CN104782406B - 一种食用菌的培养方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种食用菌的培养方法，该方法包括以下步骤：在全开放条件下，用含有0.3～0.8％高锰酸钾的溶液浸泡食用菌菌种60～120min后继续培养。本发明提供的方法操作简便，效果优异，特别适用于野外采集的菌种、受污染菌种或长杂菌的菌种培养。

Description

一种食用菌的培养方法

技术领域

本发明涉及食用菌的培养方法，具体涉及一种用含有高锰酸钾的溶液浸泡食用菌后继续培养的方法。

背景技术

食用菌菌种分离培养是十分重要的研究领域，每年需要的食用菌菌种数以百万吨计。野生菌种的分离、纯化和栽培菌种的保存、三级扩繁、提纯复壮都需要制备母种、原种、栽培种，传统的制备母种的方法都是斜面试管种，200～500元/支，试管口为棉塞、化纤塞、硅胶塞等，很容易污染、松动、脱落，菌种量特别少，再接种时去棉塞、化纤塞、硅胶塞等不方便，很容易再污染，试管太长不方便取、接菌种，并且不能保证菌种的纯度，有无杂菌(如细菌等无色杂菌)肉眼很难判断。

在传统培养工艺中，一般都添加防霉剂、抗生素等，并且有10％左右因培养失败而报废，菌种的菌株与植物的品种一样是宝贵的资源，分离、纯化、培养、复壮在很多科研课题中是关键性技术，如种子发芽菌、冬虫夏草菌、内生菌、共生菌、肠道有益菌、土壤有益菌、病虫害的致病菌、特殊天然产物菌等，只要能分离、纯化、培养、复壮，进一步的研究就有了可靠的基础。

专利文献CN104012576A公开了一种养殖食用菌用的消毒剂，所述消毒剂的组分包括：以体积份计，高锰酸钾溶液2-5mL、过氧乙酸6-12mL、乙醇溶液23-28mL、二氯异氰尿酸钠7-13mL、乙二胺四乙酸钠0.5-1.2mL、去离子水40-50mL，将所述各组分在常温常压下搅拌一定时间，并分装、塑封即得到所述消毒剂。通过上述方式，本发明的养殖食用菌用的消毒剂，可以对细菌、放线菌、酵母菌、霉菌等多种食用菌菌种制培过程中会出现的杂菌有消除和预防作用；但是，其发明仅为一种消毒剂，而且处方组份复杂，其发明没有公开所述消毒剂在菌种培养过程中是如何使用的，没有具体操作方案及使用效果，对已经生长杂菌的菌种进行局部消毒，不能对菌种本身和培养基消毒，与单用乙醇消毒没有本质的区别，没有处理菌种本身的能力，没有事先预防、处理菌种的意义，没有改变食用菌的培养方式和过程，没有产生积极的影响。该发明中除了高锰酸钾外还含有大量的其它化学物质，对于食用菌菌种而言，防霉剂、抗生素或多种化学物质的添加、使用会影响菌种本身的健康，不利于菌种的生长。

同时，虽然现有技术报道了高锰酸钾可以用于食用菌培养过程中的消毒，但那是与甲醛溶液反应产生蒸汽用于环境、空气、器皿熏蒸消毒，与本发明有本质的区别。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的缺陷，提供一种简便、高效培养食用菌的方法。

具体而言，本发明提供的方法包括以下步骤：在全开放条件下，用含有0.3～0.8％高锰酸钾的溶液浸泡食用菌菌种60～120min，继续培养食用菌菌种；在浸泡过程中，每30min更换一次高锰酸钾溶液，可以避免有机物过多使高锰酸钾溶液失效，从而使消毒尽可能彻底。

本发明所述食用菌菌种包括球孢虫草菌菌种-子座、茯苓菌菌种、灵芝菌菌种、天麻发芽菌菌种、蜜环菌菌种、香菇菌菌种、平菇菌菌种等；本发明提供的方法对于野外采集的食用菌菌种、受污染的食用菌菌种、长杂菌的食用菌菌种的培养效果尤为显著。

