CN104797705A - 具有抗真菌性的乳杆菌属菌株 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的乳杆菌(Lactobacillus)菌株以及制备物和组合物，诸如仅具有乳杆菌或与丙酸杆菌(Propzonzbacterium)属的细菌组合的发酵培养液、保护性培养物、最终食物或饲料产品。本发明还涉及通过使用这些新的乳杆菌菌株来控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长的方法。

Description

具有抗真菌性的乳杆菌属菌株
技术领域
本发明涉及新的乳杆菌(Lactobacillus)属菌株以及制备物和组合物，诸如仅具有乳杆菌或与丙酸杆菌(Propionibacterium)属的细菌组合的发酵培养液、保护性培养物、最终食物或饲料产品。本发明还涉及通过使用这些新的乳杆菌菌株来控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长的方法。
背景技术
酵母和霉菌在不同的乳制品类型(比如酸奶、甜奶油和酸奶油以及新鲜干酪和熟化干酪类型)的腐坏中起着重要作用，并因此可导致高昂的经济损失。比如有机酸及其盐(例如山梨酸盐和丙酸盐)的化学防腐剂用于保存乳制品，并保证和延长保质期。使用化学防腐剂的缺点是需要在标签上注明(通常作为E编号)以及对食品感官性质的潜在不良影响。
已知乳酸菌产生多种抗微生物化合物，诸如有机酸、过氧化氢、二乙酰和细菌素。已建议将乳酸菌和由乳酸菌产生的产品作为增加食物和动物饲料保质期的替代型添加剂。商业抗微生物产品(丹尼斯克公司(Danisco))基于从乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)纯化而来的乳酸链球菌肽。
EP0302300涉及通过培养干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)菌种并从培养基中分离产物来制备抑制酵母和抑制霉菌的低分子量产品的工艺。
US2008286406 A1涉及具有针对青霉(Penicillium)属霉菌的抗真菌活性的德氏乳杆菌乳酸亚种(Lactobacillus delbrueckii subsp.lactis)菌株及其在动物饲料中控制霉菌的用途。
US2008299098 A1涉及约氏乳杆菌(Lactobacillus johnsonii)菌株及其作为益生菌、作为预防剂或作为针对多种人类和动物病原体的材料表面处理方式的用途。
WO2009130423涉及类干酪乳杆菌类干酪亚种(Lactobacillus paracasei subsp.paracasei)菌株及其作为益生菌的用途。
DE202006014937涉及具有降低的脂肪含量的乳脂混合物，其包含黄油和来自乳酸菌的生物保护性培养物，不含防腐剂。
在1993年，维利奥公司(Valio)(一家芬兰乳品公司)在EP 0576780中描述了一种具有酵母和霉菌控制效果的新的微生物菌株，即干酪乳杆菌鼠李糖亚种(Lactobacillus casei ssp.rhamnosus)LC-705(作为DSM 7061保藏于德国微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，DSM))。EP 0576780还描述了保护性培养物在抑制真菌生长方面的用途，其中使用干酪乳杆菌鼠李糖亚种菌株和费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichii subsp.shermanii)菌株(DSM 7067)的混合物。该共培养物的特定特征是乳杆菌和丙酸杆菌的组合具有比单独的鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)更佳的抗真菌活性。该培养物由威尔斯比公司(Wiesby)以名称“Bio Profit”商业化，并由丹尼斯克公司(Danisco)重命名为HOLDBACTM YM-B。
EP1308506(瑞士苏黎世的瑞士联邦理工学院(Swiss Federal Institute of Technology(ETH)，Zürich，Switzerland))还描述了乳杆菌和丙酸杆菌的组合。来自ETH的类干酪乳杆菌类干酪亚种菌株(DSM 14514)作为与来自维利奥公司(Valio)的费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067的共混物以名称HOLDBACTM YM-C商业化。
WO 03/040349涉及作为不含代谢物的非起子培养物并且包含詹氏丙酸杆菌(Propionibacterium jensenii)和选自乳杆菌属的第二细菌的细菌混合物。
本发明的目标
本发明实施例的目标是提供改进的乳杆菌菌株以及制备物和组合物，诸如仅包含这样的改进乳杆菌或与丙酸杆菌属细菌组合的发酵培养液、保护性培养物、最终食物或饲料产品。
本发明实施例的目标是提供通过使用这些新的乳杆菌菌株来控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长的方法。
发明内容
本发明人已发现，新的乳杆菌菌株在能够控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长方面具有改进的性质。
因此，在第一方面，本发明涉及选自以下列表的乳杆菌属的细菌：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
及它们的功能等同物。
在第二方面，本发明涉及细菌制备物，其特征在于包含单独的或与丙酸杆菌属的细菌、与乳杆菌属的任何其他菌株或与这两者组合的选自以下列表的乳杆菌：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
在第三方面，本发明涉及选自以下列表的乳杆菌属的细菌在制备最终食物或饲料产品中的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
在又一个方面，本发明涉及包含选自以下列表的乳杆菌的细菌制备物在控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长方面的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
在又一个方面，本发明涉及控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长的方法，其特征在于使用包含单独的或与丙酸杆菌属的细菌、与乳杆菌的另一种菌株或与这两者组合的选自以下列表的乳杆菌的细菌制备物：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
在一些实施例中，该方法还包括纯化和/或浓缩所述乳杆菌属细菌的步骤。
