CN103829040B - 一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法与应用 - Google Patents
一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法与应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法与应用。本发明利用陈香茶制曲阶段，温度控制在28～30℃，以利于长霉菌，有利于蛋白酶、糖化酶的生成；发酵阶段需氧菌利用有限氧气生长，枯草芽孢杆菌夺氧强，发酵罐很快处于厌氧状态，霉菌及耗氧细菌无法生长，而此时酵母菌、乳酸菌代谢加强。在酶参与下，厌氧菌代谢降低抗营养因子含量，提高有机酸及酸溶性蛋白含量，形成优质发酵豆粕。通过陈香茶复合菌及枯草芽孢杆菌协调作用，无需对豆粕进行灭菌处理，发酵过程兼性厌氧和厌氧发酵，能耗小，抑制生料致病菌生长，干物质损失低。本发明的工艺流程操作简便，既适合养殖场直接生产投喂，也适合饲料厂规模化生产。
Description
技术领域
本发明属于生物技术发酵领域，具体涉及一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法与应用。
背景技术
豆粕的蛋白质含量很高，是制备畜禽精饲料的基本原料，但直接饲喂蛋白质生物转化率较低。发酵豆粕是通过有益微生物作用提高了豆粕蛋白的溶解度，利于消化；减小了豆粕中蛋白的分子量，其中的一部分已达到小肽水平甚至氨基酸水平，可以直接被动物吸收；发酵豆粕具有一定的芳香气味和鲜味，有一定的诱食作用，适口性较好；豆粕中一些非淀粉性多糖在发酵过程中得到了分解，有利于动物消化。
发酵饲料的菌种开发，将直接影响发酵效果，不同微生物对物料的各种理化因子要求不同，而发酵过程中又难以维持某一个理化条件，因此，决定了豆粕发酵是由多种微生物共同协同或按顺序进行的。发酵豆粕产品质量的稳定性，总体上，单菌不如多菌，纯培养（多菌种的纯培养物之间的相容性不一定协调）不如曲种（曲种中的微生物是天然组合的，相互之间互补性强）。因此优良的发酵菌种开发还有待进一步研究和摸索。
陈香茶是指鲜叶经杀青、揉捻、晒干（烘干）后经长时间自然发酵或毛茶经渥堆而加工成的茶类。陈香茶中的霉菌主要为黑曲霉、产黄青霉、灰绿曲霉以及根霉,其中黑曲霉居多,占霉菌总数的80%（质量分数）。细菌主要有芽孢杆菌属如凝结芽孢杆菌（Bacillus coagulans），地衣芽孢杆菌（Bacilluslicheniformis），嗜热淀粉芽孢杆菌（Bacillus thermoamylovorans）等，另外还有乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）和植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）。酵母菌类主要是产生酒精和产酯等生香酵母。如：异常汉逊酵母（Hansenulaanomala），鲁氏酵母（Zygosaccharomyces rouxii），球拟酵母（Torulopsis Berlese），酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae），酒香酵母属（Brettanomyces sp.）等。陈香茶在后期发酵很复杂，由于茶中的蛋白质含量少，使得有害菌很难生存，大多数是有益菌，陈香茶发酵呈弱酸性，因此绝大多数为有益菌。同时，茶叶中的多酚类物质会抑制有害菌的生长。有研究表明，陈香茶类的提取物有一定的抗突变作用，对革兰氏阳性葡萄状球菌和杆状菌有潜在的抗菌活性。证明陈香茶的安全性很高。
枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）基我国农业部允许作为饲料添加剂的两种芽孢杆菌之一，已被越来越多的研制成微生物制剂。其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色”添加剂，具有广阔的发展前景，现已在畜牧业、饲料行业中广泛应用，显示出了巨大的社会效益和生态效益。枯草芽孢杆菌具有很强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等活性，能产生抗菌素，在动物肠道内具有较强生物夺氧能力，这些特性对促进动物营养的消化吸收、提高动物的饲料转化率和防病，促进生长起到重要作用。
利用以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，至今尚未有报道。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法。该方法克服了复合发酵剂存在的配伍不科学、协调效果差的问题。
本发明的另一目的在于提供通过上述制备方法得到的复合发酵豆粕。
本发明的再一目的在于提供所述的复合发酵豆粕在饲料上的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，包含如下步骤：各组分按质量百分比计
（1）将陈香茶常温下磨碎，得到陈香茶粉；
（2）曲种制备：按固体培养基A总量的1%接入步骤（1）得到的陈香茶粉，混匀，培养；菌丝布满固体培养基A后，摇瓶；固体培养基A表面长满孢子，曲种培养完成；
（3）种曲制备：按固体培养基B总量的5%～15%接入步骤（2）制得的曲种，拌匀后平摊，培养；固体培养基B表面长满菌丝后，开始翻曲散热；整个固体培养基B长满孢子后，陈香茶菌剂培养完成；
（4）枯草芽孢杆菌制剂制备：按液体培养基总量的1%～2%接入活化的枯草芽孢杆菌，培养，可得枯草芽孢杆菌制剂；
（5）将步骤（3）制得的陈香茶菌剂10～20%、步骤（4）制得的枯草芽孢杆菌制剂2%～8%、糖蜜2～10%、水17%～31%均匀混合，再与45～55%豆粕混匀，得到豆粕混合物；
（6）将步骤（5）中得到的豆粕混合物直接装填在发酵罐中发酵，密封防止水分散发；
（7）在25～37℃的条件下发酵3～6天，得到发酵好的复合发酵豆粕；
（8）步骤（7）得到的发酵好的复合发酵豆粕，可直接饲喂畜禽。
为了更好地实现本发明：
步骤（1）中所述的陈香茶优选为湖南安化黑茶、广西六堡散茶、云南普洱茶或广东大叶青等；更优选为云南普洱茶；
步骤（1）中所述的常温优选为15～25℃；
步骤（2）中所述的固体培养基A优选通过如下步骤制备：各组分按质量百分比：5%豆粕，45%麸皮，50%水，121℃灭菌30min；
步骤（2）中所述的培养的温度优选为28～30℃；
步骤（2）中所述的摇瓶后优选每8小时摇瓶1次；
步骤（3）中所述的平摊优选为平摊在竹筛上，并放入种曲房中；
所述的竹筛的厚度优选为4～6cm；
步骤（3）中所述的培养的条件优选为28～30℃，湿度控制在90%以上；
步骤（3）中所述的固体培养基B优选通过如下步骤制备：各组分按质量百分比：10%糖蜜，60%豆粕，30%水，121℃灭菌30min；
步骤（4）中所述的培养的条件优选为37℃通气培养24小时；
步骤（4）中所述的液体培养基优选通过如下步骤制备：各组分按质量体积百分比（g/mL）：0.5%氯化钠，0.5%酵母粉，1.0%蛋白胨，加水，121℃灭菌15min；
所述的陈香茶、麸皮、糖蜜均为市售产品；
所述的复合发酵豆粕，是通过上述方法得到；
