CN104945360A - 烟草中一种苯丙素类化合物的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种如式（Ⅰ）所示的苯丙素类化合物及其制备方法和应用， ，式（Ⅰ），属于烟草化学技术领域。以烟叶为原料，以高浓度甲醇水溶液、高浓度乙醇水溶液或高浓度丙酮水溶液作为提取溶剂进行提取，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏；浸膏用硅胶干法装柱进行硅胶柱层析；以氯仿-丙酮的混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩；将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮的混合溶剂洗脱收集浓缩得到的部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得该的苯丙素类化合物。经活性测试表明，该化合物对轮状病毒具有很好的抑制作用。本发明化合物结构简单，化合物活性好，可作为抗轮状病毒的先导性化合物。
Description
技术领域
本发明属于烟草化学技术领域，具体涉及一种从烟草中首次提取得到的苯丙素类化合物。同时，本发明还涉及该化合物的制备方法和应用。
背景技术
烟草是世界上化学成分最为复杂的植物，次生代谢产物非常丰富，经过几十年的研究，人们目前从烟草中鉴定出来的单体化学物质就超过3000多种，而且还有许多成分尚未鉴定出来。烟草除主要用于卷烟抽吸用途外，还可从中提取多种有利用价值的化学成分，从中发现有开发利用价值的先导性化合物。
苯丙素是一类自然界中广泛存在的生物活性物质。由于植物苯丙素成分结构类型多，立体化学复杂，具有多种生物活性，国内外对该领域的研究十分活跃；无论是天然存在的，还是人工合成得到的苯丙素类化合物，都引起了化学家的广泛关注。有研究证实，苯丙素类化合物的药理作用与化学结构密切相关，可进一步研究和开发更多的苯丙素类化合物，从中寻找有效的先导化合物和活性基团。本发明从烟草中分离得到了一种具有抗轮状病毒活性的苯丙素类化合物，该化合物至今尚未见到相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新的苯丙素类化合物。
本发明的另一个目的是提供一种制备所述苯丙素类化合物的方法。
本发明的目的还在于提供所述苯丙素化合物在制备抗轮状病毒的药物中的应用。
除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。
本发明从烟草中分离出一种新的苯丙素类化合物，其分子式为C11H10O5，具有如式（Ⅰ）所示的结构式：
，式（Ⅰ）；
该化合物命名为5-羟基-6-(3-羟基丙酰基)-异苯并呋喃-1(3H)-酮，英文名称为：5-hydroxy-6-(3-hydroxypropanoyl)-isobenzofuran-1(3H)-one，为浅黄色胶状物。
制备上述苯丙素类化合物的方法，该方法包括以下步骤：
步骤（1），浸膏提取：将烟叶样品粉碎或切成小段（本发明对烟叶粉碎后的粒度没有要求，对切成的小段的具体长度没有限制），用高浓度甲醇（w%：80%～100%）或高浓度乙醇（w%：80%～100%）或高浓度丙酮（w%：60%～90%）为提取溶剂进行浸泡提取，提取溶剂：烟草（重量比）=2～4:1，浸泡24 h～72 h，提取3～5次，合并提取液，过滤浓缩成浸膏；
步骤（2），硅胶柱层析：步骤（1）得到的浸膏用重量是其1.5～3倍量的纯甲醇、纯乙醇或纯丙酮溶解后，用重量是浸膏0.8～1.2倍的80～100目硅胶拌样，同时，用重量是浸膏2～4倍量的160～300目硅胶干法装柱，然后干法上样，进行硅胶柱层析；以体积配比依次为（1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1和1:2）的氯仿-丙酮的混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，薄层层析法跟踪，合并相同的部分，收集各部分洗脱液并浓缩；其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂；
步骤（3），高压液相色谱分离纯化：将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮的混合溶剂洗脱收集浓缩得到的部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得所述的苯丙素类化合物。
高压液相色谱分离纯化是采用柱长×内径为21.2 mm × 250 mm，内膜厚度为5μm的C18色谱柱，流速为20 mL/min，流动相为质量浓度为28%的甲醇水溶液，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 μL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干。
经所述高效液相色谱分离纯化后，一个优选的后续处理方案为，所得化合物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用凝胶柱层析分离，以进一步分离纯化。