在又一个方面，本发明涉及选自以下列表的活乳杆菌细菌的制备物在控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长方面的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
在又一个方面，本发明涉及控制组合物中诸如细菌、酵母或霉菌的污染物的生长的方法，该方法的特征在于使所述组合物中存在选自以下的活乳杆菌细菌：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
附图说明
图1至图8是覆盖层测定的结果。当由乳杆菌产生抗真菌代谢物时，在LAB菌落周围可见到干净的区域。
图1：植物乳杆菌DSM 25834及其对青霉种(Penicillium sp.)DCS 436的抑制效果。
图2：植物乳杆菌DSM 25834及其对青霉种DCS 1066的抑制效果。
图3：植物乳杆菌DSM 25836及其对青霉种DCS 435的抑制效果。
图4：植物乳杆菌DSM 25836及其对青霉种DCS 436的抑制效果。
图5：植物乳杆菌DSM 25836及其对汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)DCS 1037的抑制效果。
图6：植物乳杆菌DSM 25833及其对镰刀菌种(Fusarium sp.)DCS 1106的抑制效果。
图7：植物乳杆菌DSM 25833及其对青霉种DCS 1540的抑制效果。
图8：植物乳杆菌DSM 25835及其对青霉种DCS 1540的抑制效果。
具体实施方式
本发明涉及具有针对细菌、酵母和霉菌的抑制活性的改进乳杆菌菌株。该细菌适用于商品(例如食物或饲料)的保存。
市售的抗真菌培养物HOLDBACTM YM-B和YM-C(丹麦杜邦公司(DuPont，Denmark))的抗真菌效果已经在比如酸奶、新鲜干酪、酸奶油和白卤干酪的不同类型发酵乳制品的各种挑战性研究中得到证实。此外，在Gouda型干酪的内部试验中评价了HOLDBACTM YM-B和YM-C的应用。结果证实，用YM-B或YM-C制备的干酪上的腐坏霉菌的长出比没有添加保 护性培养物的参照延迟。据设想，只需存在丙酸杆菌菌株即可能诱导乳杆菌菌株形成抗真菌代谢物。本发明的发明人已经证实抗真菌活性的主要部分来自于乳杆菌。
如在实例中所述，在琼脂测定中筛选菌株。
这些菌株可用于开发抗真菌培养物，特别是用于乳品应用的抗真菌培养物。使用本发明的抗真菌乳杆菌，基于HOLDBAC YM共培养概念的用于例如酸奶(包括酸奶饮品)、酸奶油、半硬和硬干酪、白软干酪、新鲜干酪、奶油干酪和白卤干酪的抗真菌培养物将成为可能。比如酸面团等其他食物应用以及饲料产品(诸如青贮饲料)的保护可以是潜在性应用。
定义
如本文所用，术语“活的”是指具有活性代谢、存活、生长或繁殖的潜力的细菌细胞。
如本文所用，术语“乳杆菌的保护性培养物”是指包含活乳杆菌的组合物(纯培养物或培养物浓缩物)，其不是适于食用的最终食物产品，但添加到食物产品中以期降低病原性或产毒微生物导致的风险。该定义包括诸如发酵培养基及其浓缩制备物的组合物，其中乳杆菌在合适的培养基中生长。
欧洲食品与饲料培养物协会(EFFCA)将保护性培养物表征如下：术语“保护性培养物”已应用于表现出有助于抑制或控制食物中不期望微生物生长的代谢活性的微生物食物培养物(MFC)。这些不期望的微生物可以为病原性或产毒细菌和真菌，但是引起腐坏的物种也可包括在内。
保护性培养物被视为起子培养物不可分割的一部分，起子培养物是用于生产诸如干酪、酸奶、某些腊肠、葡萄酒等发酵食物的传统食品技术工具。发酵食物的一般性质是它们具有比非发酵原料更长的保质期(例如干酪具有比奶长得多的保质期)。这种性质是发酵性培养物的活性代谢的结果，通过竞争营养物和结合位点的复杂***以及通过产生抑制性代谢物(比如有机酸、过氧化氢、二乙酰、罗伊氏素和细菌素)来发挥其作用。
根据所用的特定培养物，培养物通常还形成对食物产品具有感官和营养价值的多种性质。以此方式，还已向食物中施加了用于发酵过程的相同起子培养物物种，以便利用“生物保护”潜能而对感官具有或不具有影响。术语保护性培养物已应用于这些起子培养物。
它们的使用不限于“经典”的发酵食物，当其代谢活性在具有中性pH和高水活性(会使食物病原体生长的风险升高)的食物中发生时，它们也发挥着重要作用。“保护性培养物”的应用构成了改善食物卫生的额外措施，并且不应允许忽视确保高食物安全标准的良好生产规范的任何措施。
保护性培养物是起子培养物不可分割的一部分，而不是添加剂。显而易见的是，这些培养物(比如所有起子培养物)因其在食物中或食物上的代谢活性而发挥其保护性和有益的潜力(EFFCA，2011年12月)。
在食物或饲料发酵前，将保护性培养物与起子培养物一起添加至食物或饲料基质中。因此，保护性培养物经历了发酵步骤，并能够生长和/或能够具有代谢活性。需要起子培养物来生产发酵食物，比如酸奶、干酪和酸奶油，并且起子培养物有助于在味道、质地和风味形成方面实现期望的产品变化。除此之外，将保护性培养物添加到食物中以限制病原性或腐坏细菌的生长，并因此降低食物中毒的风险且保证保质期。
如本文所用，术语“最终食物或饲料产品”是指适于食用的组合物，诸如适于人类或动物以食物或饲料的形式食用。
如本文所用，术语“制备物”是指来源于通过乳杆菌属的细菌生长而调节的培养基或其提取物的任何组合物或其部分，所述提取物包括含有一种或多种非活细菌细胞组分(诸如来源于乳杆菌属的细菌的脂质、蛋白质或核酸组分)的提取物。制备物的这种定义包括液体制备物以及水被基本上除去的干粉制备物。
如本文所用的术语“污染物”是指诸如细菌、真菌(诸如酵母或霉菌)的任何微生物的任何不期望的和非故意的生长。在某些情况下，污染物可引起疾病。然而，通常来说污染物仅降解和劣化产品，其中发现和/或产生令人不愉快和不期望的味道或口感。
在一些实施例中，污染物是选自以下列表的真菌：青霉种(Penicillium spp.)，短密青霉(Penicillium brevicompactum)、离生青霉(Penicillium solitum)、光滑青霉(Penicillium glabrum)、顶青霉(Penicillium corylophilum)、娄地青霉(Penicillium roqueforti)；曲霉种(Aspergillus sp.)，赭曲霉(Aspergillus ochraceus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)、杂色曲霉(Aspergillus versicolor)、黑曲霉(Aspergillus niger)；散囊菌种(Eurotium spp.)；镰刀菌种(Fusarium spp.)；假丝酵母种(Candida spp.)