CN105717229B - 一种用hplc同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法 - Google Patents
一种用hplc同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105717229B CN105717229B CN201610079019.9A CN201610079019A CN105717229B CN 105717229 B CN105717229 B CN 105717229B CN 201610079019 A CN201610079019 A CN 201610079019A CN 105717229 B CN105717229 B CN 105717229B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- vine tea
- test sample
- kinds
- absolute methanol
- hplc
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 title claims abstract description 40
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 title claims abstract description 40
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 title claims abstract description 36
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 241001122767 Theaceae Species 0.000 title abstract description 39
- KJXSIXMJHKAJOD-LSDHHAIUSA-N (+)-dihydromyricetin Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC(O)=C(O)C(O)=C1 KJXSIXMJHKAJOD-LSDHHAIUSA-N 0.000 claims abstract description 30
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 26
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 21
- KQILIWXGGKGKNX-UHFFFAOYSA-N dihydromyricetin Natural products OC1C(=C(Oc2cc(O)cc(O)c12)c3cc(O)c(O)c(O)c3)O KQILIWXGGKGKNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 15
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 235000007743 myricetin Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 claims abstract description 14
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N Myricetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 235000010209 hesperetin Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N myricetin Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C(=O)C=2)=C1 PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229940116852 myricetin Drugs 0.000 claims abstract description 13
- DCYOADKBABEMIQ-OWMUPTOHSA-N myricitrin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O DCYOADKBABEMIQ-OWMUPTOHSA-N 0.000 claims abstract description 13
- DCYOADKBABEMIQ-FLCVNNLFSA-N myricitrin Natural products O([C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O1)C1=C(c2cc(O)c(O)c(O)c2)Oc2c(c(O)cc(O)c2)C1=O DCYOADKBABEMIQ-FLCVNNLFSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 claims abstract description 13
- CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N (+)-taxifolin Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC=C(O)C(O)=C1 CXQWRCVTCMQVQX-LSDHHAIUSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000001100 (2S)-5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 claims abstract description 12
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- XCGZWJIXHMSSQC-UHFFFAOYSA-N dihydroquercetin Natural products OC1=CC2OC(=C(O)C(=O)C2C(O)=C1)c1ccc(O)c(O)c1 XCGZWJIXHMSSQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- AIONOLUJZLIMTK-AWEZNQCLSA-N hesperetin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 AIONOLUJZLIMTK-AWEZNQCLSA-N 0.000 claims abstract description 12
- AIONOLUJZLIMTK-UHFFFAOYSA-N hesperetin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 AIONOLUJZLIMTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229960001587 hesperetin Drugs 0.000 claims abstract description 12
