CN101147855A - 一种利用酵母细胞制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种利用酵母细胞制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材的方法，涉及到酵母细胞的培养、处理的方法，更进一步涉及通过该方法所制备的微胶囊壁材和生物微胶囊。将在合适的条件下培养的酵母细胞直接或重新悬浮在吐温－80或TritonX－100、溴化十六烷基三甲基铵、十二烷基硫酸钠、乙酸乙酯、乙醇、盐酸、氢氧化钠、氯化钾及氯化钠等具有自溶促进功能的自溶促进剂中，在40～60℃的温度下进行振荡处理24～48小时后，离心、洗涤，冻干，即得到所述的微胶囊壁材。将酵母微胶囊壁材与活性物质进行高频度接触等便可制得大小均匀、不黏结，表面无未包埋芯物质的生物微胶囊。通过对酵母细胞进行改性处理后达到了增加芯物质包埋率，并能用于水溶性物质微胶囊化的目的。

Description

一种利用酵母细胞制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材的方法

技术领域

本发明涉及一种利用酵母细胞制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材的方法，涉及到酵母细胞的培养、处理的方法，更进一步涉及通过该方法所制备的微胶囊壁材和生物微胶囊。

技术背景

微胶囊技术又称微胶囊化，是21世纪食品、医药等工业领域重点开发的高新技术之一。微胶囊由芯材和壁材组成，具有保护物质免受环境的影响，降低毒性，掩蔽不良味道，控制核心释放，延长存储期，改变物态便于携带和运输，改变物性使不能相容的成分均匀混合等功能。这些功能使微胶囊技术成为工业领域中有效的商品化方法，在医药、香料、食品工业等领域具有广泛的用途。通过对敏感的活性物质或挥发性组分的微胶囊化，使它们定时、靶向释放，不仅增强了其使用效率，拓展了应用范围，保证了其最佳剂量，极大地增强了它们的性价比，而且使微胶囊化技术不再局限于提高产品附加值，而是成为一种崭新的能赋予新的功能性成分无与能比优越性的技术。

作为一项能够改善功能性物质性能的新技术，自1954年美国的NRC公司利用微胶囊技术研制成第一代无碳复写纸微胶囊并投放市场以来，微胶囊技术得到了突飞猛进的发展，每年有关微胶囊的出版物都以指数倍数增长。目前微胶囊技术在国外发展迅速，仅2002年，有关微胶囊的专利就有1000余项。但是由于成本过高，难以放大，或者由于应用范围太窄而使众多的微囊化专利和方法无法实现工业化。目前，微胶囊化的食品和药品在国外已在其总量中占有相当大的份额，特别是食品中的油脂和香料香精，微胶囊化的份额已接近20％～35％，而且还有不断增大的趋势。近几年，我国在微胶囊技术的应用方面有了许多发展，但同国外相比，国内的微胶囊技术仍处于起步阶段，进口微胶囊在生产中仍起着主导作用。

壁材的选择是制备性能优良的微胶囊产品的关键。目前使用的微胶囊壁材主要有天然、半合成和合成高分子三大类。天然高分子材料包括蛋白质类(如明胶、骨胶，纤维蛋白，血红蛋白等)、植物胶类(如树胶，琼脂，褐藻酸钠鹿角胶等)、蜡类(如石蜡，松香，蜂蜡等)、海藻酸盐类和壳聚糖类等。其特点是无毒，成膜性好，稳定性好，但机械强度差，原料质量不稳定。半合成高分子材料主要是纤维素类，如羟甲基纤维素，醋酸纤维素，纤维素醋酸酞酸酯等。其特点是毒性小，粘度大，成盐后溶解度增加，但不耐高温，耐酸性差，易水解。合成高分子材料有均聚物类，缩聚物类，共聚物类，如丙烯酸树脂，环氧树脂，聚乙烯酰胺，聚丙乙烯等。其中，最常用的合成材料为聚赖氨酸(PLL)，虽然有好的化学稳定性和成膜性，但在人体内能引起炎性反应，难以生物降解。此外，脂质体是保护敏感性物质的又一途径，利用脂质体包埋药物已得到了广泛的应用，但价格昂贵的卵磷脂和有机溶剂的使用限制了其在食品微胶囊工业化方面的应用。随着崇尚自然浪潮的兴起，使用天然高分子材料作为微胶囊化壁材成为一种必然。虽然新的微胶囊化方法和技术不断面世，它们大多以蛋白质、碳水化合物和蜡为壁材，所得的微胶囊脆弱，对芯物质适应性小，不耐压、不耐热，加工性能差，而且产品的颗粒大小不均匀，因此，能用于工业化生产的却并不多，有的微囊化的过程中还会用到有毒的溶剂或辅料等。为此，解决制备成本过高和壁材及辅助料的安全性问题是微胶囊研究中急需解决的问题之一，寻找原料易得、价廉、适用范围广、微囊化制备简单、对人类和生态环境安全的壁材将极大地促进微胶囊技术的发展。

