CN104936963A - 作为蛋白激酶抑制剂的硫醚衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及作为蛋白激酶抑制剂的硫醚衍生物(1)，其对于与哺乳动物尤其是人类细胞异常和过度增殖相关的疾病的治疗、缓解和/或预防有用，并且其对于所有形式的癌症的治疗特别有用。

Description

作为蛋白激酶抑制剂的硫醚衍生物

技术领域

本发明涉及作为蛋白激酶抑制剂的硫醚衍生物，其对于与哺乳动物特别是人类中细胞异常和过度增殖相关的疾病的治疗、缓解和/或预防有用，并且其对于所有形式的癌症治疗特别有用。

背景技术

蛋白激酶在细胞功能的调节中起主要作用。这包括诸如细胞生长和***、细胞增殖和细胞死亡等过程，而且还包括很多其他细胞活动。蛋白激酶催化磷酸残基从ATP向目标蛋白质的转移，作为此蛋白激酶介导的磷酸化的结果，目标蛋白质改变其三维结构，并由此改变其生理功能。取决于被蛋白激酶磷酸化的氨基酸，这些酶分类为两个家族，即所谓的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶和酪氨酸蛋白激酶。

基于人类基因组计划，已知在人类中有518条编码蛋白激酶样蛋白序列的DNA序列。对于这些518种蛋白质的若干种，在最近约20年中可表明其相关基因序列的修饰(例如点突变、删除或基因扩增)导致相应蛋白激酶细胞活性的病理性变化。这对于参与细胞增殖和细胞周期控制、细胞存活和细胞死亡、肿瘤血管发生以及肿瘤转移形成的蛋白激酶特别准确。

若干所谓的致癌基因是病理性修饰的基因，其原癌形式(proto-oncogenicform)编码参与细胞生长和***的正常、生理性调节的蛋白激酶。

鉴于蛋白激酶是细胞功能的关键调节子，且鉴于其在细胞内可表现失调的酶活性，故其为治疗剂开发的有前景的靶标。在制药工业中有很多进行中的以鉴定蛋白激酶调节剂为目标的药物发现项目。目前主要集中在参与炎症和癌症的蛋白激酶上，但是除此之外，在几乎所有疾病领域中目前都在将蛋白激酶作为有前景的靶标在讨论。

在肿瘤领域，首个蛋白激酶抑制剂(例如Gleevec,Iressa)已经上市。除此之外，大量的蛋白激酶抑制剂现在正处于临床开发的不同阶段。多数情况下，这些化合物靶向的是EGF(表皮生长因子)受体或VEGF(血管内皮生长因子)受体的亚型。所有这些化合物都是以特异性地抑制某一特定的蛋白激酶为目标来开发的，因为有证据表明其干扰肿瘤进展的四种主要分子过程的一种。这四种过程是(a)细胞增殖/细胞周期控制，(b)程序性细胞死亡(凋亡)和细胞存活的调节，(c)肿瘤血管发生和(d)肿瘤转移。

考虑到当前对于与如ALK、AXL、FAK、IGF1-R、SRC和VEGF-R2等蛋白激酶相关，特别是与如ALK(细胞增殖)、AXL(凋亡)、FAK(转移)、VEGF-R2(血管发生)等蛋白激酶相关的多数病况缺乏可用的治疗选择，对抑制这些蛋白靶标的新型治疗剂仍有巨大的医药需求。

发明内容

因此，本发明所要解决的技术问题是提供一种能抑制如ALK、AXL、FAK、IGF1-R、SRC和VEGF-R2等蛋白激酶，并且可用于治疗、缓解和/或预防疾病(特别是所有形式的肿瘤)的蛋白激酶抑制剂。

上述技术问题的解决是通过权利要求中表征的实施方案来实现的。

特别地，本发明提供作为蛋白激酶抑制剂的硫醚衍生物，其对于参与包括癌症在内的疾病的蛋白激酶的抑制有用，但其作为抗肿瘤剂尤其有用。这包括优先抑制诱因性参与肿瘤进展的某一蛋白激酶的单特异性(monospecific)蛋白激酶抑制剂，也包括所谓的多靶标蛋白激酶抑制剂，其抑制至少两种不同的在两种或更多种不同的肿瘤进展分子机制中起作用的蛋白激酶。作为实例，此类化合物可以是肿瘤血管发生的抑制剂，并且除此之外也可以是凋亡的刺激剂。虽然开发“多重蛋白激酶抑制剂”的思想已经由J.Adams等人,Current Opinion in Chemical Biology 6,486-492,2002.描述，但多靶标蛋白激酶的概念仍是新方式。在上述文献中描述了一类化合物，其同时抑制虽然是若干种但均参与一种肿瘤进展的分子机制，即肿瘤血管发生的蛋白激酶。本发明现提供作为一组新蛋白激酶抑制剂的硫醚衍生物，该组新蛋白激酶抑制剂显示蛋白激酶差异抑制，其中每一个都可归属于四种肿瘤发展分子机制的一种。

根据本发明的一方面，提供根据通式(1)的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐：

其中X选自N和CH；

Y选自NH、S和O；

Z选自N和CH；

R¹选自取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基；

R²选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基；

n选自0、1和2；以及

Q选自H以及取代或未取代的氨基。

上述通式(1)中的X、Y、Z、n以及残基R¹、R²和Q可相互独立地选择。

上述通式(1)中的系数“n”选自0、1和2。根据本发明优选的实施方案，上述通式(1)中的n是0。

上述通式(1)中的“Q”选自H(氢)以及取代或未取代的氨基。在本发明中，未取代的氨基是-NH₂基团。氨基可任选地被取代，即氨基的一个或两个氢原子被取代基替换。此类取代基可以是例如烷基(从而形成单烷基氨基或二烷基氨基)、烯基、烷叉基(alkylidene)、炔基、芳基、芳叉基(arylidene)、酰基、环烷基、杂芳基、杂芳叉基等。在氨基的两个氢原子都被取代基替换的情形下，取代基可相互独立地选择。根据本发明优选的实施方案，上述通式(1)中的Q是H。

上述通式(1)的双环体系中的“X”选自N(氮)和CH。根据本发明优选的实施方案，上述通式(1)中的X是CH。根据本发明另一优选的实施方案，上述通式(1)中的X是N。

上述通式(1)的双环体系中的“Y”选自NH、S(硫)和O(氧)。根据本发明优选的实施方案，上述通式(1)中的Y是S。根据本发明另一优选的实施方案，上述通式(1)中的Y是NH。

上述通式(1)的双环体系中的“Z”选自N(氮)和CH。根据本发明优选的实施方案，上述通式(1)中的Z是N。

根据本发明特别优选的实施方案，在上述通式(1)中同时地n是0，Q是H，X是CH，Y是S，且Z是N，从而形成通式(2)的噻吩并[3,2-d]嘧啶衍生物。

根据本发明另一特别优选的实施方案，在上述通式(1)中同时地n是0，Q是H，X是N，Y是NH，且Z是N，从而形成通式(2a)的嘌呤衍生物。

在上下文中，应当注意到通式(2a)的化合物处于与化合物(2a*)的互变异构平衡，所述互变异构化合物(2a*)也由本发明涵盖。这对本文提及的所有具体示例的化合物同样适用。

上述通式(1)、(2)、(2a)和(2a*)中的R¹选自取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基。

根据具体的实施方案，通式(2)的噻吩并[3,2-d]嘧啶衍生物是由下式表示的化合物：

其中取代基R⁵不特别限定，并可以是例如烷基、卤素、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、羧酸及其衍生物、酰基、氨基、烷基氨基、氰基、硝基、烷基硫烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨磺酰、亚砜氨基、三卤甲氧基、三卤甲基等。在两个或多个取代基R⁵的情形下，两个或多个取代基R⁵可相同或不同。芳基中取代基的位置不特别限定。例如，苯基可在邻-、间-和/或对-位被取代。

在本发明中，“芳基”是指任何芳香族烃基，例如苯基、萘基等。芳基可任选地被(多)取代，即芳基的一个或多个氢原子可被取代基替换。此类取代基可以是烷基、卤素、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、羧酸及其衍生物、酰基、氨基、烷基氨基、氰基、硝基、烷基硫烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨磺酰、亚砜氨基、三卤甲氧基、三卤甲基等。芳基中取代基的位置不特别限定。例如，苯基可在邻-、间-和/或对-位被取代。

在本申请中，“杂芳基”是指任何一个或多个碳原子被例如氮、氧、硫等杂原子替换的单环或二环芳香族烃基。在两个或多个碳原子由杂原子替换的情形下，杂原子可相同或不同。本发明中的杂芳基是例如苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并异噁唑基、苯并噻唑基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、吲唑基、中氮茚基、吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噁唑基、1,5-二氮杂萘基、噁二唑基、噁唑基、2,3-二氮杂萘基、吡唑基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、噻唑基、四唑基、噻二唑基、***基等。杂芳基上向通式(1)的双环体系连接的位置不特别限定。杂芳基可任选地被(多)取代，即杂芳基的一个或多个氢原子可被取代基替换。此类取代基可以是烷基、卤素、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、羧酸及其衍生物、酰基、氨基、烷基氨基、氰基、硝基、烷基硫烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨磺酰、亚砜氨基、三卤甲氧基、三卤甲基等。杂芳基中取代基的位置不特别限定。

根据本发明优选的实施方案，上述通式(1)和(2)中的R¹是下列残基：

上面残基中的R³可以是卤素原子，例如F(氟)、Cl(氯)、Br(溴)和I(碘)。

可选地，上述残基中的R³可以是取代或未取代的烷基。烷基可以是直链的或支链的。在本发明中，“直链烷基”是指线型的烃基，例如甲基、乙基、丙基等。直链烷基的链长不特别限定。然而，C₁-C₆的链长是优选的。在本发明中，“支链烷基”是指分枝的烃基，例如异丙基、仲丁基、叔丁基等。构成支链烷基的碳原子数不特别限定。然而，C₃-C₆的碳原子数是优选的。直链或支链烷基可任选地被(多)取代，即，烷基的一个或多个氢原子可被取代基替换。此类取代基可以是卤素、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、羧酸及其衍生物、酰基、氨基、烷基氨基、氰基、硝基、烷基硫烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨磺酰、亚砜氨基、三卤甲氧基、三卤甲基等。

可选地，上述残基中的R³可以是羟基(-OH)。此外，羟基的氢原子可被取代，从而形成烷氧基。取代基可以是例如直链或支链的烷基、环烷基、芳基、杂芳基等，并且取代基的一个或多个氢原子可进一步被例如烷基、卤素、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、羧酸或其衍生物等取代。

根据本发明优选的实施方案，上述残基中的R³是F(氟)。

根据本发明优选的实施方案，上述通式(2a)和(2a*)中的R¹是苯基。

上述通式(1)、(2)、(2a)和(2a*)中的R²选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基。“取代或未取代的烷基”、“取代或未取代的芳基”和“取代或未取代的杂芳基”的定义与上文提供的相同，参照残基R¹和R³。

