CN105017227B - N‑(1h‑吡唑‑5‑基)喹唑啉‑4‑胺类化合物 - Google Patents
N‑(1h‑吡唑‑5‑基)喹唑啉‑4‑胺类化合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明记载了N‑(1H‑吡唑‑5‑基)喹唑啉‑4‑胺类化合物。本发明提供了式I化合物或其在药学上可接受的盐。还提供了制备式I化合物的方法，和式I化合物作为药物和在癌症治疗中的用途
Description
技术领域
本发明属于药物学领域，涉及一类N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类衍生物及其制备方法和用途。具体涉及如结构式I的一类化合物及其制备方法和在FGFR抑制剂中的用途，上述化合物具有显著的抗肿瘤活性。
背景技术
蛋白激酶为一类调节各种细胞功能的蛋白质。这是通过在蛋白底物上特定氨基酸的磷酸化而使得底物蛋白构象改变而完成的。构象的变化调节底物活性或者其与其他结合配偶体相互作用的能力。蛋白激酶的酶活性是指激酶往底物上添加磷酸根基团的速率。这可以通过测定被转化为底物的量和时间的函数来测定。在蛋白激酶的活性位出现底物的磷酸化。
酪氨酸激酶在蛋白底物上催化ATP的末端磷酸转化为酪氨酸残基的蛋白激酶的亚组。这些激酶在致使细胞增殖、分化和迁移的生长因子信号传导的传播中具有重要作用。
成纤维细胞生长因子（FGF）被认为是许多生理过程（如发育和血管生长过程中形态变化）的重要介质。目前存在超过25中德已知FGF家族成员。成纤维细胞生长因子受体（FGFR）家族包括是个成员，其各由胞外配体结合区、单跨膜区和细胞内胞质蛋白酪氨酸激酶区组成。在FGF刺激下，FGFR发生二聚作用和转磷酸作用，着导致受体活化。受体的活化足以恢复和激活特定的下游信号配偶体，所述下游信号配偶体参与各种过程如细胞生长、细胞代谢和细胞存活的调节（Eswarakumar, V. P.等，Cytokine&Growth Factor Reviews2005,16,139-149）。在对于肿瘤细胞增殖、迁移、入侵和血管形成等关键性的生活过程中，FGF/FGFR信号通路具有多效应作用，与人类癌症直接有关。
在多种肿瘤如膀胱、肾细胞和***等中各种FGF的表达均有增加。FGF也是强有力地血管生成因子。各种FGF的激活突变与膀胱癌和多发性骨髓瘤有关，同时有文献证明受体在***和膀胱癌有表达（Grose， R. 等， Cytokine&Growth Factor Reviews 2005,16,179-186； Kwabi-Addo，B.等， Endocrime-Related Caner 2004,11,709-24）.因此，靶向FGFR和FGF信号传导的治疗可以直接影响肿瘤细胞核肿瘤血管生成，FGF信号传导***为具有吸引力的治疗靶点。
发明内容
本发明的一个目的是公开下述结构通式I所示的一类全新的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物。
本发明的另一个目的是公开上述的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物的制备方法。
本发明的又一个目的是公开上述的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物在制备FGFR抑制剂的抗肿瘤药物中的用途。
本发明提供了式I化合物或其在药学上可接受的盐。
其中
X代表CH2；
Y代表CH2或O；
-A-(R1)a代表基团；
R2为-H、-NH-CHRa-取代或未取代的杂芳基、-NH-CRaRb-取代或未取代的芳基或杂芳基；；
R3为卤素、-OH、-SH、取代或未取代的C6-C12的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的C1-C10的烃基、取代或未取代的C3-Cl0的环烃基、取代或未取代的杂环基、-ORa、-NHRa、-NRaRb或-SRa；
R4为-H、强吸电子基团； 做为优选方式，所述R2中，Ra和Rb各自独立地为取代或未取代的C1-Cl0的烷基、取代或未取代的C3-C10的环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂环基；所述R2中，所述取代的取代基选自卤素、OH、硝基、C1-C6烷基、羧基、C1-C6烷氧基羰基、苯基、-NH2、C1-C6烷基取代的氨基、羟基取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷氧基、未取代或C1-C4烷基取代的杂环基和三氟甲基；
作为优选方式，所述R2中，杂芳基为5元或6元环,含有1~3 个N 原子；杂环基为3元~7元的单环或8 元的二环，含有1~3个N原子，且所述杂环基非必需地被硫代或氧代。
作为优选方式，所述R3中，Ra和Rb各自独立地为取代或未取代的C1-Cl0的烷基、取代或未取代的C3-C10的环烷基、取代或未取代的苯基、取代或未取代的杂芳基或者取代或未取代的杂环基；所述取代的取代基选自卤素、OH、硝基、C1-C6烷基、羧基、C1-C6烷氧基羰基、苯基、-NH2、C1-C6烷基取代的氨基、羟基取代的C1-C6烷基、羟基取代的C1-C6烷氧基、未取代或C1-C4烷基取代的杂环基和三氟甲基 ；
进一步优选，所述R3中，杂芳基为5元或6元环,含有1~3 个N 原子；杂环基为3元~7元的单环或8 元的二环，含有1~3个N原子，且所述杂环基非必需地被硫代或氧代。
作为优选方式，所述R4中，强吸电子基选自三氟甲基、三氯甲基、二氟甲基、硝基、氰基；
包括上述任一所述的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物在制备用于在温血动物中产生FGFR抑制作用以抗肿瘤的药物中的用途。