酵母细胞安全无毒，大小均匀，天然的细胞结构使其具有包埋物质的潜能。在水中有优良的分散性，适应环境性强，不仅材料易得，而且其色浅、口感柔和，经过适当改性，完全能成为一种新型的、理想的微胶囊壁材。较之已有的微胶囊化技术，酵母微胶囊具有独特的优点：

(1)酵母细胞碳水化合物组成的外层细胞壁和内层细胞膜构成了天然的双层囊腔结构，可以避免挥发性物质的挥发，也可以避免光照、氧气所引起的氧化变质；

(2)微囊化过程中不需添加任何添加剂，只需水、酵母细胞和活性物质高频度接触即可；

(3)芯物质释放容易：只要遇到潮湿的粘膜如舌头或鼻粘膜，活性物质便能释放出来而无需破壁。酵母细胞天然的生物黏附性，使活性物质能长久释放；

(4)非热弹性的囊腔结构使包裹其中的芯物质不会因受热挤出或因食品加工过程中的煎、烤、炸、煮而损失；事实上，酵母细胞壁具有强韧度和柔软度，支持细胞壁物理强度的β-葡聚糖为难分解物质，因此，酵母微胶囊即使经过高压锅加压加热或冻结处理，芯物质也不会泄漏。

(5)酵母细胞易于培养，安全、无毒，已使其成为最为经济的微胶囊壁材。

此外，酵母的细胞壁成分甘露聚糖和葡聚糖均为生物活性物质，葡聚糖具有刺激动物体内淋巴细胞的产生、活化动物体内的巨噬细胞、诱使动物对念珠菌症产生非特异性免疫、提高存活率的作用。而甘露寡糖(简称MOS)与病原菌在肠壁上的受体非常相似，与类丁质有很强的结合能力，能够阻止病原菌在动物肠细胞表面吸附，在饲料中添加甘露寡糖可以减少肠道病原菌的数量，有些报告称MOS为“病原菌吸附剂”或“病原菌清除剂”。因此，酵母细胞是一种理想的微胶囊壁材。2000年成立的Fluid Technologies Plc.公司专门生产风味物质的酵母微胶囊。日本也开发成功了油脂的酵母微胶囊产品。

酵母细胞微胶囊原则上要求芯物质是脂溶性的，而脂溶性的芯物质进入酵母细胞的难易程度各异，已见报道的酵母微胶囊方法多限于精油类风味物质的微胶囊化，最近有文献报道，酵母细胞重组体可以作为口服药物的运输载体。为此，通过对酵母细胞进行改性处理，可以达到增加芯物质包埋率，并能用于水溶性物质微胶囊化的目的。

发明内容

本发明的目的是通过对酵母细胞进行改性处理，提供一种制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材及生物微胶囊的方法。该方法可以达到增加芯物质包埋率，并能用于水溶性物质微胶囊化的目的。

因此，本发明第一个目的是提供一种制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材的方法，包括：

(1)采用酵母细胞为出发菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中进行摇瓶培养；

(2)将所得的细胞离心，洗涤后，冻干或重新悬浮在具有自溶促进功能的自溶促进剂中，在40～60℃的温度下进行振荡处理24～48小时后，离心、洗涤，冻干，即得到所述的微胶囊壁材。其中所述的自溶促进剂任一选自吐温-80或TritonX-100、溴化十六烷基三甲基铵、十二烷基硫酸钠、乙酸乙酯、乙醇、盐酸、氢氧化钠、氯化钾及氯化钠；

