CN104781227A

CN104781227A - 环氧乙烷胺

Info

Publication number: CN104781227A
Application number: CN201380059201.2A
Authority: CN
Inventors: 延斯·斯滕·奥尔森
Original assignee: BIOTEK HOLDING APS V
Current assignee: BIOTEK HOLDING APS V
Priority date: 2012-11-15
Filing date: 2013-11-15
Publication date: 2015-07-15
Also published as: AU2013347263A1; IL238711A0; JP2015537012A; CA2891178A1; US20160102067A1; WO2014075676A1; WO2014075691A1; EA201590782A1; EP2920145A1

Abstract

在此披露了有用于治疗多种疾病的环氧乙烷胺。这些环氧乙烷胺在制备药物组合物中是有用的。该药物组合物可用于治疗或预防由具有脂质膜的病毒引起的疾病或该药物组合物可以用于需要细胞增殖或免疫调节的疾病。

Description

环氧乙烷胺

引言

本发明涉及新颖的环氧乙烷酰胺，它们可以用于多种目的，包括治疗由病毒、寄生虫和细菌引起的疾病。在此披露的化合物还用于治疗通过增殖作用减轻的疾病。实例包括口腔疾病和烧伤。已经从植物胡芦巴中分离出新颖的烷基酰胺。

背景技术

胡芦巴(在此亦称Fenugreek或TFG)是一种属于豆科的一年生草本植物。TFG种子是咖喱和一部分传统的印度和亚洲烹调用品的主要成分。TFG种子富含植物化学物质，包括蛋白质、甾体皂苷、类黄酮、鞣酸、硬脂酸、植物油、生物碱胡芦巴碱以及4-羟基异亮氨酸(Duke(杜克)，2001；Skaltsa(斯卡特萨)，2002)。

民俗传说和古老且传统的医学已经描述了TFG种子和TFG提取物的许多用途，包括刺激泌乳、调味品、助产、消化不良、改善一般健康状况以及改善新陈代谢(Basch(巴施)等人，2003；Ulbricht(乌布利希)等人，2007)。体外研究已经显示，TFG种子提取物既可以诱导细胞凋亡和细胞死亡又可以具有保护作用。主要经由类固醇组分，TFG提取物保护肝细胞免受乙醇介导的毒性(Kaviarasan(卡瓦拉森)等人，2006)，但是TFG提取物在细胞系H-60中也可以诱导细胞凋亡和细胞死亡(Hibasami(希巴萨米)等人，2003)。已经报道了TFG提取物的抗微生物活性。已经显示，来自TFG幼芽的提取物对胃部细菌幽门螺杆菌具有体外抗细菌作用(Randhir(兰迪尔)等人，2004；兰迪尔&Shetty(谢蒂)，2007)。然而，迄今为止还没有报道示出TFG提取物的抗病毒作用。

HSV-2和HIV-1两者都形成终身的潜伏感染并且对于任一病毒而言，既不存在有效的疫苗又没有研发出任何疗法。在全世界，估计3300万人被HIV-1感染并且超过5亿人被HSV-2感染(Looker(卢克)等人，2008；UNAIDS(***艾滋病规划署)，2010)。HIV-1感染最终导致获得性免疫缺陷综合征(AIDS)，其特征是共同地导致死亡的免疫应答退化、机会性感染的侵袭。HSV-2是一种非常常见且重要的引起生殖器粘膜的局部感染的人类病原体，但是HSV-2还可以感染皮肤和咽。一般地，HSV感染是良性且自限的。然而，在免疫受损的患者(例如HIV患者、移植患者)中以及在新生儿中，这些感染可以在中枢神经***中产生严重的感染，包括急性坏死性脑炎和脑膜炎(Roizman(罗伊兹曼)等人，2007)。此外，HSV-2是一种重要的HIV-1感染辅因子并且因此，抑制HSV-2感染可能可以减少HIV-1的传播(Freeman(弗里曼)等人，2006；Rebbapragada(莱巴普拉格达)等人，2007)。因此，研发对抗HIV-1和HSV-2的双重作用化合物和预防性药物可以成为抑制这些病毒的传播的重要目标。

本发明的烷基酰胺化合物来源于TFG的提取物。已经首次在此分离并表征了这些化合物。

本发明是针对提供用于治疗多种疾病的新颖化合物的目的，包括病毒相关的疾病、可以通过细胞增殖治愈或减轻的疾病以及可以通过免疫调节治疗的疾病。仍需要提供用于治疗此类疾病的新的化合物。

发明简要说明

本发明涉及具有以下通式的新颖的烷基酰胺化合物：

其中

X表示O或S，

R₁独立地表示氢；包含多达6个碳原子、任选地被一个或多个卤素原子或一个或多个基团R⁵取代的直链或支链烷基、烯基或炔基基团；或包含从3至7个碳原子的环烷基或环烯基基团，所述基团任选地被一个或多个基团R⁵或一个或多个卤素原子取代，

R₂表示包含3至24个碳原子的直链或支链烷基、烯基或炔基基团，所述基团任选地被一个或多个卤素原子、包含从3至6个碳原子的环烷基或一个或多个基团R⁵取代，

R₃和R₄可以独立地表示氢，包含多达六个碳原子的直链或支链烷基、烯基或炔基基团，所述基团任选地被一个或多个卤素原子取代，或可以与它们连接至其上的氮原子一起或与R₁一起形成包含多达三个选自氮、氧和硫的环杂原子的5至7元饱和或不饱和杂环，该环任选地被一个或多个选自卤素、硝基、-S(O)pR⁶、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷氧基、＝O以及＝NO-R⁵的基团取代，应理解的是当存在于该环中时，硫原子可以处于基团-SO₂-或-SO-的形式；

R₅表示包含多达六个碳原子的直链或支链烷基基团(所述基团任选地被一个或多个卤素原子取代)，C_1-4烷氧基，或包含从2至6个碳原子的直链或支链烯基或炔基基团，所述基团任选地被一个或多个卤素原子取代；并且

R⁶表示包含多达六个碳原子的直链或支链烷基基团，所述基团任选地被一个或多个卤素原子取代；

p是0、1或3，

及其药学上可接受的盐。

术语‘药学上可接受的盐’意指本领域中已知且接受的用于形成供治疗使用的盐的阳离子或阴离子的盐。适合的碱盐包括碱金属(例如钠和钾)盐、碱土金属(例如钙和镁)盐、氨和胺(例如二乙醇胺、三乙醇胺、辛胺，吗啉及二辛基甲胺)盐。适合的酸加成盐(例如由包含氨基的具有化学式(I)的化合物形成)包括无机酸盐，例如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐及硝酸盐，以及有机酸盐，例如乙酸盐。

具有化学式(I)或(II)的化合物可以按烯醇互变异构形式存在，这些互变异构形式可以给出绕烯醇双键的几何异构体。此外，在某些情况下，以上取代基可以有助于旋光异构和/或立体异构。所有此类形式及其混合物都被本发明所包括。

除非另外说明，在本说明书(包括随附权利要求书)中，在符号的定义中，以下定义通常适用于化学式(I)中的基团：‘卤素’意指氟、氯、溴或碘原子；并且‘烷基’意指包含从1至6个碳原子的直链或支链基团。

杂环可以包括吡啶、吡咯、咪唑、噁嗪(oxazibe)、噻嗪、嘧啶、哌嗪、氮丙啶、氮环丙烯(azirine)、哌啶、二氮环丙烯、噁唑烷、咪唑烷、噻唑烷、异噁唑烷、吡唑烷、异噻唑烷、噁唑、噻唑、异噁唑、吡唑、异噻唑、吗啉、哌嗪、噻嗪、噁嗪(oxazine)、吡嗪、哒嗪、二氮环丁烷、氮杂卓、氮杂环庚烷、三嗪、四嗪、三嗪、四嗪、三嗪、腺嘌呤、鸟嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、尿嘧啶、嘌呤、嘧啶、吲哚、苯并咪唑、苯并***或喹啉基团。

在本发明的某一方面中，R1是氢或具有1至3个碳原子的直链或支链烷基。在一个优选方面中，R1是氢。

在本发明的某一方面中，R2可以表示具有多达5个碳原子(例如5与20个碳原子之间)的直链或支链烷基或烯基。当R2是烯基时，可以存在1至4个双键并且这个或这些双键可以处于顺式和反式构型。双键可以位于从甲基末端计数第3、6或9碳原子处。

R3和R4适合地是氢或具有1-3个碳原子的直链或支链烷基。在本发明的一个优选方面中，R3和R4是相同的。

在本发明的某一方面中，具有化学式(I)的化合物优选属于由以下化学式表示的类型：

n＝2，3，4，5，或6

根据通式(I)和(II)的化合物可以按任何适合的方式获得。在第一方面中，通过化学合成获得这些化合物。在另一个方面中，从天然来源(例如从胡芦巴)获得这些化合物。当从胡芦巴获得这些化合物时，通常首先获得水性提取物并且从此提取物中分离本发明的化合物。

可以通过碾磨种子，向碾磨的种子中倒入热水或沸水，并且滤掉固体颗粒来获得水性提取物。还可以通过将种子在潮湿或水性条件下孵育3小时至7天来首先允许种子发芽而获得提取物。在种子发芽后，将它们用温度70℃或以上的温水(优选沸水)处理。在滤掉固体部分后，获得澄清的提取物。

首先可以将提取物用乙醇处理，以从提取物中沉淀大部分的植物残体和多糖。可以通过沉降或离心除去沉淀物。为了更方便地存储，可以将溶剂蒸发或以另外的方式除去，以便产生粉末。可替代地，可以将乙醇处理的提取物直接用于随后的工艺中。

随后，将粉末悬浮于水中并用强酸(例如盐酸)酸化至pH 1-4，优选pH 2。用水不混溶性有机溶剂(像庚烷)提取酸化的提取物。搅拌后，有机层与水层分离并且将水层用碱剂处理，以获得高于pH 9的pH，优选大约pH 10。将碱性水相再次用水不混溶性有机溶剂提取并搅拌。通过蒸发，例如通过在减压下蒸发除去溶剂而从回收的有机相中获得固体粉末。

在本发明的一个方面中，起始自可商购的物质通过化学合成来制备活性化合物(I)。在第一步中，可以使脂肪醛或酮化合物与硝基烷基反应，以获得在相邻碳上被OH基团和NO₂基团取代的烷烃链。在第二步中，可以通过消除OH基团而形成双键。任选地，在进行消除反应之前，首先使OH基团与酸(通常是甲酸、乙酸或无水乙酸)在酸催化剂的存在下反应以形成酯。在第三步中，通过使双键与过氧化物(像H₂O₂)和碱(像NaOH)的混合物反应而形成环氧乙烷环。在最后一步中，通过适合的还原剂(例如NaBH₄)将硝基还原为胺。任选地，可以在催化剂(例如Co²⁺)的存在下进行反应。

本发明的化合物可以用于治疗多种疾病。在第一方面中，本发明的化合物可以用于治愈由病毒引起的疾病。目前相信，具有脂质被膜的病毒尤其易受本发明的化合物的影响。此类病毒的实例包括单纯性疱疹病毒(HSV)、流感病毒、人***瘤病毒(HPV)或人类免疫缺陷病毒(HIV)。

