CN105067746B - 化妆品中帕地马酯的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化妆品中帕地马酯的测定方法，其包括如下步骤：(1)样品的前处理；(2)采用高效液相色谱的方法对帕地马酯进行分析，优化了高效液相色谱条件；(3)绘制标准工作曲线，采用外标法定量，计算帕地马酯的含量。本发明化妆品中帕地马酯的测定方法采用高效液相色谱法同时测定化妆品中帕地马酯A和帕地马酯O，对于采用高效液相色谱法检出阳性的样品，进一步采用高效液相色谱‑质谱/质谱法进行确证。本发明所述方法准确、快速、灵敏度高，对于化妆品的质量安全风险监测具有重要意义。

Description

化妆品中帕地马酯的测定方法

技术领域

本发明涉及一种化学物质的测定方法，特别是涉及化妆品中帕地马酯的测定方法。

背景技术

帕地马酯分为帕地马酯A和帕地马酯O。帕地马酯A，相对分子质量：235.36，CAS：14779-78-3，分子式：C₁₄H₂₁NO₂，结构式如下：

帕地马酯O，相对分子质量：277.41，CAS：21245-02-3，分子式：C₁₇H₂₇NO₂，结构式如下：

帕地马酯A由于其对眼睛、呼吸道和皮肤有刺激作用，我国《化妆品卫生规范》中明确规定化妆品中不得添加帕地马酯A，帕地马酯O作为一种抗紫外线的吸收剂，广泛应用于化妆品及其它透光防日晒工业品中，限量为8％。国内外对化妆品中帕地马酯的检测方法未见报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种准确、快速、灵敏度高的化妆品中帕地马酯的测定方法。

化妆品中帕地马酯的测定方法，其包括如下步骤：

(1)样品的前处理；

(2)采用高效液相色谱的方法对帕地马酯进行分析，优化了高效液相色谱条件；

(3)绘制标准工作曲线，采用外标法定量，计算帕地马酯的含量。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述高效液相色谱条件如下：

色谱柱：XTerra C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)；

流速：1.0mL/min；

流动相：乙腈-水混合溶液，其中乙腈与水的体积比为9:1，等度洗脱；

检测波长：310nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述样品为膏霜类、唇膏类、水剂类、散粉类或香波类化妆品样品。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述样品为膏霜类化妆品样品，前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL比色管中，加入2g氯化钠破乳后，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述样品为唇膏类化妆品样品，前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL比色管中，加入2mL四氢呋喃，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述样品为水剂类、散粉类或香波类化妆品样品，前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL比色管中，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，对于采用高效液相色谱法检出阳性的样品，进一步采用高效液相色谱-质谱/质谱法进行确证，其中：

高效液相色谱条件如下：

色谱柱：HSS T3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm)；

流动相：体积比为1:9的0.1％甲酸水溶液和甲醇；

流速：0.4mL/min；

柱温：30℃；

进样量：10μL；

质谱条件如下：

离子源：电喷雾离子源；

离子化模式：正离子模式；

毛细管电压：3.5kV；

萃取电压：2.9V；

离子源温度：150℃；

脱溶剂气温度：350℃；

数据采集方式：多反应离子监测。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述帕地马酯为帕地马酯A和帕地马酯O。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述确证实验包括如下步骤：将样液适当稀释，按高效液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中含有帕地马酯。

表1 帕地马酯质谱分析参数

本发明化妆品中帕地马酯的测定方法与现有技术不同之处在于：目前国内外尚无化妆品中帕地马酯A和帕地马酯O的测定方法报道，本发明化妆品中帕地马酯的测定方法采用高效液相色谱法同时测定化妆品中帕地马酯A和帕地马酯O，准确、快速、灵敏度高，对于化妆品的质量安全风险监测具有重要意义。

下面结合附图对本发明的化妆品中帕地马酯的测定方法作进一步说明。

附图说明

图1为本发明中帕地马酯的紫外吸收光谱；

图2为本发明中采用Elipes XDB C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱得到的色谱图；其中，1-帕地马酯A，2-帕地马酯O；

图3为本发明中采用XTerra C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱得到的色谱图；其中，1-帕地马酯A，2-帕地马酯O；

图4为本发明中采用Promosil C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱得到的色谱图；其中，1-帕地马酯A，2-帕地马酯O；

图5为本发明中采用Symmetry C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱得到的色谱图；其中，1-帕地马酯A，2-帕地马酯O；

图6为本发明中采用Kromasil C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱得到的色谱图；其中，1-帕地马酯A，2-帕地马酯O；

图7为本发明中帕地马酯的多反应监测色谱图，其中，1-帕地马酯A，2-帕地马酯O。

本发明附图中出现的所有的英文对应的中文翻译为：

mAU：毫吸收值；time：时间；Abs：吸收度；nm：纳米；Response：响应值。

具体实施方式

实施例1

一、试剂和材料

除非另有说明，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682-2008规定的实验用水。

甲醇：色谱纯。

四氢呋喃：色谱纯。

氯化钠。

帕地马酯标准品。

帕地马酯混合标准储备液：分别称取适量帕地马酯A和帕地马酯O标准品(精确至0.0001g)，用甲醇配制成含甲醇1000mg/L的单标储备液，再用甲醇配制成100mg/L的混合标准储备液。