所述的复合发酵豆粕形成较浓郁的酒香味，带酸味；pH优选为3.08～4.35；有机酸含量优选为3.23%～4.35%；酸溶性蛋白优选为10.76%～15.29%；尿素酶活性优选降低80～94%；枯草芽孢杆菌孢子数优选为9.7×109cfu/g以上；乳酸菌数优选为8.3×108cfu/g以上；
所述的复合发酵豆粕在饲料上的应用。
所述的复合发酵豆粕直接作为饲料饲喂畜禽，或加入4%预混料混匀饲喂畜禽。
本发明的机理是：利用陈香茶制曲阶段，温度控制在28～30℃，以利于长霉菌（曲霉为主），有利于蛋白酶、糖化酶的生成。发酵阶段需氧菌利用有限氧气生长，枯草芽孢杆菌夺氧强，发酵罐很快处于厌氧状态，霉菌及耗氧细菌无法生长，而此时酵母菌、乳酸菌代谢加强。在酶参与下，厌氧菌代谢降低抗营养因子含量，提高有机酸及酸溶性蛋白含量，形成优质发酵豆粕。
本发明相对于现有技术，具有如下的优点及效果：
（1）复合发酵豆粕成品为陈香茶自然发酵成熟过程中形成良好补强性的曲种，原生态发酵，菌种培养工艺简单。
（2）本发明的工艺流程操作简便，既适合养殖场直接生产投喂，也适合饲料厂规模化生产。
（3）通过陈香茶复合菌及枯草芽孢杆菌协调作用，无需对豆粕进行灭菌处理，发酵过程兼性厌氧和厌氧发酵，能耗小，抑制生料致病菌生长，干物质损失低。
（4）有浓郁酸香味，酸溶性蛋白最高能达15.29%，有机酸最高为4.35%，尿素酶活性能降低94%。高于市场发酵豆粕质量水平。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
按如下步骤实施：下述组分均按质量百分比计
（1）市售陈香茶（云南普洱茶）常温下磨碎，得到陈香茶粉；
（2）三角瓶曲种制备：在装有100g固体培养基A500mL三角瓶中，按培养基1%接种量接入步骤（1）所述陈香茶粉，混匀，28℃培养。菌丝布满培养基后，摇瓶，后每8小时摇瓶1次。培养基表面长满孢子，三角瓶曲种培养完成；
所述的固体培养基A质量百分比：5%豆粕，45%麸皮，50%水，121℃灭菌30min。
（3）种曲制备：按照固体培养基B总量的10%接入步骤（2）制得的三角瓶曲种，拌匀后平摊在竹筛（市售产品）上（厚度6cm），放入种曲房，28℃，湿度控制在90%以上培养。培养基表面长满菌丝后，开始翻曲散热。
整个培养基长满孢子后，陈香茶菌剂培养完成。
所述固体培养基B质量百分比：10%糖蜜，60%豆粕，30%水，121℃灭菌30min。
（4）枯草芽孢杆菌制剂制备：在液体培养基上，按1%接种量接入活化的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）（ATCC6633）（购自广东英维饲料有限公司），37℃通气培养24小时，可得枯草芽孢杆菌制剂。
所述的液体培养基营养成分的质量体积百分比（g/mL）：0.5%氯化钠，0.5%酵母粉，1.0%蛋白胨，加水至100mL，121℃灭菌15min。
（5）将步骤（3）制得陈香茶菌剂10%、步骤（4）制得的枯草芽孢杆菌制剂8%、糖蜜6%、水21%均匀混合，再与55%豆粕混匀，得到豆粕混合物；
（6）将步骤（5）中得到的豆粕混合物直接装填在发酵罐中发酵，密封防止水分散发；
（7）在37℃的条件下发酵3天，得到发酵好的复合发酵豆粕，可以直接作为饲料成品直接使用。
得到的复合发酵豆粕作为饲料成品时的测量结果见表1。其中，酸溶性蛋白的含量依据QB/T2653-2004方法，pH通过pH计测得，有机酸是通过GB/T5009.39-2003方法测得，尿素酶活性是通过GB/T8622-2006测得。
表1饲料成品的测量结果
| 检测项目 | 发酵前 | 发酵后 | 比例（发酵后/发酵前） |
