CN104686804B - 一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法 - Google Patents
一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104686804B CN104686804B CN201510092514.9A CN201510092514A CN104686804B CN 104686804 B CN104686804 B CN 104686804B CN 201510092514 A CN201510092514 A CN 201510092514A CN 104686804 B CN104686804 B CN 104686804B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fermentation
- bacillus subtilis
- aquatic product
- fish
- activated peptide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
- Y02A40/80—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in fisheries management
- Y02A40/81—Aquaculture, e.g. of fish
- Y02A40/818—Alternative feeds for fish, e.g. in aquacultures
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，包括以下主要步骤：将新鲜的水产品下脚料绞碎；绞碎后的水产品下脚料加入到发酵罐中，并添加营养物和水混匀作为发酵培养基；发酵罐中的培养基灭菌冷却后接入能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL‑1进行液态好氧发酵；发酵结束后发酵液升温至90℃灭酶5min，然后经过滤去除沉淀得到滤液，滤液再进行真空浓缩和喷雾干燥后而得到活性肽饲料添加剂成品。本发明方法制备的活性肽饲料添加剂富含抗菌肽与营养小肽，它具有良好的促生长性能与抗病能力，具有良好的应用前景和社会意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，属于水产品加工与利用领域。
背景技术
自20世纪50年代以来，在动物饲养和饲料中广泛使用抗生素、化学合成药物、激素、β-***、重金属、镇静剂等促生长保健剂。抗生素等促生长保健剂在饲料中的应用历史由来已久,它创造了养殖业和饲料工业的革命,使得规模养殖在全世界范围内得到了迅速发展,动物的生产数量和饲料转化率得到大幅度提高。但是,正如所有工业文明的成果都有它的负面影响一样,长期以来使用抗生素等非绿色饲料添加剂, 导致了如下的问题：畜禽和水产产品中药物残留严重，直接危害人体健康；畜禽和水产产品品质下降，缺乏市场竞争力和信任感；细菌耐药性增强、耐药菌株增多，威胁人类安全；破坏生态环境等。随着饲料工业和畜牧水产业的迅猛发展，目前我国的畜产品和水产品已从短缺转变为阶段性过剩，人们更关心食品是否安全、卫生，因而绿色消费已成为今后的发展趋势，加之我国已加入ＷＴＯ， 发达国家对我国出口的农产品要求越来越严格，目前药物残留问题成为我国畜产品和水产品走出国门的主要障碍之一。因此加速开发、推广和应用新型绿色饲料添加剂势在必行。
大量的文献表明，在日粮中添加不同来源的活性肽均能提高不同饲养动物的生产性能，活性肽的促生长性能已得到饲料行业的公认。因而，作为一种新型绿色饲料添加剂，活性肽饲料添加剂有着良好的应用前景。生物活性肽可分为两大类，即营养小肽和功能肽。营养性小肽是只为蛋白质合成提供氮架,不具有特殊生理调节功能的活性肽。功能肽为具有某些特殊功能的肽，如抗菌肽、抗氧化肽、免疫肽和激素肽等。
活性肽的制备主要是将大分子蛋白质用化学或酶的方法水解成小分子的肽。目前活性肽的制备方法有化学法、酶解法和微生物发酵法。化学水解法是采用酸、碱化学试剂在一定温度下促使蛋白质分子的肽链断裂形成小分子肽。化学水解法虽然简单、成木低，但是其缺点是不能进行有规则地控制生产,氨基酸会受到损害而降低其营养价值，并且对环境污染大。目前化学水解法多用于试验,生产实践中使用较少。酶解法生产活性肽是以蛋白原料为底物,运用蛋白酶的酶解作用，生产小分子肽。酶解法易于控制，作用条件温和适合活性肽的生产。但酶解法需要大量的蛋白酶，生产成本高。因此，酶解法制备活性肽多用于食品与医药行业，低端的饲用活性肽产品很少采用酶解的方法。微生物发酵法是以大分子蛋白质为原料，接入产蛋白酶的微生物，利用微生物发酵过程产生的蛋白酶的酶解作用，生成小分子肽。微生物发酵法把蛋白酶的发酵生产和酶解过程有机结合在一起，降低了活性肽的生成成本，更适合活性肽的生产。专利CNZL200410029787.0“一种活性肽饲料添加剂及制备方法和用途”公开了一种发酵发制备活性肽饲料添加剂的方法，它是以植物蛋白和动物蛋白的一种或几种的混合物，经芽孢杆菌等发酵降解，使其水解度控制在20～35％，然后经过后处理可得到活性肽饲料添加剂。但由于发酵过程蛋白酶的浓度的不可控性，再加上酶解的随机性，因而以上方法制备的活性肽多为营养小肽，而缺乏功能肽，特别是饲料工业急需的抗菌肽。
作为饲用抗生素的一种替代品，抗菌肽通常具有耐热、抗菌谱广、水溶性好和不易产生耐药性等特性，近年来备受关注。抗菌肽的来源于动物、植物和微生物，但动植物源抗菌肽由于来源有限，应用受到了限制；而微生物抗菌肽可以大规模生产，成本相对较低，因而微生物源抗菌肽更有应用前景。目前微生物源抗菌肽研究最多的是乳酸菌的抗菌肽，而国际上对枯草芽孢杆菌产生的枯草菌素这种新型细菌素类抗菌肽研究则很少，国内更是少见。
发明内容
针对目前发酵法制备的活性肽饲料添加剂多为营养小肽，而缺乏抗菌肽，使得其功效不够突出。本发明的目的是制备一种富含抗菌肽的活性肽饲料添加剂，在进一步提高活性肽饲料添加剂促生长性能的基础上，还赋予其抗病能力。从而显著提高活性肽饲料添加剂的功效，以促进活性肽饲料添加剂在饲料工业的广泛应用。