根据本发明优选的实施方案，R²是下列残基：

其中R⁴选自氨基，单烷基氨基，二烷基氨基，烷氧基，取代或未取代的烷基，具有一个或多个杂原子的取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基，取代的硫烷基(-SR')、亚硫酰基(-S(O)R')、磺酰基(-S(O)₂R')、氨磺酰基(-S(O)₂NH₂)和亚砜氨基(-S(O)(NH)R')，其中R'是例如取代或未取代的烷基/烯基/炔基/环烷基、芳基等。“取代或未取代的烷基”、“取代或未取代的芳基”和“取代或未取代的杂芳基”、“氨基”、“单烷基氨基”、“二烷基氨基”和“烷氧基”的定义与上文定义的相同，参照残基R¹、R²和R³。

可选地，上述残基中的R⁴可以是取代或未取代的环烷基。在本发明中，“环烷基”是指环状烃基，例如环丙基、环丁基、环戊基等。环烷基可任选地含有一个或多个双键和/或三键，并且可任选地被(多)取代，即环烷基的一个或多个氢原子可被取代基替换。此类取代基可以是例如卤素、芳基、杂芳基、羟基、烷氧基、羧酸及其衍生物、酰基、氨基、烷基氨基、氰基、硝基、烷基硫烷基、烷基亚硫酰基、烷基磺酰基、氨磺酰、亚砜氨基、三卤甲氧基、三卤甲基等。此外，环烷基的一个或多个碳原子可被例如氮、氧、硫等杂原子替换。在两个或多个碳原子被杂原子替代的情形下，杂原子可相同或不同。

根据优选的实施方案，R⁴选自取代或未取代的烷基、具有一个或多个杂原子的取代或未取代的环烷基、取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基。

R⁴特别优选的实例包括取代或未取代的苯基、吡啶基、氨基取代的烷基、杂环取代的烷基以及取代或未取代的苄基。

根据本发明特别优选的实施方案，蛋白激酶抑制剂是具有通式(3)的化合物或其药学上可接受的盐：

其中R³和R⁴相互独立，如上文所定义。

根据本发明另一特别优选的实施方案，蛋白激酶抑制剂是具有通式(3a)的化合物，或其互变异构化合物，或其药学上可接受的盐：

其中R⁴如上文所定义。

根据本发明的蛋白激酶抑制剂可以是如上所述的硫醚衍生物或其药学盐。在本发明的蛋白激酶抑制剂是根据通式(1)的硫醚衍生物的药学上可接受的盐的情形下，盐可由无机或有机酸或碱形成。药学上可接受的盐的实例包括但不限于非毒性的无机或有机盐，例如衍生自乙酸的乙酸盐、衍生自乌头酸的乌头酸盐、衍生自抗坏血酸的抗坏血酸盐、衍生自苯甲酸的苯甲酸盐、衍生自肉桂酸的肉桂酸盐、衍生自柠檬酸的柠檬酸盐、衍生自亚甲基双羟萘酸(embonic acid)的亚甲基双羟萘酸盐、衍生自庚酸的庚酸盐、衍生自甲酸的甲酸盐、衍生自富马酸的富马酸盐、衍生自谷氨酸的谷氨酸盐、衍生自乙醇酸的乙醇酸盐、衍生自盐酸的氯化物、衍生自氢溴酸的溴化物、衍生自乳酸的乳酸盐、衍生自马来酸的马来酸盐、衍生自丙二酸的丙二酸盐、衍生自扁桃酸的扁桃酸盐、衍生自甲磺酸的甲磺酸盐、衍生自萘-2-磺酸的萘-2-磺酸盐、衍生自硝酸的硝酸盐、衍生自高氯酸的高氯酸盐、衍生自磷酸的磷酸盐、衍生自苯二甲酸的苯二甲酸盐、衍生自水杨酸的水杨酸盐、衍生自山梨酸的山梨酸盐、衍生自硬脂酸的硬脂酸盐、衍生自琥珀酸的琥珀酸盐、衍生自硫酸的硫酸盐、衍生自酒石酸的酒石酸盐、衍生自对甲基苯磺酸的对甲基苯磺酸盐及其它。此类盐可通过本领域技术人员公知的方法容易地生产。

不认为是药学上可接受的其它盐，例如衍生自草酸的草酸盐，可适合作为用于生产通式(1)蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或生理功能衍生物或其立体异构体的中间体。

在另外的方面，本发明涉及如上文所定义的蛋白激酶抑制剂在医药中的使用。

特别地，本发明涉及如上文所定义的蛋白激酶抑制剂在选自细胞增殖紊乱、心血管病症、免疫性疾病、炎症性疾病、神经免疫性疾病、神经退行性疾病、自体免疫疾病的疾病的治疗、缓解和/或预防中的用途。上述疾病的治疗、缓解和/或预防优选是在哺乳动物中，更加优选在人类中。

根据本发明的“治疗”意指疾病的完全或部分痊愈，或疾病的减轻，或给定疾病进展的停止。

在一个实施方案中，如上文所定义的蛋白激酶抑制剂用于治疗恶性细胞增殖所导致的疾病，例如所有形式的实体瘤、白血病和淋巴瘤等。因此，如上文所定义的蛋白激酶抑制剂以及由其制备的药物组合物用于调节细胞激活、细胞增殖、细胞存活、细胞分化、细胞周期、细胞成熟和细胞死亡，或诱导代谢中的***性变化，例如糖、脂类或蛋白质代谢中的变化。如上文所定义的蛋白激酶抑制剂也可在由例如有毒物质、辐射、免疫治疗、生长缺陷、营养不良、吸收不良、免疫失调、贫血等造成的细胞消耗或破坏之后用来支持细胞产生的发生，包括血细胞生长和产生(前造血效应，prohematopoieticeffect)，或者用来提供组织发生和降解的治疗性控制，以及细胞的治疗性修饰，以及组织维持和血细胞内稳态，或血管或***形成或生长。

根据本发明优选的实施方案，如上文所定义的蛋白激酶抑制剂用于癌症的治疗、缓解和/或预防。癌症可以是血液学的瘤(例如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤)或实体瘤(例如乳腺、***、肝、膀胱、肺、食道、胃、结直肠、泌尿生殖器、胃肠、皮肤、胰腺、脑、子宫、结肠、头和颈、宫颈及卵巢的肿瘤，黑色素瘤，星形细胞瘤，小细胞肺癌，非小细胞肺癌，神经胶质瘤，基底和鳞状细胞癌，肉瘤，如卡波济肉瘤和骨肉瘤)。

根据本发明特别优选的实施方案，癌症是乳腺、膀胱、结直肠、肺、***、胰腺和肾癌中的实体瘤，或白血病，或淋巴瘤(例如间变性大细胞淋巴瘤)。

在本发明另一个实施方案中，如上文所定义的蛋白激酶抑制剂用于治疗、缓解和/或预防细胞增殖紊乱在其中起作用的疾病。

在本发明优选的实施方案中，使用如上文所定义的蛋白激酶抑制剂，通过抑制一种或多种蛋白激酶和/或磷酸酶来治疗、缓解和/或预防疾病。

在本发明特别优选的实施方案中，使用如上文所定义的蛋白激酶抑制剂，通过抑制一种或多种激酶，例如ALK、AXL、FAK、IGF1-R、SRC和VEGF-R2，来治疗、缓解和/或预防疾病。

在本发明另一个实施方案中，如上文所定义的蛋白激酶抑制剂用于治疗、缓解和/或预防T细胞起作用的疾病，特别是炎症性疾病和免疫疾病，例如阿狄森病(Addison's disease)、簇状脱发(alopecia areata)、强直性脊柱炎、溶血性贫血(贫血溶血)、恶性贫血(贫血恶性)、口疮、口疮性口炎、关节炎动脉硬化疾病、骨关节炎、类风湿性关节炎、***生成缺乏(aspermiogenese)、支气管哮喘(asthma bronchiale)、自身免疫哮喘、自身免疫溶血、贝切特病(Bechet's disease)、伯克病(Boeck's disease)、炎性肠病、伯基特淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)、克罗恩病、脉络膜炎、溃疡性结肠炎、乳糜泻、冷球蛋白血症、疱疹样皮炎、皮肌炎、胰岛素依赖I型糖尿病、青少年糖尿病、特发性糖尿病尿崩症、胰岛素依赖型糖尿病、自身免疫脱髓鞘病、杜普伊特仑挛缩(Dupuytren's contracture)、脑脊髓炎、过敏性脑脊髓炎、晶状体蛋白过敏性眼内炎、过敏性肠病、自身免疫性肠病综合征、麻风结节性红斑、特发性面神经麻痹、慢性疲劳综合征、发热性风湿、肾小球肾炎、古德帕斯彻综合征(Goodpasture's syndrome)、格雷夫斯病(Graves'disease)、Harnman-Rich病(Harnman-Rich's disease)、桥本病(Hashimoto's disease)、桥本甲状腺炎、突发性脱发、神经性听力损失、慢性肝炎、何杰金病(Hodgkin's disease)、阵发性血红蛋白尿、区域性回肠炎、虹膜炎、白细胞减少、白血病、播散性红斑狼疮、***性红斑狼疮、皮肤红斑狼疮、恶性淋巴肉芽肿、传染性单核细胞增多症、重症肌无力、横贯性脊髓炎、原发特发性粘液性水肿、肾变病、交感性眼炎、肉芽肿性***炎、胰腺炎、天疱疮、寻常型天疱疮、结节性多发动脉炎、进行性慢性多关节炎、多肌炎、急性多神经根炎、牛皮藓、紫癜、坏疽性脓皮症,Quervain甲状腺炎(Quervain's thyreoiditis)、莱特尔综合征(Reiter's syndrome)、结节病、共济失调硬化症、进行性***性硬化症、巩膜虹膜炎、硬皮病、多发性硬化、播散性脑硬化、获得性视神经萎缩、抗***抗体所致的不育、血小板减少、特发性血小板减少性紫癜、胸腺瘤、急性前眼色素层炎、白癜风、艾滋病，人类免疫缺陷病毒、严重联合免疫缺陷和非洲淋巴细胞瘤病毒相关的疾病，例如斯耶格伦综合征(Sjorgren's syndrome)、病毒(AIDS或EBV)相关的B细胞淋巴瘤，寄生虫病，例如利什曼原虫病，以及免疫抑制疾病状态，例如异体移植后的病毒感染、艾滋病、癌症、慢性活跃性肝炎糖尿病、中毒性休克综合征和食物中毒。

