CN104818317A - 一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒 - Google Patents
一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104818317A CN104818317A CN201410213583.6A CN201410213583A CN104818317A CN 104818317 A CN104818317 A CN 104818317A CN 201410213583 A CN201410213583 A CN 201410213583A CN 104818317 A CN104818317 A CN 104818317A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- detection
- sample
- value
- kras
- gene
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一次性检测肠癌多重突变基因的引物、探针、检测体系和试剂盒,其中包括用于检测肠癌KRAS、NRAS、PIK3CA和BRAF基因突变的引物、探针及其分配方式。本发明的检测试剂盒采用12联PCR反应条设计,每一个12联PCR条检测一个样品,12联条的1-11管内装有相应的KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因37种突变检测和内控试剂,突变由FAM信号指示,内控由HEX(或VIC)信号指示;12号管作为DNA提取质量的外控检测管,亦由FAM信号指示。本发明可以实现一次性检测DNA的KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因37种突变,大大缩短了检测的时间,灵敏度高,特异性强,操作简便快捷,可为临床医生对肠癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体地涉及肺癌多重基因突变的引物、探针、及检测试剂盒和体系。
背景技术
大肠癌是在世界范围内发病率第三的恶性肿瘤,死亡率高居第二,大约每年新增一百二十万患者。在中国,所有恶性肿瘤中,大肠癌己经一跃成为死亡率高达第三位的恶性肿瘤。大肠癌治疗是以手术为主的积极综合治疗,手术治疗可以切除原发灶,解除肿瘤造成的梗阻症状。手术后化疗近年来发展迅速,辅以免疫治疗、中药治疗、基因靶向治疗、特别是靶向治疗越来越多的用于临床。大肠癌的发生是多阶段、多步骤、涉及到多种癌基因及抑癌基因激活或失活等复杂过程形成的。化疗会提高晚期大肠癌的生存期,但一部分患者会出现耐药,一旦晚期大肠癌发生耐药的不良事件,据文献报道生存期不会超过半年。
大肠癌的发生、发展是一个受多基因、多步骤调控的复杂过程,是基因突变致癌的经典模式,此过程常与细胞增殖、凋亡失控有关,涉及癌基因(主要为Ras基因)、抑癌基因(主要包括p53基因、APC基因等)、错配修复基因(MMR基因)以及一些修饰基因(如COX-2等)。
KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF都是EGFR下游的信号分子,是众多信号通路上关键的激活因子。这些基因的突变常见于多种恶性肿瘤,在大肠癌患者中的突变率分别为20~50%、1~6%、10~30%、8~15%。KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF基因突变一般会使结直肠癌患者对抗EGFR抗体类药物产生耐药。因此,对大肠癌进行KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因遗传变异的检测至关重要,然而目前临床上大多每次只能检测一个突变或一段基因的突变,检测通量低,耗时长,尚无能够同时、一次性完成对此4个基因突变进行检测的试剂盒。
因此以期待找到适合大肠癌靶向治疗将提高晚期大肠癌的预后生存期、减少耐药不良事件的发生,为大肠癌的个体化治疗提供新方案,使晚期大肠癌患者受益。基因突变的联合检测能提高肿瘤临床治疗的针对性,降低治疗费用,节省宝贵的治疗时间
本发明提供一种高灵敏度和高特异性的用于一次性检测多重大肠癌突变基因的引 物、探针、试剂盒及引物分配方式。该检测试剂盒利用DNA样本进行基因突变的检测,提供突变状态的定性评估,特异性和灵敏度高,检测结果重复性好,而且引入了荧光检测技术,克服了传统PCR产物遗留污染的问题,操作简便快捷,可辅助临床医生筛选出可受益于肿瘤靶向药物的大肠癌等癌症患者,为临床肠癌基因突变的检测提供了一种快速可靠的检测方法。该方法可以实现一次性检测DNA的KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因37种突变,大大缩短了检测的时间,为临床医生对结直肠癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于一次性检测多重肠癌突变基因的引物、探针,包括KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF等突变基因的引物、探针及分配方式,其序列如表1;