，软假丝酵母 (Candida colliculosa)、无名假丝酵母(Candida famata)、季也蒙假丝酵母(Candida guilliermondii)、乳酒假丝酵母(Candida kefyr)、郎比克假丝酵母(Candida lambica)、解脂假丝酵母(Candida lipolytica)、葡萄牙假丝酵母(Candida lusitaniae)、清酒假丝酵母(Candida sake)、圆球形假丝酵母(Candida sphaerica)、***滑假丝酵母(Candida parapsilosis)、菌膜假丝酵母(Candida pelliculosa)、皱褶假丝酵母(Candida rugosa)、诞沫假丝酵母(Candida zeylanoides)；德巴利酵母种(Debaryomyces spp.)，汉逊德巴利酵母；克鲁维酵母种(Kluyveromyces spp.)，马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)；红酵母种(Rhodotorula spp.)，胶红酵母(Rhodotorula mucilaginosa)；酵母种(Saccharomyces spp.)，酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、赛瓦酵母(Saccharomyces servazzii)；以及地霉种(Geotrichum spp.)，白地霉(Geotrichum candidum)。
在一些实施例中，污染物是与根据本发明的方法所用的特定乳杆菌菌株不同的细菌，其选自以下列表：单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)、假单孢菌种(Pseudomonas sp.)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、芽孢杆菌种(Bacillus sp.)、乳杆菌种、明串珠菌种(Leuconostoc sp.)、梭菌种(Clostridium sp.)、肠杆菌(Enterobacteriaceae)如柠檬酸杆菌种(Citrobacter sp.)、肠杆菌种(Enterobacter sp.)、埃希氏菌种(Escherichia sp.)、克雷伯氏菌种(Klebsiella sp.)、沙门氏菌种(Salmonella sp.)。
乳杆菌
如本文所用，术语“乳杆菌属的任何其他菌株”或“乳杆菌的任何其他菌株”是指不是选自以下列表的乳杆菌菌株的乳杆菌属的任何菌株：类干酪乳杆菌DSM 25832、植物乳杆菌DSM 25833、植物乳杆菌DSM 25834、植物乳杆菌DSM 25835、植物乳杆菌DSM 25836和植物乳杆菌DSM 25837，诸如可用于生产酸奶、干酪、德国泡菜、咸菜、啤酒、葡萄酒、苹果酒、朝鲜泡菜、可可和其他发酵食物以及动物饲料(诸如青贮饲料)的乳杆菌菌株。术语乳杆菌旨在涵盖(http：//www.bacterio.cict.fr/l/Lactobacillus.html)中所述的生物体，并且具体地讲包括：耐酸乳杆菌(L.acetotolerans)、酸粉乳杆菌(L.acidifarinae)、马里乳杆菌(L.acidipiscis)、嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)、敏捷乳杆菌(L.agilis)、阿 氏乳杆菌(L.algidus)、消化乳杆菌(L.alimentarius)、降解淀粉类乳杆菌(L.amylolyticus)、嗜淀粉乳杆菌(L.amylophilus)、嗜淀粉乳杆菌(L.amylotrophicus)、食淀粉乳杆菌(L.amylovorus)、动物乳杆菌(L.animalis)、胃窦乳杆菌(L.antri)、姬鼠乳杆菌(L.apodemi)、鸟乳杆菌(L.aviarius)、双发酵乳杆菌(L.bifermentans)、短乳杆菌(L.brevis)、布氏乳杆菌(L.buchneri)、茶树乳杆菌(L.camelliae)、干酪乳杆菌(L.casei)、链状乳杆菌(L.catenaformis)、L.ceti、L.coleohominis、丘状菌落乳杆菌(L.collinoides)、复合乳杆菌(L.composti)、弧形乳杆菌(L.concavus)、棒状乳杆菌(L.coryniformis)、卷曲乳杆菌(L.crispatus)、面包乳杆菌(L.crustorum)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、德氏乳杆菌德氏亚种(L.delbrueckii subsp.delbrueckii)、德氏乳杆菌保加利亚亚种(L.delbrueckii subsp.bulgaricus)、德氏乳杆菌乳酸亚种(L.delbrueckii subsp.lactis)、糊精乳杆菌(L.dextrinicus)、迪氏乳杆菌(L.diolivorans)、L.equi、额氏乳杆菌(L.equigenerosi)、螺丝乳杆菌(L.farraginis)、香肠乳杆菌(L.farciminis)、发酵乳杆菌(L.fermentum)、弓形乳杆菌(L.fornicalis)、食果糖乳杆菌(L.fructivorans)、弗氏乳杆菌(L.frumenti)、果糖乳杆菌(L.fuchuensis)、鸡乳杆菌(L.gallinarum)、格氏乳杆菌(L.gasseri)、胃炎乳杆菌(L.gastricus)、甘氏乳杆菌(L.ghanensis)、草乳杆菌(L.graminis)、L.hammesii、哈氏乳杆菌(L.hamsteri)、哈尔滨乳杆菌(L.harbinensis)、L.hayakitensis、瑞士乳杆菌(L.helveticus)、希氏乳杆菌(L.hilgardii)、同型腐酒乳杆菌(L.homohiochii)、惰性乳杆菌(L.iners)、L.ingluviei、肠乳杆菌(L.intestinalis)、詹氏乳杆菌(L.jensenii)、约氏乳杆菌(L.johnsonii)、L.kalixensis、马乳酒样乳杆菌(L.kefiranofaciens)、高加索酸奶乳杆菌(L.kefiri)、辣白菜乳杆菌(L.kimchii)、肉汤乳杆菌(L.kitasatonis)、昆氏乳杆菌(L.kunkeei)、莱士曼氏乳杆菌(L.leichmannii)、林氏乳杆菌(L.lindneri)、坏发酵乳杆菌(L.malefermentans)、马里乳杆菌(L.mali)、食木薯乳杆菌(L.manihotivorans)、明登乳杆菌(L.mindensis)、黏膜乳杆菌(L.mucosae)、鼠乳杆菌(L.murinus)、纳氏乳杆菌(L.nagelii)、L.namurensis、L.nantensis、寡发乳杆菌(L.oligofermentans)、口乳杆菌(L.oris)、面包乳杆菌(L.panis)、美洲虎乳杆菌(L.pantheris)、类短乳杆菌(L.parabrevis)、类布氏乳杆菌(L.parabuchneri)、类丘状菌落乳杆菌(L.paracollinoides)、类螺丝乳杆菌(L.parafarraginis)、类高加索酸奶乳杆菌(L.parakefiri)、类消化乳杆菌 (L.paralimentarius)、类植物乳杆菌(L.paraplantarum)、戊糖乳杆菌(L.pentosus)、L.perolens、植物乳杆菌、桥乳杆菌(L.pontis)、鹦鹉乳杆菌(L.psittaci)、L.rennini、罗伊氏乳杆菌(L.reuteri)、鼠李糖乳杆菌(L.rhamnosus)、龈沟乳杆菌(L.rimae)、罗氏乳杆菌(L.rogosae)、罗斯乳杆菌(L.rossiae)、瘤胃乳杆菌(L.ruminis)、L.saerimneri、清酒乳杆菌(L.sakei)、唾液乳杆菌(L.salivarius)、旧金山乳杆菌(L.sanfranciscensis)、L.satsumensis、L.secaliphilus、沙氏乳杆菌(L.sharpeae)、L.siliginis、L.spicheri、猪双臼乳杆菌(L.suebicus)、泰国乳杆菌(L.thailandensis)、L.ultunensis、疫苗粪乳杆菌(L.vaccinostercus)、***乳杆菌(L.vaginalis)、文氏乳杆菌(L.versmoldensis)、L.vini、犊牛乳杆菌(L.vitulinus)、玉米乳杆菌(L.zeae)和L.zymae，及它们的变体。
术语乳杆菌旨在涵盖在EP0576780、EP1308506、EP1796698、EP2245943、EP1530642、EP1740726、WO 03/040349、WO/2006/032542、WO/2007/132359、WO/2004/013343和WO/2010/081138中所述的任何特定的乳杆菌菌株。
在一些实施例中，任何其他乳杆菌菌株选自类干酪乳杆菌类干酪亚种DSM 14514和鼠李糖乳杆菌DSM 7061。
丙酸杆菌
如本文所用，术语“细菌丙酸杆菌的菌株”是指丙酸杆菌属的任何菌株，包括以下种：产酸丙酸杆菌(Propionibacterium acidifaciens)、产丙酸丙酸杆菌(Propionibacterium acidipropionici)、痤疮丙酸杆菌(Propionibacterium acnes)、澳樟丙酸杆菌(Propionibacterium australiense)、贪婪丙酸杆菌(Propionibacterium avidum)、嗜环己烷丙酸杆菌(Propionibacterium cyclohexanicum)、费氏丙酸杆菌费氏亚种(Propionibacterium freudenreichii subsp.freudenreichii)、费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichii subsp.shermanii)、颗粒丙酸杆菌(Propionibacterium granulosum)、詹氏丙酸杆菌(Propionibacterium jensenii)、微嗜氧丙酸杆菌(Propionibacterium microaerophilum)、嗜丙酸丙酸杆菌(Propionibacterium propionicum)和特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)及它们的变体。该术语旨在涵盖在本公开中以及在EP0576780、EP1308506、WO03/040349和 US4728516任一者中所述的特定丙酸杆菌菌株，包括费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067。
本发明的具体实施例。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物为单独的或与丙酸杆菌属的细菌或乳杆菌的任何其他菌株组合的发酵培养液中的细胞悬液。
类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)DSM 25832、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DSM 25833、植物乳杆菌DSM 25834、植物乳杆菌DSM 25835、植物乳杆菌DSM 25836、植物乳杆菌DSM 25837分别以保藏号DSM25832、DSM25833、DSM25834、DSM25835、DSM25836、DSM25837于2012年4月3日保藏于德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH)(德国)。
产丙酸丙酸杆菌(Propionibacterium acidipropionici)DSM 25845、费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichii subsp.shermanii)DSM 25846、费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichii)DSM 25847、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)DSM 25848和特氏丙酸杆菌DSM 25849分别以保藏号DSM25845、DSM25846、DSM25847、DSM25848、DSM25849于2012年4月3日保藏于德意志微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zelikulturen GmbH)(德国)。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物包含选自以下的乳杆菌菌株：类干酪乳杆菌DSM 25832、植物乳杆菌DSM 25833、植物乳杆菌DSM 25834、植物乳杆菌DSM 25835、植物乳杆菌DSM 25836、植物乳杆菌DSM 25837、或它们的任何组合。