根据本发明的另一个实施方案，上文定义的蛋白激酶抑制剂用于治疗、缓解和/或预防人类和动物中由原生动物感染所导致的疾病。此类兽医学和人类致病性原生动物优选顶复亚门或肉鞭虫门的细胞内活性的寄生虫，特别是椎虫属、疟原虫、利什曼原虫属、巴贝虫和泰累尔梨浆虫、隐孢子虫、肉孢子虫属,阿米巴属、球虫亚纲和毛滴虫。如上文所定义的蛋白激酶抑制剂特别适用于恶性疟原虫导致的热带疟、间日疟原虫或卵形疟原虫导致的间日疟的治疗，以及用于三日疟原虫导致的三日疟的治疗。如上文所定义的蛋白激酶抑制剂也适于刚地弓形虫导致的弓形虫病、贝氏等孢球虫导致的球虫病、猪人肉孢子虫导致的小肠肉孢子虫病、溶组织内阿米巴导致的痢疾、小球隐孢子虫导致的隐孢子虫病、克氏锥虫导致的恰加斯病(Chagas disease)、布氏罗德西亚锥虫或布氏冈比亚锥虫导致的昏睡病、皮肤和内脏以及其它形式的利什曼原虫病的治疗。如上文所定义的蛋白激酶抑制剂也适于被例如导致牛东海岸热的病原体牛泰累尔梨浆虫，导致牛非洲锥虫病的刚果锥虫或活跃锥虫、布氏锥虫，导致苏拉病的布氏锥虫伊氏亚种，在牛和水牛中导致得克萨斯热的病原体双芽巴贝虫，导致欧洲牛巴贝虫病以及在狗、猫和绵羊中导致巴贝虫病的病原体牛巴贝虫，在牛和鸟中导致隐孢子虫病的病原体隐孢子虫，在兔、牛、绵羊、山羊、猪和鸟特别是在鸡和火鸡中导致球虫病的病原体艾美球虫属和等孢球虫属等兽医致病性原生动物感染的动物的治疗。如上文所定义的蛋白激酶抑制剂特别优选用于球虫病或疟疾感染的治疗，或者用于治疗这些疾病的药物或饲料的制备。此治疗可以是预防性的或治疗性的。在疟疾的治疗中，如上文所定义的蛋白激酶抑制剂可与其它抗疟疾剂组合。

如上文所定义的蛋白激酶抑制剂可进一步用于病毒感染或由例如卡氏肺孢子虫等导致的其它感染。

此外，本发明涉及疾病的治疗或预防方法，其包括给药有效量的如上文所定义的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐。

如上文所定义的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐可本身作为治疗剂、作为与其它的混合物或以允许肠内或肠胃外使用的药物制剂的形式向动物、优选哺乳动物，并且特别地向人、狗和鸡给药，并且除了通常的药用无害赋形剂(excipient)和添加剂之外还含有有效剂量的至少一种如上文所定义的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐作为活性成分。如上文所定义的蛋白激酶抑制剂也可按通过使相应化合物与生理上可接受的酸和碱反应而获得的盐的形式给药。

含有如上文所定义的蛋白激酶抑制剂的药物的生产及其施用可根据公知的药学方法来进行。

虽然如上文所定义的用于治疗的蛋白激酶抑制剂可按原料化学化合物的形式给药，但优选将活性成分，任选地以生理上可接受的盐的形式，与一种或多种佐剂(adjuvant)、赋形剂、载体(carrier)、缓冲剂、稀释剂和/或其它通常的药用辅助剂一起引入药物组合物。此类如上文所定义的蛋白激酶抑制剂的盐可以是无水的或溶剂化的。

在优选的实施方案中，本发明提供包含如上文所定义的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或生理功能性的衍生物或立体异构体，以及其一种或多种药学上可接受的载体，和可选地其它治疗性和/或预防性成分的药物。载体在与配方的其它成分相容的意义上必须是“可接受的”，并且对其接受者无害。

本发明的药物可以是适合供口服、直肠、支气管、鼻、局部、***、舌下、透皮、***或肠胃外(包括皮肤、皮下、肌内、腹腔内、静脉内、动脉内、脑内、眼内注射或输液)给药，或者是适合通过吸入或吹入给药的形式的药物，包括粉末和液体喷雾剂给药，或者通过持续释放***。持续释放***的适合实例包括含有本发明的化合物的固体疏水性聚合物的半透过性基质，其中基质可处于成型制品的形式，例如膜或微囊。

如上文所定义的蛋白激酶抑制剂，连同常规的佐剂、载体或稀释剂，可如此成为药物及其单位剂量的形式。此类形式包括固体，并且特别是片剂、填充的胶囊、粉末和丸粒形式，以及液体，特别是水或非水溶液剂、混悬剂、乳剂、酏剂以及用其填充的胶囊(均供口服使用)，供直肠给药的栓剂，以及供肠胃外使用的无菌可注射溶液。此类药物及其单位剂量形式可按常规的比例包含常规的成分，具有或者不具有额外的活性化合物或物质，并且此类单位剂量可含有任何有效量的活性成分，与欲使用的预期每日剂量范围相当。

如上文所定义的蛋白激酶抑制剂可按多种多样的口服和肠胃外剂量形式给药。对本领域技术人员显而易见的是，下列剂量形式可包含如上文所定义的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐或立体异构体作为活性组分。

为了由如上文所定义的蛋白激酶抑制剂制备药物，药学上可接受的载体可为固体或液体。固体形式的制剂包括粉末、片剂、丸剂、胶囊、扁囊、锭剂、栓剂及可分散颗粒。固体载体可以是一种或多种亦可充当稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、悬浮剂、粘结剂、防腐剂、片剂崩解剂或成胶囊材料的物质。

在粉末中，载体是细分的固体，其处于与细分的活性组分的混合物中。在片剂中，活性组分与具有必要粘结能力的载体以适合的比例混合，并压实为期望的形状和大小。适合的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”意欲包括活性化合物与作为载体的成胶囊材料的配方，提供与载体或不与载体一起的活性组分由载体包围而如此与其结合的胶囊。类似地，包括扁囊和锭剂。片剂、粉末、胶囊、丸剂、扁囊和锭剂可作为适合口服给药的固体形式使用。

对于制备栓剂，将例如脂肪酸甘油酯或可可脂等低熔点蜡首先熔融，并在其中均匀地分散活性组分，如通过搅拌。然后将熔融的均一的混合物倒入合适尺寸的模具，使之冷却，并由此固化。适合***给药的组合物可呈现为除了活性成分以外还含有现有技术中已知适当的此类载体的***栓、棉塞、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾剂。液体制剂包括溶液剂、混悬剂和乳剂，例如水或水-丙二醇溶液。例如，肠胃外注射液体制剂可配方为在含水聚乙二醇溶液中的溶液剂。

如上文所定义的蛋白激酶抑制剂可由此配方，供胃肠功能外给药用(例如通过注射，例如快速推注或连续输液)，并可呈现为安瓿中的单位剂量形式、预充填的注射器、小体积输液或者处于具有添加的防腐剂的多剂量容器当中。组合物可采用诸如混悬剂、溶液剂，或者油性或水性媒介中的乳剂等形式，并可含有配方剂，例如悬浮、稳定和/或分散剂。可选地，活性成分可处于通过无菌固体的无菌分离或者通过从溶液冻干而获得的粉末形式，供在使用前与例如无菌、无热原水等合适的媒介构成。

适合口服使用的水溶液剂可通过将活性组分溶解在水中并按需添加合适的着色剂、矫味剂、稳定和增稠剂来制备。适合口服使用的水混悬剂可通过将细分的活性组分分散在具有例如天然或合成胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或其它公知的悬浮剂等粘稠材料的水中来制作。

也包括意欲在即将使用之前转化为液体形式的制剂供口服给药的固体形式的制剂。此类液体形式包括溶液剂、混悬剂和乳剂。除了活性组分以外，这些制剂还可含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

在本发明的一个实施方案中，药物局部地，或***地，或通过两种途径的组合来施用。

在本发明特别优选的实施方案中，药物局部地施用。这降低可能的副作用，并将必要治疗限制在受影响的区域。

优选地，药物制备为软膏、凝胶、膏剂、乳剂、乳液、泡沫、混合相或两性乳化***(油/水-水/油混合相)的乳膏、脂质体、传递体(transfersome)、糊剂或粉末的形式。

软膏和乳膏例如可与添加了合适的增稠和/或胶凝剂的水性或油性基质配方。乳液可与水性或油性基质配方，并通常也将含有一种或多种乳化剂、稳定剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂或着色剂。

适合在口中局部给药的组合物包括锭剂，其包含处于经矫味的基质(通常是蔗糖和***胶或黄蓍胶)当中的活性物质；软锭剂，其包含处于例如明胶和甘油或蔗糖和***胶等惰性基质中的活性成分；以及漱口剂，其包含处于合适的液体载体中的活性成分。

溶液剂或分散剂通过常规手段，例如用滴管、移液管或喷雾器向鼻腔直接施用。组合物可按单剂量或多剂量形式提供。在滴管或移液管的后一种情形，这可通过给予患者适当、预定体积的溶液剂或混悬剂而达到。在喷雾器的情形，这可通过例如计量雾化喷雾泵的手段而达到。

向呼吸道给药也可通过气溶胶配方的手段而达到，在气溶胶配方中活性成分与合适的推进剂，例如氯氟烃(CFC)如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷或二氯四氟乙烷，二氧化碳或其它合适的气体等一起在加压包装中提供。气溶胶也可合宜地含有表面活性剂，例如卵磷脂。药的剂量可通过剂量阀的规定来控制。

可选地，活性成分可按干燥粉末的形式提供，例如化合物处于合适的粉末基质例如乳糖、淀粉、淀粉衍生物例如羟丙甲纤维素和聚乙烯吡咯烷酮(PVP)当中的粉末混合物。常规地，粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。粉末组合物可呈现为单位剂量的形式，例如，如明胶等的胶囊或药筒，或水泡包装，从中粉末可通过吸入器的手段来给药。

在意欲用于向呼吸道给药的组合物，包括鼻内组合物中，化合物通常具有小的粒径，例如5微米以下的量级。此类粒径可通过现有技术中已知的手段来获得，例如微粉化。

有需求时，可使用适于给出活性成分持续释放的组合物。

药物制剂优选为单位剂量形式。在此类形式中，制剂进一步分为包含适当数量活性组分的单位剂量。单位剂量形式可以是包装的制剂，该包装包含独立量的制剂，例如包装的片剂、胶囊以及小瓶或安瓿中的粉末。而且，单位剂量形式可以是胶囊、片剂、扁囊或锭剂本身，或可以是任何这些在包装形式中的适当数量。供口服给药的片剂或胶囊，以及供静脉给药和连续输液的液体是优选的组合物。

药物组合物也可含有两种或更多种如上文所定义的蛋白激酶抑制剂或它们的药学上可接受的盐，以及其它治疗活性物质。

于是，如上文所定义的蛋白激酶抑制剂可按单独一种化合物或者与其它活性化合物组合的形式使用-例如与已知用于前述疾病的治疗的药物一起，由此，在后一种情形中注意到有利的额外增强效果。向人类给药的合适的量在每日5至1,250mg的范围内。

为制备药物制剂，可使用药学上惰性的无机或有机赋形剂。为制备丸剂、片剂、包衣的片剂和硬明胶胶囊，可使用例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等。用于软明胶胶囊和栓剂的赋形剂是例如脂肪、蜡、半固体和液体多元醇、天然或硬化的油等。适合于溶液剂和糖浆生产的赋形剂是例如水、蔗糖、转化糖、葡萄糖、多元醇等。适合于注射液生产的赋形剂是例如水、醇、甘油、多元醇或植物油。