帕地马酯混合标准工作溶液：用甲醇将帕地马酯混合标准储备液配制成浓度为0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10mg/L甲醇混合标准工作溶液。

二、仪器和设备

高效液相色谱仪：配有紫外检测器。

分析天平：感量为0.0001g和0.001g。

离心机：转速不低于5000r/min。

超声波水浴

注射器：5mL。

微孔滤膜：0.45μm，有机相。

三、分析步骤

1、样品处理

(1)膏霜类化妆品样品前处理

取1g样品置于10mL比色管中，加入2g氯化钠破乳后，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定。

(2)唇膏类化妆品样品前处理。

取1g样品置于10mL比色管中，加入2mL四氢呋喃，再加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定。

(3)水剂类、散粉类及香波类化妆品样品前处理

取1g样品置于10mL比色管中，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定。

2、测定条件

高效液相色谱参考条件：

色谱柱：XTerra C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)；

流速：1.0mL/min；

流动相：乙腈-水混合溶液，其中乙腈与水的体积比为9:1，等度洗脱；

检测波长：310nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL。

3、标准曲线的绘制

将帕地马酯标准工作液按如上测定条件依次由低向高进样测定，以峰面积-浓度作图，得到标准回归方程，绘制标准工作曲线。

4、测定

按本发明测定条件对待测样品进行测定，用外标法定量。待测样液中帕地马酯含量应该标准曲线之内，超出线性范围则应稀释后在进行分析。对于采用高效液相色谱法检出阳性的样品，进一步采用高效液相色谱-质谱/质谱法进行确证。

5、空白试验

除不称取样品外，均按上述测定条件和步骤进行。

6、结果计算

$W=\frac{c\×V}{m}\mathrm{...}\left(1\right)$

式中：

W———样品中帕地马酯的含量，mg/kg；

c———从标准工作曲线上查出的试样溶液中帕地马酯的浓度，mg/L；

V———样液最终定容体积，mL；

m———试样的质量，g。

7、检出限和定量限

帕地马酯的检出限为0.2mg/kg，定量限为0.5mg/kg。

8、回收率

在添加浓度0.5mg/kg～80000mg/kg浓度范围内，，测得回收率89.15％～112.57％，相对标准偏差为1.91％～7.71％。

四、实验条件的选择：

1、检测波长的选择

测定帕地马酯A和帕地马酯O的最大吸收波长，扫描范围为200-400nm。经测定，如图1所示，帕地马酯A和帕地马酯O均在310nm处有最大吸收峰。因此，设定其检测波长为310nm。

2、色谱柱的优化

分别考察了Elipes XDB C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)、XTerra C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)、Promosil C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)、Symmetry C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)和Kromasil C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)不同极性色谱柱对帕地马酯峰形及保留时间的影响，结果如图2-6所示。结果表明，在以乙腈：水＝90:10为流动相洗脱条件下，各种色谱柱对帕地马酯洗脱峰形均为拖尾、峰形及峰面积无差异，而XTerra C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)对其保留时间最合理，出峰较快，故选择XTerra C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱。

3、流动相的优化

分别选择甲醇：水＝50:50、甲醇：水＝80:20、甲醇：水＝90:10、乙腈：水＝80:20、乙腈：水＝90:10四种流动相，考察不同洗脱溶剂对帕地马酯的影响。结果表明，选择乙腈：水＝90:10做为流动相，帕地马酯洗脱效果峰形最好，保留时间最短，因此流动相最终选择乙腈：水＝90:10。

4、色谱柱温度优化

考察色谱柱温度对帕地马酯出峰的影响。分别选择25℃、30℃、35℃、40℃条件下，以乙腈：水＝90:10为流动相，XTerra C₁₈(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱为分析柱，结果表明，在各温度下，帕地马酯保留时间无差异，而在柱温30℃条件下，帕地马酯峰形最好，因此柱温选择30℃。

5、提取溶剂的选择

比较甲醇和乙腈对帕地马酯提取效果的影响。筛选经测定不含帕地马酯A和帕地马酯O的膏霜类、水剂类、散粉类、唇膏类和香波类化妆品样品作为空白样品，向其中加入一定量帕地马酯标准溶液，充分混匀后，按上述步骤提取帕地马酯。结果表明，以甲醇和乙腈作为样品提取溶液，对帕地马酯提取率无差异。鉴于乙腈的毒性及其成本较高，最终确定甲醇为样品提取溶剂。

五、方法的线性关系和定量限

1、线性关系

在本标准方法所确定的实验条件下，配制1000mg/L的帕地马酯A及帕地马酯O标准储备液，之后配制100mg/L混合标准储备液。以甲醇将其稀释至0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1、2、5、10mg/L；以峰面积为纵坐标，相应帕地马酯浓度为横坐标作图，在以上浓度范围内帕地马酯A的线性方程为y＝56.564x-0.1024，相关系数r²为0.9999；帕地马酯O的线性方程为y＝51.417x-0.1266，相关系数r²为0.9999，均呈良好的线性关系。