为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，包括如下步骤：
（1）将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 ℃、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液备用；
（2）将新鲜的水产品下脚料绞碎后备用；
（3）将步骤（2）制得的绞碎的水产品下脚料放入到发酵罐中，并向发酵罐中加入水和营养物，混匀后得到发酵培养基；
（4）将步骤（3）获得的发酵罐中的发酵培养基于115℃灭菌20min；
（5）将步骤（4）获得的灭菌后的发酵培养基冷却至室温，然后接入步骤（1）所制备的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液；
（6）发酵过程的控制：发酵温度为28℃～30℃，无菌空气通入量为0.5vvm～2.5vvm，发酵罐的转速为150rpm～350rpm，发酵时间为35h～45h；
（7）成品处理：发酵结束后发酵液升温至90℃保温灭酶5min，灭酶后的发酵液冷却至室温后，经过滤去除沉淀得到滤液，滤液再经真空浓缩和喷雾干燥后而得到活性肽饲料添加剂成品。
所述步骤（1）中接入的枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）HL-1能产生枯草菌素，该菌已于2015年1月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No．10379，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。
所述步骤（2）中的水产品下脚料为虾头、扇贝裙边、去掉内脏与鱼皮的罗非鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的鳕鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的鲤鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的青鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的鲢鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的草鱼下脚料和去掉内脏与鱼皮的鲣鱼下脚料中的一种。所述步骤（3）中发酵罐中水产品下脚料的加入量以添加的水产品下脚料的质量占水总质量百分比计，为10%～20%。
所述步骤（3）中的营养物为葡萄糖、氯化亚铁和磷酸氢二钾所组成的混合物；所述步骤（3）中的营养物的加入量以添加的营养物的质量占水总质量百分比计，分别为：葡萄糖0.01%～5%，氯化亚铁0.01%～5%，磷酸氢二钾0.01%～5%。
所述步骤（5）中枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液的接种量以接入的种子液的质量占发酵培养基总质量百分比计，为0.1%～5%。
本发明跟现有的技术相比，本发明采用能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌进行目的性发酵，在得到营养小肽的同时还得到了枯草菌素这种细菌素类抗菌肽，因而本发明方法制备的活性肽饲料添加剂富含抗菌肽。富含抗菌肽，使得本发明制备的饲料添加剂在进一步提高活性肽饲料添加剂促生长性能的基础上，还赋予其抗病能力，显著提高了活性肽饲料添加剂的功效。
本发明提供了一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法。本发明得到的活性肽饲料添加剂在华南地区的猪、鸡、对虾的养殖试验表明，用本发明生产的活性肽饲料添加剂配合的饲料，不但可提高饲养动物的生长效果，而且还可提高饲养动物的免疫力和抗病力，可直接用来配制绿色饲料，具有良好的应用前景和社会意义。
具体实施方式
为了更好地理解本发明，下面就水产品下脚料的种类、发酵参数和发酵方式的选择结合实施例对本发明作进一步描述，但本发明的保护范围不限于此。
实施例1：将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 ℃、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液备用。将新鲜的去掉内脏与鱼皮的罗非鱼下脚料绞碎后备用。将10公斤绞碎的罗非鱼下脚料和100公斤水加入到发酵罐中，并向发酵罐中加入800克葡萄糖、300克氯化亚铁和500克磷酸氢二钾，获得发酵培养基；发酵罐中发酵培养基于115℃灭菌20min；接着往灭菌后冷却的发酵原料中加入2公斤枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液；发酵温度为30℃，无菌空气通入量为1.5vvm～2.5vvm，发酵罐的转速为250rpm～350rpm，发酵时间为35h；发酵结束后发酵液升温至90℃灭酶5min，灭酶后的发酵液冷却至室温后，经过滤去除沉淀得到滤液，再将滤液经真空浓缩和喷雾干燥后，即制得了本发明所述的一种利用水产品下脚料制备的活性肽饲料添加剂成品。
实施例2：将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 ℃、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液备用。将新鲜的虾头绞碎后备用。将15公斤绞碎的虾头和100公斤水加入到发酵罐中，并加入900克葡萄糖、300克氯化亚铁和550克磷酸氢二钾一起混匀，获得混匀后的发酵培养基；发酵罐中发酵培养基于115℃灭菌20min；接着往灭菌后冷却的发酵原料中加入2公斤枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液；发酵温度为28℃，无菌空气通入量为0.5vvm～1.5vvm，发酵罐的转速为150rpm～250rpm，发酵时间为45h；发酵结束后发酵液升温至90℃灭酶5min，灭酶后的发酵液冷却至室温后，经过滤去除沉淀得到滤液，再将滤液经真空浓缩和喷雾干燥后，即制得了本发明所述的一种利用水产品下脚料制备的活性肽饲料添加剂成品。