| 颜色 | 淡黄 | 黄色 | ------ |
| 颗粒 | 颗粒较粗 | 颗粒细 | ------ |
| 气味 | 淡豆香味 | 酒香味和酸味 | ------ |
| pH | 6.92 | 4.18 | ------ |
| 有机酸（%） | 0.62 | 4.14 | 6.68 |
| 酸溶性蛋白（%） | 2.24 | 12.12 | 5.66 |
| 尿素酶活性（U） | 0.402 | 0.081 | 20% |
实施例2
按如下步骤实施：下述组分均按质量百分比计
（1）市售陈香茶（云南普洱茶）常温下磨碎，得到陈香茶粉；
（2）三角瓶曲种制备：在装有100g固体培养基A500mL三角瓶中，按培养基1%接种量接入步骤（1）所述陈香茶粉，混匀，28℃培养。菌丝布满培养基后，摇瓶，后每8小时摇瓶1次。培养基表面长满孢子，三角瓶曲种培养完成；
所述的固体培养基A质量百分比：5%豆粕，45%麸皮，50%水，121℃灭菌30min。
（3）种曲制备：按照固体培养基B总量的5%、10%、15%接入步骤（2）制得的三角瓶曲种，拌匀后平摊在竹筛（市售产品）上（厚度5cm），放入种曲房，28℃，湿度控制在90%以上培养。培养基表面长满菌丝后，开始翻曲散热。
整个培养基长满孢子后，陈香茶菌剂培养完成。
所述固体培养基B质量百分比：10%糖蜜，60%豆粕，30%水，121℃灭菌30min。
（4）枯草芽孢杆菌制剂制备：在液体培养基上，按1%、1.5%、2%接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气培养24小时，可得枯草芽孢杆菌制剂。
所述的液体培养基营养成分的质量体积百分比（g/mL）：0.5%氯化钠，0.5%酵母粉，1.0%蛋白胨，加水至100mL，121℃灭菌15min。
（5）将步骤（3）制得陈香茶菌剂10%、步骤（4）制得的枯草芽孢杆菌制剂4%、糖蜜4%、水21%均匀混合，再与55%豆粕混匀，得到豆粕混合物；
（6）将步骤（5）中得到的豆粕混合物直接装填在发酵罐中发酵，密封防止水分散发；
（7）在25℃、30℃、37℃的条件下发酵4天，得到发酵好的复合发酵豆粕，可以直接作为饲料成品直接使用。
以三角瓶曲种添加量、枯草芽孢杆菌接种量、培养温度为三因素三水平，得到的复合发酵豆粕作为饲料成品时的测量结果见表2。其中，酸溶性蛋白的含量依据QB/T2653-2004方法测得。
表2L9(33)正交试验表其酸溶性蛋白含量
由正交表可知，菌种制剂过程，枯草芽孢菌接种量、三角瓶曲种量对发酵成品酸溶性蛋白影响较小。发酵过程温度影响较大。
实施例3
按如下步骤实施：下述组分均按质量百分比计
（1）市售陈香茶（云南普洱茶）常温下磨碎，得到陈香茶粉；
（2）三角瓶曲种制备：在装有100g固体培养基A500mL三角瓶中，按培养基1%接种量接入步骤（1）所述陈香茶粉，混匀，29℃培养。菌丝布满培养基后，摇瓶，后每8小时摇瓶1次。培养基表面长满孢子，三角瓶曲种培养完成；
所述的固体培养基A质量百分比：5%豆粕，45%麸皮，50%水，121℃灭菌30min。
（3）种曲制备：按照固体培养基B总量的10%接入步骤（2）制得的三角瓶曲种，拌匀后平摊在竹筛上（厚度约5cm），放入种曲房，29℃，湿度控制在90%以上培养。培养基表面长满菌丝后，开始翻曲散热。
整个培养基长满孢子后，陈香茶菌剂培养完成。
所述固体培养基B质量百分比：10%糖蜜，60%豆粕，30%水，121℃灭菌30min。
（4）枯草芽孢杆菌制剂制备：在液体培养基上，按1%接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气培养24小时，可得枯草芽孢杆菌制剂。
