) * | 2021-02-08 | 2021-05-14 | 郑州大学 | 一种co2响应性微纳米给药***的制备方法及其应用 |
| CN112791068B (zh) * | 2021-02-08 | 2022-06-21 | 郑州大学 | 一种co2响应性微纳米给药***的制备方法及其应用 |
| CN114470228A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-13 | 深圳先进技术研究院 | 一种载凝血药酵母免疫微纳生物机器人及其制备和应用 |
| CN114470227A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-13 | 深圳先进技术研究院 | 一种矿化载药酵母仿生微纳机器人及其制备方法和应用 |
| CN114425089A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-03 | 深圳先进技术研究院 | 一种酵母仿生微纳生物机器人及其制备方法 |
| CN114425088A (zh) * | 2021-12-08 | 2022-05-03 | 深圳先进技术研究院 | 一种酵母仿生免疫微纳生物机器人及其制备方法和应用 |
| WO2023104056A1 (zh) * | 2021-12-08 | 2023-06-15 | 深圳先进技术研究院 | 一种酵母仿生免疫微纳生物机器人及其制备方法和应用 |
| WO2023104027A1 (zh) * | 2021-12-08 | 2023-06-15 | 深圳先进技术研究院 | 一种载凝血药酵母免疫微纳生物机器人及其制备和应用 |
| WO2023104058A1 (zh) * | 2021-12-08 | 2023-06-15 | 深圳先进技术研究院 | 一种基于巨噬细胞的活细胞载药***及其制备方法与应用 |
| WO2023104125A1 (zh) * | 2021-12-08 | 2023-06-15 | 深圳先进技术研究院 | 一种酵母仿生微纳生物机器人及其制备方法 |
| CN114469888A (zh) * | 2022-03-14 | 2022-05-13 | 辽宁大学 | 一种载药酵母微囊药物制剂及其制备方法 |
| CN117844643A (zh) * | 2024-03-06 | 2024-04-09 | 天津中逸安健生物科技有限公司 | 一种基于转基因小球藻制备的重组流感疫苗的制备方法 |
| CN117844643B (zh) * | 2024-03-06 | 2024-06-07 | 天津中逸安健生物科技有限公司 | 一种基于转基因小球藻制备的重组流感疫苗的制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105168180A (zh) | 一种基于酵母微囊的口服靶向载体***及其制备方法 | |
| Zavareh et al. | Chitosan/carbon quantum dot/aptamer complex as a potential anticancer drug delivery system towards the release of 5-fluorouracil | |
| Zeeshan et al. | Advances in orally-delivered pH-sensitive nanocarrier systems; an optimistic approach for the treatment of inflammatory bowel disease | |
| Lu et al. | Nanoparticle-based oral delivery systems for colon targeting: principles and design strategies | |
| Khalil et al. | Bacterial-derived polymer poly-γ-glutamic acid (γ-PGA)-based micro/nanoparticles as a delivery system for antimicrobials and other biomedical applications | |
| Viscido et al. | Nanotechnology in the treatment of inflammatory bowel diseases | |
| Cu et al. | Controlled surface modification with poly (ethylene) glycol enhances diffusion of PLGA nanoparticles in human cervical mucus | |
| Kothamasu et al. | Nanocapsules: the weapons for novel drug delivery systems | |
| Youshia et al. | Size-dependent nanoparticulate drug delivery in inflammatory bowel diseases | |
| Li et al. | Physiologically based pharmacokinetic modeling of nanoparticles | |
| Sivanesan et al. | Green synthesized chitosan/chitosan nanoforms/nanocomposites for drug delivery applications | |
| CA2936493C (en) | Nanoencapsulation of hydrophilic active compounds | |
| Li et al. | Cetirizine dihydrochloride loaded microparticles design using ionotropic cross-linked chitosan nanoparticles by spray-drying method | |
| CN106038512B (zh) | 一种层层自组装纳米载体及其制备方法 | |
| JP2013525351A (ja) | ナノ粒子の医薬組成物 | |
| Yang et al. | Nanoparticle-based therapeutics of inflammatory bowel diseases: a narrative review of the current state and prospects | |
| Navarro et al. | Biodistribution of PLGA and PLGA/chitosan nanoparticles after repeat-dose oral delivery in F344 rats for 7 days | |
| Leonard et al. | Design and in vitro characterization of multistage silicon-PLGA budesonide particles for inflammatory bowel disease | |
| CN103417515A (zh) | 一种包载可生物降解纳米粒的口服结肠靶向微囊及其制备方法 | |
| Qin et al. | Combatting Helicobacter pylori with oral nanomedicines | |
| Pachiyappan et al. | Surfactant‐mediated synthesis of polyhydroxybutyrate (PHB) nanoparticles for sustained drug delivery | |
| Wang et al. | Recent progress in the diagnosis and precise nanocarrier-mediated therapy of inflammatory bowel disease | |
| Xu et al. | Microparticles based on alginate/chitosan/casein three‐dimensional system for oral insulin delivery | |
| Capurso et al. | Development of a pH-responsive particulate drug delivery vehicle for localized biologic therapy in inflammatory bowel disease | |
| Shrestha et al. | Poly (vinyl alcohol)‐coated chitosan microparticles act as an effective oral vaccine delivery system for hepatitis B vaccine in rat model |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20151223 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |