CN104946713B

CN104946713B - 一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法及其应用

Info

Publication number: CN104946713B
Application number: CN201510369021.5A
Authority: CN
Inventors: 刘学玲; 姜乃义; 毛学英; 宋佳佳
Original assignee: Yantai Yuanlide Marine Biological Co Ltd
Current assignee: YANTAI YUANLIDE MARINE BIOLOGICAL CO., LTD.
Priority date: 2015-06-29
Filing date: 2015-06-29
Publication date: 2018-10-26
Anticipated expiration: 2035-06-29
Also published as: CN104946713A

Abstract

本发明公开一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法及其应用，制备方法包括以下步骤：取海参粉，加入去离子水，在水浴中加热；匀浆，得到海参匀浆液；调节pH值至7.0～10.0，加入蛋白酶I，进行酶解反应2～4h后，向所述反应体系中加入蛋白酶II，继续酶解2～4h，终止反应，得到海参蛋白水解液；灭活其中的蛋白酶I和蛋白酶II；冷却后离心除杂质，保留上清液；加入95％乙醇，静置后离心取上清液，调节上清液pH值至6.0～8.0，并将所述上清液通过截流分子量为3000～10000Da的超滤膜，收集超滤液，即得。采用本发明方法制备的海参蛋白肽对糖尿病和高脂血症患者可起到良好的降糖降脂作用，食用安全性高。

Description

一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及水产品深加工及生物技术领域，特别涉及一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法及其应用。

背景技术

随着社会进步和经济发展，人们的生活方式发生了很大的改变，糖尿病和高脂血症等代谢性疾病的发病率逐年升高。据国际糖尿病联盟(International DiabetesFederation，IDF)统计，截止2013年，全球糖尿病人数已达到3.82亿。预计到2035年，全球将有5.92亿人受到糖尿病的困扰。目前，我国已成为糖尿病患者人数最多的国家，患者人数已接近1亿。长期高血糖会诱发机体脂肪代谢紊乱，导致血脂异常，增加心血管疾病的患病风险。据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)公布数据显示，2008年全球大约有1730万人死于心血管疾病。截止2012年，我国心血管疾病患者人数为2.9亿，每年约有350万人死于心血管疾病。目前，治疗糖尿病的方法包括注射胰岛素和口服降糖药物，但是这些治疗方法易引起低血糖、肝脏损伤、乳酸中毒以及胃肠道不适等不良反应。对于高脂血症的治疗，常用的他汀类降脂药物，长期服用也会对人体产生毒副作用。因此，积极研究食物中的降糖降脂功能成分，开发来源于食物中的安全、天然、高效的降糖降脂肽产品已成为今后糖尿病和高脂血症等代谢性疾病非药物治疗的重要部分。例如中国专利201210462662.1，吴成业等利用中性蛋白酶水解紫菜，制备具有降糖降脂和降血压活性的海藻多肽。

海参是海洋中重要的食物和药物资源。海参体壁是海参主要食(药)用部位，含有丰富的胶原蛋白、黏多糖以及皂苷，其中海参蛋白含量占其体壁干重80％以上。海参蛋白富含多种生物活性序列，在适当的蛋白酶作用下可释放出来，成为具有抗氧化、免疫调节、降血压以及降糖降脂等生物学活性的肽段。近年来，海参蛋白水解产物的活性得到了广泛的研究。李伟等在中国专利201310215842.4中公开了具有免疫调节、改善睡眠和抗辐射功能的海参果汁饮料；刘凯等在中国专利201410114474.9中利用中性蛋白酶水解海参蛋白制备具有促进术后伤口愈合功效的海参蛋白肽。