所述的液体培养基营养成分的质量体积百分比（g/mL）：0.5%氯化钠，0.5%酵母粉，1.0%蛋白胨，加水至100mL，121℃灭菌15min。
（5）将步骤（3）制得陈香茶菌剂20%、步骤（4）制得的枯草芽孢杆菌制剂8%、糖蜜10%、水17%均匀混合，再与45%豆粕混匀，得到豆粕混合物；
（6）将步骤（5）中得到的豆粕混合物直接装填在发酵罐中发酵，密封防止水分散发；
（7）在30℃的条件下发酵3、4、5、6天，得到发酵好的复合发酵豆粕，可以直接作为饲料成品直接使用。
得到发酵好的复合发酵豆粕作为饲料成品时的测量结果见表3。有机酸、酸溶性蛋白、尿素酶活性的测量方法见实施例1。氨基酸态氮依据GB/T5009.39-2003测得。尿素酶活性降低=（发酵前尿素酶活性-发酵后尿素酶活性）/发酵前尿素酶活性×100%。
表3发酵不同天数饲料成品的测量结果
实施例4
按如下步骤实施：下述组分均按质量百分比计
（1）市售陈香茶（云南普洱茶）常温下磨碎，得到陈香茶粉；
（2）三角瓶曲种制备：在装有100g固体培养基A500mL三角瓶中，按培养基1%接种量接入步骤（1）所述陈香茶粉，混匀，30℃培养。菌丝布满培养基后，摇瓶，后每8小时摇瓶1次。培养基表面长满孢子，三角瓶曲种培养完成；
所述的固体培养基A质量百分比：5%豆粕，45%麸皮，50%水，121℃灭菌30min。
（3）种曲制备：按照固体培养基B总量的10%接入步骤（2）制得的三角瓶曲种，拌匀后平摊在竹筛上（厚度6cm），放入种曲房，30℃，湿度控制在90%以上培养。培养基表面长满菌丝后，开始翻曲散热。
整个培养基长满孢子后，陈香茶菌剂培养完成。
所述固体培养基B质量百分比：10%糖蜜，60%豆粕，30%水，121℃灭菌30min。
（4）枯草芽孢杆菌制剂制备：在液体培养基上，按1%接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气培养24小时，可得枯草芽孢杆菌制剂。
所述的液体培养基营养成分的质量体积百分比（g/mL）：0.5%氯化钠，0.5%酵母粉，1.0%蛋白胨，加水至100mL，121℃灭菌15min。
（5）将步骤（3）制得陈香茶菌剂15%、步骤（4）制得的枯草芽孢杆菌制剂2%、糖蜜2%、水31%均匀混合，再与50%豆粕混匀，得到豆粕混合物；
（6）将步骤（5）中得到的豆粕混合物直接装填在发酵罐中发酵，密封防止水分散发；
（7）在25℃的条件下发酵5天，得到发酵好的复合发酵豆粕，可以直接作为饲料成品直接使用。
得到发酵好的复合发酵豆粕作为饲料成品时的测量结果见表4。有机酸测定方法同实施例1。乳酸菌数的测量方法参考GB4789.35-2010方法。枯草芽孢杆菌菌数测量方法参考GB4789.2-2010，其中样品处理方法改为取25g样品置于225mL生理盐水煮沸15min。尿素酶活性降低=（发酵前尿素酶活性-发酵后尿素酶活性）/发酵前尿素酶活性×100%，测量方法见实施例1。
表4复合发酵豆粕检测结果
实施例5
按如下步骤实施：下述组分均按质量百分比计
（1）市售陈香茶（云南普洱茶）常温下磨碎，得到陈香茶粉；
（2）三角瓶曲种制备：在装有100g固体培养基A500mL三角瓶中，按培养基1%接种量接入步骤（1）所述陈香茶粉，混匀，30℃培养。菌丝布满培养基后，摇瓶，后每8小时摇瓶1次。培养基表面长满孢子，三角瓶曲种培养完成；
所述的固体培养基A质量百分比：5%豆粕，45%麸皮，50%水，121℃灭菌30min。
（3）种曲制备：按照固体培养基B总量的10%接入步骤（2）制得的三角瓶曲种，拌匀后平摊在竹筛上（厚度约5cm），放入种曲房，30℃，湿度控制在90%以上培养。培养基表面长满菌丝后，开始翻曲散热。