在本发明的另一个方面中，这些化合物可以用于治疗需要细胞增殖的疾病。此类疾病包括：伤口(例如手术伤口或烧伤)、口腔疾病或牙周病。

在本发明的第三方面中，这些化合物可以用于治疗由免疫相关缺陷引起的疾病。更确切地说，本发明的化合物可以用于治疗受白介素-6、白介素-10、CCL3以及白介素-12影响的疾病。IL-6与许多疾病相关，例如糖尿病、动脉粥样硬化、抑郁、阿尔茨海默病、***性红斑狼疮、类风湿性关节炎、自身免疫性疾病、口腔疾病、冠状动脉疾病、病毒、细菌或原生动物感染的发展以及血液和实体恶性肿瘤。CCL3(亦称巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α)是MIP-1CC趋化因子亚家族的四个成员中的第一成员。CCL3能够将单核细胞/巨噬细胞吸引到炎症位点并且可以经由CCR5连接而潜在地抑制HIV-1的单核细胞/巨噬细胞摄取。因此，目前相信，在此披露的化合物可以用于治疗多种炎症疾病，例如哮喘、关节炎或多发性硬化。

在本发明的第四方面中，具有化学式I的化合物可以用作抗生素。尤其地，本发明的化合物已经在MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)和MSSA(甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌)上显示出作用。

附图概述

图1：带有注释的分离自提取物的化合物的NMR数据。

图2：TFG提取物的抗病毒作用。接种非洲绿猴肾细胞(Vero cell)并且在过夜培养后，用HSV-2株MS感染，HSV-2株MS用TFG提取物或PBS(作为对照)预孵育30min。24h后，将细胞固定并染色并对病毒噬斑计数。所有图都示出了三个独立实验的平均值+/-SD。

图3：接种Tzmbl-HIV-1报告细胞并在过夜培养后，用HIV-1株89.6或JR-CSF感染。在感染之前，将病毒用指定浓度的TFG提取物预孵育60min或用PBS(作为对照)。所有图都示出两个独立实验的平均值+/-SD。

图4：TFG提取物对抗甲型流感病毒的抗病毒作用。接种MRC-5成纤维细胞并在过夜培养后，用CMV株AD169感染，该CMV株已用PBS(对照，CTR)或稀释100倍或30倍的TFG提取物处理。感染3天后，将细胞固定并针对CMV蛋白累积染色。使用荧光显微镜检术对感染细胞的数目计数。这些图表示显示出相似结果的三个独立实验之一的平均值+/-SD。

图5：TFG提取物对抗人巨细胞病毒的抗病毒作用。接种MDCK细胞并在过夜培养后，用甲型流感病毒感染，该病毒已用PBS(对照，CTR)或稀释100倍或30倍的TFG提取物处理。使用荧光染色对感染细胞的数目进行量化。这些图表示显示出相似结果的两个独立实验之一的平均值+/-SD。

图6：TFG提取物的毒性和细胞增殖作用的评估。将非洲绿猴肾细胞用指定浓度的TFG提取物处理2天并使用MTT测定评估细胞生活力。

图7：TFG提取物的毒性和细胞增殖作用的评估将人类角质化细胞HaCaT细胞用指定浓度的TFG提取物处理2天并使用MTT测定评估细胞生活力。

图8：将人类PBMC用指定浓度的TFG提取物处理并在孵育两天后，使用细胞滴度发光(cell titre glow)测定细胞的生活力。描绘的数据表示2个独立实验的平均值+/-SD。

图9：热稳定的TFG提取物的抗病毒作用主要是经由与病毒进行直接相互作用。在时刻0给予HSV-2感染之前、同时或之后，将非洲绿猴肾细胞用TFG提取物(20μg/ml)处理。病毒感染24h后，将细胞用结晶紫染色并且随后对病毒噬斑计数。

图10：在添加HSV-2之前，向非洲绿猴肾细胞中添加TFG提取物(20μg/ml)或等量的热处理的TFG提取物。24h后，将细胞染色并对噬斑数目计数。图中的数据表示三个单独实验的平均值+/-SD。

图11：添加脂质抑制TFG提取物的抗病毒作用。将每个样品30μl的TFG提取物(100μg/ml)与指定体积的脂质体2000(lipofectamin2000)孵育20min。之后，在感染非洲绿猴肾细胞之前，立即将提取物与HSV-2孵育30min。24h后，将细胞染色并确定病毒噬斑的数目。数据表示四个独立实验的平均值+/-SD。

图12：TFG提取物诱导并增加促炎性IL-6和CCL3的分泌。A至D)在不存在或存在TFG提取物(10μg/ml或20μg/ml)的情况下，用LPS(100ng/ml)、R848(0.5μg/ml)或TNF-α(25ng/ml)或培养基(作为对照)刺激新鲜制备的PBMC。20h后，收获细胞培养基。使用ELISA测量分泌的IL-6和CCL3的水平。E)接种单核THP-1细胞并在不存在或存在TFG提取物(20μg/ml或200μg/ml)的情况下，用TNF-α(25ng/ml)或培养基(作为对照)加以刺激。20min后，收获细胞培养基。使用ELISA测量分泌的CCL3的水平。描绘的数据表示四至六个供体(A至D)或四个独立实验(E)的平均值+/-SD。

图13：TFG提取物在人类原代细胞中对IL-10和IL-12的作用。在不存在或存在TFG提取物(10μg/ml或20μg/ml)的情况下，用LPS(100ng/ml)、R848(0.5μg/ml)或TNF-α(25ng/ml)或培养基(作为对照)刺激新鲜制备的PBMC。20h后，收获细胞培养基。使用ELISA测量分泌的IL-10(A至C)和IL-12(D和E)的水平。描绘的数据表示六个供体(A至C)或四个供体(D和E)的平均值+/-SD。

图14：TFG提取物对***HSV-2感染的体内作用。用包含0.5mg/mlTFG提取物(A)或包含2.5mg/ml TFG提取物(B)的凝胶处理小鼠。在用HSV-2(株333，6.67×104pfu/小鼠)进行***激发之前12h和之后12h，施加TFG提取物。在感染后每天，使用标准评分***对疾病严重性评分。描绘的数据表示两个独立实验(对于A而言)和一个实验(对于B而言)的平均值+/-SD。

图15：恶性疟原虫在存在2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺或DMSO的情况下的生长率。48小时后，测量掺入的[3H]-次黄嘌呤的量，以与被寄生的红细胞的数目相关联。

详细说明

在此描述的化合物可以用于治疗多种病毒相关疾病。病毒感染是指由病毒引起的感染。不同于细菌，病毒复制依赖于宿主细胞，利用宿主***，例如转录因子和翻译机器。由病毒引起的最常见的人类疾病包括普通感冒、流感、感冒疮以及疣。

在根据本发明的一个实施例中，如在此描述的化合物用于治疗病毒感染，例如普通感冒、流感、感冒疮以及疣。

可以用在此描述的化合物治疗的病毒相关疾病的具体实例包括单纯性疱疹病毒(HSV)。可以用在此描述的化合物治疗单纯性疱疹病毒1和2(HSV-1和HSV-2)，然而，在本发明的一个优选方面中，该疾病是由HSV-2引起。HSV-1(其大多产生感冒疮)和HSV-2(其大多产生生殖器疱疹)两者都是遍在且具接触传染性的。当感染者正在产生且排出该病毒时，它们可以进行传播。

单纯性疱疹病毒感染的症状包括在皮肤或口、唇或生殖器的粘膜中起水泡。病损愈合为具疱疹疾病特征的痂。有时候，这些病毒在爆发期间引起非常温和或非典型的症状。然而，作为亲神经且具神经侵染性的病毒，HSV-1和HSV-2通过潜伏在神经元的细胞体中并躲避其中的免疫***而持续存在于体内。在初始或初次感染后，一些感染者经历病毒再活化的零星发作或爆发。在爆发时，该病毒在神经细胞中变得活化并且经由神经元的轴突运送至皮肤，在皮肤中发生病毒复制与排出并引起新疮。

疱疹病毒的结构由一个相对较大的双链的线性DNA基因组组成，该基因组被包于称为衣壳的二十面体蛋白笼形物中，该蛋白笼形物被包裹于称为被膜的脂双层中。该被膜借助外被连接至衣壳。此完整的颗粒被称作病毒体。目前相信，本发明的化合物通过与脂双层相互作用而发挥其作用。

HSV通过干扰细胞表面上的抗原呈递I类MHC而逃避免疫***。其通过HSV阻断由ICP-47[15]的分泌而诱导的TAP转运体而实现这点。在经由高尔基体被运送之前，TAP维持I类MHC分子的完整性，用于为细胞表面上的CD8+CTL所识别。

疱疹病毒形成终身的感染并且该病毒当前不能被从体内根除。治疗通常涉及通用的抗病毒药，这些抗病毒药干扰病毒复制，从而减少爆发相关的病损的身体严重性并降低传染给他人的可能性。因此，本发明的化合物清楚地满足了提供比现在的通用抗病毒药更有效，或至少作为其替代方案的治疗方法的需要。

可以通过本发明化合物治愈或减轻的另一种疾病是流感。流感(俗称flu)是一种由正粘病毒科(流感病毒)的RNA病毒引起的鸟类和哺乳类的传染性疾病。术语流感包括由甲型流感病毒、乙型流感病毒或丙型流感病毒引起的疾病。最常见的症状是发冷、发热、咽喉痛、肌肉痛、头痛(通常是严重的)、咳嗽、虚弱/疲劳以及浑身不舒服。尽管经常将它与其他流感样疾病(尤其是普通感冒)相混淆，但是流感是一种由不同类型的病毒引起的更严重的疾病。流感可以产生恶心和呕吐，特别在儿童中。

典型地，流感通过产生包含病毒的气溶胶的咳嗽或喷嚏而经由空气传播。流感还可以通过直接接触鸟粪或鼻腔分泌物或经由接触被污染的表面而传播。尽管还不完全清楚哪种传播手段最重要，但是认为空气传播的气溶胶引起大部分感染。

RNA基因组存在于流感病毒颗粒的内部并结合至核糖核酸蛋白。衣壳包围着遗传材料并且脂质被膜存在于衣壳外。存在于脂质被膜上的是多种蛋白质，包括血球凝集素和离子通道。目前，假定本发明的化合物通过与脂质膜相互作用而发挥其作用。

本发明的化合物还可以用于治疗由人***瘤病毒(HPV)引起的疾病。疣是常见的与人***瘤病毒(HPV)感染相关的良性表皮病损。疣是指一系列病症，其不同之处在于引起这些病症的***瘤病毒的类型、形态学、在身体上(例如在手指、脚，面部(例如唇或靠近眼睑)或性区上)的外观。疣的实例包括由HPV 1、2、4、27及29引起的普通疣(寻常疣)，由HPV 3、10、28及49引起的扁平疣(flat wart，verruca plana)，丝状或指状疣，由HPV 1引起的掌跖疣(疣，足背疣)，镶嵌疣以及生殖器疣(花柳疣，***，锋利疣)。

除了疼痛之外，疣还可以是一个美容问题，对于疣没有有效的治疗，在可供使用的治疗已经终止后数月或数年疣频繁地复发。

在根据本发明的一个优选实施例中，在此披露的化合物用于治疗疣，例如位于手指、脚、面部(例如唇或靠近眼睑)或性区上的疣。

在本发明的另一个方面中，用在此披露的化合物治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)相关疾病。HIV是一种引起获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的慢病毒，该综合征是人类中一种免疫***的逐渐破坏允许危及生命的机会性感染和癌症发迹的病症。HIV包括若干亚型，包括HIV-1和HIV-2。