做为优选方式，所述肿瘤为非小细胞肺癌。
做为优选方式，所述肿瘤为胃癌。
做为优选方式，所述肿瘤为多发性骨髓瘤。
包括上述任一所述的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物及药学上可接受的盐、水合物的药物组合物。
本发明中药学上可接受的盐包括：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐等无机酸，以及苹果酸盐、富马酸盐、马来酸盐、甲磺酸、对甲苯磺酸、甲酸盐、领苯二甲酸盐、醋酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸、丙二酸、乳酸盐、扁桃酸盐等有机酸盐，以及钠盐、钾盐、钡盐等。
本发明的有益效果在于：本发明提供一系列的化合物用于FGFR抑制剂以抗肿瘤的用途，常规方法即可合成。经实验，发现其抗肿瘤的作用明显。
说明书附图
图1为待测化合物对HUVEC 细胞的增殖抑制作用图；
图2为待测化合物对SNU-16 细胞的增殖抑制作用图；
图3为待测化合物对KATO III细胞的增殖抑制作用图。
具体实施方式
本说明书中公开的所有特征，或公开的所有方法或过程中的步骤，除了互相排斥的特征和/或步骤以外，均可以以任何方式组合。
实施例1：本发明N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类衍生物中具有代表性的化合物结构如下：
表1 具有代表性的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类衍生物
| 化合物 | 编号 |
| 1a | |
| 1b | |
| 1c | |
| 1d | |
| 1e | |
| 1f | |
| 1g | |
| 1h | |
| 1i | |
| 2a | |
| 2b | |
| 2c | |
| 2d | |
| 2e | |
| 2f | |
| 2g | |
| 2h | |
| 2i | |
| 3a | |
| 3b | |
| 3c | |
| 3d | |
| 4a | |
| 5a | |
| 5b | |
| 5c | |
| 5d | |
| 5e | |
| 6a | |
| 6b | |
| 6c | |
| 7a | |
| 7b | |
| 7c | |
| 7d |
实施例2：化合物1a的合成
将原料9a（200mg，0.86mmol）和8（214mg，0.86mmol）加入反应瓶中，然后加入异丙醇（8ml），100℃下搅拌回流4h。反应液呈黄色浑浊，TLC监测反应完全后，过滤得黄色固体，乙醇重结晶得122mg化合物1a。收率32.1%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS),δ(ppm)}: 2.024(s,4H),3.430(s,4H),3.721(s,6H),5.105(s,2H),6.130(s,1H),6.221(d,2H),6.654(s,1H),6.774(s,1H),7.119(d,1H).8.566(d,1H).8.708(s,1H),11.465(s,1H),13.077(s,1H)。
实施例3：化合物1b的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9b。得到目标化合物1b为黄色固体。收率60%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.916(m,4H), 3.717(s,6H),3.772(t,4H), 5.110(s,2H),6.129(s,1H),6.218(s,2H),6.819(s,1H),7.077(s,1H),7.546(d,1H).8.641(d,1H).8.799(s,1H),11.692(s,1H),13.18(s,1H)。
实施例4：化合物1c的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9c。得到目标化合物1c为黄色固体。收率48.3%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.235(m,3H),1.370(m,3H),1.628(d,1H).1.764(d,2H),1.963(d,2H),3.718 (s,6H),5.078(s,2H),6.130(s,1H),6.220(d,2H),6.638(s,1H),6.718(s,1H),7.041(d,1H).7.161(s,1H),8.341(d,1H).8.589(s,1H),10.936(s,1H)。
实施例5：化合物1d的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9d。得到目标化合物1d为黄色固体。收率43.1%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.625(s,6H), 3.542(s,4H),3.720(s,6H),5.105(s,2H),6.131(s,1H),6.220(s,2H),6.795(s,1H),7.022(s,1H),7.501(d,1H).8.571(d,1H).8.745(s,1H),11.546(s,1H),13.117(s,1H)。
