CN104777315A - 一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测s100的方法 - Google Patents

一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测s100的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，主要包括以下步骤：(1)包被，即以金磁微粒作为免疫反应和固相分离的载体，将S100抗体偶联在金磁微粒的表面；(2)封闭，即用封闭液封闭金磁微粒表面未与S100抗体结合的空白位点；然后磁性分离，弃上清；(3)将待检样品和能与抗原发生特异性结合的酶标二抗加入经过步骤(2)封闭后的结合S100抗体的金磁微粒中反应，形成“双抗体夹心复合物”；(4)清洗；(5)检测。本发明的方法检测灵敏度高、特异性好、线性范围宽、精密度高、稳定性好、无放射性污染、操作安全、方法简便快速。

Description

一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法
技术领域
本发明涉及一种化学发光免疫学检测S100的方法。
背景技术
目前市场上对S100蛋白的免疫学检测方法主要包括酶联免疫分析法、电化学发光法、放射免疫分析法、免疫放射测定法和荧光免疫测定法等。酶联免疫分析法可用于定量检测，但操作步骤繁琐，受人为因素影响大，在灵敏度、特异性和应用范围上差别很大。电化学发光法定量检测的准确度较高，水平具有定量和稳定的优点，但是不适合于现代自动免疫仪器，需要专门的配套仪器使用，投资成本较高、因此难以推广应用。放射免疫分析法和免疫放射测定法存在放射污染和危害，核素半衰期短，试剂盒稳定期短，操作繁琐等不足而应用受限。荧光免疫测定法需专门的荧光设备，因此临床上不易普及。
传统的磁性微粒大多是通过表面功能化修饰后带有的羧基(-COOH)、羟基(-OH)、氨基(-NH2)、醛基(-CHO)等活性基团与抗原或抗体的共价作用将这些抗原抗体偶联在磁珠表面的。偶联过程复杂，而且在偶联时容易导致抗原或抗体失活，不仅偶联效率低，而且浪费成本，由于这些原因，使得基于磁性微粒的化学发光的普及应用受到一定的限制。
磁性复合微粒，又称磁性微球或磁珠，是20世纪70年代末发展起来并被广泛用于生物医学领域的超顺磁性纳微米复合粒子，是由高分子或无机材料与磁性超细粉末(包括磁性金属如Fe，Co，Ni或其金属氧化物等)构成的胶态复合物。在外加磁场作用下，磁性粒子的超顺磁性可保证既能被快速分离，本身又不会被永久磁化。纳微米级磁性复合微粒具有较高的比表面积，表现出较强的吸附能力。通过物理吸附，或利用修饰在磁性复合微粒表面的活性基团可将酶、抗体、寡核昔酸及核酸等生物活性物质偶联在其表面。因而磁性抗体免疫技术(Magnetic Antibody Immunoassay,MAIA)技术具检测速度快、特异性高、灵敏度高、重复性好、无放射性污染等优点，该方法在医学检测、环境监测及食品安全检测等领域有着很好的应用前景。
胶体金很早就被用于生物分子的标记和检测，将磁性纳米粒子在外磁场中的可分离性和胶体金特性结合起来，制备组成为Fe/Au，Fe3O4/Au，Co/Au等磁性微粒被称为“金磁微粒”。
金磁微粒是一种新型磁性无机物复合微粒，由胶体金颗粒与磁性粒子复合形成的，这种材料兼有磁性粒子在外磁场中的可分离性以及胶体金对生物分子的快速固定化等特点，在生物与医学领域具有重要的应用前景。结合磁性纳米粒子的超顺磁性和金表面生物分子可修饰性的双重特质，发明人研制了Fe3O4/Au磁性复合微粒，并将其实现了商业化。
化学发光免疫分析技术诞生于1977年。Halmann等根据放射免疫分析的基本原理，将高灵敏的化学发光技术与高特异性的免疫反应结合起来，建立了化学发光免疫分析法。该技术包含两个***，即免疫分析***和化学发光分析***。因此，它兼具免疫分析高特异性及化学发光高灵敏度于一体的特点。免疫分析***是应用抗原、抗体间反应的原理，通过将化学发光物或酶标记于抗原或抗体上，经过免疫反应，形成抗原-抗体复合物。化学发光分析***则是在免疫反应结束后，加入酶的化学发光底物或氧化剂，化学发光物质在氧化剂作用下形成激发态的中间体，不稳定的中间体在回到稳定基态时，将发射出光子，此时可通过化学发光检测器对化学发光强度进行检测。该方法能够进行定性分析和定量分析，是一种综合性技术。
基于磁性微粒的化学发光免疫分析法是将磁分离技术、免疫分析技术及化学发光检测技术三者有效结合在一起的新型的分析检测技术，因而具有化学发光的高灵敏度、免疫分析的强特异性、磁分离***的快速分离的特点，此外，还具有检测时间短、线性范围宽、以及易实现自动化等优点，因此，近年来被广泛应用于临床诊断、生物医学、食品安全及毒品检测等众多方面。
在实际检测过程中，针对不同的检测因子，因其检测范围、灵敏度需求不同，免疫反应、磁分离、化学发光各***的条件优化和相互协调就显得非常重要。尤其是新型创新磁性颗粒偶联抗原或抗体的方式、免疫反应的抗体用量及反应时间、磁分时长及次数、化学发光剂及底物选择，都是此方法研究的重点和难点。