整个培养基长满孢子后，陈香茶菌剂培养完成。
所述固体培养基B质量百分比：10%糖蜜，60%豆粕，30%水，121℃灭菌30min。
（4）枯草芽孢杆菌制剂制备：在液体培养基上，按1%接种量接入活化的枯草芽孢杆菌，37℃通气培养24小时，可得枯草芽孢杆菌制剂。
所述的液体培养基营养成分的质量体积百分比（g/mL）：0.5%氯化钠，0.5%酵母粉，1.0%蛋白胨，加水至100mL，121℃灭菌15min。
（5）分别①20%步骤（3）制得陈香茶菌剂+2%糖蜜+步骤（4）制得枯草芽孢杆菌制剂8%+25%水+45%豆粕，搅拌均匀得到豆粕混合物；②20%步骤（3）制得陈香茶菌剂+4%糖蜜+步骤（4）制得枯草芽孢杆菌制剂6%+25%水+45%豆粕，搅拌均匀得到豆粕混合物；③20%步骤（3）制得陈香茶菌剂+6%糖蜜+步骤（4）制得枯草芽孢杆菌制剂4%+25%水+45%豆粕，搅拌均匀得到豆粕混合物；④20%步骤（3）制得陈香茶菌剂+8%糖蜜+步骤（4）制得枯草芽孢杆菌制剂2%+25%水+45%豆粕，搅拌均匀得到豆粕混合物。
（6）将步骤（5）中得到的豆粕混合物直接分别装填在发酵罐中发酵，密封防止水分散发；
（7）在37℃的条件下发酵4天，分别得到发酵好的复合发酵豆粕，可以直接作为饲料成品直接使用。
得到发酵好的复合发酵豆粕作为饲料成品时的测量结果见表5。有机酸测定方法同实施例1，枯草芽孢杆菌菌数测定方法见实施例3，酸溶性蛋白测量方法见实施例1。
表5复合发酵豆粕检测结果
应用实施例1
本发明复合发酵豆粕的应用：将其添加质量分数4%生长猪复合预混料投喂，进行猪喂养生长性能试验。
猪舍的温度与湿度：试验期间于每天10:00、14:00测定猪舍的温度与湿度，取其平均值作为猪舍当天的温度与湿度；经测定，试验期间猪舍内平均温度为30.52±2.03℃、平均湿度为69.21±2.53%。
实验动物：体重约60kg的杜×长×大杂交阉公猪100头；
实验动物分组：将100头猪随机分为对照组和试验组，每组5个重复，每个重复10头猪，每个重复为1栏，单栏面积为4.5m×5.0m。
饲料：对照组饲喂常规日粮，添加质量分数4%生长猪复合预混料（购买自北京农大利生物技术有限公司），所用日粮采用玉米-豆粕型，参照NRC(1998)猪饲养标准配制；试验组饲喂实施例1制备得到的复合发酵豆粕，添加质量分数4%生长猪复合预混料。
每天早晚各投喂1次，直到停止采食；喂养期为30天；试验动物按栏饲养，自由饮水，其他饲养管理按常规进行。
喂养期结束后，测定实验动物的生长性能指标。测定方法如下：
生长性能指标测定：在试验开始和结束时禁食1夜，对逐头动物称重量，每个重复的饲料采食量单独记录，计算日增重量、日采食量、料重比。
实验结果，见表6
表6发酵饲料对育肥猪生产性能的影响
P<0.01，表明差异极显著；P<0.05，表明差异显著；P>0.05，表明差异不显著。
应用实施例2
本发明复合发酵豆粕的应用：将其直接投喂，进行鸡喂养试验。
实验动物：AA商品肉鸡苗，1000只。
实验动物分组：将1000只鸡随机分为对照组和试验组，每组5个重复，每个重复100只鸡，每个重复为1栏。
饲料：试验组饲喂实施例1制备得到的复合发酵豆粕，对照组和试验组营养成分相同，饲养管理方式相同。
喂养期为55天，喂养期结束后，测定实验动物的生长性能指标。见表7。
表7复合发酵豆粕对肉鸡生长性能的影响
| 组别 | 平均每只质量（kg） | 料肉比 | 成活率（%） |
| 对照组 | 2.08 | 2.57 | 94.1 |
| 试验组 | 2.86 | 2.26 | 98.3 |