- FTODBIPDTXRIGS-UHFFFAOYSA-N homoeriodictyol Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 FTODBIPDTXRIGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 claims abstract description 12
- PADQINQHPQKXNL-LSDHHAIUSA-N (+)-dihydrokaempferol Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](C(C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)=O)O)=CC=C(O)C=C1 PADQINQHPQKXNL-LSDHHAIUSA-N 0.000 claims abstract description 10
- UIDUJXXQMGYOIN-UHFFFAOYSA-N aromadendrin Natural products CC1(C)C2C1CCC(C)C1C2C(C)CC1 UIDUJXXQMGYOIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- RAYJUFCFJUVJBB-UHFFFAOYSA-N dihydrokaempferol Natural products OC1Oc2c(O)cc(O)cc2C(=O)C1c3ccc(O)cc3 RAYJUFCFJUVJBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 235000007625 naringenin Nutrition 0.000 claims abstract description 10
- FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N (S)-naringenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 claims abstract description 9
- WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N naringenin Natural products C1(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC(C1)C1=CC=C(CC1)O WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229940117954 naringenin Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 14
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims description 8
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 7
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 244000276331 Citrus maxima Species 0.000 claims description 3
- 235000001759 Citrus maxima Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 3
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 claims description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 claims description 2
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 claims 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 abstract description 2
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 4
- 150000002212 flavone derivatives Chemical class 0.000 description 4
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 4
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 4
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000009388 Parthenocissus quinquefolia Nutrition 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 241000563984 Ampelopsis Species 0.000 description 2
- 241000207199 Citrus Species 0.000 description 2
- 208000035126 Facies Diseases 0.000 description 2
- 241001018563 Nekemias grossedentata Species 0.000 description 2
- 241000219099 Parthenocissus quinquefolia Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 229940126062 Compound A Drugs 0.000 description 1
- 206010017553 Furuncle Diseases 0.000 description 1
- NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N Heterophylliin A Natural products O1C2COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(OC(=O)C=2C=C(O)C(O)=C(O)C=2)C(O)C1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 NLDMNSXOCDLTTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- LUJAXSNNYBCFEE-UHFFFAOYSA-N Quercetin 3,7-dimethyl ether Natural products C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2OC)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 LUJAXSNNYBCFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PUTDIROJWHRSJW-UHFFFAOYSA-N Quercitrin Natural products CC1OC(Oc2cc(cc(O)c2O)C3=CC(=O)c4c(O)cc(O)cc4O3)C(O)C(O)C1O PUTDIROJWHRSJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- OXGUCUVFOIWWQJ-XIMSSLRFSA-N acanthophorin B Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OXGUCUVFOIWWQJ-XIMSSLRFSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000000589 high-performance liquid chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 1
