CN105092758A

CN105092758A - 一种甘草总黄酮的含量测定方法

Info

Publication number: CN105092758A
Application number: CN201510486559.4A
Authority: CN
Inventors: 周洁
Original assignee: Yi Chuansi Bio Tech Ltd Chengdu
Current assignee: Yi Chuansi Bio Tech Ltd Chengdu
Priority date: 2015-08-11
Filing date: 2015-08-11
Publication date: 2015-11-25

Abstract

本发明公开了一种甘草总黄酮的含量测定方法，包括以下步骤：采用紫外可见分光光度计测定；柚皮苷对照品溶液的制备，取柚皮苷对照品10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容即得；甘草中药材样品液的制备，称取甘草中粉0.1g，精密称定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；甘草酮提取物样品液的制备；确定检测波长；确定对照品溶液的显色时间；取甘草中药材5份，精密称定，以甲醇作为对照溶液，测定吸收度。该含量测定方法稳定，可靠，且操作简单。

Description

一种甘草总黄酮的含量测定方法

技术领域

本发明涉及中草药检测技术领域，具体是指一种甘草总黄酮的含量测定方法。

背景技术

目前国内外学者对甘草的化学和药理作用进行了许多研究，主要有效成分有三萜皂苷和黄酮类化合物。其中，黄酮类成分具有明显的抗溃疡、解痉、抗炎、降血脂、镇痛和***样作用。近年来还发现甘草黄酮对艾滋病毒有很强的抑制增殖作用，对甘草黄酮的研究应用已引起了人们的重视，甘草总黄酮主要以二氢黄酮类化合物为主。

由于目前测定甘草总黄酮含量的主要方法是采用碱性比色法，但是该方法不稳定，操作复杂，影响因素较多，造成测定出来的含量结果不准确。

基于以上研究并设计了一种甘草总黄酮的含量测定方法。

发明内容

本发明的目的在于：提供一种甘草总黄酮的含量测定方法，该含量测定方法稳定，可靠，操作简单。

本发明通过下述技术方案实现：一种甘草总黄酮的含量测定方法，包括以下步骤：1）采用紫外可见分光光度计测定；

2）制备柚皮苷对照品溶液，取柚皮苷对照品约10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容即得；

3）制备甘草中药材样品液，称取甘草中粉0.1g，精密称定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；

4）制备甘草酮提取物样品液，取甘草酮提取物0.10g，精密称定，至100ml量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；

5）确定检测波长，分别取上述柚皮苷对照品溶液、甘草中药材样品液、甘草酮提取物样品液各0.05、1.00、0.1ml，置10ml容量瓶中，加入甲醇至1ml，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，放置1小时，以甲醇为参比液，于200—600mm波长处扫描；

6）确定对照品溶液的显色时间；

7）取甘草中药材5份，精密称定，于50ml容量瓶中，分别加入柚皮苷对照品2.0mg，分别加入加甲醇1ml，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容至10ml，放置，以甲醇作为对照溶液，测定吸收度。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤（5）中甘草中药材样品液、甘草酮提取物样品液与对照品溶液UV最大吸收为420—430nm。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以技术特征，所述步骤（5）中确定的检测波长为422nm。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述步骤6）确定对照品溶液的显色时间步骤为，精密量取柚皮苷对照品溶液0.02ml，置10ml容量瓶中，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，以甲醇作为空白对照，分别放置10、20、30、40、50、60、90、120、150、180min，测定吸收度。

进一步地，为了更好的实现本发明，还包括以下技术特征，所述对照品溶液显色时间为1h。

具体实验方法为：

仪器与试剂FA2004N电子天平，生产厂家：上海精密科学科技有限公司；SB2200超声波清洗器，生产厂家：上海科导超声仪器有限公司，DZF型真空干燥箱，生产厂家：上海精密实验设备有限公司，Angilent(8453型紫外分光光度计)，BuchiR-200型旋转蒸发器（瑞士Buchi公司），柚皮苷对照品，生产厂家：中国药品生物制品检定所，甘草药材，生产厂家：上海华宇药业有限公司。

实验步骤：

对照品溶液的制备取柚皮苷对照品10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容即得。

供试品溶液的制备1）药材样品液的制备：取甘草中粉0.1g，精密称定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过滤即得；2）甘草黄酮提取物样品液的制备取甘草黄酮提取物约0.10g，精密成定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得。

确定检测波长分别取上述柚皮苷对照品溶液、甘草中药材溶液、甘草黄酮提取物样品液各0.05ml、1.00ml、0.10ml，置10ml容量瓶中，加入甲醇至1ml，准确加入10%KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，放置，以甲醇为参比液，于200—600nm波长处扫描，紫外光谱图如图1。结果表明，甘草中药材供试品溶液、甘草黄酮提取物样品液与对照品显色溶液UV最大吸收为422nm。

其中图1、图2、图3、图4中：A为空白对照，B为对照品溶液，C为甘草中药材甲醇提取液，D为甘草黄酮提取物样品液。

确定显色时间准确量取对照品溶液0.02ml，置10ml容量瓶中，加入甲醇至约1ml，准确加入10%KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，以甲醇作为空白对照，分别于10、20、30、40、50、60、90、120、150、180min，在422nm处测定吸光度。

结果表明：显色溶液室温放置时间在50min后，吸光度趋于稳定，60—180min内吸收值RSD为1.01，确定显色时间为1h。

以下从线性关系、重现性、回收率验证含量测定方法的准确度；

测定线性关系

精密量取上述对照品溶液0.02，0.04，0.08，0.12，0.20ml，分别加甲醇至约1ml，准确加入10%KOH溶液的0.5ml，甲醇定容至10ml，放置1h，以甲醇为空白对照溶液，在波长422nm处测吸收度，得线性回归方程c=258.9A-1.6864（r=1，线性范围：2.252—22.52ug/ml）。