以上述方法制备得到的苯丙素类化合物的结构通过以下方法进行测定。本发明化合物为浅黄色胶状物；紫外光谱 (溶剂为甲醇), l max (log e) 318 (3.28), 286 (3.59), 215 (4.02) nm；红外光谱 (溴化钾压片) n max 3460, 2927, 1730, 1652, 1608, 1536, 1487, 1285, 1121, 1072, 927, 805 cm-1；高分辨质谱 (HRESIMS) 给出准分子离子峰m/z 221.0457 [M-H]- (计算值221.0450)。结合图1和图2所示的1H和13 C NMR谱给出一个分子式C11H10O5，不饱和度为7。从1H和13CNMR谱(数据归属见表1)信号可以看出化合物中有一个1,2,4,5-四取代的苯环、一个3-羟基丙酰基、一个氧化亚甲基、一个酯羰基、一个酚羟基。根据H-2'和C-3'的HMBC相关 (图3) 可证实C-2'和C-3'通过氧原子连接形成了内酯。根据H-8和C-1，H-6和C-7的HMBC相关可证实3-羟基丙酰基连接在苯环的-1位，根据酚羟基氢(d H 10.86 s)和C-1、C-2和C-3的HMBC相关可证实酚羟基取代在C-2位。至此本化合物的结构得以确定。
表1.化合物的
1
H NMR 和
13
C NMR 数据 (C
5
D
5
N)
| No. | d C | d H (m, J, Hz) | No. | d C | d H (m, J, Hz) |
| 1 | 120.9 s | 7 | 198.4 s | ||
| 2 | 166.1 s | 8 | 42.1 t | 3.45 (t) 6.8 | |
| 3 | 112.0 d | 6.94 s | 9 | 58.7 t | 4.14 (t) 6.8 |
| 4 | 152.0 s | 1′ | 69.0 t | 5.40 s | |
| 5 | 116.3 s | 2′ | 169.1 s | ||
| 6 | 130.4 d | 8.32 s | Ar-OH | 10.86 s |
将所述的苯丙素类化合物应用于制备抗轮状病毒的药物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明化合物是首次被分离出来的，通过上述核磁共振和质谱测定方法确定了为苯丙素类化合物，并表征了其具体结构。经对抗轮状病毒的实验，其TC50值为206.7 μg/mL、IC50值为8.22 μg/mL，治疗指数TI为25.15；其治疗指数超过对照病毒唑的治疗指数18.90；化合物具有很好的抗轮状病毒活性。以上结果揭示了本发明的化合物在制备抗轮状病毒药物中有良好的应用前景。本发明化合物结构简单活性较好，可作为抗轮状病毒药物研发的先导性化合物用于抗轮状病毒药物制剂研发。
附图说明
图1为本发明苯丙素类化合物的核磁共振碳谱；
图2为本发明苯丙素类化合物的核磁共振氢谱；
图3为本发明苯丙素类化合物的主要HMBC相关。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
本发明中的溶液如果只给出了溶质，没有公开溶剂，则本领域技术人员应该知晓溶剂为水。本发明中纯甲醇指100%甲醇，纯乙醇是指100%乙醇，纯丙酮是指100%丙酮。
实施例1
制备苯丙素类化合物C11H10O5，包括浸膏提取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离，具体采用以下步骤：
步骤（1），浸膏提取：取烟叶粉碎，用高浓度甲醇（w%：95 %）或高浓度乙醇（w%：95%）或高浓度丙酮（w%：70%）为提取溶剂，提取溶剂：烟草（重量比）=2:1，浸泡54 h，提取4次，合并提取液，过滤浓缩成浸膏。
步骤（2），硅胶柱层析：步骤（1）得到的浸膏用重量是其2.5倍量的纯甲醇、纯乙醇或纯丙酮溶解后，用重量是浸膏1.2倍的80～100目硅胶拌样，同时，用重量是浸膏3倍量的250目硅胶干法装柱，然后干法上样，进行硅胶柱层析；以体积配比依次为（1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1和1:2）的氯仿-丙酮的混合溶剂作为洗脱剂进行梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，收集各部分洗脱液并浓缩；其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂；
步骤（3），高压液相色谱分离：将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮的混合溶剂洗脱收集浓缩得到的部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得所述的苯丙素类化合物，高压液相色谱分离纯化是采用21.2 mm × 250 mm，5μm的C18色谱柱，流速为20 mL/min，流动相为28%的甲醇，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 μL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干。
高压液相色谱法分离纯化后的物质，一个优选的后处理方案为，所得化合物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用凝胶柱层析分离，以进一步分离纯化。
本发明所用烟叶原料不受地区和品种限制，均可以实现本发明，下面以来源于云南中烟工业有限责任公司不同产地的烟叶原料，对本发明做进一步说明：
实施例2
烟草样品来源于云南玉溪，品种为玉溪K326。将烟草取样2.0 kg粉碎以95%的甲醇浸泡提取5次，每次提取24 h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 2:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏105 g。浸膏用重量是其2.0倍量的纯甲醇溶解后，用120 g的100目粗硅胶拌样，0.6 kg 的160目硅胶装柱，进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例3