目前，关于酶水解海参蛋白的专利技术大多采用单酶或复合酶一步水解的酶解模式，这种酶解模式不利于海参蛋白的水解，也不宜于海参蛋白中生物活性序列的释放。尽管王纳在中国专利201310278840.X中利用碱性蛋白酶和固定化酶(包括中性蛋白酶和木瓜蛋白酶)分步水解海参蛋白，但为了提高固定化酶的酶解效率，需过滤除去碱性蛋白酶初步水解液中的不溶物，此过程会损失部分未水解的海参蛋白。此外，由于酶解过程中碱液的使用以及海洋生物与生俱来的腥味，会使制得的海参蛋白肽具有不良气味。汪秋宽等在中国专利201210053085.0中利用阴离子树脂对海参蛋白肽进行脱腥，此法操作繁琐且耗时、效率低，不利于工业化生产；吴庆林在中国专利201110449621.4中利用活性炭对海参蛋白肽进行去味处理，这种处理方法会损失蛋白多肽中的功能成分而降低其生物学活性。而采用微囊化技术既可以掩盖海参蛋白肽的不良气味，又不会损失多肽中的功能成分。

采用双酶分步水解模式提高海参蛋白的水解度，制备具有降糖降脂活性的海参蛋白肽以及利用微囊化技术提升其品质的研究尚未发现。因此，开发一种可控制的酶法制备高活性、风味优良的海参蛋白降糖降脂肽的方法具有重要的理论意义和应用价值。

发明内容

针对上述现有技术的不足，本发明提供一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法及其应用，采用该方法制备的降糖降脂肽活性高、风味优良。

本发明的技术方案是这样的实现的：

一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，包括以下步骤：

1)取新鲜海参洗净、去除内脏，冷冻干燥后粉碎，得海参粉；取海参粉，按1:20～1:30重量比例加入去离子水，然后在75～95℃水浴中加热15～30min。在匀浆功率1500～3500r/min条件下，匀浆5～10min，得到海参匀浆液；

2)调节步骤1)所述海参匀浆液的pH值至7.0～10.0，加入蛋白酶I，使海参蛋白和蛋白酶I在40～60℃条件下进行酶解反应；所述蛋白酶I为碱性蛋白酶或胰蛋白酶；

3)步骤2)酶解反应进行在2～4h后，保持所述酶解反应的反应体系温度不变，向所述反应体系中加入蛋白酶II，继续酶解2～4h，终止反应，得到海参蛋白水解液；

4)将步骤3)所得的海参蛋白水解液升温至75～95℃，保持15～30min，灭活其中的蛋白酶I和蛋白酶II；冷却后离心除杂质，保留上清液；所述蛋白酶II为复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶中的任意一种；

5)向步骤4)所得上清液中加入95％乙醇，使其终体积达到总体系的60～80％，4℃静置10～15h后离心取上清液，调节所述上清液pH值至6.0～8.0，并将所述上清液通过截流分子量为3000～10000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽。

一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，还包括以下微囊化技术处理的步骤：

6)将微囊化壁材溶于水中，制成壁材溶液；

7)将步骤6)所得的壁材溶液按一定比例加入到步骤5)得到的海参蛋白降糖降脂肽中，室温下搅拌0.5～2h，得到混合溶液；

8)对步骤7)所得的混合溶液进行喷雾干燥，得到微囊化蛋白多肽。

所述步骤2)中蛋白酶I的加入量为每100g海参粉加入200～800KU蛋白酶I。其中，1U定义为40℃下每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸的量，KU为1000U。

所述步骤3)中蛋白酶II的加入量为每100g海参粉加入200～800KU蛋白酶II。其中，1U定义为40℃下每分钟水解酪蛋白产生1μg酪氨酸的量，KU为1000U。

所述步骤2)中调节pH值所用的碱液为食品级碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸氢二钾或氢氧化钾溶液中的任意一种；调节pH值所用的酸液为食品级乳酸或柠檬酸溶液中的任意一种。

所述步骤7)中的壁材为蛋白质含量≥80％的浓缩乳清蛋白。

所述步骤7)中的壁材为海藻酸钠和蛋白质含量≥80％的浓缩乳清蛋白的混合物，浓缩乳清蛋白与海藻酸钠混合重量比为1:10～1:35。

所述步骤7)中海参蛋白降糖降脂肽与壁材的质量比为1:1～1:5。

所述壁材溶液中壁材的质量浓度可根据蛋白多肽溶液中多肽的质量，以及混合溶液的干物质含量来确定。

一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法制得的海参蛋白的降糖降脂肽在食源性降糖降脂保健食品中的应用。

