CN104474068B - 鸡矢藤提取物及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明公开鸡矢藤提取物，所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物，其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物主要由20.0％‑50.0％的鸡矢藤苷酸、2.0％‑25.0％的鸡矢藤苷和1.0％‑10.0％鸡矢藤苷酸甲酯组成；所述鸡矢藤提取物按照如下方法制备：a)鸡矢藤药材经乙醇提取得提取液；b)提取液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析，依次用水和80‑90％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压干燥，即得鸡矢藤提取物。本发明也提供所述的鸡矢藤提取物在制备降尿酸同时镇痛的抗痛风关节炎的药物中的应用。

Description

鸡矢藤提取物及其用途
技术领域
本发明涉及鸡矢藤提取物及其用途。
背景技术
鸡矢藤为茜草科鸡矢藤属植物鸡矢藤Paederia scandens(Lour.)Merr.的地上部分或全草，为传统中草药，又名鸡屎藤、牛皮冻、解暑藤、狗屁藤、臭藤、清风藤等，鸡矢藤味苷酸、性平，入肝、胃、大肠经，有消食化积、祛风活血、止痛消肿的功效。分布于中国和东南亚多个国家，国内外对鸡矢藤的药理作用和鸡矢藤临床应用研究主要集中在抗炎、镇痛和治疗消化***疾病。近年来的化学成分研究表明鸡矢藤中主要含有含硫的环烯醚萜苷类化合物，有鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸和多种含硫的环烯醚萜苷二聚体。
CN101129524涉及一种鸡矢藤提取物，该申请用含乙醇(20％～95％)溶剂提取鸡矢藤药材，并指出该方法的提取物中主要含有鸡屎藤苷(10-90％)和鸡屎藤苷酸甲酯(10-90％)。然而，该申请公开的方法操作繁琐、能耗高。
发明内容
本发明的第一个目的是提供鸡矢藤提取物，所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物，其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物主要由20.0％-50.0％的鸡矢藤苷酸、2.0％-25.0％的鸡矢藤苷和1.0％-10.0％鸡矢藤苷酸甲酯组成；所述鸡矢藤提取物按照如下方法制备：
a)鸡矢藤药材经乙醇提取得提取液；
b)提取液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析，依次用水和80-90％乙醇(优选85％乙醇)洗脱，收集洗脱液，减压干燥，即得鸡矢藤提取物。
根据一个优选的实施方式，所述药材与树脂重量之比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的大孔树脂。
根据另一个优选的实施方式，所述大孔吸附树脂的型号为D101。
根据一个优选的实施方式，所述树脂柱径高比为1∶8～1∶12。
根据另一个优选的实施方式，所述上样流速为1.0～2.0BV/h，洗脱流速为4～6BV/h。
根据本发明的一个特别优选的实施方式，本发明所述鸡矢藤提取物的制备方法包括如下具体步骤：
取鸡矢藤药材W kg，加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，过滤提取液，药渣再加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，过滤提取液，药渣再加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，过滤提取液，合并三次提取液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入4倍药材量的去离子水溶液使溶解，离心，离心上清液上D101大孔吸附树脂，药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的D101大孔树脂，树脂柱径高比为1∶8～1∶12，上样流速为1.0～2.0BV/h，洗脱流速为4～6BV/h。上样结束后，先用去离子水洗脱树脂柱2BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用85％乙醇洗脱树脂柱6BV，收集85％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤提取物。
本发明的第二个目的是提供鸡矢藤提取物在制备降尿酸同时镇痛的抗痛风关节炎的药物中的用途。
本发明的第三个目的是提供鸡矢藤提取物在制备治疗痛风关节炎的药物中的用途。
本发明的第四个目的是提供鸡矢藤提取物在制备治疗高尿酸血症的药物中的用途。
本发明的第五个目的是提供鸡矢藤提取物在制备防止尿酸盐沉积的药物中的用途。
本发明鸡矢藤提取物能够有效的降低高尿酸大鼠的血尿酸水平，同时还能有效改善醋酸致小鼠的疼痛扭体反应。综上所述，本发明的鸡矢藤提取物在降尿酸的同时具有镇痛活性。