在一些实施例中，该细菌制备物还包含选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM 25848、特氏丙酸杆菌DSM 25849和费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物包含类干酪乳杆菌DSM 25832和选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM 25848、和特氏丙酸杆菌DSM 25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物包含植物乳杆菌DSM 25833和选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM 25848、和特氏丙酸杆菌DSM 25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物包含植物乳杆菌DSM 25834和选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM 25848、和特氏丙酸杆菌DSM 25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物包含植物乳杆菌DSM 25835和选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM  25848、和特氏丙酸杆菌DSM 25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物包含植物乳杆菌DSM 25836和选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM 25848、和特氏丙酸杆菌DSM 25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物包含植物乳杆菌DSM 25837和选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM 25848、和特氏丙酸杆菌DSM 25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物是浓缩的。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物是冷冻干燥的或冷冻的。
在一些实施例中，根据本发明的细菌制备物的特征在于其还包含用于酵母和霉菌控制的常规试剂，诸如丙酸盐或苯丙氨酸。
在一些实施例中，根据本发明的组合物是乳杆菌的保护性培养物，并且乳杆菌属的所述活细菌以至少107CFU/g或ml，诸如至少5×107CFU/g或ml，诸如至少108CFU/g或ml，诸如至少109CFU/g或ml，诸如至少1010CFU/g或ml，诸如至少5×1010CFU/g或ml，诸如至少1011CFU/g或ml，诸如至少5×1011CFU/g或ml，诸如至少1012CFU/g或ml，诸如至少5×1012CFU/g或ml，诸如至少1013CFU/g或ml，诸如至少5×1013CFU/g或ml组合物的量存在。
在一些实施例中，根据本发明的组合物为最终食物或饲料产品，并且乳杆菌属的所述活细菌以至少105CFU/g或ml，诸如至少5×105CFU/g或ml，诸如至少106CFU/g或ml，诸如至少5×106CFU/g或ml，诸如至少107CFU/g或ml，诸如至少5×107CFU/g或ml，诸如至少108CFU/g或ml，诸如至少5×108CFU/g或ml，诸如至少109CFU/g或ml，诸如至少5×109CFU/g或ml，诸如至少1010CFU/g或ml，诸如至少5×1010CFU/g或ml，诸如至少1011CFU/g或ml，诸如至少5×1011CFU/g或ml，诸如至少 1012CFU/g或ml，诸如至少5×1012CFU/g或ml，诸如至少1013CFU/g或ml，诸如至少5×1013CFU/g或ml组合物的量存在。
在一些实施例中，根据本发明的组合物或制备物为乳杆菌的保护性培养物。
在一些实施例中，根据本发明的组合物或制备物为最终食物或饲料产品。
在一些实施例中，根据本发明的组合物具有或不具有丙酸杆菌属的所述细菌的细胞残留物。
在一些实施例中，根据本发明的组合物是乳杆菌的保护性培养物，并且乳杆菌属的所述活细菌以至少107CFU/g或ml，诸如至少5×107CFU/g或ml，诸如至少108CFU/g或ml，诸如至少109CFU/g或ml，诸如至少1010CFU/g或ml，诸如至少5×1010CFU/g或ml，诸如至少1011CFU/g或ml，诸如至少5×1011CFU/g或ml，诸如至少1012CFU/g或ml，诸如至少5×1012CFU/g或ml，诸如至少1013CFU/g或ml，诸如至少5×1013CFU/g或ml组合物的量存在。
在一些实施例中，根据本发明的组合物为最终产品，并且乳杆菌属的所述活细菌以至少105CFU/g或ml，诸如至少5×105CFU/g或ml，诸如至少106CFU/g或ml，诸如至少5×106CFU/g或ml，诸如至少107CFU/g或ml，诸如至少5×107CFU/g或ml，诸如至少108CFU/g或ml，诸如至少5×108CFU/g或ml，诸如至少109CFU/g或ml，诸如至少5×109CFU/g或ml，诸如至少1010CFU/g或ml，诸如至少5×1010CFU/g或ml，诸如至少1011CFU/g或ml，诸如至少5×1011CFU/g或ml，诸如至少1012CFU/g或ml，诸如至少5×1012CFU/g或ml，诸如至少1013CFU/g或ml，诸如至少5×1013CFU/g或ml组合物的量存在。
在一些实施例中，根据本发明的组合物是乳杆菌的保护性培养物，并且乳杆菌属的所述活细菌以至少107CFU/g或ml，诸如至少5×107CFU/g或ml，诸如至少108CFU/g或ml，诸如至少109CFU/g或ml，诸如至少1010CFU/g或ml，诸如至少5×1010CFU/g或ml，诸如至少1011CFU/g或ml，诸如至少5×1011CFU/g或ml，诸如至少1012CFU/g或ml，诸如至少5×1012CFU/g或ml，诸如至少1013CFU/g或ml，诸如至少5×1013CFU/g或ml组合物的量存在。
在一些实施例中，根据本发明的组合物为最终产品，并且乳杆菌属的所述活细菌以至少105CFU/g或ml，诸如至少5×105CFU/g或ml，诸如至少106CFU/g或ml，诸如至少5×106CFU/g或ml，诸如至少107CFU/g或ml，诸如至少5×107CFU/g或ml，诸如至少108CFU/g或ml，诸如至少5×108CFU/g或ml，诸如至少109CFU/g或ml，诸如至少5×109CFU/g或ml，诸如至少1010CFU/g或ml，诸如至少5×1010CFU/g或ml，诸如至少1011CFU/g或ml，诸如至少5×1011CFU/g或ml，诸如至少1012CFU/g或ml，诸如至少5×1012CFU/g或ml，诸如至少1013CFU/g或ml，诸如至少5×1013CFU/g或ml组合物的量存在。
在一些实施例中，根据本发明的组合物或制备物用于制备食物产品或饲料产品，诸如奶产品。在一些实施例中，食物产品选自乳制品、酸奶、酸奶饮品、干酪(诸如新鲜干酪、奶油干酪、白软干酪、半软和软干酪、半硬和硬干酪、白卤干酪)、酸奶产品和酸奶油、德国泡菜、咸菜、啤酒、葡萄酒、苹果酒、朝鲜泡菜、可可、酸面团和其他发酵食物以及动物饲料(诸如青贮饲料)。
在根据本发明的一些实施例中，“乳杆菌属的任何其他细菌”选自类干酪乳杆菌DSM 14514和鼠李糖乳杆菌DSM 7061。
编号的根据本发明的实施例：
1.一种乳杆菌属的细菌，选自以下列表：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