HIV感染人类免疫***中的活细胞，例如辅助性T细胞(特别是CD4+T细胞)、巨噬细胞和树突细胞。HIV感染通过三种主要机制导致CD4+T细胞的水平低下：第一种，病毒直接杀死受感染细胞；第二种，受感染细胞的细胞凋亡速率增加；以及第三种，通过识别受感染细胞的CD8细胞毒性淋巴细胞杀死受感染的CD4+T细胞。当CD4+T细胞数目降至临界水平以下时，失去细胞介导的免疫，并且身体逐渐地变得更易受机会性感染的影响。

HIV病毒颗粒大致是球形的，直径约120nm，比红细胞小大约60倍，但是对于病毒而言，仍是较大的。它由两个拷贝的编码病毒的九个基因的正义单链RNA构成，这些基因被圆锥形衣壳封闭，该衣壳由2,000个拷贝的病毒蛋白p24构成。该单链RNA紧紧地结合至核壳蛋白p7以及病毒体的发展所需的酶，例如逆转录酶、蛋白酶、核糖核酸酶以及整合酶。由病毒蛋白p17构成的基质围绕着衣壳，从而保证病毒体颗粒的完整性。

这反过来被病毒被膜包围，该病毒被膜由当新形成的病毒颗粒从人类细胞出芽时取自该细胞膜的称作磷脂的两层脂肪分子构成。目前相信，本发明的化合物与磷脂双分子层相互作用，以发挥其作用。诸位发明人目前未知具体的作用方式。

本发明化合物可以用于治疗多种疾病和障碍，包括需要细胞增殖的疾病。可以被治愈或症状可以被减轻的疾病的实例是牙周病。牙周炎(牙周变性，牙周病，脓溢)是一种由牙龈炎的发展而造成的牙齿障碍，涉及支持牙齿的韧带和骨质的炎症和感染。

如果数年未加以治疗，它可以导致失去支持牙齿的骨质并且最终失去牙齿。这些病症可以涉及一个或多个牙齿。

除变红、肿胀和牙龈容易出血之外，牙龈炎与很少的不舒适或无不舒适相关。牙龈炎通常由不适当的口腔卫生用品引起，将细菌留在牙齿的噬斑中，从而引起牙龈发炎。通过专业治疗和良好的口腔家庭护理，牙龈炎是可逆的。如果对牙龈炎不加以治疗，噬斑可以在牙龈线下面扩展并生长并且该病症可以发展为牙周炎。由细菌释放在噬斑中的毒素在牙龈中启动炎症应答，这可以是慢性的并破坏支持牙齿的骨质。牙龈与牙齿分离，从而形成被感染的袋(pocket)(牙齿与牙龈之间的空间)。随着疾病发展，这些袋加深并且更多的牙龈组织和骨质受到破坏。通常，此种破坏过程具有非常温和的症状。最终，牙齿可以变得松动并且可能不得不被拔除。

慢性牙周炎被认为是牙周炎的最频繁出现的形式。慢性牙周炎使得牙齿的支持组织出现炎症，逐渐丢失附接和骨质并且由形成袋和/或牙龈(gum，gingiva)凹陷表征。它在成人中是普遍的并且是成人牙齿丢失的主要原因，但是该疾病可以发生在任何年龄。附接丢失的发展通常出现地较慢，但是可以出现快速发展的时期。

侵袭性牙周炎是一种影响在其他方面在临床上健康的患者的病症。常见的特征包括快速丢失附接以及骨质破坏和家族聚集。牙周炎(通常在年轻的时候发病)与若干全身性疾病相关，例如糖尿病或骨质疏松症(牙周炎是全身性疾病的一种表现形式)。坏死性牙周病是另一种形式的感染，由牙龈组织、牙周膜和牙槽骨的坏死表征。此病症最经常与全身性病症相关，包括但不限于HIV感染、营养不良和免疫抑制。

除牙菌斑之外，影响牙龈健康的其他因素包括：吸烟、遗传、妊娠、***、压力、药物、咬牙/磨牙、营养不良、糖尿病以及其他全身性疾病。

牙龈炎通常随着良好的自我护理而消失。相比之下，牙周炎需要重复的专业护理。使用良好口腔卫生用品的个人仅仅可以清洁到牙龈线下面2至3毫米(1/12英寸)。牙科医生可以使用刮治和根面平整术而清洁深达4至6毫米(1/5英寸)的袋，从而彻底地清除牙垢和患病的根面。对于5毫米(1/4英寸)或更深的袋而言，通常需要手术。牙科医生或牙周病医师可以通过手术(牙周翻瓣术)而接近牙龈线下面的牙齿，以彻底地清洁牙齿并矫正由感染引起的骨质缺损。牙科医生或牙周病医师还可以清除受感染且分离的牙龈部分(牙龈切除术)，这样使得剩余的牙龈可以重新仅仅地附接至牙齿并且该个人然后可以在家里清除噬斑。牙科医生可以开处抗生素(例如四环素或甲硝唑)，特别是如果已经发展为脓肿。牙科医生还可以将抗生素浸渍的材料(细丝或凝胶)***深牙龈袋中，这样使得高浓度的药物可以到达患病区域。牙周脓肿引起骨质破坏的爆发，但是立即用手术和抗生素加以治疗可以允许许多受损骨质重新长出。如果口腔在术后疼痛，可以将刷牙和使用牙线临时替换为氯己定口腔清洗剂，使每天两次，每次1分钟。

如果患者在其大部分牙齿周围具有5毫米(1/4英寸)或更深的袋，则他们然后将面临在数年内失去其全部牙齿的风险。如果这未被鉴定出并且该患者仍没觉察到发展的牙周病，则数年后，他们可能感到惊奇，大部分牙齿好像突然松动并且可能需要拔出大部分或全部牙齿。

使用四环素对牙龈炎、牙周炎(侵袭性的和慢性的)(牙周炎是全身性疾病的一种表现形式)和坏死性牙周病进行的药物全身治疗与多个缺点相关，在治疗期间细菌菌株快速出现四环素抗性以及不敏感的病原体(例如假丝酵母属)出现过度生长。用四环素对牙周感染进行的短期治疗通常是无效的。已经显示，青霉素(一般而言，其是高度有效的对抗厌氧细菌的抗微生物组合物)对于对抗在牙周感染中重要的细菌种类(例如牙龈卟啉单胞菌)而言是无效的。

当前使用的手术和非手术疗法的上述局限和缺点透露了对这些牙齿病症的有效治疗的未满足的需求。

根据本发明的一个高度优选地实施例涉及如在此描述的化合物用于治疗牙周病的用途，该牙周病是例如牙龈炎、牙周炎(侵袭性的和慢性的)、作为全身性疾病的一种表现形式的牙周炎和坏死性牙周病。

口臭(halitosis或bad breath)是一种非常常见的暂时性病症，例如“早晨的口气(morning breath)”。慢性口臭(其是一种更为严重且持久的病症)通常由某些类型的口腔细菌的持续种群过剩引起。慢性口臭通常与在此描述的牙周病相关。

在根据本发明的一个实施例中，如在此描述的化合物用于治疗口臭。在一个优选实施例中，所述口臭是慢性口臭。

在本发明的另一个方面中，使细胞繁殖的能力被用于刺激伤口的治疗。术语“伤口”是指皮肤或粘膜(例如口腔粘膜、胃粘膜和肠粘膜)的病损。伤口可以是感染、损害或手术的结果。根据本发明的伤口还包括慢性伤口和溃疡。

根据本发明的一个优选实施例涉及如在此描述的化合物用于治疗或预防伤口感染的用途，该伤口是例如手术伤口、刀伤、穿透伤口、刺伤、擦伤、慢性伤口或溃疡。

伤口还可以由咬伤造成。人类和哺乳动物(主要是狗和猫，但是还有松鼠、沙鼠、兔子、豚鼠以及猴子)咬伤是常见的并且偶然地引起显著的病残和伤残。手、四肢和面部最频繁地被侵袭，尽管人类咬伤可以偶然地涉及***和生殖器。除组织创伤之外，来自叮咬生物体的口腔菌丛的感染是主要关注点。

在根据本发明的一个实施例中，如在此披露的化合物用于治疗由人类或哺乳动物(优选狗)引起的咬伤。

已经出人意料地证明，用根据本发明的化合物处理的伤口愈合更快。另外，瘢痕形成是有限的或不存在。瘢痕是在损害后代替正常皮肤的纤维组织(纤维化)区域并且由身体的皮肤以及其他组织中的伤口修复生物过程造成。目前相信，由本发明的化合物刺激的细胞增殖增加是观察到的更快愈合的解释。

根据本发明的一个方面，在此披露的化合物可以用于治疗通过增加水平的促炎性IL-6和CCL3减轻或治愈的疾病。

白介素-6(IL-6)是一种参与多种生理和病理过程的多形细胞因子，包括对创伤和感染的应答以及炎症和恶性肿瘤的发展与进展。IL-6与许多疾病相关联，例如糖尿病(Kristiansen(克里斯蒂安森)OP，Mandrup-Poulsen(曼德鲁普-波尔森)T(2005年12月)，“Interleukin-6and diabetes：the good，the bad，or the indifferent？(白介素-6与糖尿病：好的，坏的或中立的？)”，Diabetes(糖尿病)54增刊2：S114–24.doi:10.2337/diabetes.54.suppl_2.S114，PMID 16306329)、动脉粥样硬化(Dubiński(杜宾斯基)A，Zdrojewicz(兹卓伊维奇)Z(2007年4月)，“[The role of interleukin-6in development andprogression of atherosclerosis(白介素-6在动脉粥样硬化的发展与进展中的作用)]”(用波兰语)，Pol.Merkur.Lekarski 22(130)：291–4.PMID17684929)、抑郁(Dowlati(道拉提)Y，Herrmann(赫尔曼)N，Swardfager(斯瓦德法格)W，Liu(刘)H，Sham(沙姆)L，Reim(雷姆)EK，Lanctot(兰克托特)KL(2010年3月)，“A meta-analysis of cytokines in majordepression(重性抑郁症的细胞因子荟萃分析)”，Biological Psychiatry(生物精神病学)67(5)：446–457，doi:10.1016/j.biopsych.2009.09.033，PMID20015486)、阿尔茨海默病(斯瓦德法格W，兰克托特K，Rothenburg(罗滕堡)L，Wong(王)A，Cappell(卡佩尔)J，赫尔曼N(2010年11月)，“A meta-analysis of cytokines in Alzheimer's disease(阿尔茨海默病的细胞因子荟萃分析)”，生物精神病学68(10)：930–941，doi:10.1016/j.biopsych.2010.06.012，PMID 20692646.)，***性红斑狼疮(Tackey(泷)E，Lipsky(利普斯基)PE，Illei(伊雷)GG(2004)，“Rationalefor interleukin-6blockade in systemic lupus erythematosus(***性红斑狼疮中白介素-6阻断的基本原理)”，Lupus(狼疮)13(5)：339–343，doi:10.1191/0961203304lu1023oa，PMC 2014821，PMID 15230289)、类风湿性关节炎(Nishimoto(西本)N(2006年5月)，“Interleukin-6in rheumatoidarthritis(类风湿性关节炎中的白介素-6)”，Curr Opin Rheumatol(风湿病学当前观点)18(3)：277–281，doi:10.1097/01.bor.0000218949.19860.d1，PMID 16582692)、自身免疫性疾病(Ishihara(石原)K，Hirano(平野)T.Cytokine Growth Factor Rev.(细胞因子与生长因子评论)20028月-10月；13(4-5)：357-68，IL-6in autoimmune disease and chronic inflammatoryproliferative disease(自身免疫性疾病和慢性炎性增生性疾病中的IL-6))、口腔疾病(Nibali(巴里)L，Fedele(费代莱)S，D'Aiuto(德亚托)F，Donos(多诺斯)N Oral Dis.(口腔疾病)2012年4月；18(3)：236-43，doi：10.1111/j.1601-0825.2011.01867.x.Epub 2011年11月4日，Interleukin-6in oral diseases：a review(口腔疾病中的白介素-6：评论))、冠状动脉疾病(Lim(利姆)Nature Reviews Cardiology(自然评论心脏病学)9，313(2012年6月)|doi:10.1038/nrcardio.2012.46Coronary artery disease：IL-6signalinglinked with CHD(冠状动脉疾病：与CHD连接的IL-6信号转导))、被病毒、细菌或原生动物感染的发展以及血液和实体恶性肿瘤(Barton(巴顿)BE(2005年8月)，“Interleukin-6and new strategies for the treatment ofcancer，hyperproliferative diseases and paraneoplastic syndromes(用于治疗癌症、过度增生性疾病和副肿瘤综合征的白介素-6和新策略)”，Expert Opin.Ther.Targets(治疗靶标的专家意见)9(4)：737–752，doi:10.1517/14728222.9.4.737，PMID 16083340)。