本发明的鸡矢藤提取物的制备方法工艺简单、设计合理，环境污染小。该方法对环境无污染，乙醇用量少，成本较低，收率较高，适宜工业化生产。
附图说明
图1为实施例1所得鸡矢藤提取物的HPLC图谱，其中1表示鸡矢藤苷酸；2表示鸡矢藤苷；3表示鸡矢藤苷酸甲酯；
图2为实施例2所得鸡矢藤提取物的HPLC图谱，其中1表示鸡矢藤苷酸；2表示鸡矢藤苷；3表示鸡矢藤苷酸甲酯。
具体实施方式
实施例的HPLC分析方法条件如下：
流动相：乙腈：1‰甲酸水，梯度洗脱，检测波长245nm，流速0.5ml/min，柱温30℃，色谱柱Waters AtlantisTM C18，5u，250×4.6mm。
流动相梯度洗脱比例：
以鸡矢藤苷酸为标准品，外标法计算鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷和鸡矢藤苷酸甲酯的含量。
实施例1
取云南药材(批号：131110)1.0kg，加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，提取3次，过滤合并提取液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入去离子水至4L使溶解，离心，取上清液上D101大孔吸附树脂(药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的D101大孔树脂)，树脂柱径高比为1∶8，上样流速为1.0BV/h，上样结束后，洗脱流速为5BV/h，先用去离子水洗脱树脂柱2BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用85％乙醇洗脱树脂柱6BV，收集85％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤提取物16.43g，批号131110，得率为1.64％，以鸡矢藤苷酸为标准品外标法计算鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯的含量分别为27.33％、4.56％、6.53％。
实施例2
取云南药材(批号：131226)1.0kg，加入8倍量95％乙醇回流提取3小时，提取3次，过滤合并提取液，60℃减压浓缩，至无醇味，加入去离子水至4L使溶解，离心，取上清液上D101大孔吸附树脂(药材与树脂量比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的D101大孔树脂)，树脂柱径高比为1∶8，上样流速为1.0BV/h，上样结束后，洗脱流速为5BV/h，先用去离子水洗脱树脂柱2BV，弃去流穿液及水洗脱液，再用85％乙醇洗脱树脂柱6BV，收集85％乙醇的洗脱液，60℃减压浓缩，干燥，即得鸡矢藤提取物15.79g，批号131226，得率为1.58％，以鸡矢藤苷酸为标准品外标法计算鸡矢藤苷酸、鸡矢藤苷、鸡矢藤苷酸甲酯的含量分别为27.65％、18.23％、2.20％。
对比例
将1公斤洗净、破碎的鸡矢藤全草用体积浓度为70％的乙醇溶液回流提取2小时，收集该乙醇溶液并将其减压浓缩至干，得到约100g浸膏。用2升体积浓度为10％的乙醇溶液于45℃的温度下将步骤1的浸膏溶解，再将所得的溶液离心分离后取上液。将所得上清液通过大孔树脂(D101)层析柱，所述大孔树脂的重量为所得浸膏重量的20倍。用体积浓度为20％的乙醇溶液洗此大孔树脂柱至溶液颜色变淡，所述乙醇用量为该大孔树脂柱体积的10倍，流速为1柱体积/小时。再用体积浓度为60％的乙醇溶液洗此大孔树脂柱至溶液颜色变淡，所述乙醇用量为该大孔树脂柱体积的12倍，流速为1柱体积/小时，收集洗脱液。使得到的洗脱液经过减压浓缩干，得到鸡矢藤提取物10.32g。
药效试验结果
1.1药品与试剂
实施例1鸡矢藤提取物批号131110；对比例样品。
苯溴马隆(德国赫曼大药厂，1207062)；冰醋酸(国药集团化学试剂有限公司)；吲哚美辛肠溶片(上海信谊黄河制药有限公司批号：A100101)；尿酸(Uric acid)(美国Sigma公司，批号：LOT#BCBJ8674V)；尿酸检测试剂盒(日本世诺临床诊断制品株式会社，批号YZB/JAP 6068-2012)。
1.2动物
雄性ICR小鼠，体重18-22g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供动物中心提供。合格证号：SCXK 2008-0016。
雄性SD大鼠，体重130-150g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供动物中心提供。合格证号：SCXK 2008-0016。
1.3仪器
分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司，型号：PL601-L)；鼠称(南京以马内利医药仪器有限公司)；全自动血清生化分析仪(日本日立公司，型号：7080)；
1.4方法
(1)长期预防给药对大鼠高尿酸血症模型