表1肠癌突变特异性引物、新型探针及分配方式
本发明的另一目的在于提供一次性检测多重肠癌突变基因的试剂盒,包括KRAS、NRAS、PIK3CA、BRAF等突变基因的特异性引物、新型探针,还包括PCR缓冲液、DNA聚合酶等。试剂盒采用12联PCR反应条设计,每一个12联PCR条检测一个样品,12联条的 1-11(12联PCR条一端为平端,另一端为梯形,平端为1号管,梯形端为12号管,见图1)管内装有相应的KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因37种突变检测和内控试剂,突变由FAM信号指示,内控由HEX(或VIC)信号指示;12号管作为DNA提取质量的外控检测管,亦由FAM信号指示,内控和外控作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控,选择的检测区域是人类PIK3CA基因相对保守的区段,约100bp,这样即便DNA有降解,外控和内控仍然能够最真实地反应KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因有效的DNA量。每个PCR反应管内均含有5~10pM环形引物、20pM特异探针、12.5μM dNTPs、175μM氯化镁、1mM硫酸铵、2.5mM氯化钾和纯化水等(详见表2和表3)。由此通过一次性对样本DNA中基因突变的检测,指导肠癌临床治疗方案制定和化疗预后。
表2试剂盒组成
表3KNPB PCR反应条的组成
本发明另一方面提供一种用于检测肠癌基因突变检测的反应体系如下:
表4肠癌基因检测位点
本发明试剂盒的使用方法包括以下步骤:
1.提取检测样本中基因组DNA,包括新鲜病理组织、石蜡包埋组织或石蜡切片、全血、血液、血浆胸腔积液等组织中的DNA。
2.配制各反应荧光PCR扩增突变基因反应体系。
3.根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果:
1)突变结果的确定:首先确定样品各个反应管各自的突变Ct值,然后确定该样品的外控Ct值。由于样品中突变百分含量各不相同,所得到的突变Ct值也各不相同。根据不同的突变Ct值,把样品检测结果分为阴性、弱阳及强阳。具体判定见表5。
a)当样品突变Ct值大于或等于阴性临界值时,则该样品为阴性或低于本试剂盒的检测下限。
b)当样品突变Ct值小于阴性临界值时,进行下列判断:
i.当某个反应管的突变Ct值小于阳性临界值时,则该样品为该反应管对应的突变阳性,即强阳。
ii.当反应管的突变Ct值大于或等于阳性临界值时,则计算该反应管的ΔCt值。若反应管的ΔCt值小于相对应的ΔCt Cut-off值,则该样品也为该反应管对应的突变阳性,即弱阳;反之则为阴性或低于本试剂盒的检测下限。
2)ΔCt值的计算:ΔCt值=突变Ct值-外控Ct值。突变Ct值是指样品突变信号(FAM 信号)对应的Ct值;外控Ct值是指样品对应的外控信号(FAM信号)的Ct值。一个样品可能同时含有2个或多个突变类型。
表5肠癌检测结果判定
本发明的有益效果是:
本发明采用了特异性引物和新型探针技术,可以特异性地检出肠癌的突变基因。此方法:(1)建立了实时PCR体系可以一次性检测人类KRAS基因第2、3和4外显子上17种热点体细胞突变、人类NRAS基因第2、3和4外显子上12种热点体细胞突变、人类PIK3CA基因20号外显子的2种热点体细胞突变和人类BRAF基因15号外显子V600的6种热点体细胞突变(见表4);可以为临床医生对结直肠癌患者选择肿瘤靶向药物治疗提供参考,并且,还建立了同一反应体系,本发明所用的引物和探针都适应该体系,都可在该同一反应体系中进行。
本发明根据所检测的多个突变位点的检测难易程度、引物之间的相互影响、竞争等多方面综合因素,将61条序列(包括引物和探针)分组,分装于12联条中,其优点在于:(1)经过分组之后,同组引物之间不会互相干扰;(2)1、2、4-8、10、11管中,设计了共用的上游或下游引物;使得识别同样多的突变位点(例如n个),所用的引物条数最少(只需n+1个,而通常需要2n个),可以节约成本。(3)采用12联条,一次性检测多个突变位点,且建立了12联管各管可以通用的PCR反应体系,各管中的引物和探针检测反应体系一致、操作一致、可以节约大量时间,避免现有技术中,不同位点的引物采用不同的反应体系,容易人为操作失误的弊端。(4)12号管作为DNA提取质量的外控检测管,亦由FAM信号指示,内控和外控作为对试剂、DNA质量以及操作本身的质控,选择的检测区域是人类PIK3CA基因相对保守的区段,约100bp,这样即便DNA有降解,外控和内控仍然能够最真实地反应KRAS/NRAS/PIK3CA/BRAF基因有效的DNA量;(5)灵敏度高,5-10拷贝的突变可以检出;(6)特异性强,10ng的野生型基因组DNA不会产生非特异性信号; (7)检测速度快,检测过程只需要90分钟即可完成;(8)采用预分装,并进行封蜡处理,可提高运输过程的安全性,同时可使试验过程操作简便。