实施例6：化合物1e的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9e。得到目标化合物1e为黄色固体。收率57.1%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 3.066(s,6H)，3.710(s,6H),5.101(s,2H),6.179(s,1H),6.229(s,2H),6.703(s,1H),6.800(s,1H),7.186(s,1H)8.475(s,1H).8.747(s,1H),11.485(s,1H)。
实施例7：化合物1f的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9f。得到目标化合物1f为黄色固体。收率23.6%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.118(m,6H),2.416(t,1H).2.777(s,1H),2.975(s,2H),3.717(s,6H),3.928 (d,2H),5.063(s,2H),6.116(s,1H),6.223(s,2H),6.986(s,1H),7.359(s,1H),8.5427(d,1H).,10.084(s,1H),13.117(s,1H),10.415(s,1H).12.668(s,1H)。
实施例8：化合物1g的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9g。得到目标化合物1g为黄色固体。收率49.9%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}:3.159（s,4H）,3.641(s,4H),3.721(s,6H),5.055(s,2H),6.112(s,1H),6.219(d,2H),7.102(s,1H),7.416(d,1H),8.149(d,2H),9.374（s,1H）,9.913(s,1H),12.850(s,1H)。
实施例9：化合物1h的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9h。得到目标化合物1h为黄色油状物。收率64.7%。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}:2.255（s,3H）,3.144(s,4H)，3.660（s,4H）,3.714（s,6H）,5.054（s,2H）,6.021（s,1H）,6.222（d,2H）,6.930（s,1H）,6.971（s,1H），7.348（s,1H）,8.437（s,2H）,10.121（s,1H）,12.673（s,1H）。
实施例10：化合物1i的合成。
制备方法类似于实施例2，但所用原料为9i。得到目标化合物1i为黄色油状物。收率40%。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}:0.929（d,3H）,1.180（m,2H）,1.714（d,3H）,2.899（t,2H）,3.713（s,6H）,4.101（d,2H）,5.052（s,2H）,6.114（s,1H）,6.219（s,2H）,6.709（s,1H）,7.00（s,1H）,7.373（d,1H）,8.415（d,1H）,8.496（s,1H）,10.66（s,1H）,12.55（s,1H）。
实施例11：化合物2a的合成。
将原料9e（200mg, 0.97mmol）和10（238mg， 0.97mmol）加入反应瓶中，然后加入异丙醇（20ml），100℃下搅拌回流4h。反应液呈黄色浑浊，TLC监测反应完全后，过滤得黄色固体，乙醇重结晶得157mg化合物2a。收率38.9%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.908(m,4H),3.129(s,6H),,3.715(s,6H),6.322(s,1H),6.440(d,2H),6.532(s,1H)6.930(s,1H),7.251(d,1H),8.66(s,1H),11.333(s,1H),12.802(s,1H),15.117(s,1H)。
实施例12：化合物2b的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9b。得到目标化合物2b为黄色固体。收率70%。熔点：214-217℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.916(m,4H),3.463(t,4H),3.715(s,6H),3.777(t,4H),6.332(t,1H),6.426(d,2H),6572(s,1H),7.069(d,1H),7.521(d,1H),8.627(d,1H),8.772(s,1H),11.580(s,1H),12.689(s,1H)。
实施例13：化合物2c的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9a。得到目标化合物2c为黄色固体。收率37.5%。熔点：212-214℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.013(s,4H),2.912(m,4H),3.414(s,4H),3.716(s,6H),6.328(s,1H),6.429(d,2H),6.539(s,1H),6.651(s,1H),7.088(d,1H),8.556(d,1H),8.694(s,1H),11.404(s,1H),12.677(s,1H)。