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg切成小段，以95%的乙醇浸泡提取4次，每次提取48 h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 4:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏250 g。浸膏用重量是其2.0倍量的纯甲醇溶解后，用250 g的80目粗硅胶拌样，0.8 kg的200目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例4
烟草样品来源于云南昆明，品种为红花大金元，将烟草取样5 kg粉碎，以75%的丙酮用浸泡提取3次，每次提取72h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 3:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏380 g。浸膏用重量是其1.6倍量的纯甲醇溶解后，用400 g的90目粗硅胶拌样，1.4 kg的180目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例5
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg切成小段，以80%的乙醇浸泡提取3次，每次提取72 h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 2:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏250 g。浸膏用重量是其1.5倍量的纯甲醇溶解后，用重量是浸膏1.2倍的的100目粗硅胶拌样，用重量是浸膏2倍量的300目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例6
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg粉碎，以100%的乙醇浸泡提取5次，每次提取24 h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 3:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏251 g。浸膏用重量是其3.0倍量的纯甲醇溶解后，用重量是浸膏0.8倍的的90目粗硅胶拌样，用重量是浸膏4倍量的160目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例7
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg切成小段，以80%的甲醇浸泡提取5次，每次提取24h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 3.5:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏248 g。浸膏用重量是其1.5倍量的纯乙醇溶解后，用重量是浸膏0.85倍的的100目粗硅胶拌样，用重量是浸膏4倍量的160目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例8
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg粉碎，以90%的甲醇浸泡提取3次，每次提取72h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 2.5:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏252 g。浸膏用重量是其3.0倍量的纯乙醇溶解后，用重量是浸膏1.2倍的的80目粗硅胶拌样，用重量是浸膏2倍量的300目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例9
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg粉碎，以100%的甲醇浸泡提取4次，每次提取50 h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 3:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏251 g。浸膏用重量是其2.5倍量的纯乙醇溶解后，用重量是浸膏0.8倍的的90目粗硅胶拌样，用重量是浸膏2.6倍量的250目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配依次比为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例10
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg粉碎，以60%的丙酮浸泡提取5次，每次提取72 h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 2.4:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏250 g。浸膏用重量是其2.8倍量的纯丙酮溶解后，用重量是浸膏1.1倍的的80目粗硅胶拌样，用重量是浸膏2倍量的160目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例11
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg粉碎，以90%的丙酮浸泡提取3次，每次提取24 h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 2:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏245 g。浸膏用重量是其1.5倍量的纯丙酮溶解后，用重量是浸膏1.2倍的的100目粗硅胶拌样，用重量是浸膏4倍量的300目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