剂量可在宽的限度内变化，并且在每个单独病例中配合单独的病况。对于上述用途，适当的剂量将取决于给药方式、欲治疗的特定病况和期望的效果而变化。然而通常满意的结果在1至100mg/kg动物体重，优选1至50mg/kg的剂量率获得。适合于较大哺乳动物例如人的剂量率是在约10mg至3g/天的量级，方便地单次给药、按分开的剂量例如每天2至4次或者以持续释放的形式给药。

通常，在口服给药的情形，每个人个体大约10mg至5000mg，优选50至500mg的每日剂量是适当的。而且在其它给药形式的情形，每日剂量在相似范围内。对于局部输送，取决于皮肤的透过性、疾病的类型和严重性，并且取决于配方的类型和施用的频率，通过局部施用，药物中活性化合物的不同浓度可足以引起治疗效果。优选地，在根据本发明的药物当中，活性化合物或其药学上可接受的盐或其生理上有功能的衍生物或立体异构体的浓度在1μmol/L和100mmol/L之间的范围内。

本申请另一方面涉及用于生产根据通式(4)的蛋白激酶抑制剂的方法：

其中该方法包括在碱的存在下将通式(5)的化合物与R²-SH反应：

在上述式(4)和(5)中，R¹和R²与上文对式(1)和(2)所定义的相同。根据优选的实施方案，R¹是取代的苯基，例如下列残基

其中R³与上文定义的相同。

上述方法中的碱不特别限定。根据优选的实施方案，碱是N,N-二异丙基甲胺、碳酸钾或氢氧化钠。相对于化合物R²-SH，使用至少等摩尔量的碱。优选地，相对于化合物R²-SH，使用1.5当量的碱。

上述方法中的溶剂不特别限定。根据优选的实施方案，溶剂是正丁醇、乙腈或乙醇。上述方法优选在至少90℃的温度下进行，而当通过常规的加热，例如通过油浴或类似热源的手段进行时，反应时间优选至少6小时。可选地，上述方法优选在至少60℃的温度下进行，而当在化学合成用的微波炉中进行时，反应时间优选至少10分钟。反应完成后，按照本领域技术人员公知的标准方法整理反应混合物。例如，蒸去溶剂，并从例如甲苯等溶剂中重结晶残渣，以收获通式(4)的产品。

此外，对上述方法有用的通式(6)的原料：

可通过例如下列反应顺序来制备，其中单独的步骤根据参考文献[1]、[3]和[4]的记载：

其中R³与上文描述的相同，优选MeO(甲氧基)。

此外，对上述方法有用的通式(6b)的原料：

可通过例如下列反应顺序来制备，其中单独的步骤根据参考文献[1]、[3]和[17-22]的记载：

其中R³与上文描述的相同，优选MeO(甲氧基)。

此外，对上述方法有用的通式(6c)的原料：

可通过例如下列反应顺序来制备，其中单独的步骤根据参考文献[24]的记载：

其中R³与上文描述的相同，优选MeO(甲氧基)。

此外，对上述方法有用的通式(7)的原料：

可例如根据参考文献[6]、[7]和[8]通过下列反应制备：

其中R⁴与上文描述的相同，例如苄基。

本发明将在下列实施例中进一步说明，但不限于实施例。

实施例

概述

原料、试剂和溶剂主要购自Acros Organics(比利时吉尔)、Sigma Aldrich(美国密苏里州圣路易)和Alfa Aesar(美国马萨诸塞州Ward Hill)。4-氯-6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶、6-(4-氯苯基)-噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-硫醇以及6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-硫醇购自Enamine Ltd.(乌克兰基辅)。熔点在电可变加热器(Electrothermal IA 9100)上的开口玻璃毛细管中测定。FT-IR吸收谱在使用KBr丸粒的Thermo Nicolet FT-IR 200光谱仪上记录。H-NMR和¹³C-NMR谱分别在Bruker Avance DRX-400(¹H-NMR：400.1MHz，³C-NMR：100.6MHz)和Bruker Avance II-600(H-NMR：600.1MHz，¹³C-NMR：150.9MHz)上记录，分别使用DMSO-d₆、CDCl₃和丙酮-d₆作为溶剂(NMRlaboratories of the Chemical Institutes of the Technische UniversitatBraunschweig)。化学位移报告为从用作内标的TMS的低场的百万分之一(ppm)。元素分析在CE Instruments1112元素分析仪上记录。反应用TLC(Macherey-Nagel Polygram SIL G/UV254)监控。HPLC实验在MerckHitachi LaChrom Elite***上进行(泵：L-2130，DAD检测器：L-2450；自动进样器：L-2200；柱：Merck LiChroCART 125-4，LiChrospher 100RP-18()；洗脱速率1.000mL/min；检测波长：254nm和280nm；总运行时间：15min，除非另有描述)；t_MS＝总保留时间，t_M＝死时间；洗脱剂：乙腈和双蒸水的混合物或硫酸三乙铵缓冲液(pH 2.3)；缓冲液制备：将20mL三乙胺和0.242g氢氧化钠溶解在1000mL双蒸水中，并用浓硫酸调节至pH 2.3。梯度HPLC在Merck Hitachi LaChrom Elite***上进行(泵：L-2130，UV检测器：L-2400；自动进样器：L-2200；柱：Merck LiChroCART 125-4，LiChrospher 100RP-18()；洗脱速率：1.000mL/min；检测波长：254nm，除非另有描述；总运行时间：25min，除非另有描述，洗脱剂在线混合)。梯度洗脱条件如下。方法1：0→10.0min：乙腈/水10/90→70/30；10.0→10.5min：乙腈/水70/30→90/10；10.5→16.5min：乙腈/水90/10。方法2：0→10.0min：乙腈/水10/90→70/30；10.0→13.0min：乙腈/水70/30→90/10；13.0→20.0min：乙腈/水90/10。t_MS＝总保留时间，t_Μ＝死时间；洗脱剂：乙腈和双蒸水的混合物。质谱在Thermofinnigan MAT95XL(Department of mass spectrometry of theChemical Institutes of the Technische Universitat Braunschweig)上记录。

化合物的合成

3-氯-3-(4-甲氧基苯基)丙烯醛：^[1]

实验过程取自Romagnoli等人^[1]

将磷酰氯(3.36g，2.00mL，21.9mmol)逐滴添加到冰冷却搅拌的N,N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)中。进一步搅拌溶液30分钟。将4'-甲氧基乙酰苯(0.751g，5.00mmol)逐份添加至DMF-POCl₃络合物，形成黄色溶液。随后，该批次在70℃加热5小时。冷却至室温后，添加乙酸钠的冰冷饱和水溶液(50mL)。所得的悬浮液用乙酸乙酯提取(3×20mL)。有机层用氯化锂(5％，20mL)洗涤，在无水Na₂SO₄上干燥并在真空中浓缩。在没有任何进一步的纯化下使用黄色粉末(产率：80.9％)。

Mp＝63-65℃.(58-60℃^[1])

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):3.85(s,3H,CH₃),6.92(d,J＝6.76,2H,＝CH-CHO),7.06-7.09(m,2H,ArH),7.88-7.92(m,2H,ArH),10.10(d,J＝6.78,1H,CHO).

3-氯-3-(4-甲氧基苯基)丙烯腈：^[2]

实验过程取自Romagnoli等人^[2]

在氮气氛中将3-氯-3-(4-甲氧基苯基)丙烯醛(0.750g，3.81mmol)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中。添加盐酸羟胺(0.348g，5.00mmol)之后，溶液在60℃加热6小时。添加冰冷却的水造成无色悬浮液。产物用乙酸乙酯提取(3×50mL)。有机层用水(20mL)洗涤，在无水Na₂SO₄上干燥并在真空中浓缩。将醋酸酐(30mL)添加至剩余的油中，且溶液在130℃下搅拌18小时，从而将醛肟转变为所需的腈。在真空中蒸发脱水剂。在没有任何进一步的纯化下将完整批次的剩余残渣用于下面的合成。

Mp＝103-105℃.(88-90℃^[16])

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz)：3.84(s,3H,CH₃),6.81(s,1H,＝CH-C),7.06-7.09(m,2,ArH),7.78-7.80(m,2H,ArH).

3-氨基-5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-羧酸乙酯：^[3]

实验过程取自Hartmann等人^[3]

将2-巯基乙酸乙酯(0.601g，0.551μL，5.00mmol)添加至等摩尔的氢氧化钠在乙醇中的溶液(10mL)。溶液在室温搅拌15分钟。随后，添加通过如上文描述的方法而生产的β-氯肉桂酸腈批次，并回流所得的溶液2小时。冷却至室温后，添加冰冷却的水(30mL)并过滤沉淀。从正丁醇重结晶产品(产率：65.4％，由3-氯-3-(4-甲氧基苯基)丙烯醛的两步之后计算)。

Mp＝123-125℃.(119-120℃^[3])

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):1.26(t,J＝7.09Hz,3H,CH₃),3.80(s,3H,CH₃),4.20(q,J＝7.09Hz,2H,CH₂),6.55(s,2H,NH₂),6.87(s,1H,ArH),6.98-7.02(m,2H,ArH),7.56-7.59(m,2H,ArH).

3-甲酰胺基-5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-羧酸乙酯：

实验过程取自Thrash等人^[4]

将甲酸(4mL)添加至冰冷却的醋酸酐(6mL)。逐份添加3-氨基-5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(1.39g，5.01mmol)并此后在室温搅拌4小时。连续地，将反应批次倒至冰冷却的5.00g Na₂CO₃在20mL水中的溶液。所得的棕色油用乙酸乙酯(3×20mL)提取。有机层用氯化锂(5％，20mL)洗涤，在无水Na₂SO₄上干燥并在真空中浓缩，从而收获在没有进一步纯化下使用的50％的粗产品。

Mp＝121-123℃

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):1.30-1.34(t,J＝7.09Hz,3H,CH₃),3.81(s,3H,CH₃),4.30-4.35(q,J＝7.08Hz,2H,CH₂),7.02-7.04(m,2H,ArH),7.64-7.67(m,2H,ArH),8.21(s,1H,ArH),8.44(s,1H,CHO),10.41(s,1H,NH)

6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮：^[5]

实验过程取自Thrash等人^[4]

将3-甲酰胺基-5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(1.00g，3.27mmol)、甲酸铵(2.60g，5.00mmol)和甲酰胺(4mL)在氮气氛中160℃下加热6小时。将溶液冷却至室温并过滤沉淀，用丙酮洗涤，并在五氧化二磷上干燥(产率：50.0％)。Mp＝288-290℃。

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):3.83(s,3H,CH₃),7.04-7.07(m,2H,ArH)，7.71(s,1H,ArH),7.78-7.82(m,2H,ArH),8.15(s,1H,ArH),12.40(s,1H,NH).

4-氯-6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶

实验过程取自Thrash等人^[4]

磷酰氯(5mL)中的6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(0.500g，1.94mmol)在氮气氛中回流2小时。随后将溶液冷却至室温并小心添加至饱和碳酸钠水溶液(5.40g Na₂CO₃/25mL)。水溶液用乙酸乙酯提取(3×25mL)。然后，有机层用盐水洗涤并在无水Na₂SO₄上干燥。溶剂在真空中蒸发(产率：25.7％)。

Mp＝174-176℃.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):3.85(s,1H,CH₃),7.09-7.12(m,2H,ArH),7.93-7.95(m,2H,ArH),8.10(s,1H,ArH),8.98(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆):56.0(一级C)；115.4(2C),119.2,129.0(2C),155.2(三级C)；124.6,129.3,153.1,155.1,161.9,163.4(四级C).