实施例14：化合物2d的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9d。得到目标化合物2d为黄色固体。收率31.5%。熔点：218-220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.621(s,6H),2.921(m,4H),3.631(s,4H),3.715(s,6H),6.329(s,1H),6.424(s,2H),6.553(s,1H),7.023(s,1H),7.488(d,1H),8.565(d,1H),8.728(s,1H),11.481(s,1H),12.666(s,1H)。
实施例15：化合物2e的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9c。得到目标化合物2e为黄色固体。收率25.4%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.259(m,3H),1.364(t,3H),1.629(d,1H).1.759(d,2H),1.958(d,2H),2.905(d,4H),6.328(s,1H),6.421(d,2H),6.517(s,1H),6.679(s,1H),7.085(d,1H),7.511(s,1H),8.422(s,1H),8.678(s,1H),14.185(s,1H)。
实施例16：化合物2f的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9j。得到目标化合物2f为黄色固体。收率58.3%。熔点：大于194-196℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.429(s,9H),2.881(s,4H),3.481(s,4H), 3.611(s,4H),3.71(s,6H),6.317(s,1H),6.429(s,2H),6.638(s,1H),6.966(s,1H),7.308(d,1H),8.411(s,2H),10.005(s,1H),12.171(s,1H)。
实施例17：化合物2g的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9g。得到目标化合物2g为黄色固体。收率32.5%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.891(s,4H),3.232(s,4H),3.641(s,4H),3.702(s,6H),6.311(s,1H),6.417(s,2H),6.550(s,1H),7.07(s,1H), 7.441(d,1H),8.528(d,1H),8.588(s,1H),9.246(s,1H),11.945(s,1H)。
实施例18：化合物2h的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9f。得到目标化合物2h为黄色固体。收率28.5%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.353（s,6H），2.957(d,4H),3.074(t,3H),3.705(s,6H),4.200(d,2H),6.320(s,1H),6.381(d,2H),6.575(s,1H),7.140(s,1H),7.588(d,1H).8.636(d,1H).8.741(s,1H),9.469(s,1H), 11.495(s,1H),12.666(s,1H)。
实施例19：化合物2i的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为9i。得到目标化合物2i为黄色固体。收率52.3%。熔点：大于220℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 0.933(d,3H),1.165(m,2H),1.745(d,3H),2.910(m,4H),3.036(t,2H),3.232(s,4H),3.714(s,6H),4.050(d,2H),6.329(s,1H),6.425(s,2H),6.552(s,1H),7.016(s,1H),7.494(d,1H),8.564(d,1H),8.726(s,1H),11.469(s,1H),12.65(s,1H)。
实施例20：化合物3a的合成。
将原料11a (200mg，0.64mmol)和10 (158mg，0.64mmol)加至THF(10ml)中，然后加入三乙胺（89uL,0.64mmol），100℃下搅拌回流1h。待反应完全后，减压除去溶剂, 乙醇重结晶得250mg化合物12a。再将12a（250mg，0.48mmol）和13（61mg，0.58mmol）加至10ml乙腈中，180℃下封管回流6h。待反应完全后，停止反应。冷却有固体析出，抽滤干燥得241mg黄色固体，即化合物11。收率63.8%。熔点大于200℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}:1.908(m,4H),2.863(m,4H),3.177(m,4H),3.017(s,6H),4.614(s,2H),6.309(s,1H),6.415(s,2H),6.572(s,1H),7.397(m,6H),8.458(br,1H) ,9.009(s,1H),10.621(br,1H) ,12.155(br,1H)。
实施例21：化合物3b的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11b。得到目标化合物3b为黄色固体。收率62.5%。熔点：大于230℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.499(m,4H),2.873(m,4H),3.007(m,4H),3.697(s,6H),4.629(s,2H),6.244(s,1H),6.307(s,1H),6.415(s,2H),7.397(m,6H),8.05(br,1H) ,9.159(s,1H),10.470(br,1H) ,12.201(br,1H)