70只大鼠随机分为正常组、模型组、鸡矢藤提取物剂量不同组、阳性药组，每组10只。鸡矢藤提取物的剂量组设为25、50、100、200、400mg·kg·d-1，以上药物均用0.5％CMC-Na溶液配制成溶液或混悬液。空白组和模型组每日灌服生理盐水1ml/d，其余各组灌服等体积相应药物，连续灌胃7天，每日1次。第7天，除空白组外，余各组在灌胃给药后1小时腹腔注射剂量为250mg/kg尿酸混悬液造模。1小时后大鼠眼底静脉丛插管取血0.5mL，冰浴保存，离心，血清在一小时内全自动血清生化分析仪检测尿酸含量，结果见表1。
(2)单次治疗给药对大鼠高尿酸血症模型
33只大鼠随机分为正常组、模型组、鸡矢藤提取物组和对比例样品组，每组10只。两个给药组剂量均为400mg·kg·d-1，以上药物均用0.5％CMC-Na溶液配制成溶液或混悬液。空白组和模型组每日灌服生理盐水1ml，其余各组灌服等体积相应药物，除空白组外，余各组在灌胃给药后1小时腹腔注射剂量为250mg/kg尿酸混悬液造模。1小时后大鼠眼底静脉丛插管取血0.5mL，冰浴保存，离心，血清在一小时内全自动血清生化分析仪检测尿酸含量，结果见表2
(3)对醋酸致小鼠扭体的影响
70只雄性标重ICR小鼠随机分为模型组、鸡矢藤提取物剂量不同组、阳性药组，每组10只。模型组给予生理盐水，阳性对照组给予吲哚美辛(10mg·kg·d-1)，鸡矢藤提取物的剂量组设为50、100、200、400和800mg·kg·d-1，以上药物均用0.5％CMC-Na溶液配制成溶液或混悬液。于末次给药60min后，腹腔注射0.7％醋酸溶液0.1mL/10g，以小鼠腹部内凹，后肢伸直，臀部抬起为指标，记录15min内小鼠扭体反应次数，并计算镇痛抑制百分率，结果见表3。
镇痛百分率％＝(对照组扭体均数-给药组扭体均数)/对照组扭体均数×100％。
所有数据均用SPSS20.0软件进行统计处理，以表示，采用T检验。
1.5结果
(1)长期预防给药对高尿酸血症大鼠血清尿酸的影响：由表1可知，高尿酸血症模型组大鼠血清尿酸水平明显高于正常组(P＜0.01)，与模型组比较，当阳性药给予50mg/kg时能显著地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平(P＜0.05)；当鸡矢藤提取物给予50、100、200、400mg/kg时能显著地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平(P＜0.05，0.01)，且呈浓度依赖性。
表1长期预防给药对大鼠高尿酸血症的影响
与正常组比较：##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
(2)单次治疗给药对高尿酸血症大鼠血清尿酸的影响：由表2可知，高尿酸血症模型组大鼠血清尿酸水平明显高于正常组(P＜0.01)，与模型组比较，当对比例样品给予400mg/kg时，大鼠血尿酸无显著性改变；当鸡矢藤提取物给予400mg/kg时能显著地降低高尿酸血症大鼠的血清尿酸水平(P＜0.05)。说明鸡矢藤提取物降尿酸作用优于对比例样品。
表2单次治疗给药对大鼠高尿酸血症的影向
与正常组比较：##P＜0.01；与模型组比较：*P＜0.05
(3)对醋酸导致的小鼠扭体的影响：如表3所示，与模型组比较，给予吲哚美辛10mg/kg能有效抑制醋酸诱导的小鼠扭体反应(P＜0.001)；EPS不同剂量均能能有效减少15min内醋酸诱导的小鼠扭体次数(50mg/kg，P＜0.01；100mg/kg，P＜0.001，200mg/kg，P＜0.001；400mg/kg，P＜0.001；800mg/kg，P＜0.001)；抑制率分别为46.4％、65.2％、68.0％、76.2％和74.9％，100-800mg/kg剂量间抑制率差别不大，有较明显的剂量依赖性。
表3对醋酸导致的小鼠扭体次数的影响(n＝10)
与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001
高尿酸血症是痛风性关节炎的重要生化基础，维持正常的血清尿酸水平，对于防止尿酸盐沉积有重要的生化基础意义，同时，炎症引起的疼痛是治疗痛风性关节炎的主要治疗目标之一。本发明药效实验结果表明，本发明所得的鸡矢藤提取物能够有效的降低高尿酸大鼠的血尿酸水平，同时还能有效改善醋酸致小鼠的疼痛扭体反应。综上所述，本发明鸡矢藤提取物在降尿酸的同时具有镇痛活性。

Claims (1)

1.鸡矢藤提取物在制备降尿酸同时镇痛的抗痛风关节炎的药物中的用途，所述提取物含有环烯醚萜苷类化合物，其特征在于所述环烯醚萜苷类化合物主要由20.0％-50.0％的鸡矢藤苷酸、2.0％-25.0％的鸡矢藤苷和1.0％-10.0％鸡矢藤苷酸甲酯组成；
所述鸡矢藤提取物按照如下方法制备：
a)鸡矢藤药材经乙醇提取得提取液；
b)提取液浓缩至无醇味上大孔吸附树脂层析，依次用水和85％乙醇洗脱，收集洗脱液，减压干燥，即得鸡矢藤提取物；
所述药材与树脂重量之比为1kg药材需300ml经无水乙醇溶胀预处理后的大孔树脂；
所述大孔吸附树脂的型号为D101；
所述树脂柱径高比为1:8～1:12；
所述上样流速为1.0～2.0BV/h，洗脱流速为4～6BV/h。
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