应当指出：所加入的自溶促进剂的作用在于促进细胞自溶，如果加入高浓度的自溶促进剂则反应时间更短，如果加入低浓度的自溶促进剂则反应时间更长。因此在合适浓度范围内，加入不同浓度的自溶促进剂，本领域技术人员显然可以通过控制时间长短来达到预期效果。

在另一具体实施方案中，所述的吐温-80或TritonX-100的加入重量为0.1～5％；或

所述的溴化十六烷基三甲基铵的加入重量为0.1～5％；或

所述的十二烷基硫酸钠的加入重量为0.1～5％；或

所述的乙酸乙酯的加入重量为0.5～10％；或

所述的乙醇的加入重量为0.5～10％；或

所述的盐酸的加入重量为0.5～10％；或

所述的氢氧化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钾的加入重量为1～20％；

在另一个具体实施方案中，摇瓶培养的步骤如下：斜面种子活化4小时后接入种子培养基，培养24小时后再按10％的接种量接入装有50mL发酵培养基的250mL摇瓶中进行发酵培养，发酵时间24小时，发酵温度28-32℃，转速180r/min。

还在另一个具体实施方案中，酵母细胞处理的步骤如下：培养的酵母细胞离心、洗涤后，直接冷冻干燥，或重新悬浮于0.1～20％的自溶促进剂溶液中，在40～60℃下处理24～48小时后，离心，冷冻干燥，即得到所述的微胶囊壁材。

本发明的第二个目的是提供利用所制备的微胶囊壁材制备生物微胶囊的方法，包括：

步骤(1)-(2)，与前述相同；

(3)将冻干后的酵母微胶囊壁材进行微囊化处理，如与活性物质高频度接触等。

(4)如果需要，采用高效液相色谱法测定微胶囊中芯物质的含量。

其中，包埋度定义(下同)：包埋度(％)＝实际包埋量/微胶囊重量×100％

高频度接触定义(下同)：以可以实现溶液组分充分混和的转速进行振荡的频度。本领域公知的转速50rpm/min以上或加压2MPa以上，例如50-75rpm/min、75-200rpm/min、或200rpm/min以上的振荡频度。

在一个具体实施方案中，利用所述的壁材制备微胶囊的步骤如下：将1g酵母细胞与1-20mL1％的抗氧化剂溶液高频度接触进行包埋。24小时后取出，离心、洗涤除去表面未包埋的抗氧化剂，冷冻干燥。

另一个具体实施方案中，所述的抗氧化剂为1％的绿原酸，所述的溶液为水溶液。在另一个具体实施方案中，所加入的1％绿原酸的量为1-20mL。

在另一个具体实施方案中，所述的抗氧化剂为1％的白藜芦醇，所述的溶液为乙醇溶液。

经过对微胶囊壁材改性处理后，酵母细胞制备的壁材对水溶性绿原酸和脂溶性白藜芦醇的包埋度都有不同程度的提高，对绿原酸的包埋度分别比改性前提高了3.75％～43.52％不等，白藜芦醇的包埋度则提高了1.28％～25.06％不等。

本发明的第三个目的是提供适于培养上述酵母菌株的培养条件。

在一个具体实施方案中，所述的菌株为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae Han.)，斜面培养基为PDA培养基，种子培养基和发酵培养基为高糖培养基，组成为：蔗糖、酵母浸出物、无机氮源采用中心组合设计优化，再补充必要的矿物质。

在另一个具体实施方案中，所述的种子培养基和发酵培养基均为YPD培养基，组成如下：蛋白胨20.0g、酵母提取物10.0g、葡萄糖10.0g，添水至1000mL，pH4-5。

在另一个具体实施方案中，所述的种子培养基和发酵培养基均为产脂培养基，组成如下：蛋白胨3.0g、酵母提取物8.0g、蔗糖170.0g，添水至1000mL。

还在另一个具体实施方案中，种子培养基和发酵培养基都为豆芽汁蔗糖培养基，配制如下：取黄豆芽200.0g，洗净，放入水中煮沸30min，纱布过滤。取豆芽汁加蔗糖30.0g，添水至1000mL，调节pH＝7.2。