本发明使用的高锰酸钾溶液为强氧化剂，在各行各业有着十分广泛的用途，杀菌谱广、杀菌力强而短暂，破坏力不强，易受有机物和还原剂的影响，见光、有机物、还原剂分解，因此，高锰酸钾溶液不残留、不持久，浓度适当时对菌种没有伤害，不必用蒸馏水反复冲洗，可以添加进入培养基中，培养过程中可以添加高锰酸钾溶液浸泡消毒，转瓶培养时可以添加高锰酸钾溶液浸泡消毒，有效期约为2小时，2小时以后自动失效。高锰酸钾溶液对细菌、真菌、病毒、病虫害等病原体都有很好的杀灭作用，比多菌灵、代森锰锌好，而且可以作为钾肥、锰肥，环保、安全、方便，用于食用菌菌种分离培养材料表面浸泡消毒非常合适，应用自如，环保、安全、方便、彻底。在本发明中，将高锰酸钾用常水或蒸馏水、纯净水配制成0.3％～0.8％的高锰酸钾溶液，临用时配制，有条件的用蒸馏水、纯净水配制，没有条件或大量使用时用常水配制即可。用于菌种分离培养材料表面浸泡消毒，材料可以不经过清洗，消毒后材料可以不经过漂洗，可以连同高锰酸钾溶液一起加入培养基中。

当所述食用菌菌种为野外采集的食用菌菌种时，所述方法包括以下步骤：

(1)在固体或半固体培养基中加入0.3～0.8％丙酸钠，加水溶解完全后，分装于组培瓶中，120～125℃下灭菌25～35分钟，放凉后取出，盖紧，冷却至室温后，即得培养基；

(2)从野外采集食用菌菌种，在全开放条件下，在5～10倍于菌种体积的0.5～0.8％高锰酸钾溶液中浸泡60～120min，每30min更换一次含有高锰酸钾的溶液，浸泡结束后不使用清水漂洗；

(3)在全开放条件下，将经步骤(2)处理后的菌种接入步骤(1)所得培养基中，在15～25℃下培养5～7天，即得扩增繁殖的食用菌菌种；所得菌种的污染率低。

当所述食用菌菌种为在长期储存过程中受污染的食用菌菌种时，所述方法包括以下步骤：

(1)在固体或半固体培养基中加入0.3～0.8％丙酸钠，加水溶解完全后，分装于组培瓶中，120～125℃下灭菌25～35分钟，放凉后取出，盖紧，冷却至室温后，即得培养基；

(2)取受污染的食用菌菌种，在全开放条件下，在5～10倍于菌种体积的0.5～0.8％高锰酸钾溶液中浸泡60～120min，每30min更换一次含有高锰酸钾的溶液，浸泡结束后不使用清水漂洗；

(3)在全开放条件下，将经步骤(2)处理后的菌种接入步骤(1)所得培养基中，在15～25℃下培养5～7天，即得；所得菌种的污染率显著降低，且菌种可以健康生长。

本发明将培养容器限定为培养瓶。对于本发明提供的技术方案，培养容器要求使用方便，从高温灭菌、通气培养、购买、运输、保存、再接种等各个环节避免杂菌的污染；要将培养材料表面的微生物杀死，对材料本身要无伤害或伤害很轻微，不残留，安全、环保，本发明选择组培瓶培养的效果优于斜面培养，量大，使用方便。

培养基中加入0.3％～0.8％的丙酸钠。在食品工业领域，丙酸钠用于面包、糕点防霉，安全无毒。在培养基中添加0.3～0.8％丙酸钠，加水加热溶解完全后，与其他半固体、固体培养基一起分装于组培瓶中，120～125℃下灭菌25～35分钟，放凉后取出，盖紧，冷却至室温后，本发明可以采用全开放式接种，也可以于接种箱内无菌接种。