实施例12
烟草样品来源于云南大理，品种为云烟200，将烟草取样3.5 kg粉碎，以70%的丙酮浸泡提取4次，每次提取60h，提取溶剂：烟叶的重量比 = 4:1，提取液合并，过滤，减压浓缩成浸膏，得浸膏255 g。浸膏用重量是其3.0倍量的纯丙酮溶解后，用重量是浸膏0.8倍的的90目粗硅胶拌样，1用重量是浸膏3.5倍量的250目硅胶装柱进行硅胶柱层析，用体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分并浓缩，得到8个部分，其中将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮洗脱浓缩得到的部分用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以28％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C18 (21.2 ′ 250 mm, 5 mm)制备柱为固定相，流速为20 ml/min，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 mL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干；所得产物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用Sephadex LH-20 凝胶柱层析分离，即得该新化合物。
其中，梯度洗脱时，每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
鉴定例1
------ 化合物结构的鉴定
取实施例1制备的化合物，化合物为浅黄色胶状物；紫外光谱 (溶剂为甲醇), l max (log e) 318 (3.28), 286 (3.59), 215 (4.02) nm；红外光谱 (溴化钾压片) n max 3460, 2927, 1730, 1652, 1608, 1536, 1487, 1285, 1121, 1072, 927, 805 cm-1；高分辨质谱 (HRESIMS) 给出准分子离子峰m/z 221.0457 [M-H]- (计算值221.0450)。结合图1和图2所示的1H和13 C NMR谱给出一个分子式C11H10O5，不饱和度为7。从1H和13CNMR谱(数据归属见表1)信号可以看出化合物中有一个1,2,4,5-四取代的苯环、一个3-羟基丙酰基、一个氧化亚甲基、一个酯羰基、一个酚羟基。根据H-2'和C-3'的HMBC相关 (图3) 可证实C-2'和C-3'通过氧原子连接形成了内酯。根据H-8和C-1，H-6和C-7的HMBC相关可证实3-羟基丙酰基连接在苯环的-1位，根据酚羟基氢(d H 10.86 s)和C-1、C-2和C-3的HMBC相关可证实酚羟基取代在C-2位。至此本化合物的结构得以确定。
鉴定例2
取实施例2-12制备的化合物，为黄色胶状物。测定方法与实施例13相同，确认实施例2-12制备的化合物为所述的苯丙素类化合物——5-羟基-6-(3-羟基丙酰基)-异苯并呋喃-1(3H)-酮。
应用例1
取实施例1~12制备的任一苯丙素类化合物进行抗轮状病毒活性试验，试验情况如下：
抗轮状病毒采用体外细胞测试法，即样品与病毒同时作用于MA104细胞后，通过Alarmablue法检测样品对病毒感染致细胞死亡的保护作用，从而测定样品对HRV的活性作用。
(a) 药物的细胞毒性检测
MA104细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后，加入不同浓度的样品液，继续培养3天后，更换含Alamarblue的培养液，继续培养2～3小时后检测其530/590nm处的荧光值，从而检测样品对 MA104 细胞的毒性，并计算半数细胞毒浓度（TC50）。
(b) 药物抗轮状病毒作用检测
MA104细胞在 96 孔细胞培养板中培养形成单层后，100TCID50的病毒液和不超过20％细胞毒性的梯度浓度药物溶液同时加到MA104细胞上，继续培养4-6天后，更换含Alamarblue的培养液继续培养2~3小时后检测其530/590nm处的荧光值，并计算半数抑制浓度（IC50）。
(c) 根基TC
50
/ IC
50
计算化合物的治疗指数。
结果表明，本发明化合物的TC50值为206.7 μg/mL、IC50值为8.22 μg/mL，治疗指数TI为25.15；其治疗指数超过对照病毒唑的治疗指数18.90；化合物具有很好的抗轮状病毒活性。以上结果揭示了本发明的化合物在制备抗轮状病毒药物中有良好的应用前景。本发明化合物结构简单活性较好，可作为抗轮状病毒药物研发的先导性化合物用于抗轮状病毒药物制剂研发。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定 。
Claims (7)
1.如式（Ⅰ）所示的一种苯丙素类化合物，
，式（Ⅰ）；
该化合物的命名为：5-羟基-6-(3-羟基丙酰基)-异苯并呋喃-1(3H)-酮[5-hydroxy-6-(3-hydroxypropanoyl)-isobenzofuran-1(3H)-one]。
2.权利要求1所述的苯丙素类化合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤（1），浸膏提取:以烟叶为原料，将烟叶粉碎或切成小段，用重量百分浓度80%～100%的甲醇、重量百分浓度80%～100%的乙醇或重量百分浓度60%～90%的丙酮为提取溶剂进行浸泡提取，提取溶剂：烟叶的重量比 = 2～4:1，浸泡24 h～72 h，提取3～5次，合并提取液，过滤浓缩成浸膏；