本发明的有益效果：

1.本发明采用双酶分步水解的酶解模式，可有效提高海参蛋白的水解度，工艺简单易行，便于工业化生产；

2.本发明中采用的微囊化技术，可有效地掩盖海参蛋白肽的不良气味，而且并不影响多肽的原始结构和生物学活性；

3.采用本发明方法制备的海参蛋白肽食用安全性高、无副作用、吸收效果好，对糖尿病和高脂血症患者可起到良好的降糖降脂作用，对健康人群可起到保健作用。

具体实施方式

下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，包括以下步骤：

6)将微囊化壁材溶于水中，制成壁材溶液；

实施例1

本实施例提供一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，包括以下步骤：

1)取新鲜海参洗净、去除内脏，冷冻干燥后粉碎，得海参粉；称取10g海参粉，加入200mL去离子水，在90℃的水浴中加热20min。匀浆功率为2000r/min条件下匀浆5min，用碳酸钠溶液调节pH至9.0。加入碱性蛋白酶20KU，60℃水浴条件下，水解3h，然后，直接加入木瓜蛋白酶30KU，继续水解3h，测定此时酶解液水解度为45.2％。所得的海参蛋白酶解液升温至85℃，保持15min，灭酶。4000r/min离心15min后取上清液，加入95％乙醇使其终体积为80％(体积比)，4℃静置10h。离心取上清液，调节上清液pH至7.0，并将上清液通过截流分子量为10000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽溶液15g，其中多肽含量为6.8g。

2)称取13.6g浓缩乳清蛋白，加入150mL水，使其完全溶解。然后，将其加入到所述海参蛋白降糖降脂肽溶液中，室温搅拌2h，经喷雾干燥制得微囊化多肽粉。

水解度可按照下述方法测定：

吸取0.5mL已灭酶的样品，冷却并转移至25mL容量瓶中，用1％十二烷基硫酸钠(SDS)溶液定容，静置。取0.125mL酶解液的SDS溶液与1mL磷酸缓冲液(pH 8.2，0.2mol/L)和1mL的0.1％的三硝基苯磺酸法(TNBS)溶液振荡混合，于50℃水浴避光反应60min，反应完毕之后，用2mL 0.1mol/L的HCl立即终止反应，室温放置30min后，于420nm下测定其吸光度值。0～5.0×10-3mol/L L-亮氨酸做标准曲线。水解度用下式计算：

式中，h：表示水解物中每克被裂解的肽键毫摩尔数(meq/g protein)；

htot：表示每克原料蛋白质中总的肽键毫摩尔数。

实施例2

1)称取10g海参粉，加入250mL去离子水，在85℃的水浴中加热30min。匀浆功率为1500r/min条件下匀浆8min，用乳酸溶液调节pH至7.0。加入胰蛋白酶80KU，40℃水浴条件下，水解3h，然后，直接加入木瓜蛋白酶30KU，继续水解3h，测定此时酶解液水解度为42.5％。所得的海参蛋白酶解液升温至85℃，保持15min，灭酶。4000r/min离心15min后取上清液，加入95％乙醇使其终体积为60％(体积比)，4℃静置12h。离心取上清液，调节上清液pH至7.0，并将上清液通过截流分子量为3000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽13.16g，其中多肽含量为6.4g。

2)称取12.8g浓缩乳清蛋白和0.36g海藻酸钠，加入150mL水，使其完全溶解。然后，将其加入到所述海参蛋白降糖降脂肽溶液中，室温搅拌2h，经喷雾干燥制得微囊化多肽粉。水解度测定方法同实施例1。