重现性试验

取6份甘草中粉，精密称定，每份取甘草中粉月0.1g，精密称定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得，准确量取甘草中药材样品液1.0ml，加10%KOH溶液0.5ml，甲醇定容至10ml，放置1h，以甲醇为空白对照溶液，在422nm处测定吸收度，以外标两点法计算含量，甘草中药材中总黄酮含量为4.0（RSD=2.16）。

回收率试验

取甘草药材5份，精密称定，于50ml容量瓶中，分别加入柚皮苷对照品约2.0mg，分别加甲醇1ml，准确加入10%KOH溶液的0.5ml，用甲醇定容，放置1小时，以甲醇作为空白对照溶液，在波长422nm处测定吸收度。测定结果见下表

通过以上验证实验可知，该方法测得的平均加样回收率98.81%，RSD2.00。

本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

本发明采用的测定甘草中总黄酮含量的方法，相对于现有技术中采用碱性比色法选择柚皮苷为对照品，进行甘草中总黄酮含量的测定的方法相比，该含量测定方法稳定，可靠，且操作简单。

附图说明

图1为空白对照溶液的紫外光谱图；

图2对照品溶液的紫外光谱图；

图3是甘草中药材甲醇提取液的紫外光谱图；

图4是甘草黄酮提取物的的紫外光谱图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

按照上述检测方法分别对批号20150513和20150528的甘草中药材中总黄酮进行含量检测。

实施例1：

批号为20150513甘草中药材中总黄酮含量测定，照高效液相色谱法测定，

检测仪器Angilent，型号为8453型紫外可见分光光度计，BuchiR-200型旋转蒸发仪，DZF型真空干燥箱，生产厂家：上海精密实验设备有限公司，SB2200超声波清洗器，生产厂家：上海科导仪器有限公司，EA2004N电子天平，生产厂家：上海精密科学仪器有限公司。

对照品溶液的制备，取柚皮苷对照品10.05mg，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容即得。

甘草中药材样品液的制备取甘草中药粉6份，分别为0.15g，0.15g，0.14g，0.14g，0.15g，0.14g，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，在超声波清洗器中超声处理90min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过即得。

甘草黄酮提取物样品液的制备，取甘草黄酮提取物0.12g，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀即得。

含量测定，将制备得到的6份甘草中药材样品液，分别精密量取1.0ml，放置1小时，以甲醇为空白对照溶液，在波长422nm处测定吸收度，以外表两点法计算含量，结果甘草中药材中总黄酮含量为4.08，RSD为2.16。

实施例2：

批号为20150528甘草中药材中总黄酮含量测定，照高效液相色谱法测定。

检测仪器Angilent，型号为：8453型紫外可见分光光度计，BuchiR-200型旋转蒸发仪，DZF型真空干燥箱，生产厂家：上海精密实验设备有限公司，SB2200超声波清洗器，生产厂家：上海科导仪器有限公司，EA2004N电子天平，生产厂家：上海精密科学仪器有限公司。

甘草中药材样品液的制备取甘草中药粉6份，分别为0.14g，0.15g，0.14g，0.14g，0.15g，0.14g，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml，在超声波清洗器中超声处理90min，放冷，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过即得。

含量测定，将制备得到的6份甘草中药材样品液，分别精密量取1.0ml，放置1小时，以甲醇为空白对照溶液，在波长422nm处测定吸收度，以外表两点法计算含量，结果甘草中药材中总黄酮含量为4.04，RSD为2.15。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化，均落入本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种甘草总黄酮的含量测定方法，其特征在于，步骤如下：

1)采用紫外可见分光光度计测定；

2)制备柚皮苷对照品溶液，取柚皮苷对照品10mg，精密称定，置10ml容量瓶中，用甲醇溶解，定容即得；

3)制备甘草中药材样品液，称取甘草中粉0.1g，精密称定，至100ml容量瓶中，加甲醇80ml超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；

4)制备甘草酮提取物样品液，取甘草酮提取物0.10g，精密称定，至100ml量瓶中，加甲醇80ml，超声处理90min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过即得；

5)确定检测波长，分别取上述柚皮苷对照品溶液、甘草中药材样品液、甘草酮提取物样品液各0.05、1.00、0.1ml，置10ml容量瓶中，加入甲醇至1ml，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，放置1小时，以甲醇为参比液，于200—600mm波长处扫描；

6)确定对照品溶液的显色时间；

7)取甘草中药材5份，精密称定，于50ml容量瓶中，分别加入柚皮苷对照品2.0mg，分别加入加甲醇1ml，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容至10ml，放置，以甲醇作为对照溶液，测定吸收度。

2.根据权利要求1所述的一种甘草总黄酮的含量测定方法，其特征在于：所述步骤（5）中甘草中药材样品液、甘草酮提取物样品液与对照品溶液UV最大吸收为420—430nm。

3.根据权利要求2所述的一种甘草总黄酮的含量测定方法，其特征在于：所述步骤（5）中确定的检测波长为422nm。

4.根据权利要求3所述的一种甘草总黄酮的含量测定方法，其特征在于：所述步骤6）确定对照品溶液的显色时间步骤为，精密量取柚皮苷对照品溶液0.02ml，置10ml容量瓶中，准确加入KOH溶液0.5ml，甲醇定容，摇匀，以甲醇作为空白对照，分别放置10、20、30、40、50、60、90、120、150、180min，测定吸收度。

5.根据权利要求4所述的一种甘草总黄酮的含量测定方法，其特征在于：所述对照品溶液显色时间为1h。