实施例3：将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 ℃、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液备用。将新鲜的扇贝裙边绞碎后备用。将20公斤绞碎的扇贝裙边和100公斤水加入到发酵罐中，并加入600克葡萄糖、300克氯化亚铁和550克磷酸氢二钾一起混匀，获得混匀后的发酵培养基；发酵罐中发酵培养基于115℃灭菌20min；接着往灭菌后冷却的发酵原料中加入2公斤枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液；发酵温度为29℃，无菌空气通入量为1.0vvm～2.0vvm，发酵罐的转速为180rpm～280rpm，发酵时间为40h；发酵结束后发酵液升温至90℃灭酶5min，灭酶后的发酵液冷却至室温后，经过滤去除沉淀得到滤液，再将滤液经真空浓缩和喷雾干燥后，即制得了本发明所述的一种利用水产品下脚料制备的活性肽饲料添加剂成品。
Claims (5)
1.一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
（1）将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 ℃、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液备用；
（2）将新鲜的水产品下脚料绞碎后备用；
（3）将步骤（2）制得的绞碎的水产品下脚料放入到发酵罐中，并向发酵罐中加入水和营养物，混匀后得到发酵培养基；
（4）将步骤（3）获得的发酵罐中的发酵培养基于115℃灭菌20min；
（5）将步骤（4）获得的灭菌后的发酵培养基冷却至室温，然后接入步骤（1）所制备的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液；
（6）发酵过程的控制：发酵温度为28℃～30℃，无菌空气通入量为0.5vvm～2.5vvm，发酵罐的转速为150rpm～350rpm，发酵时间为35h～45h；
（7）成品处理：发酵结束后发酵液升温至90℃保温灭酶5min，灭酶后的发酵液冷却至室温后，经过滤去除沉淀得到滤液；滤液再经真空浓缩和喷雾干燥后而得到活性肽饲料添加剂成品；
所述步骤（1）中所用的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No．10379；所述步骤（3）中水产品下脚料的加入量以添加的水产品下脚料的质量占水总质量百分比计，为10%～20%。
2.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，其特征在于：所述步骤（2）中的水产品下脚料为虾头、扇贝裙边、去掉内脏与鱼皮的罗非鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的鳕鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的鲤鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的青鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的鲢鱼下脚料、去掉内脏与鱼皮的草鱼下脚料和去掉内脏与鱼皮的鲣鱼下脚料中的一种。
3.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，其特征在于：所述步骤（3）中营养物为葡萄糖、氯化亚铁和磷酸氢二钾所组成的混合物。
4.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，其特征在于：所述步骤（3）中的营养物的加入量以添加的营养物的质量占水总质量百分比计，分别为：葡萄糖0.01%～5%，氯化亚铁0.01%～5%，磷酸氢二钾0.01%～5%。
5.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法，其特征在于：所述步骤（5）中枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）HL-1种子液的接种量以接入的种子液的质量占发酵培养基总质量百分比计，为0.1%～5%。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510092514.9A CN104686804B (zh) | 2015-03-02 | 2015-03-02 | 一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510092514.9A CN104686804B (zh) | 2015-03-02 | 2015-03-02 | 一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104686804A CN104686804A (zh) | 2015-06-10 |
| CN104686804B true CN104686804B (zh) | 2019-11-19 |
Family
ID=53334699
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510092514.9A Active CN104686804B (zh) | 2015-03-02 | 2015-03-02 | 一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104686804B (zh) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105231000B (zh) * | 2015-09-25 | 2020-01-07 | 广东海洋大学 | 一种利用水产品下脚料生产抗菌营养复合型饲料添加剂的方法 |