步骤（2），硅胶柱层析：步骤（1）得到的浸膏用重量是其2～4倍量的160～300目硅胶干法装柱进行硅胶柱层析；以氯仿-丙酮的混合溶剂为洗脱剂进行梯度洗脱，薄层层析法跟踪，合并相同的部分，收集各部分洗脱液并浓缩；梯度洗脱时，氯仿-丙酮的混合溶剂体积配比从1:0逐渐变化至1:2；
步骤（3），高压液相色谱分离纯化：将用体积配比为6:4的氯仿-丙酮的混合溶剂洗脱收集浓缩得到的部分进一步用高压液相色谱分离纯化即得所需的苯丙素化合物。
3.根据权利要求2所述的苯丙素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（３）中，高压液相色谱分离纯化后的化合物再次用纯甲醇溶解，再以纯甲醇为流动相，用凝胶柱层析进一步分离纯化。
4.根据权利要求2所述的苯丙素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（３）中，所述的高压液相色谱分离纯化是采用21.2 mm × 250 mm，5 μm的C18色谱柱，流速为20 mL/min，流动相为质量浓度为28%的甲醇水溶液，紫外检测器检测波长为318 nm，每次进样200 μL，收集23.8 min的色谱峰，多次累加后蒸干。
5.根据权利要求2所述的苯丙素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的浸膏在经硅胶柱层析前，用重量是浸膏1.5～3倍量的纯甲醇、纯乙醇或纯丙酮将浸膏溶解后，再用重量是浸膏0.8～1.2倍的80～100目硅胶拌样，混合均匀后，上样。
6.根据权利要求2所述的苯丙素类化合物的制备方法，其特征在于：步骤（2）中，所述的梯度洗脱时，氯仿-丙酮的混合溶剂体积配比依次为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1和1:2；每个比例的混合溶剂洗脱时，洗脱到没有成分洗下为止，然后换下一个比例的混合溶剂。
7.权利要求1所述的苯丙素类化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105152880A (zh) * | 2015-10-28 | 2015-12-16 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种用超临界流体色谱制备的烟草倍半萜-f及其用途 |
| CN105646411A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-08 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种2-羧基呋喃类化合物、其制备方法及其抗菌活性的应用 |
| CN106008422A (zh) * | 2016-06-27 | 2016-10-12 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法和在制备抗癌药物中的应用 |
| CN106083781A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-11-09 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种具有卷烟增香效果的苯并内酯制备方法及其应用 |
| CN106083782A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-11-09 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法及其在卷烟滤嘴加香中的应用 |
| CN106117171A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-11-16 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种用超临界流体色谱制备烟草中具有抗菌活性的苯并异呋喃类化合物方法和应用 |
| CN106565649A (zh) * | 2016-10-18 | 2017-04-19 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法及在卷烟滤嘴加香中的应用 |
| CN106916131A (zh) * | 2017-02-14 | 2017-07-04 | 云南民族大学 | 一种葛根中的异苯并呋喃类化合物的制备方法及其清咽利喉功效 |
| CN106146383B (zh) * | 2016-07-04 | 2018-07-17 | 云南中烟工业有限责任公司 | 烟草中一种异吲哚生物碱化合物、其制备方法和应用 |
| CN111632066A (zh) * | 2020-07-03 | 2020-09-08 | 黑龙江中医药大学 | 治疗和/或预防卵巢癌的药物组合物及其制备方法和应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101550083A (zh) * | 2009-05-12 | 2009-10-07 | 云南烟草科学研究院 | 一种烟草中的苯并素类化合物及其制备方法和应用 |
| US20100126520A1 (en) * | 2007-01-17 | 2010-05-27 | Peter Clayton | Tobacco Product, Preparation and Uses Thereof |
| CN102267895A (zh) * | 2011-08-04 | 2011-12-07 | 云南烟草科学研究院 | 一种苯丙素类化合物及其制备方法和用途 |