在相同条件下，四种培养基中，利用高糖培养基所培养的酵母细胞所制备的壁材对绿原酸和白藜芦醇的包埋度最高，分别为：8.76％和4.81％，比三种常规酵母培养基分别高10.2％、12.6％、26.4％和12.9％、32.9％、17.6％。

本发明的第四个目的是提供通过上述方法所制备的安全无毒性能优良的微胶囊壁材。

本发明的第五个目的是提供通过上述方法所制备的生物微胶囊。

本发明的有益效果：酵母细胞安全无毒，易于培养，天然的细胞结构使其具有包埋物质的潜能，经过适当改性，已成为一种新型、理想的微胶囊化壁材。根据市场需求以及我国目前的状况，在国内开展微胶囊技术的研究，特别是研究性能优良、价廉易得、对环境友好的酵母细胞作为微囊化的壁材，将对我国食品和药品工业的发展具有重要意义。本专利采用化学改性的方法，对酵母细胞进行适当的处理，达到了增加芯物质包埋率，并能用于水溶性物质微胶囊化的目的，所得生物微胶囊大小均匀，不黏结，表面没有未包埋的芯物质，对创制我国具有自主知识产权的微胶囊制剂具有十分重要的意义。无论从理论还是从实践的角度来看，利用酵母细胞作为微胶囊化的壁材，不仅能填补我国在这一领域的空白，对我国医药工业、临床医学和食品工业均具有重大的社会效益和经济效益。

具体实施方式

实施例1  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入高糖种子培养基培养24小时。再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，冷冻干燥。

实施例2  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入豆芽种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入豆芽培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，冷冻干燥。

实施例3  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入YPD种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入YPD培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，冷冻干燥。

实施例4  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入产脂种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入产脂培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，冷冻干燥。

实施例5  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于0.1～5％的TritonX-100溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的TritonX-100后，冷冻干燥。

实施例6  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于0.1～5％的吐温-80溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的吐温-80后，冷冻干燥。

实施例7  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于0.1～5％的溴化十六烷基三甲基铵溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的溴化十六烷基三甲基铵后，冷冻干燥。

实施例8  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于0.1～5％十二烷基硫酸钠的溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的十二烷基硫酸钠后，冷冻干燥。

实施例9  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于0.5～10％的乙酸乙酯溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的乙酸乙酯后，冷冻干燥。

实施例10  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于0.5～10％的乙醇溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的乙醇后，冷冻干燥。

实施例11  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于1～20％的氯化钠溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的氯化钠后，冷冻干燥。

实施例12  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于1～20％的氯化钾溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的氯化钾后，冷冻干燥。

实施例13  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于1～20％的氢氧化钠溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的氢氧化钠后，冷冻干燥。

实施例14  按照说明书中所述的制备方法，将酿酒酵母菌种接种在PDA斜面种子培养基上活化4小时后接入种子培养基培养24小时后，再按10％的接种量接入高糖培养基中，装液量为50mL发酵培养液/250mL摇瓶，发酵温度28-32℃，发酵时间24小时，摇床转速180r/min。离心、洗涤后，重新悬浮于0.5～10％的盐酸溶液中，在40～60℃下处理24～48小时。然后离心，用水洗净残留的盐酸后，冷冻干燥。

从上述实施例的结果中，经过分析我们发现：

(1)制得的绿原酸酵母微胶囊在25℃/75％RH，25℃/90％RH和60℃下贮存10天后，绿原酸的保有率分别为(99.00±0.60)％，(99.57±0.88)％和(98.72±0.41)％。在模拟胃液中，绿原酸酵母微胶囊中绿原酸在2h内的释放率达95％以上，5h后，绿原酸已释放完全。说明酵母细胞能使绿原酸免受外界环境影响，达到了稳定化的目的，同时也未明显降低绿原酸的释放速度。

(2)绿原酸酵母微胶囊对DPPH和羟自由基的清除能力比预测值高，当微胶囊乙醇提取液中绿原酸浓度为17.54mg/L时，其对羟自由基清除率比预测值高60.57％，对DPPH自由基的清除率提高了9.05％。可见，绿原酸微囊化后，其对羟自由基和DPPH自由基的清除能力都得到了显著提高。