附图说明
图1为12联PCR条示意图
图2为实施例1中各检测质粒的PCR图,其中:
2-1:KRAS-M1;2-2:KRAS-M5;2-3:KRAS-M7;2-4:KRAS-M15;2-5:KRAS-M22;2-6:NRAS-M10;2-7:NRAS-M7;2-8:NRAS-M1;2-9:NRAS-M12;2-10:PIK3CA-M1;2-11:BRAF-M1
图3为实施例1灵敏度分析试验结果PCR图,其中:
3-1:KRAS-M1;3-2:KRAS-M5;3-3:KRAS-M7;3-4:KRAS-M15;3-5:KRAS-M22;3-6:NRAS-M10;3-7:NRAS-M7;3-8:NRAS-M1;3-9:NRAS-M12;3-10:PIK3CA-M1;3-11:BRAF-M1
图4为实施例2临床样本突变检测结果阳性PCR图,其中
4-1:样本1检测结果(2#KRAS-M14);4-2:样本2检测结果(5#KRAS-M23);4-3:样本3检测结果(1#KRAS-M4;10#-PIK3CA-M2);4-4:样本3检测结果(10#PIK3CA-M2);4-5:样本4检测结果(2#KRAS-M6);4-6:样本4检测结果(10#PIK3CA-M1);
其中,图2至图4各图中,横坐标都为循环数(cycles),纵坐标都为荧光值(dR)。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
根据Cosmic数据公布的人类KRAS,NRAS,BRAF和PIK3CA为野生型基因序列,针对KRAS,NRAS,BRAF和PIK3CA的驱动性突变位点为基础,来设计特异性引物和和新型探针(见表1)。
本实施例分别以KRAS-M1、KRAS-M5、KRAS-M7、KRAS-M15、KRAS-M22、NRAS-M10、NRAS-M7、NRAS-M1、NRAS-M12、PIK3CA-M1、BRAF-M1突变为例来阐述本发明 的荧光PCR检测上述肠癌突变基因。
实验分别用含上述各突变的质粒模板,其荧光PCR检测包括以下步骤:
(一)质粒处理与提取:
各质粒的提取采用质粒提取试剂盒进行提取,具体提取操作步骤按试剂盒说明书操作。所提DNA溶于Tris-HCl中(10mmol/L,PH8.0),经紫外分光光度计检测提取质量,确定其浓度,然后用Tris-HCl(10mmol/L,PH8.0)溶液调整DNA浓度到2ng/μL作为PCR模板,取5μL进行PCR反应扩增。
(二)建立PCR扩增反应体系:
将上述所提各DNA,分别按照如下扩增体系进行PCR扩增:
实时PCR反应条件为:
第一阶段:95℃5分钟,1个循环;
第二阶段:95℃25秒,64℃20秒,72℃20秒,15个循环;
第三阶段:93℃25秒,60℃35秒,72℃20秒,31个循环;
信号收集:第三阶段60℃时收集FAM和HEX(或VIC)信号,执行实时PCR,保存文件。
(三)检测结果的判断:根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果。
1)突变结果的确定:首先确定样品各个反应管各自的突变Ct值,然后确定该样品的外控Ct值。由于样品中突变百分含量各不相同,所得到的突变Ct值也各不相同。根据不同的突变Ct值,把样品检测结果分为阴性、弱阳及强阳。具体判定见表5。
a)当样品突变Ct值大于或等于阴性临界值时,则该样品为阴性或低于本试剂盒的检测下限。
b)当样品突变Ct值小于阴性临界值时,进行下列判断:
i.当某个反应管的突变Ct值小于阳性临界值时,则该样品为该反应管对应的突变阳性,即强阳。
ii.当反应管的突变Ct值大于或等于阳性临界值时,则计算该反应管的ΔCt值。若反应管的ΔCt值小于相对应的ΔCt Cut-off值,则该样品也为该反应管对应的突变阳性,即弱阳;反之则为阴性或低于本试剂盒的检测下限。
2)ΔCt值的计算:ΔCt值=突变Ct值-外控Ct值。突变Ct值是指样品突变信号(FAM信号)对应的Ct值;外控Ct值是指样品对应的外控信号(FAM信号)的Ct值。一个样品可能同时含有2个或多个突变类型。
灵敏度分析:将突变质粒DNA连续10倍梯度稀释。每次反应加入5μL DNA。结果表明本发明的荧光PCR方法的灵敏度高,10拷贝DNA基因组即可检出。
重复性试验:每个反应分别加入突变质粒DNA1000拷贝、100拷贝,重复10次进行荧光PCR扩增,10次Ct值相差不到0.5个循环。
检测结果表明,本发明的检测体系可以一次性准确检测肠癌的多种基因突变,检测的灵敏度可达到5-10拷贝。结果见图2和图3。
实施例2
取2013年8月送我公司的经直接测序法检测确定的临床肠癌石蜡包埋组织样本4例阳性样本和16例阴性样本,对其进行一次性多重肠癌基因突变检测。