发明内容
本发明提供了一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，以解决上述背景技术检测S100存在的局限性、特异性、灵敏性、危险性等问题。
为实现上述发明目的，本发明给出以下基本解决方案：
一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，包括以下步骤:
(1)包被
以金磁微粒作为免疫反应和固相分离的载体，将S100抗体偶联在金磁微粒的表面；
(2)封闭
用封闭液封闭金磁微粒表面未与抗体结合的空白位点；然后磁性分离，弃上清，用清洗缓冲液清洗后悬于保存缓冲液中保存备用；
(3)与待测物结合
将待检样品和能与抗原发生特异性结合的酶标二抗加入经过步骤(2)封闭后的结合有S100抗体的金磁微粒中反应，待测样品中游离的S100蛋白被磁微粒上包被的特异抗体捕获，同时与酶标二抗结合，形成“双抗体夹心复合物”；
(4)清洗
用清洗缓冲液清洗双抗体夹心复合物，磁性分离，弃上清；
(5)检测
向经过步骤(4)处理后形成的双抗体夹心复合物中加入化学发光底物液，在化学发光底物液加入后的25～35min内测量各孔的发光强度；发光强度与待测样本的浓度成反比关系。
为实现更好的检测效果，步骤(1)具体可以包括以下步骤:
(1.1)预处理:取金磁微粒，用平衡缓冲液平衡1～3遍；
(1.2)偶联:将S100抗体与偶联缓冲液混合，将所得混合液加入经过预处理的金磁微粒中，置于摇床，在35-38℃，170～210rpm条件下充分反应30～40min，反应完后，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；
(1.3)清洗:用清洗缓冲液清洗3-4次，磁性分离，弃上清；
(2)封闭
在步骤(1)的产物中加入封闭液，置于摇床中，在35-38℃条件下，以170～210rpm的转速反应1.3～1.7小时，封闭金磁微粒表面未与S100抗体结合的空白位点；然后磁性分离，弃上清，用清洗缓冲液清洗后悬于保存缓冲液中保存备用。
(3)与待测物结合
将待检样品和能与抗原发生特异性结合的酶标二抗加入经过步骤(2)封闭后的结合S100抗体的金磁微粒中反应，待测样品中游离的S100蛋白被磁微粒上包被的特异抗体捕获，同时与酶标二抗结合，形成“双抗体夹心复合物”；
(4)清洗
用清洗缓冲液清洗双抗体夹心复合物，磁性分离，弃上清；
(5)检测
向经过步骤(4)处理后形成的双抗体夹心复合物中加入化学发光底物液，在化学发光底物液加入后的25～35min内测量各孔的发光强度；发光强度与待测样本的浓度成反比关系。
步骤(1.1)平衡缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH6.5～7.8，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.2～7.8，浓度为0.01M～0.05M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液、
pH7.4～8.2，浓度为0.01M～0.04M的BS缓冲液；
步骤(1.2)偶联缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH3.6～5.8，浓度为0.01M～0.02M的醋酸盐缓冲液、
pH6.5～7.8，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.2～7.8，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(l.3)中采用的清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或含0.04-0.07％吐温的该种缓冲液：
pH3.6～5.8，浓度为0.01M～0.02M的醋酸盐缓冲液、
pH6.5～7.8，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.2～7.8，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(2)所述封闭液为牛血清白蛋白、脱脂奶粉、赖氨酸或动物血清之中的任一种或其中2-3种的混合物，该封闭液的质量体积浓度(g/ml)为2-5％；所述动物血清为胎牛血清或马血清，封闭剂配置缓冲溶液为偶联缓冲液；
所述封闭剂配置缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH7.7～8.0，浓度为0.01M～0.04M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.3，浓度为0.01M～0.05M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(2)中采用的清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或含0.08-0.15％吐温的该种缓冲液：