2、方法的检出限和定量限

经过检验方法的室内实验，结果表明，方法的检出限(S/N＝3)为0.2mg/kg，定量限(S/N＝10)为0.5mg/kg，帕地马酯A和帕地马酯O的定量限高效液相色谱图如图7所示。

六、方法的回收率和精密度

本标准方法对于帕地马酯A加标回收实验设定了0.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg三个添加浓度，对于帕地马酯O加标回收实验设定了0.5mg/kg、500mg/kg、80000mg/kg三个添加浓度。待测样液中帕地马酯含量应该标准曲线之内，超出线性范围则应稀释后在进行分析。按本检验方法所确定的实验条件，对每个添加浓度在膏霜类、水剂类、唇膏类、粉类和香波类样品均进行了6次试验，测得回收率89.15～112.57％，精密度试验测得相对标准偏差为1.91～7.71％。结果汇总于表2-6。

表2 膏霜类化妆品样品回收率和精密度试验结果

表3 水剂类化妆品样品回收率和精密度试验结果

表4 唇膏类化妆品样品回收率和精密度试验结果

表5 散粉类化妆品样品回收率和精密度试验结果

表6 香波类化妆品样品回收率和精密度试验结果

七、实际样品检测

应用建立的方法，对市售、网购等多种途径获取的不同品牌，不同档次的44件化妆品样品进行帕地马酯含量的测定，其中膏霜类样品11件、水剂类样品8件、唇膏类样品8件、散粉类样品8件、香波类样品9件。结果表明，所测化妆品中均未检出帕地马酯A和帕地马酯O。

八、确证试验

对于采用高效液相色谱法检出阳性的样品，进一步采用高效液相色谱-质谱/质谱法进行确证。

高效液相色谱条件如下：

色谱柱：HSS T3色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm)；

流动相：体积比为1:9的0.1％甲酸水溶液和甲醇；

流速：0.4mL/min；

柱温：30℃；

进样量：10μL；

质谱条件如下：

离子源：电喷雾离子源；

离子化模式：正离子模式；

毛细管电压：3.5kV；

萃取电压：2.9V；

离子源温度：150℃；

脱溶剂气温度：350℃；

数据采集方式：多反应离子监测。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述帕地马酯为帕地马酯A和帕地马酯O。

本发明所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其中，所述确证实验包括如下步骤：将样液适当稀释，按高效液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液，如果所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，允许偏差不超过表1规定的范围，则可判断样品中含有帕地马酯。

表1 帕地马酯质谱分析参数

以上所述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案作出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。

Claims (2)

1.化妆品中帕地马酯的测定方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)样品的前处理；

(2)采用高效液相色谱的方法对帕地马酯进行分析，优化了高效液相色谱条件；

(3)绘制标准工作曲线，采用外标法定量，计算帕地马酯的含量；

所述高效液相色谱条件如下：

色谱柱：XTerra C₁₈，4.6mm×250mm,5μm；

流速：1.0mL/min；

流动相：乙腈-水混合溶液，其中乙腈与水的体积比为9:1，等度洗脱；

检测波长：310nm；

柱温：30℃；

进样量：10μL；

所述帕地马酯为帕地马酯A和帕地马酯O；

所述样品为膏霜类、唇膏类、水剂类、散粉类或香波类化妆品样品；

当所述样品为膏霜类化妆品样品时，前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL比色管中，加入2g氯化钠破乳后，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定；

当所述样品为唇膏类化妆品样品时，前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL比色管中，加入2mL四氢呋喃，再加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定；

当所述样品为水剂类、散粉类或香波类化妆品样品时，前处理包括如下步骤：取1g样品置于10mL比色管中，加入甲醇至刻度，充分混匀，超声波辅助提取20min，转移至离心管中，以5000r/min转速离心15min后，取上清液过膜，滤液供高效液相色谱测定。

2.根据权利要求1所述的化妆品中帕地马酯的测定方法，其特征在于：对于采用高效液相色谱法检出阳性的样品，进一步采用高效液相色谱-质谱/质谱确证方法进行确证；

所述所述高效液相色谱-质谱/质谱确证方法包括如下步骤：将样液适当稀释，按高效液相色谱-质谱/质谱条件测定样液和标准工作溶液；

所述高效液相色谱-质谱/质谱条件如下：

色谱柱：HSS T3色谱柱，100mm×2.1mm,1.8μm；

流动相：体积比为1:9的0.1％甲酸水溶液和甲醇；

流速：0.4mL/min；

柱温：30℃；

进样量：10μL；

质谱条件如下：

离子源：电喷雾离子源；

离子化模式：正离子模式；

毛细管电压：3.5kV；

萃取电压：2.9V；

离子源温度：150℃；

脱溶剂气温度：350℃；

数据采集方式：多反应离子监测；

帕地马酯质谱分析参数为：

如果所选择的离子均出现，而且所选择的离子比与标准物质的相对丰度一致，允许相对偏差不超过±20％的范围，则判断样品中含有帕地马酯。