CCL3(亦称巨噬细胞炎性蛋白(MIP)-1α)是MIP-1CC趋化因子亚家族的四个成员中的第一成员。CCL3能够将单核细胞/巨噬细胞吸引到炎症位点并且可以经由CCR5连接而潜在地抑制HIV-1的单核细胞/巨噬细胞摄取。因此，目前相信，在此披露的化合物可以用于治疗多种炎症疾病，例如哮喘、关节炎或多发性硬化。

MIP-1蛋白通过结合至属于G蛋白偶联受体超家族的细胞表面CC趋化因子受体(3×104至5×105个受体/细胞)而介导其生物学作用。

受体结合涉及高亲和力相互作用以及随后的细胞内事件级联，该级联快速地导致范围广泛的靶细胞功能，包括趋化性、脱粒、吞噬作用以及介体合成。信号转导事件由G蛋白复合体启动，从而导致其解离进Gα和Gβγ亚基中。

MIP-1家族成员主要通过征募促炎细胞而在损害或感染位点协调急性和慢性炎性宿主应答。它们对于T细胞从循环至发炎组织的趋化性而言是关键的并且还在单核细胞、树突细胞和NK细胞的经内皮迁移的调节中发挥重要作用。

因此，MIP-1蛋白在许多炎性病症和疾病的发病机制中是关键角色不足为奇，包括哮喘、肉芽肿形成、伤口愈合、关节炎、多发性硬化、肺炎以及银屑病(Murdoch(默多克)，C.，&Finn(芬恩)，A.(2000).Chemokinereceptors and their role in inflammation and infectious diseases(趋化因子受体及其在炎症和感染性疾病中的作用)，Blood(血液)，95，3032–3043)。例如，发现在皮肤肉芽肿形成鼠类模型中，释放自嗜中性粒细胞的、被肥大细胞衍生的TNFα征募至皮肤损害位点处的CCL3对于巨噬细胞流入而言是关键的介体(von Stebut(冯斯德布特)，E.，Metz(梅斯)，M.，Milon(米伦)，G.，Knop(克诺普)，J.，&Maurer(摩利尔)，M.(2003).Earlymacrophage influx to sites of cutaneous granuloma formation is dependent onMIP-1α/βreleased from neutrophils recruited by mast cell-derived TNFα(巨噬细胞早期流入至皮肤损害位点依赖于释放自被肥大细胞衍生的TNFα征募的嗜中性粒细胞的MIP-1α/β)，Blood(血液)，101，210–215)。CCL3在皮肤伤口修复中也好像是关键的巨噬细胞化学引诱物，在伤口修复中它促进愈合(DiPietro(迪皮特罗)，L.A.，Burdick(布尔迪克)，M.，Low(洛)，Q.E.，Kunkel(孔克尔)，S.L.，&Strieter(斯特里特尔)，R.M.(1998).MIP-1alpha as a critical macrophage chemoattractant in murine wound repair(MIP-1α在鼠类伤口修复中作为关键的巨噬细胞化学引诱物)，Journal of ClinicalInvestigation(临床研究杂志)，101，1693–1698)，并且它在变应性哮喘模型中有助于抗原依赖性嗜碱性粒细胞趋化性、组胺释放以及嗜酸性粒细胞增多的发展(Venge(温格)，Lampinen(兰姆皮尼)，Hakansson(汉克森)，Rak(拉克)，&温格，1996，Identification of IL-5and RANTES as the majoreosinophil hemoattractants in the asthmatic lung(在哮喘肺中对作为主要的嗜酸性粒细胞化学引诱物的IL-5和RANTES的鉴定)，Journal of Allergy andClinical Immunology(***反应学与临床免疫学杂志)，97，1110–1115)。MIP-1蛋白还可以通过诱导对抗传染性病原体的炎症应答而促进健康，该病原体是如病毒，例如流感病毒(Menten(门滕)，P.，Wuyts(武伊特斯)，A.，&von Damme(冯达默)，J.(2002).Macrophage inflammatory protein-1(巨噬细胞炎性蛋白-1)，Cytokine Growth Factor Reviews(细胞因子与生长因子评论)，13，455–481)或寄生虫(Aliberti(阿丽贝尔蒂)，J.，Reise Sousa(雷斯伊苏萨)，C.，Schito(斯基托)，M.，Hieny(海尼)，S.，Wells(威尔斯)，T.，Huffnagle(哈夫内格)，G.B.，&Sher(舍尔)，A.(2000).CCR5provides a signal for microbial induced production of IL-12by CD8alpha+dendritic cells(CCR5通过CD8α+树突细胞为微生物诱导的IL-12产生提供信号)，Natural Immunology(天然免疫学)，1，83–87)。例如，在刚地弓形虫感染中，CCL3和CCL4(以及CCL5/RANTES)通过结合至CCR5而增加释放自树突细胞的IL-12，这导致Th1免疫性增强并且寄生虫的清除率增强(Venge(温格)等人，1996)。另一方面，MIP-1受体CCR3和CCR5促进HIV-1感染，因为它们是对于巨噬细胞嗜性HIV-1(M-tropicHIV-1)病毒而言在CD4+靶细胞上的重要的辅助受体(Horuk(胡鲁克)，R.(2003).Development and evaluation of pharmaceutical agents targetingchemokine receptors(靶向趋化因子受体的药学试剂的研发与评估)，Methods(方法)，29，369–375)。

在一些情况下，本发明的化合物可以被看作可以用于同时解决若干疾病(例如HIV-1或HSV-2)的治疗的双作用或多作用药物。由于HIV-1和HSV-2两者都是性传染的，因此可以将本发明的化合物与稳定溶液混合，供局部施用。一种选择是处于用于皮肤施用的凝胶或作为有待施用于***或直肠的杀微生物剂凝胶的配制品。后一解决方案可以阻断或灭活一些性传染的病原体。

根据本发明的化合物还适于在治疗或预防疟疾中使用。疟疾是由疟原虫属的原生生物引起的蚊媒传染病。本发明包括由疟原虫属任何物种引起的疟疾疾病的治疗或预防，包括恶性疟原虫、间日疟原虫、卵形疟原虫、诺氏疟原虫(P.knowlesi)以及三日疟原虫。在本发明的一个优选方面中，根据本发明的化合物用于预防或治疗由恶性疟原虫引起的疟疾。在被感染人群中，恶性疟原虫是鉴定的最常见的物种(～75％)，随后是间日疟原虫(～20％)。恶性疟原虫是大部分死亡的原因。

疟原虫属物种具有某一生命周期，其在感染后的人体中部分发生。本发明包括针对处于其全部生命周期阶段(尤其是发生在人体中的生命周期阶段)的疟原虫属物种的治疗。在疟原虫属的生命周期中，雌性疟蚊(终宿主)将显示活力的传染性形式(称作子孢子)传播至脊椎动物宿主(例如人类(第二宿主))，从而作为传播载体。子孢子穿过血管到达肝细胞(livercell，hepatocyte)，在肝细胞中它无性地繁殖成千上万的裂殖子。这些裂殖子感染新的红细胞并启动一系列无性繁殖循环，其产生8至24个新的传染性裂殖子，在此时细胞破裂并且重新开始感染循环。在一种称作配子体发生的过程中，其他裂殖子发育为未成熟的配子或配子母细胞。当受精蚊叮咬感染者时，配子母细胞随血液吸收并在蚊肠中成熟。雄性配子母细胞和雌性配子母细胞融合并形成合子(动合子)，这些合子发育为新的子孢子。子孢子迁移至昆虫的唾液腺，随时准备感染新的脊椎动物宿主。当蚊随后取食血餐时，子孢子沿着唾液被注入皮肤中。这种类型的传播偶尔被称为前站换乘(anterior station transfer)。

在本发明的一个方面中，根据本发明的化合物可以用作抗细菌剂。预期的是该化合物对多种细菌均具有广谱作用并且因此具有广泛应用。因此，本发明的化合物可以用作消毒剂，任选地在适合地配制后。该消毒剂可以用于消毒多种类型的区室，包括医院的房间，例如外科医生房间或手术室。也可以用该消毒剂清洁家用房间，包括浴室。可以进行消毒的其他房间包括牲畜(例如猪和牛)的畜舍以及实验室。测试支持本发明化合物显示出良好的减少某些类型的金黄色葡萄球菌的量的能力，例如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)。

MRSA是一种在人类中造成若干难治性感染的细菌。它还被称作耐苯唑西林金黄色葡萄球菌(ORSA)。MRSA通常用于经由自然选择过程已经对β-内酰胺抗生素产生抗性的金黄色葡萄球菌的任何菌株，这些β-内酰胺抗生素包括青霉素(甲氧西林、双氯西林、奈夫西林、苯唑西林等)和头孢菌素。不能抵抗这些抗生素的菌株被分类为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌或MSSA。MRSA在医院、监狱和养老院是尤其麻烦的，在这些地方具有开放性伤口、侵入性装置和免疫***削弱的患者比大众处于更大的感染风险之中。此类抗性的进化并未导致该生物体比没有抗生素抗性的金黄色葡萄球菌菌株本质上更具毒力，但是抗性的确使得MRSA感染更难于用标准类型的抗生素加以治疗并且因此是更危险的。因此，本发明提议了一种通过向罹患感染或处于被金黄色葡萄球菌感染的风险中的患者给予根据本发明的化合物而治疗难治性疾病(像MRSA和MSSA)的方法。

根据本发明的化合物可以被配制为任何药物形式并且与任何适当的药学上可接受的添加剂一起。

取决于具体药剂的目的和给药类型，包括根据本发明的化合物的药物组合物可以按多种不同方式进行配制。配制与优选给药类型一致的组合物完全在本领域的普通技术人员的范围内。

可以通过任何常规技术制备包括根据本发明的提取物的药剂，例如如描述于由E.W.Martin(马丁)编辑的Remington：The Science and Practiceof Pharmacy(雷明顿：药学科学与实践)1995，Mack Publishing Company(马克出版公司)，第19版，伊斯顿，宾夕法尼亚州中。

