CN105147703B

CN105147703B - 黄柏酮在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用

Info

Publication number: CN105147703B
Application number: CN201510478406.5A
Authority: CN
Inventors: 窦薇; 任改艳; 孙阿宁; 王峥涛; 邓超; 罗晓平
Original assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Shanghai University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2015-08-07
Filing date: 2015-08-07
Publication date: 2018-06-08
Anticipated expiration: 2035-08-07
Also published as: CN105147703A

Abstract

本发明涉及医药学领域，特别是涉及一种黄柏酮的医药用途。本发明的黄柏酮可用于防治溃疡性结肠炎。

Description

黄柏酮在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用

技术领域

本发明涉及医药保健品领域，特别是涉及一种黄柏酮的医药用途。

背景技术

溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis，UC)是发生于结肠的慢性、反复发作的炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)。临床主要表现为腹泻、黏液脓血便、腹痛。主要并发症有：出血、肠穿孔、肛瘘、肠梗阻、结肠癌和感染性休克等。

目前治疗UC的西药主要有氨基水杨酸类、糖皮质激素类以及免疫抑制剂。效果都不很理想，且副作用大，不易长期使用。柳氮磺胺吡啶(SASP)是目前临床最常用的西药，适用于中度、轻度和慢性UC患者。口服后在肠内分解为磺胺吡啶及5-氨基水杨酸。对结肠肠壁组织有特别亲和力，起到抗炎作用。口服SASP后有10％～40％的患者出现恶心、消化不良、头痛、白细胞下降等不良反应，偶有引起关节痛、皮疹、蛋白尿及胰腺炎等，多数不良反应都归因于SASP的磺胺吡啶部分。

黄柏酮(Obacunone)是主要存在于芸香科植物中的一种柠檬苦素类成分，具有抗癌、杀虫、降脂等活性。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种黄柏酮的新的医药用途。

具体地说，本发明提供了一种黄柏酮在制备防治溃疡性结肠炎的药物或食品中的应用。

在一优选例中，所述黄柏酮是作为唯一的活性成分用于制备防治溃疡性结肠炎的药物或食品。

本发明各个方面的细节将在随后的章节中得以详尽描述。通过下文以及权利要求的描述，本发明的特点、目的和优势将更为明显。

附图说明

图1-图4体现黄柏酮对溃疡性结肠炎的治疗作用：

图1体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠体重的影响；

图2体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠血便发生率的影响；

图3体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠结肠长度的影响；

图4小鼠结肠组织病理切片体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理损伤的影响；

图5小鼠结肠组织病理评分体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理损伤的影响；

(图中：a表示正常对照组，b表示模型对照组，c表示SASP组，d表示黄柏酮组)

具体实施方式

本发明的问世部分是基于这样一个意外发现：黄柏酮可以明显改善溃疡性结肠炎小鼠的体重减轻、血便、结肠缩短和组织病理损伤等症状，因此，黄柏酮可用于制备防治肠炎，特别是溃疡性结肠炎的药物或食品。

进而，本发明提供了黄柏酮在制备防治肠炎的药物或保健食品中的应用。

本发明的黄柏酮(obacunone)的分子式：C₂₆H₃₀O₇，分子量：454.51，其结构式如下：

本发明的黄柏酮可通过商业途径从Sigma化学公司、成都曼斯特生物科技有限公司等处购买获得。其纯度均符合药用标准。黄柏酮的纯度以>98％最佳。

本发明的黄柏酮可以单独使用或以药物组合物的形式使用。药物组合物包括作为活性成分的本发明的黄柏酮及可药用载体。较佳地，本发明的药物组合物含有0.1-99.9％重量百分比的作为活性成分的本发明的黄柏酮。“可药用载体”不会破坏本发明的黄柏酮的药学活性，同时其有效用量，即能发挥药物载体作用时的用量对人体无毒。

所述可药用载体包括但不限于：软磷脂、硬脂酸铝、氧化铝、离子交换材料、自乳化药物传递***、吐温或其他表面活化剂、血清蛋白、缓冲物质如磷酸盐、氨基乙酸、山梨酸、水、盐、电解质如硫酸盐精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、硅酸镁、饱和脂肪酸部分甘油酯混合物等。