- 208000021822 hypotensive Diseases 0.000 description 1
- 230000001077 hypotensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 206010036067 polydipsia Diseases 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- OEKUVLQNKPXSOY-UHFFFAOYSA-N quercetin 3-O-beta-D-glucopyranosyl(1->3)-alpha-L-rhamnopyranosyl(1->6)-beta-d-galactopyranoside Natural products OC1C(O)C(C(O)C)OC1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OEKUVLQNKPXSOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QPHXPNUXTNHJOF-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-O-beta-L-rhamnopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 QPHXPNUXTNHJOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXGUCUVFOIWWQJ-HQBVPOQASA-N quercitrin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OXGUCUVFOIWWQJ-HQBVPOQASA-N 0.000 description 1
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000391 smoking effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- -1 texifolin Chemical compound 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/17—Systems in which incident light is modified in accordance with the properties of the material investigated
- G01N21/25—Colour; Spectral properties, i.e. comparison of effect of material on the light at two or more different wavelengths or wavelength bands
- G01N21/31—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry
- G01N21/33—Investigating relative effect of material at wavelengths characteristic of specific elements or molecules, e.g. atomic absorption spectrometry using ultraviolet light
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Pyrane Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，属于药用植物成分分析技术领域，是先分别配制混合标准品溶液与藤茶供试样品溶液，然后采用高效液相色谱分别对混合标准品溶液与供试样品溶液进行检测，经计算获得供试样品中二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的含量。本发明测定方法稳定性和重现性好，操作简单、结果准确可靠，可应用于藤茶中多种黄酮类成分的同时测定。
Description
技术领域
本发明属于药用植物成分分析技术领域，具体涉及一种利用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法。
背景技术
藤茶为葡萄科蛇葡萄属中的一种野生藤本植物，学名为显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata W.T.Wan），是我国特有的一种药食两用植物，主要分布于我国长江流域以南等省区海拔200~1300 m的山区。藤茶味甘、淡、性凉，具有清热解毒、祛风湿等功效，民间常用于治疗感冒发热、咽喉肿痛、黄疸型肝炎、疱疖等症，已有上千年历史。现代药理研究表明，藤茶具有抗氧化、抑菌消炎、降血糖、降血脂、降血压和护肝效果，对因烟酒过度等引起的咽喉炎、消化功能障碍等病症具有独特功效。2013年显齿蛇葡萄（藤茶）叶被国家卫生计生委批准为新食品原料[2013年第16号]。目前已有大量的藤茶饮用茶产品及深加工产品在市场上销售。
研究表明，藤茶中的主要次生代谢物以黄酮类化合物为主，是迄今在自然界中发现的黄酮含量最高的一种天然植物，故被誉为“植物黄酮之王”。藤茶中的黄酮类物质种类多样，目前已发现了十几种黄酮类成分，包括二氢杨梅素、槲皮素、花旗松素、山奈酚、藤茶素、杨梅苷、橙皮素、芹菜素等。
目前黄酮类化合物含量的分析检测方法主要有紫外分光光度法和高效液相色谱法（HPLC）等，其中分光光度法测定的是总黄酮的含量，不能反映各黄酮类成分的情况。HPLC法具有易操作、灵敏度高和稳定性好等特点，已成为分析测定黄酮的主要方法。目前，利用HPLC法测定藤茶黄酮类物质的含量已有一定的文献报道，但主要是测定藤茶的二氢杨梅素、杨梅素和杨梅苷等个别黄酮类成分的含量，对其他黄酮类成分的测定很少涉及，更没有同时测定的报道。但藤茶由于品种、生态环境及栽培管理条件等方面的不同，其黄酮类成分含量存在显著差异。因此，建立一种简便、准确的分析测定藤茶中多种黄酮类成分的方法，对藤茶质量的控制及科学评价具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，该方法简单，精确度高，重现性好，可为科学评价和有效控制藤茶的内在质量提供可靠依据。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种利用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，包括以下步骤：