该药剂可以包括药学上可接受的添加剂，例如任何常规使用的药学上可接受的添加剂，应该根据特定配制品、打算的给药途径等选择添加剂。例如，药学上可接受的添加剂可以是在Nema(内马)等人，1997中提及的任何添加剂。此外，药学上可接受的添加剂可以是来自FDA的“无活性成分列表”的任何可接受的添加剂，该列表例如可在因特网地址http://www.fda.gov/cder/drug/iig/default.htm获得。

本发明的一个优选实施例在于提供一种配制用于在局部、表面和限制区域局部施用的药物组合物，例如伤口、感冒疮、疣、痤疮、尿布疹、直肠、生殖器等。

在所述上述实施例中，该药剂可以被配制为软膏剂、洗剂、霜剂、沐浴混合物、凝胶、糊剂、乳状物、混悬剂、气雾剂、喷雾、膜剂、泡沫剂、血清、拭子、小拭子、纱布块、贴剂、粉末剂、糊剂、搽剂、粘性乳液、粥状物或另一种适于局部给药的配制品。

此类用于局部给药的组合物可以进一步包括生理学上可接受的组分，例如适于此给药类型的载体、表面活性剂、防腐剂、稳定剂、缓冲剂、赋形剂以及乳化剂。用于局部递送***的适合的组分优选地选自不给受者带来过多的或不可避免的刺激或疼痛的组分。载体包括稀释剂并且提供药物成分溶解、分散或分布于其中的介质。

根据本发明的药剂可以包括但不限于载体，例如水性液体基质、非水性液体基质、水溶性凝胶、矿物油基质、乳液、软膏剂、霜剂、凝胶或洗剂、固体微粒于液体中的混悬剂。

药物的局部有效性取决于多种因素，包括其在载体(凝胶、乳膏-亲水性的)中溶解的能力及其穿透皮肤屏障(即，角质层-疏水性的)的能力，从而要求独特的疏水-亲水平衡。配制品可以需要添加赋形剂，例如渗透增强剂和增溶剂，以协助任一转运过程或两转运过程(溶解于运载体中和扩散跨过皮肤)。已经披露例如醇、脂肪醇、脂肪酸、单甘油酯、二甘油酯、三甘油酯、甘油单醚、环糊精和衍生物、聚合物、生物粘合剂、萜烯、螯合剂以及表面活性剂的添加剂可以增加药物的经皮递送。利用此类赋形剂在本发明内。

用于增加经皮递送的任何方法(不限于上述方法)在本发明的范围内。因此，根据本发明的药剂可以包括表面活性剂，例如离子和/或非离子表面活性剂。适合的非离子表面活性剂包括例如：脂肪醇乙氧基化物(烷基聚乙二醇)；烷基酚聚乙二醇；烷基硫醇聚乙二醇；脂肪胺乙氧基化物(烷基氨基聚乙二醇)；脂肪酸乙氧基化物(酰基聚乙二醇)；聚丙二醇乙氧基化物(普朗尼克(Pluronic))；脂肪酸烷基醇酰胺(脂肪酸酰胺聚乙二醇)；烷基多糖苷，N-烷基-、N-烷氧基多羟基脂肪酸酰胺(特别是N-甲基-脂肪酸葡糖酰胺)，蔗糖酯；山梨糖醇酯，山梨糖醇聚乙二醇醚酯以及卵磷脂。离子表面活性剂包括例如月桂基硫酸钠、月桂酸钠、聚氧乙烯-20-十六烷基醚、月桂醇聚醚-9、十二烷基硫酸钠(SDS)以及二辛基磺基琥珀酸钠。

醇包括但不限于乙醇、2-丙醇以及多元醇，例如聚乙二醇(PEG)、丙二醇(propylene glycol)、甘油、丙二醇(propanediol)。

用于通过局部给药而增强药物递送的方法可以与本发明一起应用，并且包括增加药剂的活性成分(例如胡芦巴的提取物)的吸收、最小化其代谢和/或延长其半衰期的任何手段。此类手段包括使用脂质体、ISCOM、纳米颗粒、微球、水凝胶、有机凝胶、聚合物类型的转运体或其他微封装技术。

根据本发明的用于局部递药的药剂可以包括任何适合量的根据本发明的化合物，例如按重量计0.01至50wt％，优选0.1至30wt％。

本发明的另一个优选实施例在于提供一种配制用于口服给药的药剂，例如漱口剂。

在一个优选实施例中，例如通过将根据本发明的化合物溶解或分散于液体中而将该药剂配制为漱口剂。

该液体可以是任何有用的液体，然而经常优选的是，该液体是一种水性液体。此外优选的是，该液体是无菌的。可以通过任何常规方法(例如过滤、辐射或加热)赋予无菌性。

提供一种药剂及其用于治疗上述临床病症(包括感染或获得感染的增加的风险)的用途在本发明的范围内，该药剂包括本发明的化合物。例如但不限于，临床病症包括感染，或处于被微生物物种感染的风险之中。在本发明的一个实施例中，将该化合物与至少一种第二活性成分共给予。优选地，本发明的化合物与该第二活性成分存在于同一药剂中。可替代地，可以将它们提供于药盒中。优选地，所述第二活性成分是一种抗微生物物质，例如防腐剂、抗生素、抗真菌剂、抗寄生虫剂或抗病毒剂。

在根据本发明的一个实施例中，本发明的化合物是一种牙膏的组分。

根据本发明，该化合物以组合物的“药物有效剂量”存在。药物有效剂量是指在对治疗有需要的受试者中诱导希望的生物学作用所需的量。

可以将根据本发明的药剂一天给予一次或超过一次，例如可以在一天2至10次的范围内给予它们，如一天2至7次，例如一天2至5次，如一天2至4次，如一天2至3次。

可以向该受试者给予根据本发明的药剂持续一周或超过一周的治疗时期，例如两周、三周、四周、五周、六周、七周、八周或超过八周。可以在复发的受试者上重复治疗。

实例

实例1

如下从胡芦巴种子中制备提取物：将500g胡芦巴种子在2.5l水中浸泡大约24小时。预浸泡后，将种子煮20分钟并从混合物中除去种子的残留物。将提取物冷冻。

将提取物用约800ml乙醇处理，以沉淀多糖和植物残体。使混合物在9000rpm下经受离心，收获上清液(reminiscence)，并且蒸发掉乙醇连同一些水。随后，通过纤维素过滤器(0.45μm)过滤提取物。此过程产生大约18g/l的干物质含量。将水性提取物冷冻干燥并获得粉末。

使用1M盐酸将5ml浓度为10mg/ml的溶解于水中的粉末调节至pH2并与10ml庚烷混合。搅拌混合物并分离水相并使用水性碳酸钠调节至pH 10。将此水层用庚烷(5ml)加以搅拌并收获有机相。将有机相分为两个级分并使其在氮下经受蒸发。将这两个级分之一用于化学分析(实例2)并且将另一部分用于生物测定(实例3)。

实例2

来自实例1的小瓶的化学分析：

LC MS分析

具有MS检测器的苏米特(Summit)4

正离子化

柱：Primesep D

洗脱液A：0,1M甲酸

洗脱液B：乙腈

扫描模式，50-1000amu

GC MS分析

具有MSD检测器的安捷伦(Agilent)GC

柱：f.eks.Zebron ZB-Wax(nr.27)

扫描模式50-550amu

LC-MS和GC MS分析显示，具有相同基序的若干化合物存在于在实例1中制备的活性级分的样品中。该样品中的分子具有以下组成：

C₁₈H₃₅NO

C₁₆H₃₃NO

C₁₄H₂₉NO

C₁₂H₂₉NO

C₁₀H₂₇NO

分别在DMSO-d6和甲醇-d6中准备进行级分1A的样品的¹H NMR。对于DMSO-d6样品而言，在6.88ppm处检测到一个信号，但是在甲醇-d6样品中不存在，这与NH₂基团一致。选择该多种化合物之一进行详细分析并且图1示出了鉴定的化合物的结构与¹H NMR图之间的对应性。

在LC-MS和GC MS分析中鉴定的5种化合物可以由以下化学式表示：

N＝3，4，5，6

实例3

测试来自实例1的小瓶的HSV-2活性。

使非洲绿猴肾上皮细胞(Vero kidney epithelial cell)在杜尔贝科改良的基本培养基(Dulbecco’s Modified Essential Medium)(DMEM)(龙沙公司(Lonza)，巴塞尔，瑞士)中生长，该培养基包含10％热灭活的胎牛血清(FCS)和50U/ml青霉素以及50μg/ml链霉素(英杰公司(Invitrogen)，格洛斯楚普，丹麦)。用于病毒噬斑测定，将非洲绿猴肾细胞以7-9×10⁵个细胞/孔的密度接种在24孔板中，以在过夜培养后获得95％汇合。使HSV-2株在非洲绿猴肾细胞中扩增并如前所述通过病毒滴定进行量化(Ank(安卡)等人，2006)。在转染后二十四小时，更新细胞培养基并且在转染后48h，收获包含病毒的上清液，通过0.45μm过滤器过滤并存储于-80℃下。

使用标准非洲绿猴肾细胞噬斑测定评估直接抗病毒活性。将来自实例1的第二小瓶在包含0.005％甲酸的水中复水并且随后添加1/10体积的10xPBS。将30μl的溶液与30μl HSV-2溶液混合。将混合物在室温下孵育30min。将50μl孵育混合物添加至95％汇合的非洲绿猴肾细胞中。孵育24h后，使用4％甲醛(波利塞斯公司(Polysciences)，埃佩尔海姆，德国)将细胞在PBS中固定10min并用0.5％结晶紫(西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)，哥本哈根，丹麦)在PBS/10％EtOH中染色，随后对病毒噬斑计数。

以4级标度(-，+，++，+++)评估噬斑。包含在实例2中鉴定的化合物的小瓶显示出完全活性(+++)。通过稀释降低活性，从而表明存在S型剂量-反应曲线。将来自实例1的小瓶的内含物与来自LC-MS分级的其他稀释级分组合，揭示到来自实例1的小瓶的内含物为完全活性所需要。

实例4

材料与方法

细胞。使非洲绿猴肾上皮细胞、人类肺泡癌上皮A549细胞、人类胚肾(HEK)293T细胞以及人类角质化细胞HaCaT细胞在杜尔贝科改良的基本培养基(DMEM)(龙沙公司，巴塞尔，瑞士)中生长，该培养基包含10％热灭活的胎牛血清(FCS)和50U/ml青霉素以及50μg/ml链霉素(英杰公司，格洛斯楚普，丹麦)。使稳定表达TLR4的HEK293细胞在DMEM中生长，该DMEM包含10％热灭活的胎牛血清(FCS)、50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素(英杰公司，格洛斯楚普，丹麦)以及500μg/mlG418。将人类单核THP-1细胞和人类外周血单核细胞(PBMC)在RPMI1640(龙沙公司，巴塞尔，瑞士)中进行培养，该RPMI 1640补充有2mML-谷氨酰胺、10mM HEPES、50U/ml青霉素和50μg/ml链霉素以及10％热灭活的FBS(英杰公司，格洛斯楚普，丹麦)。用于PBMC纯化，自Skejby医院血库(Skejby Hospital Blood Bank)获得富含白细胞的血沉棕黄层或从刚刚抽取的血液中纯化细胞。通过甲泛影钠-菲可(Isopaque-Ficoll)分离纯化PBMC并将其冷冻在包含10％DMSO(西格玛-奥德里奇公司，哥本哈根，丹麦)的RPMI 1640生长培养基中或直接使用。在实验之前，将PBMC谨慎地解冻并且用于刺激实验和生活力测定，将PBMC以2×10⁵个细胞/孔的密度接种在96孔培养板中并在进一步处理之前培养过夜。在进一步处理之前六小时，将THP-1细胞以1×10⁵个细胞/96孔的密度进行接种。用于生活力测定，将HaCaT和非洲绿猴肾细胞以1×10⁴个细胞/孔的密度进行接种。用于病毒噬斑测定，将非洲绿猴肾细胞以7-9×10⁵个细胞/孔的密度接种在24孔板中，以在过夜培养后获得95％汇合。