氯代甲脒盐酸盐

实验过程取自Henderson等人^[22]

将氨腈(1.00g，23.8mmol)溶解在醋酸酐(75.0mL)中，并且经宽玻璃管将氯化氢气体通过冰冷却的溶液2.5h，形成白色沉淀。通过过滤收集产物，用醋酸酐和石油醚充分洗涤，并在真空中干燥，从而收获白色固体(2.62g，95.9％)。

Mp＝175-177℃.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):7.09(s,2H,NH₂),10.71(s,1H,NH).

2-氨基-6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮

实验过程取自Abdillahi等人^[17]、Savall等人^[18]和Edwards等人^[19]。

将3-胺基-5-(4-甲氧基苯基)噻吩-2-羧酸乙酯(0.832g，3.00mmol)和氯代甲脒盐酸盐(0.517mg，4.50mmol)与二甲砜(0.847g，9.00mmol)混合，并在140-150℃下加热1小时。随后，将粘稠溶液冷却至室温并与冰冷却的氢氧化钠水溶液(0.400g，10.0mL)混合。水溶液用乙酸乙酯提取(3×25mL)。水溶液用稀盐酸(5％v/v)中和，直至沉淀开始。过滤沉淀并从乙醇中重结晶，从而收获棕色粉末(产率：36.0％)。

Mp＝326-32℃.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):3.81(s,3H,CH₃),6.90(s,2H,NH₂),7.01-7.04(m,2H,ArH),7.25(s,1H,ArH),7.68-7.71(m,2H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):56.1(一级C)；114.6(2C),118.3,127.4(2C)(三级C)；110.5,125.8,149.7,155.5,158.9,160.1,174.4(四级C).

4-氯-6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-胺

实验过程取自Ife等人^[20]和Jang等人^[21]。

将磷酰氯(10mL)中的2-氨基-6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4(3H)-酮(0.322g，1.18mmol)和N,N-二甲基苯胺(1.00mL)回流90分钟。随后在真空中除去挥发性成分，并添加冰冷却的水(50mL)。一旦添加三乙胺(5mL)，溶液用二氯甲烷提取(3×25mL)。在真空中蒸发合并的有机层，并从二氯甲烷中重结晶，从而收获棕色粉末(产率：15.6％)。

Mp＝230-231℃.

IR(KBr):3469cm^-1,3304cm^-1,3184cm^-1.

¹H-NMR(DMSO-d₆,600MHz):3.83(s,3H,CH₃),7.00(s,2H,NH₂),7.06-7.08(m,2H,ArH),7.58(s,1H,ArH),7.82-7.84(m,2H,ArH).

¹H-NMR(CDCl₃-d₁,400MHz):3.88(s,3H,CH₃),5.70(s,2H,NH₂),6.97-7.01(m,2H,ArH),7.25(s,1H,ArH),7.66-7.69(m,2H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,150.9MHz):56.0(一级C)；115.2(2C),117.2,128.5(2C)(三级C):118.1,125.2,153.1,154.0,161.4,162.3,165.5(四级C).

¹³C-NMR(CDCl₃-d₁,100MHz):55.5(一级C)；114.6(2C),116.4,128.1(2C)(三级C)；119.9,125.3,154.3,156.0,160.8,161.4,163.7(四级C).

HRMS/ESI(+):计算[C₁₃H₁₁ClN₃OS]⁺＝292.03039；实测292.03075[M+H]⁺.

HPLC:97.9％,在254nm；95.6％,在280nm；t_MS＝3.13min,(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:328nm.

6-氯-8-苯基-9H-嘌呤

实验过程取自Ibrahim等人^[24]。

将6-氯-4,5-二氨基嘧啶(1.4mmol)和氯化铵(8.40mmol)的混合物悬浮在POCl₃(10.0mL)中。添加苯甲酰氯(7.00mmol)之后，反应批次在100℃下加热24小时。冷却至室温并倒入冰/水后，混合物用氨水(25％v/v)中和至pH 7-8。滤过所获得的固体并用水洗涤。产物不进一步纯化就使用。

Mp＝254-255℃.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):d(ppm)＝7.62(m,3H,ArH),8.29(m,2H,ArH),8.73(s,1H,ArH),14.4(s,1H,NH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):d(ppm)＝127.3,128.4(2C),131.6(2C),151.4(三级C),129.2(四级C).

1,3,4-噁二唑-2-硫醇和1,3,4-噁二唑-2(3H)-硫酮从供应商处购买或者按下文描述合成。

1,3,4-噁二唑衍生物的合成

方法A：

参考Manjunatha等人，1,3,4-噁二唑衍生物按下文描述合成^[6]：

将合适的酰肼(10.0mmol)溶解在添加了氢氧化钠(0.400g，10.0mmol)的96％乙醇(30mL)中。添加二硫化碳(0.776g，10.2mmol)后，反应批次回流4小时。混合物冷却至室温。1M盐酸(10.0mL)的添加导致沉淀。过滤沉淀，用水洗涤，并从乙醇中回收。

方法B：

参考Farghaly等人，1,3,4-噁二唑衍生物按下文描述合成^[7]：

将合适的酰肼(10.0mmol)溶解在添加了二硫化碳(0.776g，10.2mmol)的吡啶(40mL)中。反应批次回流6小时。混合物冷却至室温，在真空中蒸发溶剂，并从乙醇中重结晶残渣。

方法C：

参考Jansen等人，1,3,4-噁二唑衍生物按下文描述合成^[8]：

将合适的酯(1.00mmol)溶解在添加了水合肼(0.320g，10.0mmol)的乙醇(10mL)中。反应批次回流3小时。混合物冷却至室温，并在真空中蒸发溶剂。在不预先纯化下如方法B中所述进一步处理残渣。

方法D：

将适当的酰肼(1.00mmol)溶解在添加了N,N-二异丙基乙胺(0.194g，1.5mmol)和二硫化碳(2.52g，33.1mmol)的甲醇(20mL)中。反应批次回流3小时。混合物冷却至室温。在真空中蒸发溶剂，并从乙醇中重结晶残渣。

5-苄基-1,3,4-噁二唑-2-硫醇：^[10]

如方法A中所述合成化合物；浅黄色粉末(产率：93％)。

Mp＝125-127℃(129-130℃^[10])

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):4.14(s,2H,CH₂),7.28-7.41(m,5H,ArH),14.12(s,br,1H,SH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):31.0(二级C)；127.4,128.8(2C),129.0(2C)(三级C)；133.5,163.0,177.8(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝192[M]^+·(69).

5-(吡啶-4-基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇：^[11]

如方法B所述合成化合物；橙色粉末(产率：88％)。

Mp＝276℃(272℃^[11])

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):7.82(dd,J＝1.65,4.49,2H,ArH)),8.82(d,J＝4.69,2H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):119.6(2C),150.8(2C)(三级C)；129.8,158.8,177.8(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝179[M]^+·(100).

对C₇H₅N₃OS的分析计算:C,46.92；H,2.81；N,23.45.

实测:C,47.18；H,2.60；N,23.08.

5-[(二甲基氨基)甲基]-1,3,4-噁二唑-2-硫醇：^[8]

如方法C所述合成化合物(产率：65％)。

Mp＝225℃.(119℃^[8])

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):2.33(s,6H,CH₃),3.73(s,2H,CH₂).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):44.0(一级C)；51.8(二级C)；160.0,175.5(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝159[M]^+·(42).

5-(吗啉代甲基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇：^[12]

如方法C所述合成化合物；白色粉末(产率：88％)。

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):2.46-2.49(m,4H,CH₂),3.57-3.59(m,4H,CH₂),3.56(s,2H,CH₂).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):51.5,52.4(2C),66.0(2C)(二级C)；160.6,178.0(四级C).

5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,3,4-噁二唑-2-硫醇：^[13]

如方法A所述合成化合物，(产率：83％)。

MS(EI):m/z(％)＝246[M]^+·(100).

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):7.85-8.04(m,4H,ArH).

5-(3-甲氧基苄基)-1,3,4-噁二唑-2(3H)-硫酮：^[14]

如方法D所述合成化合物，(产率：86.4％)。

Mp＝146-148℃.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):3.52(s,2H,CH₂),3.81(s,3H,CH₃),6.84-6.93(m,3H,ArH),7.27(t,J＝7.84,1H,ArH),8.30(s,1H,NH).

5-(叔丁基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇：^[15]

如方法D所述合成化合物，(产率：76.0％)。

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):1.30(s,9H,CH₃).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):26.9(3C)(三级C)；32.1,169.8,177.8(四级C).

5-(2,4-二氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇

如方法A所述合成化合物，(产率：85.2％)。^[25]

Mp＝169-171℃.

IR(KBr):3015cm^-1,2887cm^-1,2731cm^-1,2558cm^-1.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):7.65-7.67(m,1H,ArH),7.92-7.94(m,2H,ArH),14.92(brs,1H).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):128.2,130.8,132.0(三级C)；120.4,132.6,137.3,157.7,177.3(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝246[M]^+·(86).

5-(呋喃-2-基)-1,3,4-噁二唑-2-硫醇：

如方法A所述合成化合物并从甲醇重结晶；白色固体(产率：36％)。^[23]

Mp＝172℃.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):d(ppm)＝6.80(dd,1H；J＝1.78/3.60Hz,ArH),7.35(dd,1H,J＝0.77/3.61Hz,ArH),8.05(dd,1H,J＝0.77/1.78Hz,ArH),14.8(s,1H,SH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):112.6,115.0,147.2(三级C),137.5,153.5,176.7(四级C).