pH7.7～8.0，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.3，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(2)中采用的保存缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH7.7～8.0，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.3，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(4)所述清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或者含0.02-0.1％吐温的该种缓冲液：
pH7.7～8.0，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.2，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
所述步骤(1.3)中的清洗缓冲液是含0.05％吐温的该种缓冲液；
所述步骤(2)中的清洗缓冲液是含0.1％吐温的该种缓冲液；
所述步骤(4)中的清洗缓冲液是含0.05％吐温的该种缓冲液。
步骤(3)采用的酶标二抗是碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠或山羊抗兔。
步骤(5)中采用的化学发光底物是鲁米诺、异鲁米诺或1,2一二氧乙烷类衍生物。
上述1,2一二氧乙烷类衍生物是AMPPD、CSPD或CDP-STAR。
本发明具有以下优点：
本发明以金磁微粒为载体，结合化学发光检测***，建立了基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法。在本方法中所使用的抗体为单克隆抗体，与抗原之间反应特异性好，有效避免交叉反应，且由于金磁微粒对蛋白质等大分子物质具有的高吸附能力，加之其兼备酶联免疫分析的高特异性、无污染的特点，还保留了化学发光法的高灵敏度，弥补了它在特异性上的不足。
在制备过程中不同步骤确立了适宜的缓冲溶液和PH值，使得抗体与固相载体之间有效结合，并有效进行位点封闭，避免的了非特异性反应的产生。该方法检测灵敏度高、特异性好、线性范围宽、精密度高、稳定性好、无放射性污染，操作安全，方法简便快速。尤其在检测灵敏度、特异性、准确度及精密度方面均比显色法酶免检测有显著提高。
附图说明
图1是本发明所用的固相载体-金磁微粒的结构示意图；
图2是本发明的方法中用金磁微粒包被S100的操作示意图；
图3是本发明的基于金磁微粒双抗体夹心法原理示意图；
图4是本发明实施例1检测S100的定量反应曲线。
图5是本发明实施例2检测S100的定量反应曲线。
具体实施方式
以下实施例对本发明的方案以具体实验操作的形式示例，其中的实验条件和设定参数不应视为对本发明基本技术方案的局限；本领域技术人员应当能够认识到，基于权利要求方案限定的范围内确定具体的实验条件和参数，仍可取得足够满意的效果。
实施例1：基于金磁微粒的化学发光免疫学定量检测人血清中S100的方法
(1)包被
(l.1)预处理:取10mg/ml的金磁微粒100μl，用pH7.4，0.02M Tris-HCl平衡缓冲液100μl清洗2次，平衡磁粒的pH。
(l.2)偶联:将160μg S100抗体溶解于200μl pH7.4，0.02M Tris-HCl偶联缓冲液中，混匀后加入预处理过的金磁微粒中，于37℃,180rpm，摇床中反应35min。反应完毕后取出，磁性分离2min，弃上清。
(l.3)清洗:加入200μl pH7.4，含0.05％吐温-20的0.02M Tris-HCl清洗缓冲液，磁性分离2min，弃上清。
(2)封闭:向金磁微粒中加入1ml含5％牛血清白蛋白，2.5％脱脂奶粉和3％胎牛血清的pH8.0，0.01M PB缓冲液中，于37℃，180rpm，摇床中反应1.5h，磁性分离2min，弃上清。用1ml pH 8.0，含0.1％吐温-20的0.01M PB缓冲液清洗3次，磁粒悬于1ml pH8.0的0.02M Tris-HCl的保存缓冲液中，4℃备用。
(3)与待测物结合:取出包被后的金磁微粒，于室温下平衡20min，依次加入包被有S100抗体的金磁微粒20μl、待测样本(0ng/ml、0.05ng/ml、0.1ng/ml、0.3ng/ml、0.6ng/ml、1ng/ml、3ng/ml、6ng/ml、12ng/ml、35ng/ml)各50μl、ALP标记羊抗鼠50μl，置摇床中37℃,180rpm，反应2h，形成双抗体夹心复合物。