病毒。使HSV-2株在非洲绿猴肾细胞中扩增并如前所述通过病毒滴定进行量化(Ank(安卡)等人，2006)。在HEK293T细胞中产生HIV-1株89.6和JR-CSF。简言之，将HEK293T以5×10⁴/cm²进行接种并且使用磷酸钙沉淀用10μg HIV-1质粒/T80瓶(能肯公司(Nunc)，罗斯基勒，丹麦)进行转染。通过NIH AIDS研究和参考试剂计划(NIH AIDS Research andReference Reagent Program)，日耳曼敦，马里兰州，美国获得HIV-1株89.6和JR-CSF的质粒。在转染后二十四小时，更新细胞培养基并且在转染后48小时，收获包含病毒的上清液，通过0.45μm过滤器过滤并存储于-80℃下。如前所述，在TZM-bl细胞上确定病毒感染性(Kirkegaard(基尔克高)等人，2011)。

MTT和细胞滴度发光细胞毒性测定。为了评估在粘附细胞中的毒性，将细胞接种在96孔板中并在施加TFG提取物之前保持过夜。48h孵育后，将细胞用(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐)(MTT)底物染色。简言之，将细胞在包含0.5mg/ml MTT(西格玛-奥德里奇公司，哥本哈根，丹麦)的培养基中孵育3h。随后，将细胞用1:1体积的96％EtOH和DMSO裂解；通过在570nm处读取吸光度来量化细胞存活率。对于非粘附THP-1细胞和PBMC而言，使用细胞滴度发光(CTG)(普洛麦格公司(Promega)，纳卡，瑞典)对生活力进行量化。将二十μl的THP-1细胞悬液转移至白板(珀金-埃尔默公司(Perkin-Elmer)，斯科瓦伦德(Skovlunde)，丹麦)中。随后，添加25μl的CTG试剂，并振荡该板并测量发光信号的水平。对于PBMC而言，将50μl的CTG试剂添加至50μl包含细胞的培养基中，之后将50μl的溶液转移至白板中并留置50μl，以10min稳定发光信号。使用弗拉斯特尔ω读板仪(Fluster Omega platereader)(BMG Lebech公司，罗滕伯格(Rotenberg)，德国)测量作为生活力量度的荧光素酶活性。

HSV-2噬斑测定。使用标准非洲绿猴肾细胞噬斑测定评估TFG种子提取物的直接抗病毒活性。在添加HSV-2(株MS)之前或之后将95％汇合的细胞用提取物处理或在添加至细胞中之前，将TFG提取物预孵育指定的时间并浓缩。用于添加脂质的实验，将脂质体2000(英杰公司，格洛斯楚普，丹麦)以指定浓度添加至TFG提取物和病毒的混合物中或单独的病毒中持续20min。在56℃下将TFG提取物热处理20min。将接受PBS或病毒的对照培养物与PBS混合。孵育24h后，使用4％甲醛(波利塞斯公司，埃佩尔海姆，德国)将细胞在PBS中固定10min并用0.5％结晶紫(西格玛-奥德里奇公司，哥本哈根，丹麦)在PBS/10％EtOH中染色，随后对病毒噬斑计数。

TZM-bl HIV感染性测定。使用海拉(Hela)衍生的TZM-bl细胞评估抗HIV感染性。TZM-bl细胞表达HIV受体CD4以及辅助受体CCR5和CXCR4并且具有在HIV-1长末端重复序列(LTR)的控制之下的荧光素酶β-半乳糖苷酶报告***。将TZM-bl细胞以1×10⁴个细胞/孔的密度接种在96孔培养板中并培养过夜。用HIV-1株89.6或JRCSF(TCID50为550)感染细胞。在将病毒添加至细胞中之前，将病毒用指定浓度的TFG提取物在室温下预孵育60min。三天后，移除培养基并且将细胞在PBS中用90μl0.5％诺乃洗涤剂(Nonidet)P-40孵育至少45min，以便灭活病毒。使用90μl的britelite+试剂(珀金-埃尔默公司，斯科瓦伦德，丹麦)/孔测量荧光素酶活性。混合后，将150μl的溶液转移至96孔白板(珀金-埃尔默公司，斯科瓦伦德，丹麦)中。使用弗洛星级ω读板仪(FLUOstar Omegaplate reader)(BMG Labtech公司，奥登伯格(Ortenberg)，德国)对荧光素酶活性进行量化。

CMV测定。将汇合的MRC-5细胞用CMV感染，该CMV已用TFG提取物预孵育30min或用PBS预孵育(作为对照)。感染三天后，将细胞用PBS洗涤并固定并使用80％丙酮透化10分钟。冲洗后，用1:10稀释的单克隆抗CMV抗体(克隆DDG9+CCH2，达科公司(Dako)，格洛斯楚普，丹麦)将细胞孵育30min并且随后，用FITC-共轭的山羊抗鼠F(ab)2抗体(达科公司，格洛斯楚普，丹麦)孵育30min。通过荧光显微镜检术可视化CMV阳性细胞。

甲型流感病毒测定。在添加至接种于96孔培养板中的MDCK细胞中之前，将病毒用TFG提取物在室温下孵育30min。在适当的孵育时间后，通过使用IMAGEN试剂盒(Oxoid公司，赛默飞世尔科技(Thermo FischerScientific)，罗斯基勒，丹麦)对病毒蛋白进行荧光染色来可视化受感染细胞的数目并且使用荧光显微镜检术对受感染细胞的数目计数。

刺激实验。在用TLR4配体LPS(100ng/ml，西格玛-奥德里奇公司，哥本哈根，丹麦)、TLR7/8配体R848(0.5μg/ml，InVivoGen公司，图卢兹，法国)或TNF-α(25ng/ml，R&D***公司，阿宾顿，英国)刺激之前，将细胞用指定浓度的TFG提取物预处理30min。20h后，收获细胞培养上清液并将其存储于-80℃下，直到通过ELISA进行分析。

ELISA。对于CCL3/MIP-1α(R&D***公司，阿宾顿，英国)而言，使用Duoset ELISA测定收获的细胞培养上清液或对于IL-6、IL-10和IL-12p40/p70(英杰公司，格洛斯楚普，丹麦)而言，使用Cytoset ELISA。如由制造商详细说明地进行ELISA。

小鼠与TFG凝胶。在此研究中使用的小鼠是7周龄雌性C57BL/6(泰康利公司(Taconic M&B)，瑞海(Ry)，丹麦)。描述的所有动物实验都经过了动物实验督察组(Animal Experiments Inspectorate)，哥本哈根，丹麦审查并批准(批准编号2009/561/1641)。将来自10mg/ml TFG提取物的终浓度为0.5和2.5mg/ml的TFG提取物凝胶稀释于PBS中并且随后与羟乙基纤维素(HEC)凝胶溶液(通用HEC安慰剂凝胶，NIH AIDS研究和参考试剂计划，日耳曼敦，马里兰州，美国)混合。对于对照组而言，我们使用了稀释于PBS中的通用HEC安慰剂凝胶。为了使小鼠对HSV-2感染的易感性同步，在感染HSV-2之前5天，将小鼠用200μL稀释于PBS中的浓度为10mg/ml的皮下给予的甲羟孕酮(Depo-Provera；辉瑞公司(Pfizer)，巴勒鲁普，丹麦)预处理。用在20μl的Iscoves介质(龙沙公司，巴塞尔，瑞士)中递送的致死剂量的HSV-2株333(6.67×10⁴pfu/小鼠)实现***内感染。

小鼠***感染研究。将小鼠在笼中关为两组；一组接受20μl TFG种子提取物***凝胶，并且另一组接受HEC安慰剂凝胶。在HSV-2感染之前12h和之后12h施用凝胶。用异氟烷(2-氯-2-(二氟甲氧基)-1,1,1-三氟-乙烷)麻醉小鼠，用于施用凝胶并用于进行感染。为了允许吸收凝胶或病毒，在每次施用后，小鼠仍麻醉5-10min。随访包括每天监测体重并基于以下标度为疾病打分：0：健康的；1：生殖器红疹；2：中度生殖器感染；3：化脓性生殖器病损和/或总体上状况不佳；4：后肢瘫痪(进行安乐死)。

结果

TFG种子提取物对抗HSV-2、HIV-1和CMV的抗病毒作用

为了确定TFG提取物对抗HSV-2和HIV-1的直接抗病毒作用，我们用递减浓度的提取物预处理病毒并且随后感染细胞。在适当的孵育时间后，对于HSV-2而言，使用噬斑计数对感染水平进行量化并且对于HIV-1而言，使用萤光素酶报告测定。TFG提取物有效抑制HSV-2(图2)和HIV-1(图3)两者。HIV-1在预孵育试管中的50％抑制浓度(IC₅₀)是40μg/ml并且在细胞培养板中是380ng/ml。HSV-2的IC₅₀要低得多，在预孵育试管中的IC₅₀为大约300ng/ml，从而使得细胞培养孔中的浓度为30ng/ml。总之，TFG提取物有效抑制重大的人类病原体HIV-1和HSV-2的病毒感染。

TFG提取物选择性影响细胞增殖和细胞毒性的评估

为了论述提取物对细胞生长的毒性和作用，我们向不同细胞培养物和人类原代细胞中添加了递增浓度的化合物并且在刺激2天后评估生活力。TFG提取物对非洲绿猴肾细胞(图6)和人类PBMC(图8)的50％毒性浓度(TD₅₀)在浓度范围100-200μg/ml内。人类角质化细胞细胞系HaCaT具有>100μg/ml的TD₅₀(图7)。

有趣的是，与没有TFG提取物的对照相比，上皮非洲绿猴肾细胞在TFG浓度范围30-70μg/ml中显示出增加的增殖(图6)并且在50μg/ml的TFG提取物浓度下观察到HaCaT角质化细胞具有一致的细胞数目增加的类似趋势(图7)。可以在图8中观察到PBMC细胞具有类似趋势。总之，TFG提取物在对抗HSV-2的抗病毒活性的整个范围中是无毒的(0.1-2.5μg/ml，在预孵育试管中，图6)并且在抗HIV-1抗病毒活性的上限范围处是无毒的(10-40μg/ml，在预孵育试管中，图7)。然而，数据说明了一定浓度的TFG提取物的增殖作用。