6-芳基-4-芳基硫代噻吩并[3,2-d]嘧啶衍生物的合成

方法E：

将适当的硫醇或硫酮(0.400mmol)溶解在添加了N,N-二异丙基甲胺碱(0.694g，0.602mmol，0.0920mL)的正丁醇(10mL)中。添加噻吩并嘧啶组分(0.400mmol)之后，悬浮液在100℃下加热6小时。产物在蒸发溶剂并从甲苯中重结晶之后获得。

方法F：

将适当的硫醇(0.500mmol)悬浮在添加了碳酸钾(0.0829g，0.600mmol)的乙腈(10mL)中。添加噻吩并嘧啶组分(0.500mmol)之后，悬浮液在90℃下加热12小时。产物在蒸发溶剂并从甲苯中重结晶之后获得。

方法G：

将适当的硫醇(0.400mmol)溶解在添加了N,N-二异丙基乙胺碱(0.103g，0.800mmol，0.136mL)的正丁醇(10mL)中。添加噻吩并嘧啶组分(0.400mmol)之后，悬浮液在100℃下加热6小时。产物在蒸发溶剂并从甲苯中重结晶之后获得。

方法H：

将适当的噻吩并嘧啶(0.138g，0.500mmol)组分溶解在添加了氢氧化钠(0.0200g，0.500mmol)的乙醇(5mL)中。悬浮液在100℃下加热6小时。产物在蒸发溶剂并从甲苯中重结晶之后获得。

方法I：

将适当的硫醇(0.360mmol)溶解在添加了三乙胺碱(0.0506g，0.500mmol，0.0690mL)的正丁醇(5.00mL)中。添加噻吩并[3,2-d]嘧啶组分(0.3600mmol)之后，悬浮液在100℃下加热20小时。蒸发溶剂之后，产物通过从乙醇中重结晶而获得。

方法J：

在薄壁密封的微波容器中，将噻吩并[3,2-d]嘧啶组分(0.500mmol)以及适当的硫醇(1.00mmol)溶解在添加了三乙胺(1.00mmol，0.101g)的N,N-二甲基甲酰胺(2.00mL)中。反应混合物在合成微波中120℃、100W、斜坡时间5min、最大压强150Psi下加热20分钟。当添加冰冷却的水(2.00mL)时，目标化合物沉淀并滤出，用水洗涤，并从正丁醇中回收残渣。

方法K：

将适当的1,3,4-噁二唑-2-硫醇(0.350mmol)溶解在添加了N,N-二异丙基乙胺碱(0.350mmol)的正丁醇(10mL)中。添加6-氯-8-苯基-9H-嘌呤(0.350mmol)之后，悬浮液在100℃下加热4小时。冷却至室温之后，滤出所获得的固体，用水洗涤，并从正丁醇中重结晶。

方法L：

将适当的1,3,4-噁二唑-2-硫醇衍生物(0.800mmol)和6-氯-8-苯基-9H-嘌呤(0.400mmol)溶解在添加了N,N-二异丙基乙胺(0.800mmol)的DMF(1.00mL)中。反应混合物在合成微波中120℃、100W、斜坡时间5min、最大压强150Psi下加热20分钟。当添加冰冷却的水(2.00mL)时，目标化合物沉淀并滤出，用水洗涤，并从乙醇中回收残渣。

2-{[6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-5-苯基-1,3,4-噁二唑(8a)：

如方法G所述合成化合物8a；浅黄色粉末(产率：86.0％)。

Mp＝223℃.

IR(KBr):3086cm^-1,3057cm^-1,3043cm^-1(C-H，芳香).

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz):7.17-7.23(m,2H,ArH),7.51-7.61(m,3H,ArH),7.67(s,1H,ArH),7.73-7.75(m,2H,ArH),8.10-8.12(m,2H,ArH),8.91(s,H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz):116.6,116.8,119.7,127.3(2C),129.0(2C),129.2(2C),132.5,154.6(三级C)；123.4,128.6,153.1,156.2,157.5,161.6,162.9,165.4,168.6(四级C).

对C₂₀H₁₁FN₄OS₂的分析计算:C,59.10；H,2.73；N,13.78.

实测:C,58.88；H,2.40；N,13.45.

MS(EI):m/z(％)＝406[M]^+·(4).

HPLC:99.3％,在254nm；99.4％,在280nm；t_MS＝5.47min,t_M(DMSO)＝1.05min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:260nm和317nm.

2-{[6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-5-(吡啶-4-基)-1,3,4-噁二唑(8b)：

如方法G所述合成化合物8b；浅黄色粉末(产率：85.0％)。

Mp＝232℃.

IR(KBr):3428cm^-1,3060cm^-1(C-H，芳香).

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):7.39-7.45(m,2H,ArH),8.0-8.01(m,2H,ArH),8.05-8.09(m,2H,ArH),8.22(s,1H,ArH),8.86-8.88(m,2H,ArH),8.98(s,1H,ArH).

MS(EI):m/z(％)＝407[M]^+·(7).

HRMS(EI):m/z[M]^+·计算407.03053，实测407.03059。

HPLC:96.8％,在254nm；95.8％,在280nm；t_MS＝3.63min,t_M(DMSO)＝1.06min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:252nm和318nm。

1-{5-[(6-{4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]-1,3,4-噁二唑-2-基}-N,N-二甲基甲胺(8c)：

如方法G所述合成化合物8c；浅黄色粉末(产率：65.0％)。

Mp＝170-172℃.

IR(KBr):3055cm^-1,3075cm^-1(C-H，芳香)；2830cm^-1,2776cm^-1(CH₂N(CH₃)₂)).¹H-NMR(CDCl₃,400MHz):2.40(s,6H,CH₃),3.89(s,2H,CH₂),7.18-7.23(m,2H,ArH),7.66(s,1H,ArH),7.72-7.78(m,2H,ArH),8.87(s,H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz):45.0(一级C)；53.1(二级C)；116.7(2C),119.6,129.0(2C),154.5(三级C)；128.5,128.7,153.0,157.3,161.6,163.3,165.0,168.0(四级C).

对C₁₇H₁₄FN₅OS的分析计算：C,52.70；H,3.64；N,18.08。

实测：C,52.63；H,3.45；N,17.83。

MS(EI):m/z(％)＝386[M]^+·(1),344(100).

HPLC:95.1％,在254nm；96.4％,在280nm；t_MS＝2.57min(ACN/缓冲；40:60)λ_max:243nm和321nm.

4-{[5-({6-[4-氟苯基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基}硫醇)-1,3,4-噁二唑-2-基]甲基}-吗啉(8d)：

如方法G所述合成化合物8d；浅黄色粉末(产率：70.0％)。

Mp＝170-172℃.

IR(KBr):3058cm^-1,2967cm^-1(C-H,芳香)；2854cm^-1,2932cm^-1(CH₂N(CH₂)₂)).¹H-NMR(丙酮-d₆,400MHz):2.56-2.58(m,4H,CH₂),3.59-3.61(m,4H,CH₂),3.96(s,2H,CH₂),7.34-7.40(m,2H,ArH),7.97(s,1H,ArH),8.02-8.06(m,2H,ArH),8.89(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(丙酮-d₆,100MHz):52.7,53.6(2C),67.3(2C)(二级C)；117.4(2C),121.0,130.2(2C),155.4(三级C)；129.1,153.7,157.7,158.3,162.9,164.2,165.8,168.8(四级C).

HRMS(EI):m/z[M-C₄H₇NO]^+·计算344.01963,实测344.01989.

HPLC:97.8％,在254nm；97.3％,在280nm；t_MS＝5.04min(ACN/缓冲；50:50)；λ_max:248nm和318nm.

2-{[6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-5-[4-(三氟甲基)-苯基]-1,3,4-噁二唑(8e)：

如方法E所述合成化合物8e；浅黄色粉末(产率：85.0％)。

Mp＝233-235℃.

IR(KBr):3098cm^-1(C-H,芳香).

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz):7.20-7.23(m,2H,ArH),7.68(s,1H,ArH),7.75-7.78(m,2H,ArH),7.80-7.82(m,2H,ArH),8.24-8.25(m,2H,ArH),8.90(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz):116.6(2C),119.7,126.3(2C),127.6(2C),129.0(2C),154.7(三级C)；128.5,134.0,134.2,153.2,157.0,157.2,161.7,163.3,165.0,167.4(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝474[M]^+·(7).

HRMS(EI):m/z[Μ]^+·计算474.02267,实测474.02226.

HPLC:98.2％,在254nm；98.8％,在280nm；t_MS＝7.22min,t_M(DMSO)＝1.04min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:256nm和318nm.

2-{[6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-5-(3-甲氧基苄基)-1,3,4-噁二唑(8f)：

化合物8f按方法E中的描述合成；浅棕色粉末(65.0％)。

Mp＝166-168℃.

IR(KBr):3077cm^-1,3005cm^-1(C-H,芳香)；2942cm^-1(C-H,脂肪).

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz):3.77(s,3H,CH₃),4.28(s,2H,CH₂),6.79-6.90(m,3H,ArH),7.17-7.21(m,2H,ArH),干扰7.20(m,1H,ArH),7.64(s,1H,ArH),7.69-7.73(m,2H,ArH),8.88(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz):55.2(一级C)；32.1(二级C)；113.0,114.6,116.5,116.7,119.6,121.1,128.9,129.0,129.9,154.5(三级C)；128.5,128.7,134.6,153.0,157.0,157.4,160.0,161.6,169.5(四级C).

HRMS(EI):m/z[M]^+·计算449.05367,实测449.05481.

HPLC:96.8％,在254nm；98.9％,在280nm；t_MS＝6.96min,t_M(DMSO)＝1.02min(ACN/H₂O；60:40)；λ_max:246nm和318nm.

2-(叔丁基)-5-{[6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-1,3,4-噁二唑(8g)：

如方法E所述合成化合物8g；浅黄色粉末(产率：71.0％)。

Mp＝197-199℃.

IR(KBr):3055cm^-1(C-H,芳香)；2976cm^-1,2935cm^-1(C-H,脂肪).

¹H-NMR(DMSO-d₆,600MHz):1.40(s,9H,CH₃),4.28(s,2H,CH₂),7.41-7.45(m,2H,ArH),8.02-8.05(m,2H,ArH),8.20(s,1H,ArH),8.97(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,150.9MHz):27.5(一级C)；116.5,116.6,120.2,129.2,129.3,154.4(三级C)；32.4,127.5,128.1,152.2,155.7,157.3,161.4,176.8(四级C).

对C₁₈H₁₅FN₄OS₂的分析计算:C,55.94；H,3.91；N,14.50.

实测:C,55.95；H,3.81；N,14.34.

MS(EI):m/z(％)＝386[M]^+·(3).

HPLC:96.2％,在254nm；95.6％,在280nm；t_MS＝4.77min,t_M(DMSO)＝1.05min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:247nm和318nm.

6-(4-氟苯基)-4-{[4-(三氟甲基)苯基]硫醇}噻吩并[3,2-d]嘧啶(8h)：

如方法F所述合成化合物8h；黄色粉末(产率：80.0％)。

Mp＝172-175℃.

IR(KBr):3048cm^-1(C-H,芳香).

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):7.38-7.44(m,2H,ArH),7.88-7.95(m,4H,ArH),8.01-8.06(m,2H,ArH),8.14(s,1H,ArH),8.90(s,H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):116.5(2C),120.2,126.2(2C),129.1(2C),135.7(2C),154.4(三级C)；123.0,124.7,127.3,128.4,132.0,151.1,160.5,162.4,164.1(四级C).

对C₁₉H₁₀F₄N₂S₂的分析计算:C,56.15；H,2.48；N,6.89.

实测:C,56.45；H,2.44；N,6.73.

MS(EI):m/z(％)＝405[Μ-Η]^+·(100).

HPLC:98.3％,在254nm；96.0％,在280nm；t_MS＝7.98min,t_M(DMSO)＝1.04min(ACN/H₂O；75:25)；λ_max:257nm和318nm.

4-[(1H-咪唑-2-基)硫醇]-6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶(8i)：

如方法F所述合成化合物8i；黄色粉末(产率：80.0％)。

Mp＝204-206℃.

IR(KBr):3108cm^-1(C-H,芳香)；2914cm^-1(C-H,脂肪).