(4)清洗:取出离心管置于磁性分离器上，弃上清，用pH 8.0含0.05％吐温-20的0.02M Tris-HCl清洗缓冲液清洗3次，磁性分离2min，弃上清。
(5)检测:将经过步骤(4)处理后形成的双抗体夹心复合物的金磁微粒转入96孔板，并向其加入发光底物AMPPD溶液100μl，于加入后的30min内检测各孔的发光强度(RLU)，其发光强度与待测样本浓度关系如图四所示，在0.05ng/ml～35ng/ml范围内线性较好，最低检出限可达0.02ng/ml。
在实施过程中我们选取了具有合适pH范围且能够适应金磁微粒载体的缓冲溶液，并且在反应条件的合适范围内选取了具有最佳效果的值。偶联时免疫反应的S100抗体用量与金磁微粒的最佳比例为1∶0.15。
实施例2：基于金磁微粒的化学发光免疫学定量检测人血清中S100的方法
(1)包被
(l.1)预处理:取10mg/ml的金磁微粒100μl，用pH7.6，0.02M Tris-HCl平衡缓冲液100μl清洗2次，平衡磁粒的pH。
(l.2)偶联:将150μg S100抗体溶解于200μl pH7.6，0.02M Tris-HCl偶联缓冲液中，混匀后加入预处理过的金磁微粒中，于35℃,200rpm，摇床中反应38min。反应完毕后取出，磁性分离2min，弃上清。
(l.3)清洗:加入200μl pH7.6，含0.07％吐温-20的0.02M Tris-HCl清洗缓冲液，磁性分离2min，弃上清。
(2)封闭:向金磁微粒中加入1ml含5％牛血清白蛋白，2.5％脱脂奶粉和3％胎牛血清的pH8.0，0.01M PB缓冲液中，于38℃，200rpm，摇床中反应1.7h，磁性分离2min，弃上清。用1ml pH 7.8，含0.1％吐温-20的0.01M PB缓冲液清洗3次，磁粒悬于1ml pH7.8的0.02M Tris-HCl的保存缓冲液中，4℃备用。
(3)与待测物结合:取出包被后的金磁微粒，于室温下平衡20min，依次加入包被有S100抗体的金磁微粒20μl、待测样本(0ng/ml、0.05ng/ml、0.1ng/ml、0.3ng/ml、0.6ng/ml、1ng/ml、3ng/ml、6ng/ml、12ng/ml、35ng/ml)各50μl、ALP标记羊抗鼠50μl，置摇床中35℃,190rpm，反应2.2h，形成双抗体夹心复合物。
(4)清洗:取出离心管置于磁性分离器上，弃上清，用pH 8.2含0.05％吐温-20的0.02M Tris-HCl清洗缓冲液清洗3次，磁性分离2min，弃上清。
(5)检测:将经过步骤(4)处理后形成的双抗体夹心复合物的金磁微粒转入96孔板，并向其加入发光底物AMPPD溶液100μl，于加入后的35min内检测各孔的发光强度(RLU)，其发光强度与待测样本浓度关系如图四所示，在0.05ng/ml～35ng/ml范围内线性较好，最低检出限可达0.02ng/ml。
结论：图4是基于金磁的化学发光检测S100的剂量反应曲线，在0.05ng/ml～35ng/ml线性良好，最低检测限达0.02ng/ml。
图5是基于金磁的化学发光检测S100的剂量反应曲线，在0.05ng/ml～35ng/ml线性良好，最低检测限达0.02ng/ml。

Claims (7)

1.一种基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，包括以下步骤：
(1)包被
以金磁微粒作为免疫反应和固相分离的载体，将S100抗体偶联在金磁微粒的表面；具体过程如下：
(1.1)预处理:取金磁微粒，用平衡缓冲液平衡1～3遍；
(1.2)偶联:将S100抗体与偶联缓冲液混合，将所得混合液加入经过预处理的金磁微粒中，置于摇床，在35-38℃，170～210rpm条件下充分反应30～40min，反应完后，置于磁性分离器上，磁性分离，弃上清；
(1.3)清洗:用清洗缓冲液清洗3-4次，磁性分离，弃上清；
(2)封闭
在步骤(1)的产物中加入封闭液，置于摇床中，在35-38℃条件下，以170～210rpm的转速反应1.3～1.7小时，封闭金磁微粒表面未与S100抗体结合的空白位点；然后磁性分离，弃上清，用清洗缓冲液清洗后悬于保存缓冲液中保存备用；
(3)与待测物结合
将待检样品和能与抗原发生特异性结合的酶标二抗加入经过步骤(2)封闭后的结合S100抗体的金磁微粒中反应，待测样品中游离的S100蛋白被磁微粒上包被的特异抗体捕获，同时与酶标二抗结合，形成“双抗体夹心复合物”；
(4)清洗
用清洗缓冲液清洗双抗体夹心复合物，磁性分离，弃上清；
(5)检测
向经过步骤(4)处理后形成的双抗体夹心复合物中加入化学发光底物液，在化学发光底物液加入后的25～35min内测量各孔的发光强度；发光强度与待测样本的浓度成反比关系。
2.根据权利要求1所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，其特征在于：
步骤(1.1)平衡缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH6.5～7.8，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.2～7.7，浓度为0.01M～0.05M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液、