本发明制备的复合发酵豆粕直接喂养鸡后，毛色光亮，身体状况较好，而对照组的毛色明显较差。饲养过程中饲料的转化率高，减少了疾病的发生，具有高的成活率。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，其特征在于包含如下步骤：各组分按质量百分比计
(1)将陈香茶常温下磨碎，得到陈香茶粉；
(2)曲种制备：按固体培养基A总量的1％接入步骤(1)得到的陈香茶粉，混匀，培养；菌丝布满固体培养基A后，摇瓶；固体培养基A表面长满孢子，曲种培养完成；
(3)种曲制备：按固体培养基B总量的5％～15％接入步骤(2)制得的曲种，拌匀后平摊，培养；固体培养基B表面长满菌丝后，开始翻曲散热；整个固体培养基B长满孢子后，陈香茶菌剂培养完成；
(4)枯草芽孢杆菌制剂制备：按液体培养基总量的1％～2％接入活化的枯草芽孢杆菌，培养，得枯草芽孢杆菌制剂；
(5)将步骤(3)制得的陈香茶菌剂10～20％、步骤(4)制得的枯草芽孢杆菌制剂2％～8％、糖蜜2～10％、水17％～31％均匀混合，再与45～55％豆粕混匀，得到豆粕混合物；
(6)将步骤(5)中得到的豆粕混合物直接装填在发酵罐中发酵密封后，在25～37℃的条件下发酵3～6天；
(7)得到发酵好的复合发酵豆粕。
2.根据权利要求1所述的以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，其特征在于：步骤(1)中所述的陈香茶为湖南安化黑茶、广西六堡散茶、云南普洱茶或广东大叶青。
3.根据权利要求1所述的以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的固体培养基A通过如下步骤制备：各组分按质量百分比：5％豆粕，45％麸皮，50％水，121℃灭菌30min。
4.根据权利要求1所述的以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的固体培养基B通过如下步骤制备：各组分按质量百分比：10％糖蜜，60％豆粕，30％水，121℃灭菌30min。
5.根据权利要求1所述的以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的培养的温度为28～30℃；
步骤(3)中所述的培养的条件为28～30℃，湿度控制在90％以上。
6.根据权利要求1所述的以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，其特征在于：步骤(2)中所述的摇瓶为每8小时摇瓶1次；
步骤(3)中所述的平摊为平摊在竹筛上，并放入种曲房中。
7.根据权利要求1所述的以陈香茶及枯草芽孢杆菌复合发酵豆粕的方法，其特征在于：步骤(4)中所述的培养的条件为37℃通气培养24小时；
步骤(4)中所述的液体培养基通过如下步骤制备：各组分按质量体积百分比：0.5％氯化钠，0.5％酵母粉，1.0％蛋白胨，加水，121℃灭菌15min。
8.一种复合发酵豆粕，通过权利要求1～7任一项所述的方法得到。
9.根据权利要求8所述的复合发酵豆粕，其特征在于：所述的复合发酵豆粕形成较浓郁的酒香味，带酸味；pH为3.08～4.35；有机酸含量为3.23％～4.35％；酸溶性蛋白为10.76％～15.29％；尿素酶活性降低80～94％；枯草芽孢杆菌孢子数为9.7×109cfu/g以上；乳酸菌数为8.3×108cfu/g以上。
10.权利要求8或9所述的复合发酵豆粕在饲料上的应用。
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