实施例22：化合物3c的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11c。得到目标化合物3c为黄色固体。收率86%。熔点：228-232℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 0.941(d,3H,J=6.0Hz),1.255(m,2H),1.495(s,1H),1.665(d,2H,J=12Hz),2.761(m,4H),2.869(s,2H),3.204(d,2H,J=8.4Hz),3.697(s,6H),4.619(s,2H),6.240(s,1H),6.307(s,2H),6.746(s,1H),7.390(m,6H),8.416(br,1H) ,9.284(s,1H),10.460(br,1H) ,12.191(br,1H)。
实施例23：化合物3d的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11d。得到目标化合物3d为黄色固体。收率42.6%。熔点：136-140℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.374(m,5H),1.589(s,1H),1.692(s,2H),2.000(s,2H),2.880(s,4H) ,3.630(s,1H),3.710(s,6H),4.602(s,2H),6.425(m,4H),7.293(m,5H),7.824(d,1H,J=6.8Hz),8.015(br,1H),9.339(s,1H),10.650(br,1H) ,12.201(br,1H)。
实施例24：化合物4a的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11d和8。得到目标化合物4a为黄色固体。收率52%。熔点：124℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.379(m,5H),1.592(s,1H),1.692(s,2H),1.995(s,2H),3.638(s,1H),3.714(s,6H) ,4.651(s,2H), 5.017(s,2H), 6.108(s,1H),6.227(s,2H),6.521(s,1H),7.366(m,5H),7.838(d,1H,J=6.8Hz),8.203(br,1H),9.300(s,1H),10.834(br,1H) ,12-13(br,1H)。
实施例25：化合物5a的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11d、10和15。得到目标化合物5a为黄色固体。收率60%。熔点：200℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.282(s,1H),1.427(m,4H),1.620(s,1H),1.738(s,2H),2.000(s,2H),2.336(s,3H) ,2.860(m,4H),3.521(s,1H),3.702(s,6H),4.684(s,2H),6.404(m,4H),6.917(s,1H),8.996(s,1H),9.614(s,1H),11.813(br,1H) ,12.570(br,1H),13.107(br,1H)。
实施例26：化合物5b的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11b、10和15。得到目标化合物5b为黄色固体。收率34.4%。熔点：220-224℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.356(s,3H),2.428(m,4H),2.873(m,4H),3.032(m,4H),3.703(s,6H),4.607(s,2H),6.209(s,1H),6.312(s,1H),6.418(s,2H),6.840(s,1H),8.648(s,1H),9.354(s,1H),10.495(br,H) ,10.839(br,H) ,12.276(br,H)。
实施例27：化合物5c的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11c、10和15。得到目标化合物5c为黄色固体。收率90.5%。熔点：大于200℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 0.950(d,3H,J=6.0Hz),1.260(m,2H),1.605(s,1H),1.7113(d,2H,J=11.6Hz),2.388(s,2H),2.847(m,4H),2.976(m,2H),3.702(s,6H),4.686(s,2H),6.316(s,1H),6.370(s,2H),6.455(s,1H),7.104(s,1H),8.973(s,1H),9.292(s,1H),11.666(br,1H) ,12.580(br,1H)。
实施例28：化合物5d的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11a、10和15。得到目标化合物5d为黄色固体。收率63.8%。熔点：大于240℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.943(m,4H),2.429(m,4H),2.866(m,4H),3.708(s,6H),4.671(s,2H), 6.214(s,1H),6.316(s,1H),6.395(s,2H), 6.799(s,1H),8.614(s,1H),9.179(s,1H),10.641(br,1H) ,12.451(br,1H)。