实施例3

1)称取10g海参粉，加入250mL去离子水，在75℃的水浴中加热30min。匀浆功率为2000r/min条件下匀浆5min，用碳酸氢钠溶液调节pH至10.0。加入碱性蛋白酶40KU，50℃水浴条件下，水解3h，然后，直接加入复合风味蛋白酶80KU，继续水解3h，测定此时酶解液水解度为41.8％。所得的海参蛋白酶解液升温至75℃，保持30min，灭酶。4000r/min离心15min后取上清液，加入95％乙醇使其终体积为70％(体积比)，4℃静置10h。离心取上清液，调节上清液pH至8.0，并将上清液通过截流分子量为8000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽15g，其中多肽含量为6.5g。

2)称取75.0g浓缩乳清蛋白，加入150mL水，使其完全溶解。然后，将其加入到所述海参蛋白降糖降脂肽溶液中，室温搅拌0.5h，经喷雾干燥制得微囊化多肽粉。水解度测定方法同实施例1。

实施例4

1)称取10g海参粉，加入250mL去离子水，在95℃的水浴中加热20min。匀浆功率为1500r/min条件下匀浆8min，用碳酸钾溶液调节pH至8.0。加入胰蛋白酶30KU，40℃水浴条件下，水解2h，然后，直接加入中性蛋白酶40KU，继续水解4h，测定此时酶解液水解度为39.8％。所得的海参蛋白酶解液升温至85℃，保持15min，灭酶。4000r/min离心15min后取上清液，加入95％乙醇使其终体积为60％(体积比)，4℃静置15h。离心取上清液，调节上清液pH至7.0，并将上清液通过截流分子量为10000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽15.2g，其中多肽含量为6.5g。

2)称取13.6g浓缩乳清蛋白，加入100mL水，使其完全溶解。然后，将其加入到所述海参蛋白降糖降脂肽溶液中，室温搅拌1.5h，经喷雾干燥制得微囊化多肽粉。水解度测定方法同实施例1。

实施例5

1)称取10g海参粉，加入250mL去离子水，在95℃的水浴中加热15min。匀浆功率为1500r/min条件下匀浆10min，用碳酸氢钾溶液调节pH至8.0。加入胰蛋白酶30KU，40℃水浴条件下，水解2h，然后，直接加入复合风味蛋白酶20KU，继续水解4h，测定此时酶解液水解度为40.5％。所得的海参蛋白酶解液升温至85℃，保持15min，灭酶。4000r/min离心15min后取上清液，加入95％乙醇使其终体积为60％(体积比)，4℃静置15h。离心取上清液，调节上清液pH至7.0，并将上清液通过截流分子量为6000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽15.6g，其中多肽含量为6.4g。

2)称取16.2g浓缩乳清蛋白，加入250mL水，使其完全溶解。然后，将其加入到所述海参蛋白降糖降脂肽溶液中，室温搅拌1h，经喷雾干燥制得微囊化多肽粉。水解度测定方法同实施例1。

实施例6

1)称取10g海参粉，加入300mL去离子水，在85℃的水浴中加热30min。匀浆功率为3500r/min条件下匀浆5min，用氢氧化钾溶液调节pH至10.0。加入碱性蛋白酶40KU，50℃水浴条件下，水解4h，然后，直接加入中性蛋白酶50KU，继续水解2h，测定此时酶解液水解度为40.8％。所得的海参蛋白酶解液升温至90℃，保持15min，灭酶。4000r/min离心15min后取上清液，加入95％乙醇使其终体积为60％(体积比)，4℃静置12h。离心取上清液，调节上清液pH至6.0，并将上清液通过截流分子量为8000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽15.6g，其中多肽含量为6.5g。

2)称取14.6g浓缩乳清蛋白和1.46g海藻酸钠，加入200mL水，使其完全溶解。然后，将其加入到所述海参蛋白降糖降脂肽溶液中，室温搅拌1.5h，经喷雾干燥制得微囊化多肽粉。水解度测定方法同实施例1。

上述实施例中，调节pH值所用的碱液为食品级碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸氢二钾或氢氧化钾溶液中的任意一种；调节pH值所用的酸液为食品级乳酸或柠檬酸溶液中的任意一种。