| CN109953176A (zh) * | 2017-12-23 | 2019-07-02 | 青岛麦迪尔生物工程有限公司 | 一种利用水产加工下脚料制备蛋白胨的方法 |
| CN109123726A (zh) * | 2018-10-08 | 2019-01-04 | 何秋宏 | 一种饲料用发酵鱼粉的制备方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0347051A (ja) * | 1989-04-13 | 1991-02-28 | Kanzakiya:Kk | 調味料原液の製造方法 |
| CN1114352C (zh) * | 2000-09-13 | 2003-07-16 | 山东大学 | 营养活性肽添加剂的制备方法 |
| CN1112124C (zh) * | 2001-05-15 | 2003-06-25 | 山东大学 | 海洋活性肽食品添加剂的制备方法 |
| US6960451B2 (en) * | 2002-02-06 | 2005-11-01 | Green Earth Industries | Proteolytic fermenter |
| CN1262198C (zh) * | 2003-08-15 | 2006-07-05 | 中国农业大学 | 一种活性肽饲料添加剂及其制备方法和用途 |
| CN101564081B (zh) * | 2008-04-25 | 2012-12-05 | 上海创博生态工程有限公司 | 一种利用发酵工艺生产鱼粉替代物产品的制作方法 |
-
2015
- 2015-03-02 CN CN201510092514.9A patent/CN104686804B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104686804A (zh) | 2015-06-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101297677B (zh) | 同步混菌发酵法对菜籽粕进行脱毒和菜籽蛋白改性的工艺 | |
| CN104719639A (zh) | 一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法 | |
| CN104000008A (zh) | 一种利用亚洲鲤鱼制得的蛋白饲料原料及其制备方法 | |
| CN104381607B (zh) | 一种藻菌复合发酵饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN104719635A (zh) | 一种水产品下脚料和中草药混合发酵的饲料添加剂的制备方法 | |
| CN106173204A (zh) | 一种以柠檬酸玉米淀粉渣和菌丝渣为基料发酵制备高蛋白饲料的方法 | |
| CN105695546A (zh) | 一种利用水产品下脚料发酵制备液态有机肥的方法 | |
| CN110269146A (zh) | 一种应用于饲料上的微生态制剂 | |
| CN104686804B (zh) | 一种利用水产品下脚料制备活性肽饲料添加剂的方法 | |
| CN101194668B (zh) | 一种血粉生物改性肽蛋白的生产方法及应用 | |
| CN103229891B (zh) | 一种锁阳渣生产蛋白饲料的方法 | |
| CN102342371B (zh) | 一种利用纳豆芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌制备复合饲料添加剂的工艺 | |
| CN101690541B (zh) | 一种利用微生物发酵蚕蛹制备饲料蛋白的方法 | |
| CN103829040B (zh) | 一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法与应用 | |
| CN103168914B (zh) | 一种富含红色素的微生物酵解活性肽的制备工艺 | |
| CN105231000A (zh) | 一种利用水产品下脚料生产抗菌营养复合型饲料添加剂的方法 | |
| CN102823733A (zh) | 一种基于纳豆芽孢杆菌的生物饲料添加剂的生产方法 | |
| CN103519028B (zh) | 一种肉鸡养殖饲料及其饲养方法 | |
| CN107467347A (zh) | 南美白对虾促生长饲料的制备方法 | |
| CN102178052B (zh) | 一种发酵型饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN105707473B (zh) | 一种利用水产蛋白和中草药高温发酵制备绿色饲用抗菌促生长剂的方法 | |
| CN105746886B (zh) | 一种利用水产蛋白和中草药发酵制备复合型绿色促生长饲料添加剂的方法 | |
| CN105746889B (zh) | 一种利用水产蛋白两步发酵制备绿色抗菌促生长饲料添加剂的方法 | |
| CN107173534A (zh) | 一种利用水产蛋白和羽毛粉发酵制备鱼粉替代蛋白的方法 | |
| CN105746891B (zh) | 一种利用水产蛋白和羽毛粉发酵制备禽用促生长小肽的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20200131 Address after: 524394 Gas Station on 374 Provincial Road, Yangqing Town, Suixi County, Zhanjiang City, Guangdong Province Patentee after: Zhanjiang silver Biotechnology Co., Ltd. Address before: 524088 Guangdong city of Zhanjiang province sea Mazhang District Road No. 1 Patentee before: Guangdong Ocean University |