如果在培养过程中由于意外情况出现长杂菌现象，所述食用菌菌种为培养过程中长杂菌的食用菌菌种，所述方法包括以下步骤：

取长杂菌的食用菌菌种，在全开放条件下，在培养菌种的容器中加入含有0.3～0.4％高锰酸钾和0.3～0.4％丙酸钠的混合溶液，将菌种和培养基共同浸泡60～120min，每30min更换一次混合溶液，浸泡结束后，倒出混合溶液，继续培养，所得食用菌的含杂菌率显著降低，且菌种可以继续健康地生长。

本发明所述高锰酸钾和丙酸钠的浓度单位％的含义均为g/100ml。

本发明提供的方法具有以下显著优点：1、组培瓶代替试管斜面培养，优点很多，从高温灭菌、通气培养、购买、运输、保存、取、接菌种等各个环节避免了杂菌的污染，使用方便；2、培养基加丙酸钠，安全无毒，可以全开放式接种不长杂菌，操作方便；3、菌种不管有无杂菌用高锰酸钾溶液浸泡消毒，野外菌种和长杂菌的菌种用高锰酸钾溶液浸泡消毒，安全无毒，操作方便，材料不必反复清洗，不受消毒时间的限制，高锰酸钾溶液消毒后也不必用蒸馏水反复冲洗，无菌滤纸吸干等复杂的操作步骤，对菌种没有伤害，可以添加进入培养基中，培养过程中如果长杂菌可以添加高锰酸钾溶液浸泡消毒；4、对在菌种培养过程中已严重污染或严重长杂菌的菌种也可以分离培养，只要有菌丝、孢子和活力，都能分离培养成功，可以避免来源不易和贵重的菌种分离培养失败，培养过程中和转瓶培养时可以添加高锰酸钾溶液浸泡消毒，从而可以挽救难得的菌种；5、菌种母种、原种、栽培种在扩大培养时，为了保证菌种的纯度，避免培养过程中的杂菌发生，接种前将菌种用高锰酸钾溶液表面浸泡消毒1～2小时；6、菌种培养过程中生长杂菌，可以将有杂菌的培养物用含有0.3～0.4％高锰酸钾和0.3～0.4％丙酸钠的混合溶液浸泡1～2小时，倒出消毒液后再继续培养，高锰酸钾溶液表面浸泡消毒几个小时也不会伤害菌种，中间可以更换新的高锰酸钾溶液浸泡，消毒更方便、更彻底、更安全。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1野外采集的球孢虫草菌菌种-子座菌种

(1)取土豆丝100g、大米粒50g、新鲜玉米粒100g、麦麸50g、葡萄糖10g、过磷酸钙2g，丙酸钠2g，加水500ml，混合均匀后加热煎煮，搅拌成糊状后，等体积分装于容积为300ml的组培瓶中，125℃下灭菌35分钟，放凉后取出，盖紧，冷却至室温后，即得培养基；

(2)取从野外采集的球孢虫草菌菌种-子座菌种，在全开放条件下，在10倍于菌种体积的0.8％高锰酸钾溶液中浸泡，每隔30min更换一次高锰酸钾溶液，共浸泡120min；

(3)在全开放条件下，将经步骤(2)处理后的菌种接入步骤(1)所得培养基中，在20℃条件下培养7天后，即得扩增繁殖的球孢虫草菌菌种-子座菌种。

各步骤所述高锰酸钾溶液均为现用现配；按照该实施例所述方法培养，所得菌种污染率仅为4％。

实施例2染菌蜜环菌菌种

(1)取土豆丝100g、大米粒50g、新鲜玉米粒100g、麦麸50g、葡萄糖10g、过磷酸钙2g，丙酸钠2g，加水500ml，混合均匀后加热煎煮，搅拌成糊状后，等体积分装于容积为300ml的组培瓶中，120℃下灭菌25分钟，放凉后取出，盖紧，冷却至室温后，即得培养基；

(2)取放置冰柜内一年、因有时停电而出现少部分绿霉、黑霉的蜜环菌菌种，在全开放条件下，在5倍于菌种体积的0.5％高锰酸钾溶液中浸泡，每隔30min更换一次高锰酸钾溶液，共浸泡60min；