1、检测样本DNA的提取:DNA的提取可使用厦门艾德生物医药科技有限公司的FFPE样品DNA分离试剂盒,Cat NO.ADx-FF01(闽厦食药监械(准)字2013第1400068号)或QIAGEN石蜡组织DNA提取试剂盒,Cat NO.56404;按照提取试剂盒的说明进行操作。所提DNA溶于Tris-HCL中(10mmol/L,pH8.0)。经紫外分光光度计检测提取质量,确定其浓度OD260/OD280为1.8~2.0,然后用Tris-HCL(10mmol/L,pH8.0)溶液调整DNA浓度到2ng/μL作为PCR模板。将上述提取的DNA用作肠癌突变基因的荧光PCR扩增模板。
2、将上述所提各DNA,分别按照如下扩增体系进行PCR扩增:
实时PCR反应条件为:
第一阶段:95℃5分钟,1个循环;
第二阶段:95℃25秒,64℃20秒,72℃20秒,15个循环;
第三阶段:93℃25秒,60℃35秒,72℃20秒,31个循环;
信号收集:第三阶段60℃时收集FAM和HEX(或VIC)信号,执行实时PCR,保存文件。
3、检测结果的判断:根据荧光PCR扩增仪显示的Ct值判断检测结果。
1)突变结果的确定:首先确定样品各个反应管各自的突变Ct值,然后确定该样品的外控Ct值。由于样品中突变百分含量各不相同,所得到的突变Ct值也各不相同。根据不同的突变Ct值,把样品检测结果分为阴性、弱阳及强阳。具体判定见表5。
a)当样品突变Ct值大于或等于阴性临界值时,则该样品为阴性或低于本试剂盒的检测下限。
b)当样品突变Ct值小于阴性临界值时,进行下列判断:
i.当某个反应管的突变Ct值小于阳性临界值时,则该样品为该反应管对应的突变阳性,即强阳。
ii.当反应管的突变Ct值大于或等于阳性临界值时,则计算该反应管的ΔCt值。若反应管的ΔCt值小于相对应的ΔCt Cut-off值,则该样品也为该反应管对应的突变阳性,即弱阳;反之则为阴性或低于本试剂盒的检测下限。
2)ΔCt值的计算:ΔCt值=突变Ct值-外控Ct值。突变Ct值是指样品突变信号(FAM信号)对应的Ct值;外控Ct值是指样品对应的外控信号(FAM信号)的Ct值。一个样品可能同时含有2个或多个突变类型。
检测结果如表6、表7及图4-1至图4-6
表6临床样本肠癌基因检测结果
备注:+,阳性;-,阴性。
表7本发明检测结果与直接测序法比较
检测结果表明,本发明荧光PCR反应可一次性同时检测多重驱动性突变,检测方便快捷,准确性高,可满足肠癌基因突变的快速诊断。该荧光PCR方法和传统测序方法结果的符合率为100%,荧光PCR灵敏度也高于传统测序方法。
Claims (3)
1.用于检测肠癌的引物和探针,包括如下61条序列,且所述的序列用12联管分装分组如下:
2.一种用于检测肠癌基因突变检测的反应体系,包括:
3.一种试剂盒,包括权利要求1所述的序列。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410213583.6A CN104818317B (zh) | 2014-05-20 | 2014-05-20 | 一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201410213583.6A CN104818317B (zh) | 2014-05-20 | 2014-05-20 | 一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN104818317A true CN104818317A (zh) | 2015-08-05 |
CN104818317B CN104818317B (zh) | 2018-04-27 |
Family
ID=53728797
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201410213583.6A Active CN104818317B (zh) | 2014-05-20 | 2014-05-20 | 一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN104818317B (zh) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105112544A (zh) * | 2015-09-22 | 2015-12-02 | 厦门艾德生物医药科技股份有限公司 | 一种用于检测egfr基因t790m突变的探针、引物及试剂盒 |
CN106636442A (zh) * | 2017-02-23 | 2017-05-10 | 上海鼎晶生物医药科技股份有限公司 | 一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒 |
CN107586851A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-01-16 | 深圳市优圣康生物科技有限公司 | 一种kras、nras、braf基因突变检测试剂盒 |