2.一种细菌制备物，其特征在于包含单独的或与丙酸杆菌属的细菌、与乳杆菌属的任何其他菌株或与这两者组合的选自以下列表的乳杆菌：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能的等同物。
3.根据实施例2的细菌制备物，其为单独的或与丙酸杆菌属的细菌，与乳杆菌的另一菌株或与这两者组合的发酵培养液中的细胞悬液。
4.根据实施例2-3中任一项的细菌制备物，其特征在于包含选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌DSM 25845、费氏丙酸杆菌DSM 25846、费氏丙酸杆菌DSM 25847、特氏丙酸杆菌DSM 25848、和特氏丙酸杆菌DSM 25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种DSM 7067或它们的任何组合。
5.根据实施例2-4中任一项的细菌制备物，其中所述制备物是浓缩的。6.根据实施例2-4中任一项的细菌制备物，其中所述制备物是冷冻干燥的。
7.根据实施例2-6中任一项的细菌制备物，其特征在于还包含用于酵母和霉菌控制的常规试剂，诸如丙酸盐或苯丙氨酸。
8.选自以下列表的乳杆菌属的细菌在制备最终食物或饲料产品中的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
9.包含选自以下列表的乳杆菌的细菌制备物在控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长方面的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
10.一种控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长的方法，其特征在于使用包含单独的或与丙酸杆菌属的细菌、与乳杆菌属的另一菌株或与这两者组合的选自以下列表的乳杆菌的细菌制备物：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
11.选自以下列表的活乳杆菌细菌的制备物在控制诸如细菌、酵母或霉菌的污染物的生长方面的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
12.一种控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌在组合物中生长的方法，该方法的特征在于使所述组合物中存在选自以下的活乳杆菌细菌菌株：
a.类干酪乳杆菌DSM 25832
b.植物乳杆菌DSM 25833
c.植物乳杆菌DSM 25834
d.植物乳杆菌DSM 25835
e.植物乳杆菌DSM 25836
f.植物乳杆菌DSM 25837，
或它们的功能等同物。
实例1
乳杆菌测试菌株
使用了以下乳杆菌菌株：
-类干酪乳杆菌DSM 25832
-植物乳杆菌DSM 25833
-植物乳杆菌DSM 25834
-植物乳杆菌DSM 25835
-植物乳杆菌DSM 25836
-植物乳杆菌DSM 25837
乳杆菌的培养
使乳杆菌在MRS培养液(英国贝辛斯托克奥克欧德有限公司(Oxoid Limited，Basingstoke，United Kingdom))中在30℃下繁殖。通过将得自预培养物的0.1ml加入10ml MRS培养液，如上所述进行培养而完成传代。将培养物在使用前保持在4-6℃。
酵母和霉菌指示菌株
酵母和霉菌菌株在表1和表2中列出。
表1：用于筛选抗真菌活性的酵母菌株的列表
菌株编号 菌株名称 参考
205-J 解脂假丝酵母 DuPont A/S1
DCS 605 汉逊德巴利酵母 DSM 702382
DCS 1037 汉逊德巴利酵母 DuPont A/S
DSC 1055 清酒假丝酵母 DuPont A/S
DSC 1057 清酒假丝酵母 DuPont A/S
DSC 1063 胶红酵母 DuPont A/S
DCS 1087 胶红酵母 CFSQE 633
DCS 1088 铁红假丝酵母(Candida pulcherrima) Miescher4
DCS 1089 马克斯克鲁维酵母 CBS 15555
DCS 1228 酿酒酵母 DuPont A/S
DCS 1518 ***滑假丝酵母 DuPont A/S
1)丹麦布拉布兰丹尼斯克营养生物科学公司(Danisco Nutrition Biosciences ApS，Brabrand，Denmark)
2)德国布伦瑞克微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，Braunschweig，Germany)
3)Magnusson，J.，K.，Roos，S.，J.，and Schnürer，J.2003.Broad and complex antifungal activity among environmental isolates of lactic acid bacteria.FEMS Microbiology Letters 219：129-135(Magnusson，J.、K.、Roos，S.、J.和Schnürer，J.，2003年，“在乳酸细菌的环境分离株之中广泛而复杂的抗真菌活性”，《欧洲微生物学会联合会微生物学快报》，第219卷第129-135页)
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5)荷兰乌得勒支微生物菌种保藏中心(Centraalbureau voor Schimmelcultures，Utrecht，The Netherlands)
在使用前，将酵母菌株在由以下物质组成的培养液中培养：溶于磷酸二氢钾溶液(312μmol/l，pH 7.20±0.10)的2％葡萄糖(丹麦海菜乌vwr公司(vwr，Herlev，Denmark))、0.5％酵母提取物(英国贝辛斯托克奥克欧德有限公司(Oxoid Limited，Basingstoke，United Kingdom))和0.01％得自酪蛋白的蛋白胨(奥克欧德公司(Oxoid))。将无菌甘油以33％体积/体积浓度加入具有生长的酵母的培养基，然后储存在-80℃的低温保存管中。在冷冻后，将酵母培养物在麦芽浸出液琼脂(奥克欧德公司(Oxoid))上计数。
表2：用于筛选抗真菌活性的霉菌菌株的列表
菌株编号 菌株名称 来源
DCS 434 青霉种 DuPont A/S
DCS 435 青霉种 DuPont A/S
DCS 436 青霉种 DuPont A/S
DCS 437 青霉种 DuPont A/S
DCS 708 赭曲霉 CBS 116.39
DCS 709 寄生曲霉 CBS 100926
DCS 1065 青霉种 DuPont A/S
DCS 1066 青霉种 DuPont A/S
DCS 1069 杂色曲霉 DSM 63292
DCS 1099 散囊菌种 DTU 1236
DCS 1105 镰刀菌种 DTU 40496