实施例29：化合物5e的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11e、10和15。得到目标化合物5e为黄色固体。收率37.4%。熔点：大于200℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.298(s,6H),2.374(m,3H),2.901(m,3H),3.069 (m,4H), 3.720(s,6H),4.634(s,2H),6.329(s,1H),6.435(s,2H),6.893(s,1H),8.438(s,1H),8.956(s,1H),9.272(s,1H),9.459(br,1H),10.704(br,1H) ,11.493(br,1H)。
实施例30：化合物6a的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11d、8和15。得到目标化合物6a为黄色固体。收率45.6%。熔点：168-172℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.268(s,1H),1.423(m,4H),1.600(s,1H),1.729(s,2H),1.990(s,2H),2.349(s,3H) ,3.522(s,1H),3.705(s,6H),4.650(s,2H),5.028(s,2H),6.111(s,1H),6.209(m,2H),6.887(s,1H),8.092(d,1H,J=6.8Hz),8.971(s,1H),9.612(s,1H),11.879 (br,1H) ，13.026 (br,1H)。
实施例31：化合物6b的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11a、8和15。得到目标化合物6b为黄色固体。收率51.3%。熔点：大于240℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.955(m,4H),2.397(s,3H),3.238(m,4H)3.708(s,6H),4.669(s,2H),5.045(s,2H),6.190(s,1H),6.357(s,2H),6.683(s,1H),6.858(s,1H),8.920(s,1H),9.240(s,1H),11.658(br,1H) ,13.141(br,1H)。
实施例32：化合物6c的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为11e、8和15。得到目标化合物6c为黄色固体。收率24.3%。熔点：大于200℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.268(s,6H),2.364(m,3H),3.033(m,6H),3.706 (s,6H),4.621(s,2H),5.013(s,2H),6.100(s,1H),6.218(s,2H),6.868(s,1H),8.409(s,1H),8.956(s,1H),9.240(s,1H),9.437(br,1H) ,11.458(br,1H)。
实施例33：化合物7a的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为16、10和15。得到目标化合物7a为黄色固体。收率51.7%。熔点：184-188℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.435(s,3H),2.866(m,4H),3.709(s,6H),4.704(s,2H),6.357(m,4H),7.448(t,1H,J=7.6Hz),7.585(d,1H,J=6.8Hz),7.838(d,1H,J=6.8Hz)，8.657(m,2H), 11.541(br,1H) ,12.621(br,1H),13.311(br,1H)。
实施例34：化合物7b的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为16、10和13。得到目标化合物7b为白色固体。收率47%。熔点：158-162℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.846(s,4H),3.704(s,6H),4.595(d,2H,J=5.6Hz),6.366(m,4H),7.047(s,1H),7.317(m,5H),7.511(s,1H)，8.332(s,1H), 9.928(s,1H),10.403(br,1H) ,12.108(br,1H),12.832(br,1H)。
实施例35：化合物7c的合成。
制备方法类似于实施例20，但所用原料为16、10和17。得到目标化合物7c为黄色固体。收率39.2%。熔点：100-102℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 1.681(s,3H),2.592(m,4H),3.651(s,6H),6.038(s,1H),6.238(m,4H),6.915(t,1H,J=6.8Hz),7.406(m,5H),7.645(m,2H),7.701(d,1H,J=8.4Hz),7.812(d,1H,J=7.6Hz)，8.152(d,1H,J=6.4Hz), 8.5-9.5(br,1H) ,10-11(br,1H)。