¹H-NMR(DMSO-d₆,600MHz):6.74(d,J＝1.7,1H,ArH),7.10(d,J＝1.8,1H,ArH),7.43-7.35(m,2H,ArH),8.03-7.93(m,有1H(s),3H,ArH的干扰),9.02(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,150.9MHz):116.3(2C),117.4,118.4,128.9(2C),153.8(三级C)；125.0,152.5153.8,160.8,162.2,163.2,163.9(四级C).

对C¹⁵H₉FN₄S₂的分析计算:C,54.86；H,2.76；N,17.06.

实测:C,54.77；H,2.70；N,16.96.

MS(EI):m/z(％)＝328[M]^+·(100).

HPLC:98.8％,在254nm；98.6％,在280nm；t_MS＝9.73min,t_M(DMSO)＝1.02min(ACN/H₂O；30:70)；λ_max:259nm和316nm.

6-(4-氟苯基)-4-(吡啶-2-基硫醇)噻吩并[3,2-d]嘧啶(8j)：

如方法E所述合成化合物8j；(产率：86.4％)。

Mp＝172-174℃.

IR(KBr):3053cm^-1(C-H,芳香).

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz):7.16-7.21(m,2H,ArH),7.32-7.35(ddd,J＝2.13,4.86,6.82,1H,ArH),7.63(s,1H,ArH),7.71-7.80(m,有2H(m),4H,ArH的干扰),8.62-8.67(d,J＝4.6,1H,ArH),8.93(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃,100MHz):116.4,116.6,119.6,128.8,128.9,29.4,137.4,150.7,154.5(三级C)；128.9,129.0,152.1,152.2,160.8,161.0,165.1(四级C).

对C₁₇H₁₀FN₃S₂的:2.38.

实测:C,60.03；H,2.90；N,12.02.

MS(EI):m/z(％)＝338[M]^+·(100).

HPLC:99.1％,在254nm；96.2％,在280nm；t_MS＝4.19min,t_M(DMSO)＝1.05min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:256nm和321nm.

3-{[5-({6-[4-氟苯基]噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基}硫醇)-1,3,4-噁二唑-2-基]甲基}-四氢噻吩-1,1-二氧化物(8k)：

如方法E所述合成化合物8k；黄色粉末(产率：82.0％)。

Mp＝180-182℃

IR(KBr):3050cm^-1,3003cm^-1(C-H,芳香)；2942cm^-1(C-H,脂肪).

¹H-NMR(DMSO-d₆,600MHz):1.87-1.91(m,1H,脂肪H),2.32-2.38(m,1H,脂肪H),2.80-2.87(m,1H,脂肪H),2.90-2.95(dd,J＝10.95,12.60,1H,脂肪H),3.08-3.13(m,1H,脂肪H),3.24-3.28(m,3H,脂肪H),3.32(s,1H,脂肪H),7.40-7.44(m,2H,ArH),8.04-8.08(m,2H,ArH),8.20(s,1H,ArH),8.95(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃,150.9MHz):28.2,29.1,51.8,55.5(二级C)；34.2,117.1,117.2,120.7,129.9(2C),155.0(三级C)；128.2,128.7,152.9,156.7,157.6,161.9,163.1,164.8,169.2(四级C).

对C₁₉H₁₅FN₄O₃S₃:C,49.34；H,3.27；N,12.11.

实测:C,49.67；H,2.99；N,11.99.

MS(EI):m/z(％)＝462[Μ]^+·(10).

HPLC:98.7％,在254nm；97.6％,在280nm；t_MS＝4.10min,t_M(DMSO)＝1.02min(ACN/H₂O；50:50)；λ_max:244nm和315nm.

2-苄基-5-{[6-(4-氟苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-1,3,4-噁二唑(8l)：

如方法E所述合成化合物8l；黄色粉末(产率：86.0％)。

Mp＝165-167℃.

IR(KBr):3054cm^-1(C-H,芳香).

¹H-NMR(CDCl₃,400MHz):4.31(s,2H,脂肪H),7.17-7.22(m,2H,ArH),7.29-7.33(m,5H,ArH),7.63(s,1H,ArH),7.68-7.73(m,2H,ArH),8.86(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):30.9(二级C)；116.5,116.7,120.2,127.3,128.8(2C),128.9(2C),129.3,129.4,154.5(三级C)；127.8,128.2,134.0,152.4,156.4,157.2,161.5,162.3,169.8(四级C).

对C₂₁H₁₃FN₄OS₂的分析计算:C,59.98；H,3.12；N,13.32.

实测:C,59.91；H,2.97；N,13.21.

MS(EI):m/z(％)＝420[Μ]^+·(7).

HPLC:99.0％,在254nm；98.4％,在280nm；t_MS＝7.58min,t_M(DMSO)＝1.03min(ACN/H₂O；60:40)；λ_max:246nm和318nm.

2-{[6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-5-苯基-1,3,4-噁二唑(8m)：

如方法I所述合成化合物8m；黄色针状(产率：57％)。

Mp＝213-215℃.

IR(KBr):3059cm^-1,3003cm^-1(C-H,芳香)；2956cm^-1,2848cm^-1(C-H,脂肪).¹H-NMR(CDCl₃-d₁600MHz):3.89(s,3H,CH₃),6.99-7.03(m,2H,ArH),7.51-7.56(m,2H,ArH),7.56-7.60(m,1H,ArH),7.61(s,1H,ArH),7.69-7.73(m,2H,ArH),8.09-8.12(m,2H,ArH),8.87(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃-d₁,150MHz):55.5(一级C)；114.8(2C),118.1,127.3(2C),128.5(2C),129.2(2C),132.4,154.6(三级C)；123.3,124.8,128.5,154.5,156.5,156.8,161.6,161.9,168.5(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝418[Μ]^+·(14),315(100).

HRMS(EI):m/z[Μ]^+·计算418.05527,实测418.05498.

HPLC:96.1％,在254nm；96.5％,在280nm；t_MS＝5.53min,t_M(DMSO)＝1.02min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:251nm和340nm.

HPLC:93.5％,在254nm；t_MS＝14.54min,t_M(DMSO)＝1.12min(梯度,方法1).

2-(4-氯苯基)-5-{[6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-1,3,4-噁二唑(8n)：

如方法J所述合成化合物8n；黄色粉末(产率：88.5％)。

Mp＝221-223℃.

IR(KBr):3074cm^-1,3052cm^-1(C-H,芳香),2939cm^-1,2844cm^-1(C-H,脂肪).¹H-NMR(CDCl₃-d₁,600MHz):3.89(s,3H,CH3),7.01-7.03(m,2H,ArH),7.51-7.52(m,2H,ArH),7.61(m,1H,ArH),7.71-7.72(m,2H,ArH),8.04-8.05(m,2H,ArH),8.87(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃-d₁,150MHz):55.5(一级C)；114.8(2C),118.1,128.4(2C),128.5(2C),129.6(2C),154.5(三级C)；121.8,124.8,128.5,138.8,154.5,156.6,156.7,161.6,161.9,167.7(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝452[M]^+·(100).

对C₂₁H₁₃ClN₄O₂S₂的分析计算:C,55.69；H,2.89；N,12.37.实测:C,55.81；H,2.84；N,12.13.

HPLC:97.0％,在254nm；97.1％,在280nm；t_MS＝7.39min,t_M(DMSO)＝1.04min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:268nm和341nm.

HPLC:96.5％,在254nm；t_MS＝15.43min,t_M(DMSO)＝1.12min(梯度,方法1).

2-{[6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,3,4-噁二唑(8o)

如方法J所述合成化合物8o；黄色粉末(产率：61.5％)。

Mp＝227-228℃.

IR(KBr):3074cm^-1,3053cm^-1(C-H,芳香),2941cm^-1,2842cm^-1(C-H,脂肪).

¹H-NMR(CDCl₃-d₁,600MHz):3.89(s,3H,CH₃),7.01-7.03(m,2H,ArH),7.62(s,1H,ArH),7.71-7.73(m,2H,ArH),7.80-7.81(m,2H,ArH),8.23-8.25(m,2H,ArH),8.86(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃-d₁,150MHz):55.5(一级C)；114.8(2C),118.1,126.2(2C),127.6(2C),128.4(2C),154.7(三级C)；122.5,124.3,125.0,126.5,134.0,154.6,156.4,157.4,161.5,162.0,167.2(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝486[M]^+·(100).

对C₂₂H₁₃F₃N₄O₂S₂的分析计算:C,54.31；H,2.61；N,11.52.实测:C,54.19；H,2.65；N,11.23.

HPLC:97.7％,在254nm；97.4％,在280nm；t_MS＝4.28min,t_M(DMSO)＝1.00min(ACN/H₂O；80:20)；λ_max:248nm和340nm.

HPLC:96.5％,在254nm；t_MS＝15.49min,t_M(DMSO)＝1.00min(梯度,方法1).

2-{[6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-5-(邻甲苯基)-1,3,4-噁二唑(8p)

如方法J所述合成化合物8p；泛绿粉末(产率：76.4％)。

Mp＝184-186℃.

IR(KBr):3075cm^-1,3046cm^-1(C-H,芳香),2927cm^-1,2841cm^-1(C-H,脂肪).

¹H-NMR(CDC-c,,600MHz):2.72(s,3H,CH3),3.89(s,3H,CH3),7.00-7.02(m,2H,ArH),7.33-7.37(m,2H,ArH),7.44-7.47(m,1H,ArH),7.61(s,1H,ArH),7.70-7.72(m,2H,ArH),7.96-7.98(m,1H,ArH),8.88(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃-d₁,150MHz):22.0,55.5(一级C)；114.8(2C),118.1,126.3,128.4(2C),129.3,131.8,131.9,154.4(三级C)；122.5,124.8,128.5,138.8,154.5,156.2,156.9,161.6,161.9,168.9(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝432[Μ]^+·(100).

对C₂₂H₁₆N₄O₂S₂的分析计算:C,61.09；H,3.73；N,12.95.实测:C,61.33；H,3.72；N,12.71.

HPLC:97.3％,在254nm；96.7％,在280nm；t_MS＝7.68min,t_M(DMSO)＝1.10min(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:247nm和339nm.

HPLC:97.7％,在254nm；t_MS＝15.48min,t_M(DMSO)＝1.08min(梯度,方法1).

2-(2,4-二氯苯基)-5-{[6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-4-基]硫醇}-1,3,4-噁二唑(8q)

如方法J所述合成化合物8q；黄色粉末(产率：55.7％)。

Mp＝213-215℃.

IR(KBr):3069cm^-1,3052cm^-1,3000cm^-1(C-H,芳香),2963cm^-1,2835cm^-1(C-H,脂肪).

¹H-NMR(CDCl₃-d₁,600MHz):3.89(s,3H,CH₃),7.01-7.03(m,2H,ArH),7.41-7.43(dd,J＝2.00,8.40,1H,ArH),7.59(d,J＝2.03,1H,ArH),7.61(s,1H,ArH),7.70-7.72(m,2H,ArH),7.99-8.01(d,J＝8.53,1H,ArH),8.88(s,1H,ArH).

¹³C-NMR(CDCl₃-d₁,150MHz):55.5(一级C)；114.8(2C),118.1,127.7,128.5(2C),131.3,132.1,154.5(三级C)；121.2,124.8,128.7,134.2,138.8,154.6,156.4,157.5,161.7,162.0,166.1(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝486[M]^+·(7),315(100).