其他常用的药物辅料如粘合剂(如微晶纤维素)、填充剂(如淀粉、葡萄糖、无水乳糖和乳糖珠粒)、崩解剂(如交联PVP、交联羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、低取代羟丙基纤维素)、润滑剂(如硬脂酸镁)以及吸收促进剂、吸附载体、香味剂、甜味剂、赋形剂、稀释剂、润湿剂等。

本发明的黄柏酮以及其药物组合物可按本领域常规方法制备并可以通过肠道或非肠道或局部途径给药。口服制剂包括胶囊剂、片剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、丹剂、膏剂等；非肠道给药制剂包括注射液等；局部给药制剂包括霜剂、贴剂、软膏剂、喷雾剂等。优选为口服制剂。

本发明的黄柏酮以及其药物组合物的给药途径可以为口服、舌下、经皮、经肌肉或皮下、皮肤粘膜、静脉、尿道、***等。

除了制成药剂之外，亦可在本发明的黄柏酮中加入抗氧化剂、色素、酶制剂等各种食品添加剂，按本领域的常规方法制成保健食品。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

实施例1：

1、实验材料

1.1药材

黄柏酮(CAS：751-03-1，分子量454.51，HPLC纯度≥98％，由成都曼斯特生物科技有限公司生产)；葡聚糖硫酸钠(DSS，CAS：9011-18-1，MW 36-50kDa,由美国MP Biomedicals公司生产)；柳氮磺胺吡啶(SASP，CAS：599-79-1，分子量398.39，HPLC纯度≥98％，由美国Sigma-Aldrich公司生产)。

1.2实验动物

体重20±2g的C57BL/6雌性小鼠(8周)，由上海中医药大学实验动物中心提供，动物合格证号：SYXK(沪)2009-0069。置于常规饲养环境，自由进食和饮水。

2、实验方法

2.1溃疡性结肠炎模型的建立

选择体重均一的C57BL/6雌性小鼠(20±2g)，采用国际通用的溃疡性结肠炎造模方法(Gastroenterology 2002,123:256-70；PLoS One 2012,7:e36075)，在研究开始阶段，使小鼠自由进食和饮水，在初期适应阶段后，将水换成4％(w/v)的DSS，自由饮用7天，以引起溃疡性结肠炎。

2.2分组及给药方法

正常对照组：10只，给予正常饮食。

模型对照组：10只，给予4％DSS溶液自由饮用7天。

SASP组：10只，给予4％DSS溶液的同时灌胃给予SASP(根据临床用量换算成小鼠用量：350mg/kg)连续7天。

黄柏酮组：10只，给予4％DSS溶液的同时灌胃给予黄柏酮(50mg/kg)连续7天。

实验期间，每天新鲜制备剂量制剂，用0.5％的羧甲基纤维素钠溶解，并在制备1小时内使用。

2.3肠炎的评估

腹泻、血便、组织病理分析等均参考前期研究发表论文(PLoS One 2012,7:e36075；J Pharmacol Exp Ther 2013,345:473-82)所述的方法。实验期间每天记录体重变化、腹泻及血便症状。实验结束后麻醉并颈椎脱臼处死小鼠，打开腹腔，取出结肠，测量从盲肠到直肠的结肠长度。并取末端结肠做组织切片，进行H&E染色，对H&E染色结肠标本进行病理评分：(1)炎症细胞的渗出评分标准：0分-黏膜固有层内有极少量炎症细胞，1分-黏膜固有层内有较多的炎症细胞或黏膜固有层内的炎症细胞增多，2分-炎症细胞扩散至黏膜下层，3分-全层均有炎症细胞渗出；(2)组织损坏评分标准：0分-无黏膜损伤，1分-非连续的黏膜上皮损坏，2分-表层黏膜糜烂，3分-广泛的黏膜破损并向肠壁深层扩展。将炎症细胞的渗出计分和组织损坏计分相加，计算出组织病理评分(1-6分)。