实施例36：化合物7d的合成。
制备方法类似于实施例11，但所用原料为16。得到目标化合物7d为白色固体。收率51.7%。熔点：大于200℃。1HNMR {400 MHz, CDCl3(TMS), δ(ppm)}: 2.922(m,4H), 3.718(s,6H),6.326(s,1H),6.477(d,2H,J=1.6Hz), 6.632(s,1H),7.582(t,1H,J=7.6Hz),7.695(d,1H,J=8.4Hz), 7.855(t,1H,J=7.6Hz)，8.656(d,1H,J=8.4Hz), 10.823(br,1H) ,12.411(br,1H)。
实施例37: 体外抗肿瘤活性实验
基于CellTiter-Glo细胞生长抑制实验模型，每个化合物检测浓度为10 μM，细胞与化合物孵育72小时后进行检测，计算细胞增殖抑制百分比。实验同时设置阴性对照组（不加药仅含0.2% DMSO）和盐酸阿霉素（多柔比星，Doxorubicin）阳性对照组，阳性对照为8个浓度的量效曲线。
1.材料
1.1细胞培养材料：
（1）RPMI 1640 培养基, Cat. No. #22400-089, Lot. No. #792079（Gibco）
（2）FBS, Cat. No. #26140-079, Lot. No. #1227693（Gibco）
（3）DMSO, Cat. No. #0231-500ml, Lot. No. #2210C024 (Amresco)
（4）0.25% Trypsin-EDTA, Cat.No. #GB25200-072, Lot. No. #862530（Gibco）
（5）PBS, Cat.No. #21300-025, Lot.No.#1434815（Gibco）
（6）6 孔板, Cat.No.#3516, Lot.No.#34609010 (Corning)
（7）50 ml 离心管, Cat. No. #430828, Lot. No. #17409032 (Corning)
（8）384 孔检测板, Cat. No. #3707 (Corning)
（9）15 ml 离心管, Cat. No. #430053 (Corning)
1.2检测试剂
CellTiter-Glo 试剂盒, Cat. No. #G7571, Lot. No. #328530 (Promega) 2.实验方法:
2.1 细胞培养
2.1.1 细胞复苏
实验前，超净工作台台面用紫外线照射30 min。将水浴锅预热至37℃,将新鲜配制的培养基置于水浴锅预热。取出冻存的细胞，迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并不断的摇动，使管中的液体迅速融化。 约1-2 min后冻存管内液体完全溶解，取出用含70%酒精棉球擦拭冻存管的外壁。 吸取冻存管内细胞，转移至15 ml离心管中，同时加入5 ml预热完全培养基。 500 x g低转速离心3-5 min，吸弃上清液。向离心管内加入10ml培养液，轻柔吹打制成细胞悬液。通过台盼蓝染色细胞记数并进行活力测定后，将细胞悬液加入10 cm培养皿中，于含37℃/ 5% CO2培养箱中培养过夜。
2.1.2 细胞培养与传代
细胞培养时所需的培养基以及细胞传代的比例参考细胞供货商细胞培养说明书。
2.2 化合物处理
待测化合物用DMSO溶解后用完全培养基稀释至5倍的最终浓度（最终浓度为10 μM）用于实验。在项目完成后，GenScript会保存客户样品储存液3个月，之后会做丢弃处理。
2.3 CellTiter-Glo细胞活力检测方法
(1) 接种细胞：
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，在384孔板中接种40 μl细胞悬液（2 ×104/mL），边缘孔用无菌PBS填充。
(2) 将细胞板放在37°C / 5% CO2培养箱孵育至贴壁，加入10 μl 5 x待测浓度的化合物。原则上细胞贴壁后即可加化合物，本研究采用的方法是铺好细胞孵育6小时后加入药物。
(3) 细胞在37°C / 5% CO2培养箱孵育，在24小时、48小时和72小时用倒置显微镜进行观察。
(4) 读板：
72小时后每孔加入30μL每孔CellTiter-Glo 反应混合物，将检测板振荡 2-3分钟，室温孵育10min。 在Pherastar（BMG labtech）读RLU值并保存数据。
2.4 数据分析
Cell Growth inhibition% = 100% × [1-RLU样品/RLU阴性]，其中RLU样品为加化合物孔或阳性对照孔RLU值，RLU阴性为仅含DMSO的RLU值。运用GraphPad Prism 6.0软件进行数据分析。
3.实验结果
检测35个化合物在10 μM时对肿瘤细胞SNU-16及KATO III的生长抑制作用，每个浓度检测2个复孔。
表1 35个化合物对SNU-16及KATO III细胞的增殖抑制百分比
上述实验结果证明：化合物的活性已经达到较高水平，本发明的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物均有很显著的抗肿瘤活性。
实施例38: 体外抗肿瘤活性实验
基于CellTiter-Glo 细胞生长抑制实验模型。以2 个肿瘤细胞（SNU-16、KATOIII）以及一个正常细胞（HUVEC）细胞增殖抑制实验为实验模型。2个待测化合物（2h、3a）的检测浓度为1 μM、100 nM、10 nM、1 nM、0.1 nM，进行5 个检测浓度双复孔实验。细胞与化合物孵育72 小时后进行检测，计算细胞增殖抑制百分比。实验同时设置阴性对照组（不加药仅含0.1%DMSO）和盐酸阿霉素（多柔比星，Doxorubicin）阳性对照组，阳性对照为在BEL-7402 细胞的7 个浓度的量效曲线。