对C₂₁H₁₂Cl₂N₄O₂S₂的分析计算:C,51.75；H,2.48；N,11.50.实测:C,51.86；H,2.47；N,11.28.

HPLC:97.7％,在254nm；97.9％,在280nm；t_MS＝5.37min,(ACN/H₂O；80:20)；λ_max:250nm和340nm.

HPLC:98.4％,在254nm；t_MS＝7.64min,t_M(DMSO)＝1.09min(梯度,方法1).

4-{[5-(4-氯苯基)-1,3,4-噁二唑-2-基]硫醇}-6-(4-甲氧基苯基)噻吩并[3,2-d]嘧啶-2-胺(8r)

如方法J所述合成化合物8r；米色粉末(产率：48.4％)。

Mp＝206-208℃.

IR(KBr):3412cm^-1(NH₂)；3175cm^-1(C-H,芳香).

¹H-NMR(DMSO-d₆,600MHz):3.83(s,3H,CH₃),6.79(s,2′H，NH₂),7.05-7.08(m,2H,ArH),7.57(s,1H,ArH),7.69-7.71(m,2H,ArH),7.79-7.81(m,2H,ArH),8.06-8.08(m,2H,ArH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,150MHz):55.3(一级C)；114.6(2C),117.2,127.9(2C),128.6(2C),129.7(2C)(三级C)；116.1,121.6,124.5,137.3,152.7,155.9,157.0,160.8,161.3,164.2,166.7(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝467[Μ]^+·(9),257(100).

HRMS(EI):m/z[M]^+·计算467.02720,实测467.02695.

HPLC:99.6％,在254nm；99.7％,在280nm；t_MS＝6.27min,(ACN/H₂O；70:30)；λ_max:260nm和333nm.

HPLC:94.9％,在254nm；t_MS＝15.55min,t_M(DMSO)＝1.02min(梯度,方法1).

2-[(8-苯基-9H-嘌呤-6-基)硫醇]-5-(吡啶-4-基)-1,3,4-噁二唑(8s)

如方法K所述合成化合物8s；白色固体(产率：41％)。

Mp＝250-251℃.

IR(KBr):3434cm^-1(NH).

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):d(ppm)＝7.43(m,2H,ArH),7.52(t,1H,J＝7.46Hz,ArH),7.98(d,2H,J＝7.49Hz,ArH),8.05(m,2H,ArH),8.71(s,1H,ArH),8.87(m,2H,ArH),14.26(m,1H,NH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):d(ppm)＝120.2(2C),126.8(2C),128.8(2C),131.4,151.1(2C),151.4(三级C),128.0,129.9,130.8,152.6,153.0,153.2,158.2,65.8(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝373[M]^+·(10),269(100),195(22),78(23).

HRMS(EI):m/z[M]^+·计算373.07403,实测373.07403.

HPLC:99.4％,在254nm以及97.9％,在280nm(ACN/H₂O；40:60),t_MS＝3.8min,t_M＝1.05min,λ_max＝242和310nm.

HPLC:99.4％,在254nm；t_MS＝9.05min,t_M＝1.25min(梯度,方法2)

2-苄基-5-[(8-苯基-9H-嘌呤-6-基)硫醇]-1,3,4-噁二唑(8t)

如方法L所述合成化合物8t；白色固体(产率：29％)。

Mp＝198-199℃.

IR(KBr):3434cm^-1(NH).

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):d(ppm)＝4.41(s,2H,CH2),7.21-7.35(m,5H,ArH),7.59(m,3H,ArH),8.14(m,2H,ArH),8.66(s,1H,ArH),14.26(s,1H,NH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):d(ppm)＝30.1(CH2),127.1,127.11(2C),128.5(2C),128.7(2C),129.1(2C),131.4,151.3(三级C),128.2,131.1,133.9,152.2,152.6,153.4,156.8,169.2.

MS(EI):m/z(％)＝386[M]^+·(18),269(100),195(16),91(57).

HRMS(EI):m/z[M]^+·计算386.09443,实测386.09466.

HPLC:99.6％,在254nm以及99.0％,在280nm(ACN/H₂O；50:50),t_MS＝4.02min,t_M＝1.05min,λ_max:240nm和310nm.

HPLC:98.2％,在254nm；t_MS＝0.55min,t_M＝1.25min(梯度,方法2).

2-(呋喃-2-基)-5-[(8-苯基-9H-嘌呤-6-基)硫醇]-1,3,4-噁二唑(8u)

如方法L所述合成化合物8u；黄色固体(产率：36％)。

Mp＝224-225℃.

IR(KBr):3426cm^-1.

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):d(ppm)＝6.84(m,1H,J＝1.79Hz,ArH),7.45-7.57(m,4H,ArH),8.03(m,2H,ArH),8.14(m,1H,J＝1.81Hz,ArH),8.70(s,H,ArH),14.26(s,1H,NH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):d(ppm)＝112.8,115.7,126.9(2C)128.9(2C),131.5,147.6151.4(三级C),128.1,130.8,138.2152.8,153.2,156.0160.1(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝362[M]^+·(9),269(100),195(16).

HRMS(EI):m/z[M]^+·计算362.05805,实测362.05899.

HPLC:98.5％,在254nm以及98.9％,在280nm(ACN/H₂O；40:60),t_MS＝5.70min,t_M＝1.05min,λ_max:241nm,284nm和309nm.

HPLC:98.4％,在254nm；t_MS＝9.70min,t_M＝1.25min(梯度,方法2).

2-[(8-苯基-9H-嘌呤-6-基)硫醇]-5-[4-(三氟甲基)苯基]-1,3,4-噁二唑(8v)

如方法L所述合成化合物8v；黄色固体(产率：49％)。

Mp＝256-257℃.

IR(KBr):3466cm^-1(NH).

¹H-NMR(DMSO-d₆,400MHz):d(ppm)＝7.42(m,2H,ArH),7.52(m,1H,ArH),7.99(m,4H,ArH),8.32(d,4H,J＝8.02,ArH),8.71(s,1H,ArH),14.26(s,1H,NH).

¹³C-NMR(DMSO-d₆,100MHz):d(ppm)＝126.5,126.8,127.6(2C),128.8(2C)131.4,151.4(三级C),122.6,124.4,128.1,130.9,131.9,132.1,152.7,152.9153.2,157.7,166.2(四级C).

MS(EI):m/z(％)＝440[M]^+·(9),269(100),145(30).

HRMS(EI):m/z[M]^+·计算440.06617,实测440.06672.

HPLC:99.5％,在254nm以及99.5％,在280nm(ACN/H₂O；60:40),t_MS＝4.47mint_M＝1.05min,λ_max:244nm和310nm.

HPLC:98.7％,在254nm；t_MS＝12.55min,t_M＝1.25min(梯度,方法2).

蛋白激酶活性测定

硫醚衍生物8a-v和9a-i的效果在重组人蛋白激酶上试验。在Sf9昆虫细胞中借助于杆状病毒表达***将所有蛋白激酶表达为人重组GST-融合蛋白或His-标签蛋白。蛋白激酶通过使用GSH-琼脂糖或Ni-NTH-琼脂糖的亲和色谱来纯化。各自的纯度和鉴定通过SDS-PAGE/银染以及通过与特定抗体的免疫印迹分析来检查。

专有的蛋白激酶测定(proprietary protein kinase assay,Activity Assay)用来测量激酶活性。所有激酶测定在96孔FlashPlates^TM中以50μl反应体积进行。所有酶的测定含有60mM HEPES-NaOH,pH 7.5，3mMMgCl₂，3mM MnCl₂，3μΜ原钒酸钠,1.2mM DTT，50μg/ml PEG₂₀₀₀₀和1μΜ[γ-³³Ρ]-ΑΤΡ(约5×10⁵cpm每孔)。

反应混合物在30℃下保温80分钟。反应用50μl 2％(v/v)H₃PO₄停止，抽吸平板，并用200μl 0.9％(w/v)NaCl洗涤两次。³³Pi的掺入用微板闪烁计数器来确定。所有测定用BeckmanCoulter/Sagian自动***进行。

蛋白激酶活性测定的结果示于表1。

硫醚衍生物8a-v和9a-i显示优异的IC₅₀值。特别地，化合物9a、9c、9h、8a、8e、8f、8h、8l-r和8v在选自ALK、AXL、FAK、KIT wt、IGF1-R、PIM1、PRK1、SRC和VEGF-R2的至少一种激酶上有利地显示低于1μM的IC₅₀值。此外，化合物9a-c、9e-h,8a-h和8j-r以及8v通过以低于10μM的IC₅₀值抑制来自至少两种不同的肿瘤进展分子机制的至少两种激酶而有利地表现有益的活性谱。

由通式(3)涵盖的本发明另外的化合物是：

参考文献：

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Claims (17)

1.一种根据通式(1)的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐：

其中X选自N和CH；

Y选自NH、S和O；

Z选自N和CH；

R¹选自取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基；

R²选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基；

n选自0、1和2；和

Q选自H以及取代或未取代的氨基。

2.根据权利要求1所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中Y是S。

3.根据权利要求1或2所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中X是CH并且Z是N。

4.根据权利要求1至3任一项所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中R¹是下列残基：

其中R³选自F、Cl、Br、I、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基以及羟基。

5.根据权利要求4所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中R³是F。

6.根据权利要求1至5任一项所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中R²是下列残基

其中R⁴选自取代或未取代的烷基、具有一个或多个杂原子的取代或未取代的环烷基、取代或未取代的芳基以及取代或未取代的杂芳基。

7.根据权利要求1至6任一项所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述蛋白激酶抑制剂是通式(3)的硫醚衍生物：

其中R³和R⁴与上文所定义的相同。

8.根据权利要求1所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述蛋白激酶抑制剂是通式(2a)的化合物或其互变异构化合物(2a*)：

其中R¹和R²与上文所定义的相同。

9.根据权利要求1或8所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述蛋白激酶抑制剂是通式(3a)的硫醚衍生物或其互变异构化合物：

其中R⁴与上文所定义的相同。

10.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至9任一项所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，以及任选地一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂和/或载体。

11.根据权利要求1至9任一项所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其用于医药中。

12.根据权利要求1至9任一项所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其用于治疗、缓解和/或预防选自细胞增殖紊乱、心血管病症、免疫性疾病、炎症性疾病、神经免疫性疾病、神经退行性疾病、自体免疫疾病的疾病。

13.根据权利要求12所述用途的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述疾病是癌症。

14.根据权利要求13所述用途的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述癌症是乳腺、膀胱、结直肠、肺、***、胰腺和肾癌中的实体瘤，或白血病或淋巴瘤。

15.根据权利要求12至14任一项所述的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中通过抑制一种或多种激酶来治愈、缓解和/或预防所述疾病。

16.根据权利要求15所述用途的蛋白激酶抑制剂或其药学上可接受的盐，其中所述激酶选自ALK、AXL和FAK的一种或多种。

17.一种根据通式(4)的蛋白激酶抑制剂的生产方法：

其中所述方法包括在碱的存在下将通式(5)的化合物与R²-SH反应,

其中R¹和R²与上文所定义的相同。