1）混合标准品溶液的制备：分别精密称取适量的二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品于10 mL棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得到各成分浓度分别为112.5、135、150、125、165、125、210、138、99、300、100mg·L-1的混合标准品溶液；
2）供试样品溶液的制备：将藤茶样品用液氮研磨成粉末，冷冻干燥至含水量小于5%，然后将其粉碎、过筛后，称取所得冻干粉0.1 g于三角瓶中，加入10 mL无水甲醇，摇匀，37℃振荡提取12 h，4500 r/min离心15 min，残渣再加10 mL无水甲醇，于相同条件下重复提取1次，并用少量无水甲醇洗涤残渣，合并3次上清液并定容至25 mL，得供试样品溶液；
3）将所得混合标准品溶液与供试样品溶液分别经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，采用高效液相色谱进行检测，经计算获得供试样品中二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的含量；
其高效液相色谱的条件为：色谱柱：VisionHT C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：无水甲醇-0.4wt%磷酸水溶液；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样体积：5μL；检测波长：290 nm，360 nm；梯度洗脱程序为：0~20 min，无水甲醇的体积浓度为30%；20~30 min，无水甲醇的体积浓度由30%增加至40%；30~45 min，无水甲醇的体积浓度由40%增加至42%；45~60min，无水甲醇的体积浓度由42%增加至50%。
所述藤茶样品为藤茶的嫩茎叶。
本发明的优点在于：
1、在本发明确定的色谱条件下，60min内便可完成对藤茶中11种黄酮类成分的同时测定分析，且每一种黄酮类成分的色谱峰峰形尖锐，对称性好，其分离度均大于1.5，能够达到完全分离。
2、本发明所建立的同时测定藤茶中11种黄酮类成分的分析方法简单、重复性好，结果准确可靠，可为藤茶的质量控制提供依据。
附图说明
图1为二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素在200-600nm波长范围内的吸收光谱图；
图2为杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁、芹菜素在200-600nm波长范围内的吸收光谱图；
图3为本发明混合标准品溶液在290nm（A）和360nm（B）波长下的液相色谱图；
图4为尤溪藤茶样品1在290nm（A）和360nm（B）波长下的液相色谱图；
其中，图中各峰标识：1-二氢杨梅素；2-二氢槲皮素；3-香橙素；4-杨梅苷；5-芦丁；6-杨梅素；7-柚皮素；8-槲皮素；9-橙皮素；10-山奈酚；11-芹菜素。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
1 实验部分
1.1 仪器与试药
Thermo Fisher LCQ Fleet高效液相色谱-质谱联用仪，配有四元梯度泵、二级管阵列检测器、自动进样器；Sartorius BT125D 型分析天平（赛多利斯科学仪器(北京)有限公司）；高速离心机（Sigma 3K-30）；紫外、可见分光光度计（Thermo ScientificEvolution201）；冷冻干燥机(Telstar LyoQuest-55)。
二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品均购自上海同田生物技术有限公司（纯度大于98%)，无水甲醇（色谱纯，Fisher 公司），水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
藤茶样品分别采集自福建尤溪县、贵州江口县，经福建农林大学生命科学学院植物学教研室鉴定为显齿蛇葡萄(Ampelopsis grossedentata W.T.Wan)。
1.2 高效液相色谱条件：
色谱柱：VisionHT C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：无水甲醇（A）-0.4wt%磷酸水溶液（B）；梯度洗脱条件：0~20 min，30%A；20~30 min，30%A-40% A；30~45 min，40%A-42%A；45~60 min，42% A-50%A；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；进样体积：5μL；检测波长：290nm，360 nm。
1.3 混合标准品溶液的制备：
分别精密称取适量的二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品于10 mL棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得到各成分浓度分别为112.5、135、150、125、165、125、210、138、99、300、100mg·L-1的混合标准品溶液，将其于-20℃条件下储存供液相分析用。
1.4 供试样品溶液的制备：
将藤茶样品用液氮研磨成粉末，冷冻干燥至含水量小于5%，然后将其粉碎过40目筛后密封，储存于-80℃备用；称取所得冻干粉0.1 g于三角瓶中，加入10 mL无水甲醇，摇匀，37℃振荡提取12 h，4500 r/min离心15 min，残渣再加10 mL无水甲醇，于相同条件下重复提取1次，并用少量无水甲醇洗涤残渣，合并3次上清液并定容至25 mL，得供试样品溶液，将其于-20℃条件下储存供液相分析用。
1.5 高效液相色谱测定
将所得混合标准品溶液与供试样品溶液分别经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，采用高效液相色谱法进行检测后，经计算获得供试样品中二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的含量。
2 结果与讨论
2.1 检测波长的选择
利用紫外可见分光光度计对11种黄酮类标准品进行全波长（200~600nm范围内）扫描，以确定不同黄酮类成分的最大吸收波长，结果见图1、图2。由图1可以看出，二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素在290nm左右有最大吸收峰；由图2可以看出杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁、芹菜素在360 nm附近有最大吸收峰。
2.2 洗脱梯度的选择
设定不同的洗脱梯度程序，根据各洗脱梯度程序下色谱峰的峰形及分离度，确定最佳洗脱梯度为0~20 min，30%A-30%A；20~30 min，30%A-40% A；30~45 min，40%A-42% A；45~60 min，42% A-50%A。采用上述梯度洗脱程序，11种黄酮类成分能够在60min内达到完全分离，其分离度均大于1.5，且峰形尖锐，对称性好（如图3，其中A为290nm下的液相色谱图，B为360nm下的液相色谱图）。
2.3 HPLC定量分析的方法学考察
2.3.1 线性关系考察