(3)在全开放条件下，将经步骤(2)处理后的菌种接入步骤(1)所得培养基中，在20℃条件下培养5天后，多数菌种瓶、菌袋无污染，完全成功，少部分菌种瓶、菌袋仍然有污染，污染率仅为10％。

各步骤所述高锰酸钾溶液均为现用现配。

实施例3染菌茯苓菌种栽培种

取培养了10天的茯苓菌种栽培种，所述菌种生长了少部分包括绿霉、黑霉、黄霉的霉菌；在全开放条件下，在培养菌种的容器中加入含有0.4％高锰酸钾和0.4％丙酸钠的混合溶液，将菌种和培养基共同浸泡120min，每30min更换一次混合溶液，浸泡结束后，倒出混合溶液，继续培养，多数菌种瓶、菌袋无污染，完全成功，少部分菌种瓶、菌袋仍然有污染，污染率为30％。

所述含有高锰酸钾和丙酸钠的溶液为现用现配。

实施例4染菌平菇菌种

取培养了10天的平菇菌种，所述菌种生长了少部分包括绿霉、黑霉、黄霉的霉菌；在全开放条件下，在培养菌种的容器中加入含有0.3％高锰酸钾和0.3％丙酸钠的混合溶液，将菌种和培养基共同浸泡60min，每30min更换一次混合溶液，浸泡结束后，倒出混合溶液，继续培养，多数菌种瓶、菌袋无污染，完全成功，少部分菌种瓶、菌袋仍然有污染，污染率为20％。

所述含有高锰酸钾和丙酸钠的溶液为现用现配。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (4)

1.一种食用菌的培养方法，其特征在于，所述食用菌菌种为野外采集的食用菌菌种，所述方法包括以下步骤：

(1)在固体或半固体培养基中加入0.3～0.8％丙酸钠，加水溶解完全后，分装于组培瓶中，120～125℃下灭菌25～35分钟，放凉后取出，盖紧，冷却至室温后，即得培养基；

(2)从野外采集食用菌菌种，在全开放条件下，在5～10倍于菌种体积的0.5～0.8％高锰酸钾溶液中浸泡60～120min，每30min更换一次含有高锰酸钾的溶液，浸泡结束后不使用清水漂洗；

(3)在全开放条件下，将经步骤(2)处理后的菌种接入步骤(1)所得培养基中，在15～25℃下培养5～7天，即得扩增繁殖的食用菌菌种。

2.一种食用菌的培养方法，其特征在于，所述食用菌菌种为在长期储存过程中受污染的食用菌菌种，所述方法包括以下步骤：

(1)在固体或半固体培养基中加入0.3～0.8％丙酸钠，加水溶解完全后，分装于组培瓶中，120～125℃下灭菌25～35分钟，放凉后取出，盖紧，冷却至室温后，即得培养基；

(2)取受污染的食用菌菌种，在全开放条件下，在5～10倍于菌种体积的0.5～0.8％高锰酸钾溶液中浸泡60～120min，每30min更换一次含有高锰酸钾的溶液，浸泡结束后不使用清水漂洗；

(3)在全开放条件下，将经步骤(2)处理后的菌种接入步骤(1)所得培养基中，在15～25℃下培养5～7天，即得去除污染物的食用菌菌种。

3.一种食用菌的培养方法，其特征在于，所述食用菌菌种为培养过程中长杂菌的食用菌菌种，所述方法包括以下步骤：

取长杂菌的食用菌菌种，在全开放条件下，在培养菌种的容器中加入含有0.3～0.4％高锰酸钾和0.3～0.4％丙酸钠的混合溶液，将菌种和培养基共同浸泡60～120min，每30min更换一次混合溶液，浸泡结束后，倒出混合溶液，继续培养，即得去除杂菌的食用菌菌种；

所述杂菌为霉菌，包括绿霉、黑霉、黄霉中的一种或多种。

4.根据权利要求1、2或3所述的方法，其特征在于，所述食用菌菌种选自球孢虫草菌菌种-子座、茯苓菌菌种、灵芝菌菌种、天麻发芽菌菌种、蜜环菌菌种、香菇菌菌种或平菇菌菌种。