DCS 1106 镰刀菌种 DTU 40872
DCS 1540 青霉种 DuPont A/S
DCS 1541 青霉种 DuPont A/S
DCS 1558 青霉种 DuPont A/S
6)丹麦灵比丹麦技术大学(Danmarks Tekniske Universitet，Lyngby，Denmark)
将霉菌菌株在麦芽浸出液琼脂斜面(奥克欧德公司(Oxoid))上培养，直到可以看到孢子形成。通过添加两次5ml补充了0.01％Tween 80(默克公司(Merck))的无菌自来水而收获孢子。将无菌甘油以33％体积/体积的浓度加入孢子溶液，然后储存在-80℃的低温保存管中。在麦芽浸出液琼脂(奥克欧德公司(Oxoid))上冷冻后进行孢子计数。
覆盖层测定
将乳杆菌测试菌株在MRS琼脂上点接种(每块板三个点)。将板在30℃下进行温育。
将具有生长的乳杆菌菌落的板覆盖上麦芽浸出液软琼脂，其由以下物质组成：含有104酵母细胞/ml或104霉菌孢子/ml的2％麦芽浸出液培养液(奥克欧德公司(Oxoid))和温度调至47℃的0.8％琼脂(德国达姆施塔特默克公司(Merck KGaA，Darmstadt，Germany))。被覆盖的板在25℃下温育3-5天，并检查测试菌落周围的抑制区域。作为生长对照，针对各指示生物体制备了不含点种测试菌株的琼脂板。如下对所述区域的面积进行分级：
结果
测试了六种乳杆菌的抗真菌活性。因此，将菌株点接种到MRS琼脂板上，在其上将表1和表2所列的真菌涂到麦芽浸出液软琼脂内。将板储存在25℃，并检查乳杆菌菌落周围的抑制区域。
所有六种测试的乳杆菌均如表3中所总结在涂抹的覆盖层测定中显示出抗真菌活性。将植物乳杆菌DSM 25837在第二个试验中进行了测定，由于未使用所有真菌，因此关于此菌株的一些结果无法获得。
一般来讲，乳杆菌显示出不同的抑制谱。检测到的最高活性依次为植物乳杆菌DSM 25833，然后是植物乳杆菌DSM 25834和植物乳杆菌DSM 25836。用类干酪乳杆菌DSM 25832观测到了比植物乳杆菌菌株更弱的活性。
表3：所选的乳杆菌菌株在覆盖层测定中的抗真菌活性
n.d.：未确定
实例2
在琼脂测定中研究了类干酪乳杆菌类干酪亚种DSM 14514的抗真菌活性
使用琼脂测定评价了类干酪乳杆菌类干酪亚种DSM 14514的冷冻浓缩样品的抗真菌活性。包括无抗真菌培养物的参考样品以在评价中用于比较。使用表1中所列的指示菌株评估抗真菌活性。
表1：用于琼脂测定的酵母和霉菌菌柱的列表
菌株编号 菌株名称 参考
DCS 605 汉逊德巴利酵母 DSM 702381
DCS 1065 青霉种 DuPont A/S2
DCS 1540 青霉种 DuPont A/S
DCS 1541 青霉种 DuPont A/S
1)德国布伦瑞克微生物保藏中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH，Braunschweig，Germany)在使用前，使汉逊德巴利酵母DCS 605在由以下物质组成的培养液中生长：溶于磷酸二氢钾溶液(312μmol/l，pH 7.20±0.10)的2％葡萄糖(丹麦海菜乌vwr公司(vwr，Herlev，Denmark))、0.5％酵母提取物(英国贝辛斯托克奥克欧德有限公司(Oxoid Limited，Basingstoke，United Kingdom))和 0.01％得自酪蛋白的蛋白胨(奥克欧德公司(Oxoid))。将无菌甘油以33％体积/体积的浓度加入具有生长的酵母的培养基，然后储存在-80℃的低温保存管中。在冷冻后，将酵母培养物在麦芽浸出液琼脂(奥克欧德公司(Oxoid))上计数。使青霉种DCS 1065、青霉种DCS 1540和青霉种DCS 1541在麦芽浸出液琼脂斜面(奥克欧德公司(Oxoid))上培养，直到可以看到孢子形成。通过添加两次5ml补充了0.01％Tween 80(默克公司(Merck))的无菌自来水而收获孢子。将无菌甘油以33％体积/体积的浓度加入孢子溶液，然后储存在-80℃的低温保存管中。在麦芽浸出液琼脂(奥克欧德公司(Oxoid))上冷冻后进行孢子计数。将分成750g的市售UHT奶(含有3.5％的脂肪)的多个部分用商业酸奶起子培养物酸化。酸奶起子培养物由嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)和德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrückii subsp.bulgaricus)的菌株(丹麦丹尼斯克公司(Danisco A/S，Denmark))组成。将测试样品另外用保护性菌株接种以得到5.0·106CFU/g的水平。在42℃下进行约7-9小时的发酵，直到在酸奶样品中达到4.50的pH。将样品用力摇晃，然后称取650g酸奶加到无菌瓶中。之后，将325g由25g琼脂(默克公司(Merck))每升组成的琼脂溶液(温度调至47℃)加到酸奶中，将瓶子温和摇晃以得到酸奶和琼脂的均匀混合物。将酸奶-琼脂混合物倒入培养皿。在酸奶琼脂固化后，将稀释的酵母溶液和霉菌孢子溶液点种在琼脂板上，在25℃下孵育后，对具有和不具有抗真菌培养物的板上的指示菌株的生长进行比较。将酵母菌株汉逊德巴利酵母DCS 605以5.0·101CFU/点、5.0·102CFU/点和5.0·103CFU/点的浓度一式三份地点种在板上。将霉菌菌株青霉种DCS 1540、青霉种1541和青霉种DCS 1065以20个孢子/点的浓度点种在板上。根据以下公式，通过将不受保护的参考样品上霉菌的生长与通过添加保护性菌株而产生的样品上的生长进行比较计算了样品的抑制活性：
实例3
在干酪模型***中研究抗真菌活性
使用干酪模型***评价了植物乳杆菌DSM 25833的冷冻浓缩样品的抗真菌活性。包括无抗真菌培养物的参考样品以在评价中用于比较。使用表2中所列的指示菌株评估抗真菌活性。
表2：所用的霉菌菌株的列表
菌株编号 菌株名称 参考
DCS 1540 青霉种 DuPont A/S
DCS 1541 青霉种 DuPont A/S
DCS 1558 青霉种 DuPont A/S