精密吸取混合标准品溶液0.25、0.5、1、2、4、8mL，分别用无水甲醇稀释并定容至10mL，按1.2的色谱条件将所得各浓度标准品溶液经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，进样5μL进行测定，以峰面积为纵坐标（Y），质量浓度（X）为横坐标，绘制标准曲线，计算标准曲线的回归方程及相关系数，结果见表1。
表1 HPLC测定11种黄酮类标准品的回归方程、相关系数、线性范围
由表1可知，二氢杨梅素、二氢槲皮素等11种黄酮类成分的质量浓度和相应峰面积呈良好线性关系。
2.3.2精密度试验
精密吸取混合标准品溶液5mL，加无水甲醇稀释至二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的浓度分别为22.5、27.0、30.0、25.0、33.0、25.0、42.0、27.6、19.8、60.0、20.0mg·L-1，按1.2项下的色谱条件将所得溶液经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，连续进样6次、每次5μL进行测定，记录峰面积并计算各黄酮类成分的含量，然后根据测定结果计算相对标准偏差RSD。经计算，二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁、芹菜素相对应的RSD值分别为0.41%、0.21%、0.16%、0.25%、0.11%、0.17%、0.23%、0.35%、0.28%、0.24%、0.35%，结果表明该方法精密度良好。
2.3.3重复性试验
精密称取同一批藤茶样品6份，按1.4的方法平行制备成6份供试样品溶液，按1.2的色谱条件将所得溶液经0.45μm有机微孔滤膜过滤后进样5μL进行测定，记录峰面积并计算各黄酮类成分的含量，然后计算RSD值。经计算，11种黄酮类成分的保留时间和含量的RSD值均小于3%，表明该测定方法的重复性良好。
2.3.4稳定性试验
精密称取一份藤茶样品，按1.4的方法制备成供试样品溶液，按1.2的色谱条件将所得溶液经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，分别于0、2、4、6、8、12、24小时进样5μL进行测定，并计算各黄酮类成分的含量。经计算，11种黄酮类成分的保留时间和含量的RSD值均小于3%，表明供试样品溶液在24h内稳定。
2.3.5加样回收率试验
精密称取已知11种黄酮类成分含量的同一藤茶样品6份，分别加入适量的11个黄酮类成分标准品，并按照1.4的方法制备供试样品溶液，按1.2的色谱条件将所得溶液经0.45μm有机微孔滤膜过滤后进样5μL进行测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表2。
表2 11种黄酮类成分的回收率试验结果
由表2结果表明，该方法的回收率在85.0%~101.21%的范围内，相对标准偏差RSD≤2.04％，表明该方法具有较好的可靠性和准确性。
2.4 藤茶样品中11种黄酮类成分的含量测定
按照本发明的方法，对福建尤溪和贵州江口两个产地的4个藤茶样品中11种黄酮类成分进行同时测定，并通过与标准品的紫外图谱和保留时间相比较来确认色谱图中11种黄酮类成分，结果见图4和表3。
表3 藤茶样品中11种黄酮类成分的含量（按干重计，单位为mg·g-1）
从图4和表3中可以看出，藤茶样品中的11种黄酮类成分能良好的分离，不同样品间的黄酮类成分含量不同。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
Claims (2)
1.一种用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）混合标准品溶液的制备：分别精密称取适量的二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素标准品于10 mL棕色容量瓶中，用无水甲醇溶解并定容至刻度，得到各成分浓度分别为112.5、135、150、125、165、125、210、138、99、300、100mg·L-1的混合标准品溶液；
2）供试样品溶液的制备：将藤茶样品用液氮研磨成粉末，冷冻干燥至含水量小于5%，然后将其粉碎、过筛后，称取所得冻干粉0.1 g于三角瓶中，加入10 mL无水甲醇，摇匀，37℃振荡提取12 h，4500 r/min离心15 min，残渣再加10 mL无水甲醇，于相同条件下重复提取1次，并用少量无水甲醇洗涤残渣，合并3次上清液并定容至25 mL，得供试样品溶液；
3）将所得混合标准品溶液与供试样品溶液分别经0.45μm有机微孔滤膜过滤后，采用高效液相色谱进行检测，经计算获得供试样品中二氢杨梅素、二氢槲皮素、香橙素、柚皮素、橙皮素、杨梅素、杨梅苷、山奈酚、槲皮素、芦丁和芹菜素的含量；
其高效液相色谱的条件为：色谱柱：VisionHT C18柱，250mm×4.6mm，5μm；流动相：无水甲醇-0.4wt%磷酸水溶液；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30℃；进样体积：5μL；检测波长：290nm，360 nm；梯度洗脱程序为：0~20 min，无水甲醇的体积浓度为30%；20~30 min，无水甲醇的体积浓度由30%增加至40%；30~45 min，无水甲醇的体积浓度由40%增加至42%；45~60min，无水甲醇的体积浓度由42%增加至50%。
2.根据权利要求1所述用HPLC同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法，其特征在于，所述藤茶样品为藤茶的嫩茎叶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610079019.9A CN105717229B (zh) | 2016-02-05 | 2016-02-05 | 一种用hplc同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610079019.9A CN105717229B (zh) | 2016-02-05 | 2016-02-05 | 一种用hplc同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105717229A CN105717229A (zh) | 2016-06-29 |
| CN105717229B true CN105717229B (zh) | 2017-10-27 |
Family
ID=56155708
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610079019.9A Expired - Fee Related CN105717229B (zh) | 2016-02-05 | 2016-02-05 | 一种用hplc同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105717229B (zh) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106770781B (zh) * | 2016-12-30 | 2020-03-17 | 浙江省中药研究所有限公司 | 一种同时测定中草药或者保健品中五种黄酮的方法 |
| CN111892566A (zh) * | 2019-05-05 | 2020-11-06 | 首都医科大学 | 显齿蛇葡萄水提取物、其制备方法以及在作为乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用 |