(3)制得的白藜芦醇微胶囊在60℃下贮存10天后，白藜芦醇保有率为(99.39±0.37)％；在25℃/75％RH和25℃/90％RH光照下(ca.300lx)贮存10天后的白藜芦醇保有率比未微囊化的79.88％和77.77％分别提高了22.16％和19.75％。

(4)微囊化后白藜芦醇的水溶性比结晶型白藜芦醇高2倍以上，比无定形白藜芦醇也要高出1倍以上。表明白藜芦醇酵母微胶囊化以后，其生物利用度也因此提高了1～2倍。

(5)白藜芦醇酵母微胶囊对DPPH和羟自由基的清除能力比预测值高。当微胶囊乙醇提取液中白藜芦醇浓度为9.64和15.60mg/L时，其对羟自由基的清除能力分别比预测值高50.75％和13.70％。当微胶囊乙醇提取液中自藜芦醇浓度分别为10.18、19.28和31.22mg/L时，对DPPH自由基的清除率分别比未微囊化者高28.08％、22.71％和18.26％。可见，白藜芦醇酵母微囊化后，其对羟自由基和DPPH自由基的清除能力都得到了显著提升。

(6)酵母细胞微胶囊化的白藜芦醇在模拟胃液中90min内释放率达90％，这一释放特性对于提高白藜芦醇由于代谢和***过于迅速而引起的低生物利用度极为有利。由于白藜芦醇无法在血管外的组织中积累且血浆中白藜芦醇半衰期极短，因而微囊化白藜芦醇的缓释性能对于维持白藜芦醇的生物活性极为重要。

(7)所得生物微胶囊大小均匀，不黏结，表面没有未包埋的芯物质。

Claims (7)

1.一种利用酵母细胞制备安全无毒性能优良的微胶囊壁材及生物微胶囊的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

(1)采用酵母细胞为出发菌株，经斜面培养和种子培养后，接种在发酵培养基中进行摇瓶培养，离心后，用蒸馏水洗涤细胞；

(2)将所得的细胞冻干或重新悬浮在一定浓度的具有自溶促进功能的自溶促进剂中，在40～60℃的温度下进行振荡处理24～48小时后，离心、洗涤，冻干，即得到所述的微胶囊壁材；其中所述的自溶促进剂任一选自吐温-80或TritonX-100、溴化十六烷基三甲基铵、十二烷基硫酸钠、乙酸乙酯、乙醇、盐酸、氢氧化钠、氯化钾或氯化钠；

(3)将所得壁材与活性物质进行高频度接触等微胶囊化处理，离心，洗去细胞表面的活性物质，冻干后磨细，即得生物微胶囊。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：

所述的吐温-80或TritonX-100的加入重量为0.1～5％；或

所述的溴化十六烷基三甲基铵的加入重量为0.1～5％；或

所述的十二烷基硫酸钠的加入重量为0.1～5％；或

所述的乙酸乙酯的加入重量为0.5～10％；或

所述的乙醇的加入重量为.5～10％；或

所述的盐酸的加入重量为0.5～10％；或

所述的氢氧化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钠的加入重量为1～20％；或

所述的氯化钾的加入重量为1～20％。

3.如权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于所述的菌株为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae Han.)，斜面培养基为PDA培养基，种子培养基为高糖培养基，发酵培养基为高糖培养基。

4.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：

种子培养基和发酵培养基均为YPD培养基，组成如下：蛋白胨20.0g、酵母提取物10.0g、葡萄糖10.0g，添水至1000mL，pH4-5。

5.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：种子培养基和发酵培养基均为产脂培养基，组成如下：蛋白胨3.0g、酵母提取物8.0g、蔗糖170.0g，添水至1000mL。

6.如权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：

种子培养基和发酵培养基都为豆芽汁蔗糖培养基，配制如下：取黄豆芽200.0g，洗净，放入水中煮沸30min，用纱布过滤，取豆芽汁加蔗糖30.0g，添水至1000mL，调节pH＝7.2。

7.根据权利要求1-6的方法所制备的微胶囊壁材和生物微胶囊。