pH7.4～8.2，浓度为0.01M～0.04M的BS缓冲液；
步骤(1.2)偶联缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH3.6～5.8，浓度为0.01M～0.02M的醋酸盐缓冲液、
pH6.5～7.8，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.2～7.7，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(l.3)中采用的清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或含0.04-0.07％吐温的该种缓冲液：
pH3.6～5.8，浓度为0.01M～0.02M的醋酸盐缓冲液、
pH6.5～7.8，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.2～7.7，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(2)所述封闭液为牛血清白蛋白、脱脂奶粉、赖氨酸或动物血清之中的任一种或其中2-3种的混合物，该封闭液的质量体积浓度(g/ml)为2-5％；所述动物血清为胎牛血清或马血清，封闭剂配置缓冲溶液为偶联缓冲液；
所述封闭剂配置缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH7.7～8.0，浓度为0.01M～0.04M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.3，浓度为0.01M～0.05M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(2)中采用的清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或含0.08-0.15％吐温的该种缓冲液：
pH7.7～8.0，浓度为0.005M～0.02M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.3，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(2)中采用的保存缓冲液选自以下缓冲液中的任一种：
pH7.7～8.0，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.3，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液；
步骤(4)所述清洗缓冲液选自以下缓冲液中的任一种或者含0.02-0.1％吐温的该种缓冲液：
pH7.7～8.0，浓度为0.01M～0.05M的磷酸盐(PB)缓冲液、
pH7.6～8.2，浓度为0.01M～0.05M的BS缓冲液、
pH7.9～8.2，浓度为0.01M～0.04M的三羟甲基氨基甲烷盐酸盐(Tris-HCl)缓冲液。
3.根据权利要求2所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，其特征在于:
所述步骤(1.3)中的清洗缓冲液是含0.05％吐温的该种缓冲液；
所述步骤(2)中的清洗缓冲液是含0.1％吐温的该种缓冲液；
所述步骤(4)中的清洗缓冲液是含0.05％吐温的该种缓冲液。
4.根据权利要求1所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，其特征在于:
步骤(1)中采用的S100单克隆抗体为Meridian或Hytest公司产品。
5.根据权利要求1所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，其特征在于:
步骤(3)反应的条件为：将待检样品和酶标二抗加入金磁微粒中，置于摇床，在35-38℃条件下，以170～210rpm的转速反应1.8～2.2小时；采用的酶标二抗是碱性磷酸酶标记或辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠或山羊抗兔。
6.根据权利要求1所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，其特征在于：步骤(5)中采用的化学发光底物是鲁米诺、异鲁米诺或1,2一二氧乙烷类衍生物。
7.根据权利要求6所述的基于金磁微粒的化学发光免疫学检测S100的方法，其特征在于：所述1,2一二氧乙烷类衍生物是AMPPD、CSPD或CDP-STAR。
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