| CN110412193B (zh) * | 2019-08-12 | 2021-08-20 | 湖北省农业科学院中药材研究所 | 一种藤茶中黄酮类化合物种类及含量的检测方法 |
| CN110927312A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-03-27 | 广东一方制药有限公司 | 一种梅花配方颗粒uplc特征图谱的构建方法及其成分含量测定方法 |
| CN110865140A (zh) * | 2019-12-06 | 2020-03-06 | 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 | 一种金花茶中黄酮类化合物的检测方法 |
| CN111537627A (zh) * | 2020-04-15 | 2020-08-14 | 江苏大学 | 杨梅叶中黄酮类抗氧化活性成分的在线评价方法 |
| CN111903812A (zh) * | 2020-07-20 | 2020-11-10 | 上海中医药大学 | 一种速溶莓茶提取物、其制备方法及其应用 |
| CN112390773A (zh) * | 2020-12-02 | 2021-02-23 | 河南智盛优品生物科技有限公司 | 一种藤茶黄酮的提取工艺 |
| CN112798712B (zh) * | 2021-01-25 | 2023-01-31 | 广州研创生物技术发展有限公司 | 一种二氢槲皮素对映体的手性色谱分离分析方法 |
| CN117288862A (zh) * | 2023-09-26 | 2023-12-26 | 恩施土家族苗族自治州农业科学院(恩施土家族苗族自治州硒应用技术与产品开发研究院) | 基于hplc法同时测定藤茶中5种黄酮类物质含量的方法 |
-
2016
- 2016-02-05 CN CN201610079019.9A patent/CN105717229B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (6)
| Title |
|---|
| ＲP-HPLC法测定湘西藤茶二氢杨梅素的含量;付明 等;《江苏农业科学》;20141231;第42卷(第7期);全文 * |
| 大叶蛇葡萄总黄酮提取物的HPLC指纹图谱研究;江灿 等;《时珍国医国药》;20131231;第24卷(第7期);全文 * |
| 测定藤茶不同采收时期及不同部位的二氢杨酶素含量;何桂霞 等;《中成药》;20040531;第26卷(第3期);第211页右栏 * |
| 藤茶 HPLC指纹图谱;陈帅 等;《山地农业生物学报》;20111231;第30卷(第3期);第276页，第278页 * |
| 藤茶的HPLC 指纹图谱及化学模式识别研究;苏素娇 等;《中国实验方剂学杂志》;20131130;第19卷(第22期);全文 * |
| 藤茶黄酮提取物HPLC指纹图谱建立;王志宏;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20110315;第12-15页，第30页，第37-40页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105717229A (zh) | 2016-06-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105717229B (zh) | 一种用hplc同时测定藤茶中11种黄酮类成分的方法 | |
| CN102749348B (zh) | 一种鉴别药用植物中活性成分组的方法 | |
| CN106018629B (zh) | 一种虎杖叶指纹图谱hplc方法及其在虎杖叶胶囊质量控制中的应用 | |
| CN101979052A (zh) | 广西铁皮石斛hplc指纹图谱的建立方法及其标准指纹图谱 | |
| CN101851261B (zh) | 杠板归药材及其制剂中有效成分的对照品制法及含量测定方法 | |
| CN105572071B (zh) | 利用近红外光谱法快速检测感冒灵颗粒的提取液的方法及应用 | |
| CN104880528A (zh) | 一种双黄连口服液指纹图谱的构建方法 | |
| CN106248817B (zh) | 一种金银花质量评价方法 | |
| Cui et al. | Determination of ginseng with different ages using a taste-sensing system | |
| CN103027962A (zh) | 一种盐地碱蓬黄酮提取及含量测定方法 | |
| CN101091749A (zh) | 头花蓼药材、提取物及其质量控制方法 | |
| CN102749399B (zh) | 测定烟草中咖啡酸含量的方法 | |
| CN104090040A (zh) | 一种快速检测多穗柯主要活性成分的hplc方法 | |
| PéRez-Meseguer et al. | Development and validation of an HPLC-DAD analytical procedure for quality control of damiana (Turnera diffusa), using an antioxidant marker isolated from the plant | |
| CN109633003A (zh) | 一种测定远志中远志口山酮ⅲ和3,6，-二芥子酰基蔗糖含量的方法 | |
| CN103575821A (zh) | 一种糖敏灵制剂中14种化学成分的检测方法 | |
| Li et al. | Optimized HPLC extraction method of quercetin and berberine based on response surface analysis | |
| CN111443154A (zh) | 一种甘草属药用亲缘关系的研究方法 | |
| Li et al. | Simultaneous determination of phenols in Radix Polygalae by high performance liquid chromatography: quality assurance of herbs from different regions and seasons | |
| CN106153761B (zh) | 同时检测无籽刺梨果实中3种黄酮类成分的方法 | |
| CN102818862A (zh) | 中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法 | |
| CN109187810A (zh) | 一种治疗类风湿性关节炎中药组合物的检测方法 | |
| CN108653348A (zh) | 一种白芷茎提取物颗粒剂制备工艺 | |
| RU2614200C1 (ru) | Способ установления подлинности и качества зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum L.) | |
| CN105301130B (zh) | 一种检测麦冬中黄酮含量的高效液相色谱方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20171027 Termination date: 20180205 |