快速抗病毒作用主要经由直接与病毒相互作用

接下来，我们确定了观察到的作用是一种直接的杀病毒作用还是在感染的稍后的时间点的作用，包括抑制进入和复制。因此，我们进行了多个实验，在这些实验中我们在范围从感染前2h至感染后2h添加TFG提取物(20μg/ml)。如果在感染时施用该提取物，看到了最大的抗病毒作用(图9)。与没有提取物的对照相比，如果在感染时间之前或之后添加TFG提取物，抗病毒作用逐渐降低，其中如果在感染之前1h或感染之后1h添加该提取物，抗病毒作用为50％-55％，并且如果在感染之前2小时或感染之后2小时添加TFG提取物，抗病毒作用为30％-35％。了解到当与病毒一起施用时TFG提取物最有效地发挥其作用，接下来我们希望研究有效的抗病毒作用所需的孵育期。在添加至非洲绿猴肾细胞中之前，我们将HSV-2与TFG提取物(1μg/ml)孵育了30sec或5min。我们发现该提取物作用非常迅速并且仅仅数秒的孵育时间便将病毒水平减少15％-85％并且5min的病毒和TFG提取物孵育使得几乎没有病毒感染。总之，TFG提取物经由直接与病毒相互作用而起作用并且TFG提取物可能是经由直接干扰病毒颗粒并抑制感染的早期步骤。接下来，我们确定了TGF提取物的稳定性。我们发现加热至56℃(图10)和在溶液中存储数周后(数据未示出)提取物的抗HSV-2作用是完整的。共同地，数据显示TFG提取物是非常稳定的并且说明作用机制是经由直接与病毒颗粒相互作用和/或抑制早期感染步骤。

通过脂质竞争抑制TFG植物提取物的抗病毒作用

了解到TFG提取物可能直接与病毒颗粒相互作用和/或干扰感染的早期步骤以及某些抗病毒化合物直接与包膜病毒(包括HSV-2和HIV-1)上的脂质膜相互作用(Wolf(沃尔夫)等人，2010)，我们研究了脂质是否干扰观察到的抗病毒作用。我们发现添加脂质有力地减少抗病毒作用(图11)。总之，数据说明TFG抗病毒作用是经由直接与病毒膜相互作用。

TFG提取物介导增加水平的促炎性IL-6和CCL3

为了评估TFG植物提取物的医疗潜力，我们随后研究了该提取物在人类细胞中对炎症和固有细胞因子应答的影响。在用细菌内毒素/脂多糖(LPS)和R848刺激之前，将人类PBMC用10μg/ml或20μg/ml TFG提取物或介质预处理30min，该细菌内毒素/脂多糖触发细胞表面toll样受体4(TLR4)活化，该R848是一种位于内涵体的TLR7/8的配体。另外，我们用炎症介体TNF-α刺激了细胞。TFG提取物在人类PBMC中诱导IL-6和CCL3/MIP-1α(图12和12D)。类似地，在用TFG提取物(50和500μg/ml)刺激后，人类单核THP-1细胞响应于CCL3(图12E)。此外，在PBMC和THP-1两种细胞中，添加TFG提取物增加LPS-、R848-和TNF-α-触发的IL-6和CCL3应答(图12A至E)。总之，在触发固有的病原体传感蛋白TLR4和TLR7/8后以及在刺激TNF-α后，TFG种子提取物诱导促炎性IL-6和CCL3并增加IL-6和CCL3产生。

TFG种子提取物对IL-10和IL-12分泌的作用

为了评估TFG种子提取物的更广泛的免疫调节作用，我们研究了炎症和抗病毒应答的重要调节剂IL-10和IL-12的分泌。IL-10是一种广谱的炎症抑制剂并且IL-12是一种有效的抗病毒应答的关键调节剂(Couper(库珀)等人，2008；Trinchieri(特林奇里)，2003；Watford(沃特福德)等人，2003)。在存在或不存在TFG提取物的情况下，用LPS、R848或TNF-α刺激PBMC。IL-10和IL-12分泌都不被TFG提取物(10和20μg/ml)显著诱导(图13A、C和D)。并且，LPS诱导的IL-10和IL-12不受TFG提取物的存在的影响(图13A和D)。然而，TFG提取物增强IL-10和IL-12的R848诱导(图13B和E)。类似地，TNF-α诱导的IL-10在TFG种子提取物的存在下是增加的。共同地，数据说明TFG不单独诱导IL-10或IL-12，但是TFG提取物通过刺激R848或TNF-α而选择性地增加IL-10和IL-12的水平。

包含TFG的杀微生物剂抑制HSV-2的***感染

为了评估TFG提取物在体内的直接潜力，我们在小鼠***激发模型中使用了TFG杀微生物剂。在HSV-2感染之前12h和之后12h，向小鼠施用包含0.5或2.5μg/ml的TFG提取物的凝胶。接下来每天，使用标准化临床评分为小鼠打分。在使用0.5μg/ml TFG凝胶的实验中，这些TFG凝胶实验中的两个实验的临床评分降低，而第三个实验未显示出显著作用。使用0.5μg/ml TFG凝胶的实验的平均值描绘于图14A中。使用包含2.5μg/ml的TFG提取物的凝胶，我们还在接受包含TFG的凝胶的小鼠中发现了较不严重的疾病(图14B)。总之，数据显示配制为凝胶的TFG提取物在***激发模型中可以减弱HSV-2感染。

讨论

HSV-2和HIV-1是影响世界上的大部分人类的人类病原体。这些病毒产生潜伏性感染。对于任一病毒而言，既没有疗法可供使用，又没有疫苗可供使用。此外，这些病毒的传播难于控制，尤其是在世界上较不发达的部分。其结果是，限制病毒感染和传播的替代性方式是非常重要的。

在此论文中，我们已经证明来自豆科植物TGF(胡芦巴)的种子提取物具有对抗HSV-2和HIV-1的抗病毒活性(图2和3)。我们发现这些提取物在非毒物浓度下有效对抗HSV-2和HIV-1(图6至8)并且提出机制是经由直接与病毒被膜相互作用(图9和10)。由于HSV-2和HIV-1对洗涤剂敏感(Krebs(克雷布斯)等人，1999；Zeitlin(泽特林)等人，1997)，因此我们将抗病毒作用考虑为洗涤剂作用，例如经由皂苷。然而，在PBS中在低于100ng/ml TFG提取物的非常低的浓度下发现抗病毒HSV-2作用，这基本上低于针对测试的所有细胞看到的毒性效应范围。因此，我们排除了洗涤剂作用是抗HSV-2作用的主要原因。然而，不能排除抗HIV-1作用部分地由洗涤剂作用介导，因为在预孵育步骤中的抗病毒TFG提取物浓度(试管浓度，图3)位于在孵育2天后发现于TZM-bl细胞中的细胞毒性浓度的范围内。排除了pH依赖性作用，因为与病毒和细胞接触的TFG溶液是pH中性的并且在缓冲溶液中。

观察抗病毒作用的机制，我们发现当在感染的时候存在时，TFG提取物最有效地发挥作用(图9)。数据说明了直接与病毒相互作用，但是还显示TFG提取物的抗病毒作用在细胞培养物中是持久的，因为稳定性较高并且在感染之前2小时和感染之后2小时添加TFG都观察到抗病毒作用。观察抗病毒作用的机制，我们发现将脂质添加至TFG提取物中干扰提取物的抗病毒作用(图4)，从而说明TFG提取物中的抗病毒化合物结合至脂质膜。

除抗病毒作用之外，我们还发现TFG提取物以若干方式影响细胞：i)在浓度100μg/ml下限制细胞活力/细胞生长，ii)在某些细胞中在特定浓度范围下诱导增殖以及iii)通过诱导和增加细胞因子应答而调节免疫应答。确切地，我们发现高于100-200μg/ml的TFG浓度在测试的细胞中减少细胞生活力或细胞生长(图6至8)。

有趣的是，我们还在范围40-70μg/ml下在非洲绿猴肾细胞中观察到细胞增殖作用(图6)并且在TFG浓度50μg/ml下在人类角质化细胞HaCaT细胞中看到类似趋势(图7)。该发现是令人感兴趣的，因为病毒感染可以导致上皮细胞裂解和角质化细胞层破坏，这很容易让人推测除通过TFG提取物看到的抗病毒作用之外，TFG提取物组分可能具有某些伤口愈合作用。伤口愈合作用将是有利的，例如通过HSV-2感染皮肤和粘膜。就非洲绿猴肾细胞和HaCat细胞而言，未发现TFG提取物诱导细胞数目增加的机制。然而，一种作用可能是经由***受体***刺激生长因子，这近来已经针对角质化细胞得到了证明(Rock(罗克)等人，2012)。

在人类细胞培养物中研究TFG提取物的免疫调节作用。TFG提取物诱导促炎性IL-6和CCL3的水平，但是不诱导免疫调节性IL-10和IL-12的水平。然而，TFG提取物的存在增强IL-6、CCL3、IL-10及IL-12的分泌水平(图12A至12D以及13B、13C和13E)，例外的是LPS诱导的IL-10和IL-12的水平不受TFG提取物的存在的影响(图13A和13B)。我们无法解释为什么IL-10和IL-12在LPS刺激期间不受TFG提取物的影响，而TFG提取物增强TLR7/8(R848)和TNF-α-诱导的IL-10和IL-12。一种解释是被细菌内毒素轻微污染，这可以使得细胞对另外的刺激不敏感(Randow(兰多)等人，1995)。然而，我们发现该解释是不大可能的，因为在LPS刺激后同时在存在TFG提取物的情况下，CCL3和IL-6水平增加。此外，我们无法在用TLR4稳定转染的HEK293细胞中检测到任何LPS应答(数据未示出)。由于PBMC是一种异源细胞群体，因此另一种解释是TFG提取物响应于TNF-α、LPS和R848而影响不同的细胞。了解到单核细胞样THP-1细胞如PBMC类似地响应于CCL3，很可能TFG提取物介导的促炎细胞因子的增加在某种程度上是经由TFG提取物与单核细胞相互作用。

Bin-Hefeex(滨-海菲克斯)等人报道了TFG提取物在小鼠中的免疫刺激作用。免疫刺激作用包括迟发型超敏反应增加以及巨噬细胞体外吞噬功能增加(Bin-Hefeex(滨-海菲克斯)，2003)。我们的数据和来自Bin-Hefeex(滨-海菲克斯)等人的数据说明，TFG部分地在固有水平下经由骨髓谱系的标记免疫调节剂(包括单核细胞和巨噬细胞)起作用。共同的数据说明当研发新的药物或治疗时，不得不考虑TFG对免疫功能的调节。诱发炎症的能力对于产生局部抗微生物作用而言可能是积极的，但是炎症对于局部施用的乳膏和凝胶而言又可能是消极的。例如就HIV-1而言，杀微生物剂诱导的炎症可能是有害的并且既为HIV-1感染提供活化的细胞又将另外的靶细胞征募至施用位点(Fichorova(菲希罗拉)，2004)。也许诱导细胞因子的化合物在用于***乳膏之前应该被从我们的TFG提取物中除去。在TFG甲醇提取物的存在下，在皂苷介导下，我们的结果显示炎性细胞因子增加，这与其他研究是相反的，其他研究显示佛波醇-12-肉豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PMA)诱导的TNF-α降低(Kawabata(川端)等人，2011)。此外，TFG种子提取物可以与内分泌***相互作用(Sreeja(斯利亚)等人，2010)并且因此可以调节多种***受体调节的免疫应答，包括负影响树突细胞(DC)的成熟和增强来自浆细胞样DC的TLR应答(Escribese(艾斯克里拜斯)等人，2008；Seillet(赛尔特)等人，2012)。TFG是否影响一般的固有细胞因子应答以及免疫调节是否具有体内相关性仍待确定。

为了进行TFG提取物用于局部施用的用途的首次概念验证，我们在小鼠HSV-2***激发模型中评估了包含TFG种子提取物的杀微生物剂凝胶。我们发现包含浓度0.5和2.5μg/ml的TFG的凝胶对HSV-2发展均具有一定的积极作用(图14A和14B)。我们使用了致死剂量的HSV-2，这可能是TFG组中小鼠被感染的原因。另一个原因可能是TFG提取物的不均一性并且未知该提取物中的一些化合物是否增加体内HSV-2感染，而其他化合物限制病毒。由于小鼠不完全