1.材料
（1）RPMI 1640 培养基, Cat. No. #22400-089, Lot. No. #792079（Gibco）
（2）FBS, Cat. No. #26140-079, Lot. No. #1227693（Gibco）
（3）MCDB-131 complete media (VEC Technologies)
（4）0.25% Trypsin-EDTA, Cat.No. #GB25200-072, Lot. No. #862530（Gibco）
（5）CellTiter-Glo® Luminescent Kit, Cat# G7571（Promega）
（6）6 孔板, Cat.No.#3516, Lot.No.#34609010 (Corning)
（7）50 ml 离心管, Cat. No. #430828, Lot. No. #17409032 (Corning)
（8）384 孔检测板, Cat. No. #3707 (Corning)
（9）15 ml 离心管, Cat. No. #430053 (Corning)
2.实验方法:
2.1 细胞培养
2.1.1 细胞复苏
实验前，超净工作台台面用紫外线照射30 min。将水浴锅预热至37℃,将新鲜配制的培养基置于水浴锅预热。取出冻存的细胞，迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并不断的摇动，使管中的液体迅速融化。约1-2 min 后冻存管内液体完全溶解，取出用含70%酒精棉球擦拭冻存管的外壁。吸取冻存管内细胞，转移至15 ml 离心管中，同时加入5 ml 预热完全培养基。500 g 低转速离心3-5 min，吸弃上清液。向离心管内加入10ml 培养液，轻柔吹打制成细胞悬液。通过台盼蓝染色细胞记数并进行活力测定后，将细胞悬液加入10 cm 培养皿中，于含37°C / 5% CO2 培养箱中培养过夜。
2.1.2 细胞培养与传代
细胞培养时所需的培养基以及细胞传代的比例参考细胞供货商细胞培养说明书。
2.2 化合物处理
待测化合物用 DMSO 溶解后用完全培养基稀释至5 倍的最终浓度。
2.3 CellTiter-Glo细胞活力检测方法
(1) 接种细胞：
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度，在384孔板中接种40 μl细胞悬液（2 ×104/mL），边缘孔用无菌PBS填充。
(2) 将细胞板放在37°C / 5% CO2培养箱孵育至贴壁，加入10 μl 5 x待测浓度的化合物。原则上细胞贴壁后即可加化合物，本研究采用的方法是铺好细胞孵育6小时后加入药物。
(3) 细胞在37°C / 5% CO2培养箱孵育，在24小时、48小时和72小时用倒置显微镜进行观察。
(4) 读板：
72小时后每孔加入30μL每孔CellTiter-Glo 反应混合物，将检测板振荡 2-3分钟，室温孵育10min。 在Pherastar（BMG labtech）读RLU值并保存数据。
2.4 数据分析
Cell Growth inhibition% = 100% × [1-RLU样品/RLU阴性]，其中RLU样品为加化合物孔或阳性对照孔RLU值，RLU阴性为仅含DMSO的RLU值。运用GraphPad Prism 6.0软件进行数据分析。
3.实验结果
检测 2 个化合物对2 个肿瘤细胞（SNU-16、KATO III）以及一个正常细胞（HUVEC）的生长抑制作用，进行5 个检测浓度双复孔实验。
上述实验结果证明：化合物的活性已经达到较高水平，本发明的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物均有很显著的抗肿瘤活性。
本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。
Claims (7)
1.结构通式I所示的一类N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物或其药学上可接受的盐：
其中
X代表CH2；
Y代表O；
-A-(R1)a代表基团；
R2为-H；
R3为-NHRa或-NRaRb，Ra和Rb各自独立地为取代或未取代的C1-Cl0的烷基、取代或未取代的C3-C10的环烷基或者取代或未取代的杂环基；所述取代的取代基选自C1-C6烷基；所述杂环基为3元～7元的单环，含有1～3个N原子；
R4为-H或硝基。
2.一种如下式的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物或其药学上可接受的盐：
3.权利要求1或2中所述的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物在制备用于在温血动物中产生FGFR抑制作用以抗肿瘤的药物中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为非小细胞肺癌。
5.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为胃癌。
6.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述肿瘤为多发性骨髓瘤。
7.一种具有抗肿瘤活性的药物组合物，其特征在于，包含治疗有效量的一种或多种权利要求1或2中所述的N-(1H-吡唑-5-基)喹唑啉-4-胺类化合物及药学上可接受的盐的药物组合物。
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