CN110144386A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-08-20 | 嘉兴雅康博医学检验所有限公司 | 用于检测pole基因突变的引物、探针及试剂盒 |
CN114774539A (zh) * | 2022-03-03 | 2022-07-22 | 杭州联川生物技术股份有限公司 | 检测结直肠癌多基因变异的引物、探针、试剂盒及其应用 |
CN116397027A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-07-07 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 联合检测kras/nras/braf基因分型的复合扩增体系及试剂盒 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1838683A (zh) * | 1998-05-08 | 2006-09-27 | 奥林吉个人通讯服务公司 | 移动可视电话 |
CN102816839A (zh) * | 2012-07-06 | 2012-12-12 | 杭州艾迪康医学检验中心有限公司 | 用于检测结直肠癌pik3ca基因热点突变位点的试剂盒 |
CN103324846A (zh) * | 2013-06-13 | 2013-09-25 | 浙江加州国际纳米技术研究院绍兴分院 | 结直肠癌症治疗预后生物标记物的筛选方法 |
-
2014
- 2014-05-20 CN CN201410213583.6A patent/CN104818317B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1838683A (zh) * | 1998-05-08 | 2006-09-27 | 奥林吉个人通讯服务公司 | 移动可视电话 |
CN102816839A (zh) * | 2012-07-06 | 2012-12-12 | 杭州艾迪康医学检验中心有限公司 | 用于检测结直肠癌pik3ca基因热点突变位点的试剂盒 |
CN103324846A (zh) * | 2013-06-13 | 2013-09-25 | 浙江加州国际纳米技术研究院绍兴分院 | 结直肠癌症治疗预后生物标记物的筛选方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
S. TEJPAR, ET AL.: "Effect of KRAS and NRAS mutations on treatment outcomes in patients with metastatic colorectal cancer (mCRC) treated first-line with cetuximab plus FOLFOX4: New results from the OPUS study", 《ASCO GI》 * |
WENDY DE ROOCK, ET AL.: "Effects of KRAS, BRAF, NRAS, and PIK3CA mutations on the efficacy of cetuximab plus chemotherapy in chemotherapy-refractory metastatic colorectal cancer: a retrospective consortium analysis", 《LANCET ONCOL》 * |
涂金花 等: "基因突变与结直肠癌靶向治疗的新进展", 《世界华人消化杂志》 * |
Cited By (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105112544A (zh) * | 2015-09-22 | 2015-12-02 | 厦门艾德生物医药科技股份有限公司 | 一种用于检测egfr基因t790m突变的探针、引物及试剂盒 |
CN106636442A (zh) * | 2017-02-23 | 2017-05-10 | 上海鼎晶生物医药科技股份有限公司 | 一种人类肿瘤基因变异联合检测试剂盒 |
CN107586851A (zh) * | 2017-11-03 | 2018-01-16 | 深圳市优圣康生物科技有限公司 | 一种kras、nras、braf基因突变检测试剂盒 |
CN110144386A (zh) * | 2019-04-12 | 2019-08-20 | 嘉兴雅康博医学检验所有限公司 | 用于检测pole基因突变的引物、探针及试剂盒 |
CN114774539A (zh) * | 2022-03-03 | 2022-07-22 | 杭州联川生物技术股份有限公司 | 检测结直肠癌多基因变异的引物、探针、试剂盒及其应用 |
CN114774539B (zh) * | 2022-03-03 | 2024-01-12 | 杭州联川生物技术股份有限公司 | 检测结直肠癌多基因变异的引物、探针、试剂盒及其应用 |