2.4统计分析

所有实验数据均重复3次，结果以平均值±标准差表示，采用SPSS 16.0统计软件对实验数据采用单向方差分析(One-way ANOVA)及LSD检验，P<0.05为统计学上差异有显著性。

3结果

3.1对溃疡性结肠炎小鼠体重的影响

图1体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠体重的影响，由图1可见：正常对照组小鼠的体重增加了0.9±0.8％，模型组小鼠的体重减轻了8.2±0.9％，阳性对照组小鼠的体重减轻了5.0±0.8％，黄柏酮组小鼠的体重减轻了2.9±0.3％；进一步说明黄柏酮能显著抑制 DSS引起的溃疡性结肠炎小鼠的体重下降(P<0.001)；并且，口服给药情况下，黄柏酮(50mg/kg)对体重下降的抑制作用效果显著优于阳性对照药SASP(350mg/kg)(P<0.05)。

3.2对溃疡性结肠炎小鼠血便发生率的影响

图2体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠血便发生率的影响，由图2可见：正常对照组小鼠无血便发生，模型组小鼠的血便发生率为96.7±5.8％，阳性对照组小鼠的血便发生率为60.0±10.0％，黄柏酮组小鼠的血便发生率为43.3±5.8％；进一步说明黄柏酮能显著减少DSS引起的溃疡性结肠炎小鼠的血便率(P<0.001)；并且，口服给药情况下，黄柏酮(50mg/kg)对血便发生率的抑制作用效果显著优于阳性对照药SASP(350mg/kg)(P<0.05)。

3.3对溃疡性结肠炎小鼠结肠长度的影响

图3体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠结肠长度的影响，由图3可见：正常对照组小鼠无结肠缩短发生，模型组小鼠的结肠缩短率为35.3±0.6％，阳性对照组小鼠的结肠缩短率为19.4±0.3％，黄柏酮组小鼠的结肠缩短率为14.3±0.2％；进一步说明黄柏酮能显著改善DSS引起的溃疡性结肠炎小鼠的结肠缩短症状(P<0.01)；并且，口服给药情况下，黄柏酮(50mg/kg)对结肠缩短症状的改善作用效果显著优于阳性对照药SASP(350mg/kg)(P<0.01)。。

3.4对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织病理的影响

图4和图5体现了黄柏酮对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织的损伤修复作用，由图4可见：模型组小鼠的结肠组织为典型炎症黏膜表现，可见黏膜、黏膜下层甚至肌层大量炎性细胞浸润，组织结构紊乱、断裂，黏膜下层出血、水肿，毛细血管扩张；阳性对照组小鼠和黄柏酮组小鼠的结肠组织可见病变减轻，溃疡愈合，黏膜下层出血减轻。由图5可见：正常对照组小鼠计分为0，模型组小鼠计分为5.7±0.3，阳性对照组小鼠计分为3.4±0.4，黄柏酮组小鼠计分为3.0±0.2，与模型组相比，差异有显著性(P<0.001)。说明黄柏酮可以显著减轻结肠黏膜炎症细胞浸润和组织病理损伤状况(P<0.001)。并且，口服给药情况下，黄柏酮(50mg/kg)对结肠病理损伤的修复效果显著优于阳性对照药SASP(350mg/kg)(P<0.05)。

综上研究结果表明：黄柏酮可以明显改善溃疡性结肠炎小鼠的体重下降、血便发生率、结肠缩短率、以及组织病理损伤症状。并且，口服给药情况下，黄柏酮(50mg/kg)对溃疡性结肠炎小鼠的体重下降、血便发生率、结肠缩短率、以及组织病理损伤的改善作用显著优于阳性对照药SASP(350mg/kg)(P<0.05)。

本发明所涉及的多个方面已做如上阐述。然而，应理解的是，在不偏离本发明精神之前提下，本领域专业人员可对其进行等同改变和修饰，所述改变和修饰同样落入本申请所附权利要求的覆盖范围。

Claims

1.黄柏酮在制备防治溃疡性结肠炎的药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述黄柏酮是作为唯一的活性成分用于制备防治溃疡性结肠炎的药物。