对比例1

称取10g海参粉，加入200mL去离子水，在90℃的水浴中加热20min。匀浆功率为2000r/min条件下匀浆5min，调节pH至9.0。加入碱性蛋白酶30KU，55℃水浴条件下，水解6h，水解过程中不断加入碱液维持反应体系pH不变，测定此时酶解液水解为25.8％；所得的海参蛋白酶解液升温至85℃，保持15min，灭酶。4000r/min离心15min后取上清液，加入95％乙醇使其终体积为60％(体积比)，4℃静置10h。离心取上清液，调节上清液pH至7.0，并将上清液通过截流分子量为10000Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽。水解度测定方法同实施例1。

通过上述实施例和对比例可知，本发明的方法可有效提高海参蛋白的水解度，而且可以掩盖海参蛋白肽的不良风味。本发明方法所述工艺简单易行，利于工业化生产。

试验例1

本实施例提供一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法制得的海参蛋白的降糖降脂肽在食源性降糖降脂保健食品中的应用。

1.实验材料与方法

1.1实验材料

1)海参蛋白肽

实施例1制得的海参蛋白肽。

2)实验动物

C57BL/6小鼠，雄性，10～12周龄，50只。

3)主要仪器与试剂

血糖仪、总胆固醇试剂盒、甘油三酯试剂盒、高密度脂蛋白胆固醇试剂盒和低密度脂蛋白胆固醇试剂盒等。

4)其他材料

高脂饲料(成分包括73％基础饲料、10％猪油、10％蛋黄粉、1％胆固醇和6％乳粉)。

1.2实验方法

1)肥胖模型的建立

50只C57BL/6小鼠以基础饲料适应性喂养1周后，根据体重进行随机分组。40只C57BL/6小鼠连续饲喂高脂饲料12周，建立肥胖C57BL/6小鼠模型。10只C57BL/6小鼠饲喂正常饲料，作为正常对照组。

2)实验设计

将40只C57BL/6肥胖小鼠，分为4组，每组10只，分别设为肥胖模型对照组、海参蛋白肽低剂量组、海参蛋白肽中剂量组和海参蛋白肽高剂量组。具体实验动物分组和给药剂量如表1所述。

表1 实验动物分组和给药剂量

组别	喂养饲料	灌胃药物	剂量(mg/kg b.w.)
				正常对照组	正常饲料	蒸馏水	——
肥胖模型对照组	高脂饲料	蒸馏水	——
				海参蛋白肽低剂量组	高脂饲料	海参蛋白肽	100
海参蛋白肽中剂量组	高脂饲料	海参蛋白肽	200
				海参蛋白肽高剂量组	高脂饲料	海参蛋白肽	400

3)饲养方式

每组10只C57BL/6小鼠为1鼠笼饲养，5组实验同时进行，根据表1的设计饲喂不同饲料，正常给水。

4)给药方式

每天给药前测定大鼠体重，根据不同组别的不同给药剂量，溶于相同体积的蒸馏水中，以灌胃的方式给药。每天定时灌胃给药一次。实验连续6周，实验期间小鼠自由饮水和摄食。

5)指标测定

实验结束后，禁食12h，测定体重。麻醉后断头取血，收集血清，测定血清中空腹血糖、甘油三酯(TC)、总胆固醇(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)。

2.实验结果与分析

不同处理组C57BL/6小鼠体重和血液各项生化指标，如表2所述。

表2 不同处理组C57BL/6小鼠体重和血液各项生化指标

注：数值以平均值±标准差的形式表示；不同字母代表差异显著，p<0.05。

各剂量组小鼠体重均显著低于高脂模型组(p<0.05)。中剂量组和高剂量组小鼠体重与正常对照组小鼠体重差异不显著(p>0.05)。

与高脂模型组相比，中剂量组和高剂量组小鼠的空腹血糖、TC含量显著低于高脂模型组(p<0.05)；中剂量组和高剂量组之间差异不显著(p>0.05)。

高脂模型组和各剂量组小鼠TG含量显著高于正常对照组(p<0.05)；各剂量组小鼠TG含量显著低于高脂模型组(p<0.05)；各剂量组之间差异不显著(p>0.05)。