应该强调的是，TFG提取物的内含物可以取决于该植物的地理以及用于制备提取物的程序而不同(Taylor(泰勒)等人，2002)。由于种子和植物的制备差异及其植物化学内含物的差异，将结果从一项研究外推到另一项研究是非常困难的。

总之，本发明研究为TFG的抗病毒作用、细胞刺激作用以及免疫调节作用提供了新的知识。据我们所知，我们的研究是第一项示出TFG提取物的抗病毒作用以及该提取物可以怎样影响细胞因子平衡的研究。这些研究可以与小鼠的初步概念验证研究一起构成进一步研发对抗重大人类病原体(例如HSV-2和HIV-1)的抗微生物乳膏和杀微生物剂的基础。此外，这些结果认为进一步研究TFG提取物的化学内含物是正当的。

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实例5

提取物抑制恶性疟原虫增殖

使用阿莫地喹敏感株K1通过改良的[3H]-次黄嘌呤掺入测定(Scala(斯卡拉)，F.，Fattorusso(法托拉索)，E.，Menna(门纳)，M.，Taglialatela-Scafati(塔利亚拉泰拉-斯卡法蒂)，O.，Tierney(蒂尔尼)，M.，Kaiser(凯泽)，M.，Tasdemir(泰斯德米拉)，D.，2010.Bromopyrrole alkaloids as leadcompounds against protozoan parasites(作为抗原生动物寄生虫的先导化合物的溴吡咯生物碱)，Marine Drugs(海洋药物)8，2162–2174)测试提取物稀释物的抗红细胞内期的恶性疟原虫的体外活性。用作阳性对照的标准药物是阿莫地喹。

简言之，将寄生虫培养物在具有5％Albumax(没有次黄嘌呤)的RPMI1640培养基中孵育，将其在微量滴定板中暴露于连续提取物稀释物。在37℃下于减氧气氛中孵育48h后，向每个孔中添加0.5μCi 3H-次黄嘌呤。在玻璃纤维滤器上收获培养物并用蒸馏水洗涤之前，将其再孵育24h。使用BetaplateTM液体闪烁计数器(瓦拉克公司(Wallac)，苏黎世，瑞士)对放射性计数。将结果记录为在每个药物浓度下的每分钟计数(CPM)/孔并且将其表达为未处理的对照的百分比。从用图形方式绘制的剂量-反应曲线计算IC50值。获得的每个IC50值都是一式两份地进行的至少两个独立实验的平均值(变化最大为20％)。

结果显示在160倍的稀释度下，提取物获得的值为51.5CPM，其中参比药物(阿莫地喹)示出的活性为47.5CPM。因此，该提取物示出类似于参比药物的活性的抗疟原虫活性。

实例6

2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺的制备

2-硝基-十二烷-3-醇。

将58.1g(0.37mol)癸醛(0.37mol)；55.8g(0.74mol)硝基乙烷和1.75g(19mol)氟化钾与400mL 2-丙醇混合并在室温下搅拌48小时。添加无水MgSO₄，将混合物过滤并在真空中浓缩。收率80.8g(94％)。

根据文献数据进行NMR(D.L.Haire(海尔)，E.G.Janzen(詹曾)：Can.J.Chem.(加拿大化学杂志)60，1514(1982))

2-硝基十二烷-3-基乙酸酯。

在搅拌下，将2.4g(10.4mmol)2-硝基-十二烷-3-醇添加至1.15(11.3mmol)预冷至0℃的乙酸酐中。添加1滴浓硫酸并且再继续搅拌3小时。将混合物倾倒进水中并用二***提取。将有机相用NaHCO₃溶液洗涤，用Na₂SO₄干燥并在真空中浓缩，以给出1.77g(62％)。

(E/Z)-2-硝基十二-2-烯。

将2.70g(10mmol)2-硝基十二烷-3-基乙酸酯、75mL叔丁醇和1.6g(12mmol)在35℃下搅拌10小时，倾倒进水中并用二***提取。将有机相用Na₂SO₄干燥，过滤，在真空中浓缩并使用乙酸乙酯/己烷梯度在硅胶60(Silicagel 60)上通过干柱色谱法纯化。收率：1.2(56％)。根据文献数据进行NMR(N.Ono(小野)，K.Maruyama(丸山)：Bull.Chem.Soc.Jpn.(日本化学学会学报)61，4470-4472(1988))。

2-甲基-2-硝基-3-壬基环氧乙烷。

将1.87g(8.80mmol)(E/Z)-2-硝基十二-2-烯溶解于40mL甲醇中并冷却至0℃。在剧烈搅拌下，添加5mL 30％H₂O₂和7.5mL 2M NaOH的混合物，将其持续1小时。将混合物倾倒进冷1M HCl中并用二***提取。将有机相用Na₂SO₄干燥，过滤并在真空中浓缩，以给出1.68g(83％)产物。

1H-NMR(500MHz，CDCl3)：δ3.45(t，1H)；1.95(s，3H)；1.59(m，4H)；1.37(m，12H)；0.89(t，3H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)：δ87.96；63.10；33.87；31.85；29.39；29.35；29.23；29.12；29.05；28.91；24.68；22.64；14.08；13.67。

2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺。

将30mL己烷中的0.69g(3mmol)2-甲基-2-硝基-3-壬基环氧乙烷添加至包含19％H₂O、10mg CoCl₂·6H₂O和0.23g NaBH₄的6g Al₂O₃的混合物中。将此混合物在30℃下搅拌1小时，过滤，用二***洗涤并在真空中浓缩。收率：0.60g(定量的)。

1H-NMR(500MHz，CDCl3)：δ3.36(dd，1H)；1.86(s，2H)；1.49(m，4H)；1.37(m，12H)；0.81(t，3H)。13C-NMR(125MHz，CDCl3)：δ87.97；63.11；31.84；29.40；29.36；29.24；29.14；27.88；25.80；22.66；14.10；13.71。

实例7

2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺抑制恶性疟原虫增殖

将在实例6中获得的15.3mg 2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺与100μlDMSO(二甲亚砜)混合，以获得储备溶液。通过将100uL储备溶液与400uL寄生虫培养基混合制备第一溶液。随后，将此溶液以15个稀释系列加以稀释，每个稀释系列被稀释3倍。将与实例6中使用的相同的方案用于此实验。

确切地，将[3H]-次黄嘌呤的掺入用作恶性疟原虫的生存条件的量度。通过trizol处理将寄生虫同步至环状体期并且然后以0.3％寄生虫血症以5％分血器在100uL包含[3H]-次黄嘌呤的生长培养基中孵育一个复制周期(即48hr)。一式三份地进行每个实验。

实验结果示于图15中，该图显示在2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺的存在下，恶性疟原虫的生长率的抑制是浓度依赖性的。

实例8

2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺对MRSA或MSSA的作用

将在实例6中获得的15.3mg 2-甲基-3-壬基环氧乙烷-2-胺与100μlDMSO(二甲亚砜)混合，以获得储备溶液。使用该储备溶液确定针对MRSA(耐甲氧西林金黄色葡萄球菌)和MSSA(甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌)的MIC(最低抑菌浓度)。

在稀释系列中测量MRSA和MSSA值分别为38.3mg/ml和9.6mg/ml。因此，测试化合物针对两种测试的微生物具有抗微生物性。

Claims

1.一种具有以下通式的化合物：

其中

X表示O或S，

R₃和R₄可以独立地表示氢，包含多达六个碳原子的直链或支链烷基、烯基或炔基基团，所述基团任选地被一个或多个卤素原子取代，或者R₃和R₄可以与它们连接至其上的氮原子一起或与R₁一起形成包含多达三个选自氮、氧和硫的环杂原子的5至7元饱和或不饱和的杂环，该环任选地被一个或多个选自卤素、硝基、-S(O)pR⁶、C_1-4烷基、C_1-4烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷氧基、＝O以及＝NO-R⁵的基团取代，应理解的是当存在于该环中时，硫原子可以处于基团-SO₂-或-SO-的形式；

R₅表示包含多达六个碳原子的直链或支链烷基基团，所述基团任选地被一个或多个卤素原子取代，表示C_1-4烷氧基，或表示包含从2至6个碳原子的直链或支链烯基或炔基基团，所述基团任选地被一个或多个卤素原子取代；并且

p是0、1或3

及其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R₂表示包含5个或更多个碳原子的直链或支链烷基或烯基基团。

3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R₂表示具有1至4个双键的直链或支链烯基基团。

4.根据权利要求3所述的化合物，其中双键位于从该烯基基团的甲基末端数第三个、第六个或第九个碳原子处。

5.根据权利要求1至4中的任一项所述的化合物，具有以下化学式

6.根据权利要求5所述的化合物，其中R₂是

n＝3，4，5或6

7.一种根据以上权利要求中任一项所述的组合物，包括根据权利要求1至0中任一项所述的化合物以及药学上可接受的助剂。

8.根据权利要求1至0中任一项所述的化合物，用于在通过疗法治疗人体或动物体的方法中使用。

9.根据权利要求1至0中任一项所述的化合物，用于在预防或治疗病毒感染中使用。

10.根据权利要求1至0中任一项所述的化合物，其中所述病毒选自具有脂质膜的病毒的组。

11.根据权利要求1至0中任一项所述的化合物，其中该病毒是单纯性疱疹病毒(HSV)、流感病毒、人***瘤病毒(HPV)或人类免疫缺陷病毒(HIV)。

12.根据权利要求1至0中的任一项所述的化合物，用于在增殖细胞中使用。

13.根据权利要求1至0中的任一项所述的化合物，其中将该化合物用于治疗伤口，例如手术伤口或烧伤，口腔疾病，牙周病，眼部感染或眼睛附器感染，感冒疮以及咽炎。

14.根据权利要求0所述的化合物，其中所述牙周病选自牙龈炎、牙周炎以及口臭。

15.根据权利要求1至0中的任一项所述的化合物，用于在治疗对细胞因子敏感的疾病中使用。

16.根据权利要求15所述的化合物，其中该细胞因子选自下组，该组包括IL-6、CCL-3和IL-10。

17.根据权利要求15或16所述的化合物，其中对细胞因子敏感的该疾病是糖尿病、动脉粥样硬化、抑郁、阿尔茨海默病、***性红斑狼疮、类风湿性关节炎、自身免疫性疾病、慢性炎性增生性疾病、冠状动脉疾病、血液和实体恶性肿瘤、哮喘、关节炎、肺炎、银屑病或多发性硬化。

18.根据权利要求1至0中任一项所述的化合物，用于在预防或治疗疟疾中使用。

19.根据权利要求1至0中任一项所述的化合物，用于在预防或治疗由耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)或甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)引起的感染中使用。

20.根据权利要求1至0中的任一项所述的化合物，用于制备一种药物组合物。

21.一种药物组合物，包括根据权利要求1至0中的任一项所述的化合物，其中所述药物组合物被配制为凝胶剂、乳膏、漱口剂、口香糖、牙膏、香膏、硬膏剂、唇膏、喷雾剂、软膏、胶囊剂、滴剂或片剂。

22.一种用于治疗或预防病毒或疟原虫属感染的方法，其中向罹患由具有脂质膜的病毒或疟原虫属引起的疾病的人以足以治愈或减轻该疾病的量给予一定量的药物组合物，该药物组合物包括根据权利要求0至0中的任一项所述的化合物。