使青霉种DCS 1540、青霉种DCS 1541和青霉种DCS 1558在麦芽浸出液琼脂斜面(奥克欧德公司(Oxoid))上培养，直到可以看到孢子形成。通过添加两次5ml补充了0.01％Tween 80(默克公司(Merck))的无菌自来水而收获孢子。将无菌甘油以33％体积/体积的浓度加入孢子溶液，然后储存在-80℃下。在麦芽浸出液琼脂(奥克欧德公司(Oxoid))上冷冻后进行孢子计数。用分成500ml的未匀化奶的多个部分建立了干酪模型。将奶灌装在离心瓶中然后加热到32℃。将奶用市售嗜常温干酪起子培养物接种。干酪起子培养物由乳酸乳球菌(丹麦丹尼斯克公司(Danisco A/S，Denmark))菌株组成。将测试样品另外用保护性菌株接种以得到5.0·106CFU/ml的水平。将奶用市售液体动物凝乳酶(丹麦丹尼斯克公司(Danisco A/S，Denmark))凝固。将凝乳切成大约1cm×1cm×1cm的立方体。将乳清凝乳粒子的混合物在滚动搅拌器上以10rpm搅拌20分钟。将百分之四十(约200ml)的乳清丢弃并在32℃下替换为等体积的无菌水。将混合物如上所述再搅拌10分钟。之后，将瓶子以300g在室温下在配备浮桶式转头的离心机中离心10分钟。接下来，将乳清丢弃，将瓶子以1400g在30℃下离心1h。将凝乳在同一容器中翻转，将乳清丢弃，如上所述进行30分钟的最终离心。将微型干酪保持在其置于32℃水浴中的容器中，直到达到约5.2的pH。通过将45ml无菌饱和盐水(330g/l NaCl；pH调至5.4；12℃)倒入瓶中将干酪盐化5分钟。接下来，将干酪置于配有网格以有利于排出乳清的无菌瓶中，并储存在12℃下过夜。第二天，对干酪进行真空包装，然后使之在12℃下成熟28天。成熟后，将干酪用三种不同霉菌菌株的孢子溶液进行表面接种。将霉菌菌株青霉种DCS 1540、青霉种DCS 1541和青霉种DCS 1558以5个孢子/点、10个孢子/点和50个孢子/点的浓度一式三份地点种在干酪上。将干酪在12℃下温育，并在视觉上检查霉菌的生长。
结果：
植物乳杆菌DSM 25833在干酪模型***中的抗真菌活性
用不同的保护性培养物建立了干酪模型***中的试验。将抗真菌菌株以5.0·106CFU/g的初始水平加到未匀化的奶中。将奶用商业干酪起子培养物酸化，用市售液体动物凝乳酶凝固，然后将凝乳切成立方体。通过离心而移除乳清，对干酪进行压缩并盐化，然后成熟28天。成熟后，将干酪用三种不同霉菌菌株的孢子溶液进行表面接种。将霉菌菌株青霉种DCS 1540、青霉种DCS 1541和青霉种DCS 1558以5、10和50个孢子的浓度一式三份地点种在干酪上。将干酪在12℃下温育，并在视觉上检查霉菌的生长。记录每当干酪表面上九个点中的一个显示出可见霉菌生长的时间。通过获取霉菌生长在每个干酪表面的九个点上可见时的储存天数的平均值而计算干酪的平均保质期。结果显示在表5中。
表5：在具有和不具有抗真菌培养物的情况下制备的实验干酪的平均保质期
1霉菌生长在实验结束时在所有九个点上均不可见
2试验在61天后终止
向模型干酪添加植物乳杆菌DSM 25833与未添加抗真菌培养物的参考样品相比延迟了指示霉菌的长出。

Claims (12)

1.一种乳杆菌(Lactobacillus)属的细菌，选自以下列表：
a.类干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)DSM25832
b.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DSM25833
c.植物乳杆菌DSM25834
d.植物乳杆菌DSM25835
e.植物乳杆菌DSM25836
f.植物乳杆菌DSM25837，
或它们的功能等同物。
2.一种细菌制备物，其特征在于包含单独的或与丙酸杆菌(Propionibacterium)属的细菌、与乳杆菌属的任何其他菌株或与这两者组合的选自以下列表的乳杆菌：
a.类干酪乳杆菌DSM25832
b.植物乳杆菌DSM25833
c.植物乳杆菌DSM25834
d.植物乳杆菌DSM25835
e.植物乳杆菌DSM25836
f.植物乳杆菌DSM25837，
或它们的功能等同物。
3.根据权利要求2所述的细菌制备物，其为单独的或与丙酸杆菌属的细菌，与乳杆菌的另一菌株或与这两者组合的发酵培养液中的细胞悬液。
4.根据权利要求2-3中任一项所述的细菌制备物，其特征在于包含选自以下的丙酸杆菌菌株：产丙酸丙酸杆菌(Propionibacteriumacidipropionici)DSM25845、费氏丙酸杆菌(Propionibacteriumfreudenreichii)DSM25846、费氏丙酸杆菌DSM25847、特氏丙酸杆菌(Propionibacterium thoenii)DSM25848、和特氏丙酸杆菌DSM25849以及费氏丙酸杆菌谢氏亚种(Propionibacterium freudenreichiisubsp.shermanii)DSM7067或它们的任何组合。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的细菌制备物，其中所述制备物是浓缩的。
6.根据权利要求2-4中任一项所述的细菌制备物，其中所述制备物是冷冻干燥的。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的细菌制备物，其特征在于还包含用于酵母和霉菌控制的常规试剂，诸如丙酸盐或苯丙氨酸。
8.选自以下列表的乳杆菌属的细菌在制备最终食物或饲料产品中的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM25832
b.植物乳杆菌DSM25833
c.植物乳杆菌DSM25834
d.植物乳杆菌DSM25835
e.植物乳杆菌DSM25836
f.植物乳杆菌DSM25837，
或它们的功能等同物。
9.包含选自以下列表的乳杆菌的细菌制备物在控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长方面的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM25832
b.植物乳杆菌DSM25833
c.植物乳杆菌DSM25834
d.植物乳杆菌DSM25835
e.植物乳杆菌DSM25836
f.植物乳杆菌DSM25837，
或它们的功能等同物。
10.一种控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌的生长的方法，其特征在于使用包含单独的或与丙酸杆菌属的细菌、与乳杆菌属的另一菌株或与这两者组合的选自以下列表的乳杆菌的细菌制备物：
a.类干酪乳杆菌DSM25832
b.植物乳杆菌DSM25833
c.植物乳杆菌DSM25834
d.植物乳杆菌DSM25835
e.植物乳杆菌DSM25836
f.植物乳杆菌DSM25837，
或它们的功能等同物。
11.选自以下列表的活乳杆菌细菌的制备物在控制诸如细菌、酵母或霉菌的污染物的生长方面的用途：
a.类干酪乳杆菌DSM25832
b.植物乳杆菌DSM25833
c.植物乳杆菌DSM25834
d.植物乳杆菌DSM25835
e.植物乳杆菌DSM25836
f.植物乳杆菌DSM25837，
或它们的功能等同物。
12.一种控制污染物诸如细菌、酵母或霉菌在组合物中的生长的方法，所述方法的特征在于使所述组合物中存在选自以下的活乳杆菌细菌菌株：
a.类干酪乳杆菌DSM25832
b.植物乳杆菌DSM25833
c.植物乳杆菌DSM25834
d.植物乳杆菌DSM25835
e.植物乳杆菌DSM25836
f.植物乳杆菌DSM25837，
或它们的功能等同物。
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