中剂量组和高剂量组小鼠HDL-c含量显著高于高脂模型组(p<0.05)，与正常对照组之间差异不显著(p>0.05)；中剂量组和高剂量组之间差异不显著(p>0.05)。

高脂模型组和各剂量组小鼠LDL-c含量显著高于正常对照组(p<0.05)，中剂量组和高剂量组小鼠LDL-c含量显著低于高脂模型组(p<0.05)；中剂量组和高剂量组之间差异不显著(p>0.05)。

3.实验结论

200mg/kg b.w.剂量的海参蛋白肽，可有效控制肥胖C57BL/6小鼠体重的增加，降低其空腹血糖以及血液中的甘油三酯、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇含量，升高其血液中的高密度脂蛋白胆固醇含量。可见，长期服用本发明所述的海参蛋白肽对机体血糖和血脂具有一定的调节作用，对治疗高血糖和高脂血症具有一定的辅助疗效。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）取新鲜海参洗净、去除内脏，冷冻干燥后粉碎，得海参粉；取海参粉，按1:20～1:30重量比例加入去离子水，然后在75～95 ℃水浴中加热15～30 min；在匀浆功率1500～3500r/min条件下，匀浆5～10 min，得到海参匀浆液；

2）调节步骤1）所述海参匀浆液的pH值至7.0～10.0，加入蛋白酶I，使海参蛋白和蛋白酶I在40～60 ℃条件下进行酶解反应；所述蛋白酶I为碱性蛋白酶或胰蛋白酶；

3）步骤2）酶解反应进行在2～4 h后，保持所述酶解反应的反应体系温度不变，向所述反应体系中加入蛋白酶II，继续酶解2～4 h，终止反应，得到海参蛋白水解液；

4）将步骤3）所得的海参蛋白水解液升温至75～95 ℃，保持15～30 min，灭活其中的蛋白酶I和蛋白酶II；冷却后离心除杂质，保留上清液；所述蛋白酶II为复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶和中性蛋白酶中的任意一种；

5）向步骤4）所得上清液中加入95%乙醇，使其终体积达到总体系的60～80%，4 ℃静置10～15 h后离心取上清液，调节所述上清液pH值至6.0～8.0，并将所述上清液通过截流分子量为3000～10000 Da的超滤膜，收集超滤液，得到海参蛋白降糖降脂肽；

6）将微囊化壁材溶于水中，制成壁材溶液；

7）将步骤6）所得的壁材溶液按一定比例加入到步骤5）得到的海参蛋白降糖降脂肽中，室温下搅拌0.5～2 h，得到混合溶液；

8）对步骤7）所得的混合溶液进行喷雾干燥，得到微囊化蛋白多肽；

所述步骤7）中海参蛋白降糖降脂肽与壁材的质量比为1:1～1:5。

2.根据权利要求1所述的一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，其特征在于，所述步骤2）中蛋白酶I的加入量为每100g海参粉加入200~800KU蛋白酶I。

3.根据权利要求1所述的一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，其特征在于，所述步骤3）中蛋白酶II的加入量为每100g海参粉加入200~800KU蛋白酶II。

4.根据权利要求1所述的一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，其特征在于，所述步骤2）中调节pH值所用的碱液为食品级碳酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、碳酸钾、碳酸氢钾、磷酸氢二钾或氢氧化钾溶液中的任意一种；调节pH值所用的酸液为食品级乳酸或柠檬酸溶液中的任意一种。

5.根据权利要求1所述的一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，其特征在于，所述步骤7）中的壁材为蛋白质含量≥80%的浓缩乳清蛋白。

6.根据权利要求1所述的一种基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法，其特征在于，所述步骤7）中的壁材为海藻酸钠和蛋白质含量≥80%的浓缩乳清蛋白的混合物，浓缩乳清蛋白与海藻酸钠混合重量比为1:10～1:35。

7.权利要求1~6任一项所述的基于海参蛋白的降糖降脂肽制备方法制得的海参蛋白的降糖降脂肽在食源性降糖降脂保健食品中的应用。