CN116397027A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-07-07 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 联合检测kras/nras/braf基因分型的复合扩增体系及试剂盒 |
CN116397027B (zh) * | 2022-12-29 | 2023-10-10 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | 联合检测kras/nras/braf基因分型的复合扩增体系及试剂盒 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN104818317B (zh) | 2018-04-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN104818320B (zh) | 一次性检测肺癌多重基因的引物、探针、检测体系和试剂盒 | |
CN104818318B (zh) | 一次性检测肺癌多重基因的引物、探针、检测体系和试剂盒 | |
CN104818317A (zh) | 一次性检测肠癌多重基因突变的引物、探针、检测体系和试剂盒 | |
CN102010894B (zh) | 检测人K-ras基因外显子12、13突变的核苷酸序列、方法及试剂盒 | |
CN102586401A (zh) | 一种检测人结直肠癌braf基因突变的方法和试剂盒 | |
CN104762410A (zh) | 用于全ras突变检测的引物、探针及检测试剂盒 | |
CN106103742A (zh) | 一种富集循环肿瘤dna的方法和试剂 | |
CN104017887A (zh) | 人类braf基因突变检测引物对和探针及其试剂盒 | |
CN105177116A (zh) | 人类cyp2c9和vkorc1基因多态性检测试剂盒 | |
CN108277263A (zh) | 一种检测braf基因v600e的引物探针组合物及其检测方法 | |
CN107460239A (zh) | 一种用于pd‑l1表达水平检测的试剂盒 | |
CN104830989A (zh) | 一种用于ros1与多种基因发生融合突变的检测试剂盒 | |
CN103290120B (zh) | 一种用于检测alk基因表达的探针、引物及试剂盒 | |
CN107641649B (zh) | 检测微卫星nr27位点稳定性的引物对、试剂盒及方法 | |
CN107604069A (zh) | 基于Taqman‑MGB探针的人JAK2 V617F突变检测试剂盒和方法 | |
WO2020134950A1 (zh) | 用于肺结节良恶性鉴别的基因突变/融合组合及试剂盒 | |
CN103074438A (zh) | 一种指导华法林用药的多重基因检测试剂盒及其检测方法 | |
CN102181536A (zh) | 用于检测人类egfr基因19号外显子突变的引物组合物、试剂盒及方法 | |
WO2019084998A1 (zh) | 一种kras、nras、braf基因突变检测试剂盒 | |
CN103966306A (zh) | Egfr突变检测引物/探针及方法(pcr/ldr法) | |
CN105505934B (zh) | M5型急性髓系白血病相关的特异miRNA及其应用 | |
Terp et al. | Extraction of cell-free DNA | |
CN110438226A (zh) | 一种检测顺反式突变的试剂盒、样品处理方法及判定方法 | |
CN103725787A (zh) | 一种白血病融合基因荧光pcr检测试剂盒 | |
CN108315427A (zh) | 一种检测肿瘤kras基因g12d的引物探针组合物及其检测方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant | ||
CP03 | Change of name, title or address |
Address after: No. 39, Haicang Ding Shan Road, Haicang District, Xiamen, Fujian Patentee after: AMOY DIAGNOSTICS CO., LTD. Address before: 361000 the 5 floor of No. 4 factory, Chuang Chuang center, 289 Weng Jiao Road, Xinyang street, Haicang District, Xiamen, Fujian, China. Patentee before: Amoy Diagnostics Co., Ltd. |
|
CP03 | Change of name, title or address |