| CN102977059A (zh) * | 2012-12-06 | 2013-03-20 | 云南烟草科学研究院 | 一种苯丙素化合物及其制备方法与应用 |
-
2015
- 2015-06-25 CN CN201510357418.2A patent/CN104945360B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20100126520A1 (en) * | 2007-01-17 | 2010-05-27 | Peter Clayton | Tobacco Product, Preparation and Uses Thereof |
| CN101550083A (zh) * | 2009-05-12 | 2009-10-07 | 云南烟草科学研究院 | 一种烟草中的苯并素类化合物及其制备方法和应用 |
| CN102267895A (zh) * | 2011-08-04 | 2011-12-07 | 云南烟草科学研究院 | 一种苯丙素类化合物及其制备方法和用途 |
| CN102977059A (zh) * | 2012-12-06 | 2013-03-20 | 云南烟草科学研究院 | 一种苯丙素化合物及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 陈永宽等: "云南烤烟型烟叶中糖苷类化学成分的研究", 《天然产物研究与开发》 * |
| 韦立功: "婴幼儿轮状病毒肠炎的药物治疗现状", 《中国当代儿科杂志》 * |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105152880A (zh) * | 2015-10-28 | 2015-12-16 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种用超临界流体色谱制备的烟草倍半萜-f及其用途 |
| CN105646411A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-06-08 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种2-羧基呋喃类化合物、其制备方法及其抗菌活性的应用 |
| CN105646411B (zh) * | 2016-03-30 | 2018-07-24 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种2-羧基呋喃类化合物、其制备方法及其抗菌活性的应用 |
| CN106083782B (zh) * | 2016-06-24 | 2018-09-28 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法及其在卷烟滤嘴加香中的应用 |
| CN106083781A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-11-09 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种具有卷烟增香效果的苯并内酯制备方法及其应用 |
| CN106083782A (zh) * | 2016-06-24 | 2016-11-09 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法及其在卷烟滤嘴加香中的应用 |
| CN106083781B (zh) * | 2016-06-24 | 2018-08-17 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种具有卷烟增香效果的苯并内酯制备方法及其应用 |
| CN106008422B (zh) * | 2016-06-27 | 2018-05-25 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法和在制备抗癌药物中的应用 |
| CN106008422A (zh) * | 2016-06-27 | 2016-10-12 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法和在制备抗癌药物中的应用 |
| CN106117171B (zh) * | 2016-06-29 | 2018-05-25 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种用超临界流体色谱制备烟草中具有抗菌活性的苯并异呋喃类化合物方法和应用 |
| CN106117171A (zh) * | 2016-06-29 | 2016-11-16 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种用超临界流体色谱制备烟草中具有抗菌活性的苯并异呋喃类化合物方法和应用 |
| CN106146383B (zh) * | 2016-07-04 | 2018-07-17 | 云南中烟工业有限责任公司 | 烟草中一种异吲哚生物碱化合物、其制备方法和应用 |
| CN106565649A (zh) * | 2016-10-18 | 2017-04-19 | 云南中烟工业有限责任公司 | 一种苯并内酯类化合物、其制备方法及在卷烟滤嘴加香中的应用 |
| CN106916131A (zh) * | 2017-02-14 | 2017-07-04 | 云南民族大学 | 一种葛根中的异苯并呋喃类化合物的制备方法及其清咽利喉功效 |
| CN111632066A (zh) * | 2020-07-03 | 2020-09-08 | 黑龙江中医药大学 | 治疗和/或预防卵巢癌的药物组合物及其制备方法和应用 |
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