CN104529964A - 一种从丹参中高效提取丹参总酚酸的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种丹参总酚酸的提取方法，包括以下步骤：(1)取丹参以体积浓度为30-40％的乙醇溶液进行提取，并合并收集提取液；(2)提取液减压浓缩后，调节pH值为2.5-3，得酸化液；(3)酸化液抽滤，滤液加乙酸乙酯萃取，分离出有机溶剂层；(4)有机溶剂层减压浓缩，去除残留的乙酸乙酯后，浓缩液冷冻干燥，得丹参总酚酸。本发明由于丹参提取物处于有机溶剂中，解决了丹酚酸B降解的问题，使丹酚酸B在丹参总酚酸中的含量＞70％，产品质量更优；同时优化了各种提取方法，使提取率更高；同时操作更简便，更适于工业化生产。

Description

一种从丹参中高效提取丹参总酚酸的方法

技术领域

本发明属于天然药物有效成分提取领域，具体涉及一种从植物丹参中高效提取丹参总酚酸的方法。

背景技术

丹参为唇形科植物的干燥根及根茎，是我国传统中药中常用中药材，具有活血化淤、理气止痛、清心除烦之功效。药理实验表明，丹参中含有的酚酸类化合物具有明显的抗脂质过氧化、抗血栓、改善血液循环的作用。其中丹酚酸A和B的活性最强，对脑缺血再灌引起的心脑细胞损伤有明显保护作用。

其中，丹酚酸B(Salvianolia acid B)是由3分子丹参素与1分子咖啡酸缩合而成的聚合物(结构式如下)，其含量约占丹参药材的5％，约占总丹酚酸类的70％，但丹酚酸B在水溶液状态下很不稳定，较难提取得到。研究发现，丹酚酸B具有很强的生物活性，对脂质过氧化引起的细胞膜损伤有明显的保护作用，有抗血小板聚集和抗血栓的作用，同时对肾功能不全和肝损伤均有一定保护作用等。

目前，现有技术中对丹参植物中丹参多酚酸的提取多数采用大孔树脂法，其缺点在于操作过程繁琐，耗时较长，使得所得的提取物较长时间处于水溶液状态中，进而导致其中的丹酚酸B的降解较为严重，不仅导致丹参总酚酸含量下降，而且也严重影响了丹参总酚酸提取物的药效。

中国专利CN1857403A提供了一种不通过大孔树脂富集对丹参总酚酸进行提取的方法，其简化了操作过程，使丹参总酚酸的纯度有所提高。然而，该法仍需要经过水煮提取的步骤，依然没有解决丹参总酚酸提取物长时间处于水溶液状态中而使丹酚酸B面临降解的问题。而且该方法需要进行醇沉步骤，使提取过程未达到进一步优化。

由此可见，如何避免在丹参总酚酸提取的过程中避免丹酚酸B的降解，成为了限制丹参总酚酸提取效率的关键难题。因此，提供一种高效提取丹参植物中的总酚酸，尤其是丹酚酸B含量更高、操作简便且适于工业化生产的提取方法具有重要的意义。

发明内容

本发明所要解决的是现有技术中提取总丹酚酸的方法会导致丹酚酸B的含量低且操作复杂、不利于工业化生产的问题，进而提供一种高效提取丹参植物中的总酚酸，尤其是丹酚酸B含量更高的提取方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

本发明从丹参中高效提取丹参总酚酸的方法，包括以下步骤：

(1)取丹参以体积浓度为30-40％的乙醇溶液进行提取，并合并收集提取液；

(2)将提取液减压浓缩后，调节pH值为2.5-3，得到酸化液；

(3)将所述酸化液抽滤，取滤液加乙酸乙酯萃取，并分离出有机溶剂层；

(4)将有机溶剂层减压浓缩，去除残留的乙酸乙酯后，对浓缩液进行冷冻干燥处理，得到丹参总酚酸。

本发明上述的提取方法，上述步骤(1)中，上述提取的步骤包括煮沸回流提取、20-40℃温度下浸渍提取、20-50℃温度下发酵罐搅拌提取或者渗漉提取的方式。

本发明上述的提取方法，上述步骤(1)中，上述提取的步骤包括：

加入乙醇溶液，于40℃水浴锅中浸泡提取12小时；或

加入乙醇溶液，煮沸回流提取1.5-2小时；或

加入乙醇溶液，于40℃发酵罐中搅拌提取12小时；或

加入乙醇溶液，置于渗漉筒中，以2-3滴/秒的流速进行渗漉提取。

本发明上述的提取方法，上述步骤(1)中，上述提取步骤之前还包括于20-50℃温度下静置浸泡或恒温振荡浸泡2-24h的步骤。

本发明上述的提取方法，上述步骤(1)中，上述乙醇的体积份为上述丹参的重量份的10-12倍量；上述重量份与体积份的关系为g/mL的关系。

本发明上述的提取方法，上述步骤(2)中，上述调节pH的步骤采用浓度为8-15％的盐酸进行酸化。

本发明上述的提取方法，上述步骤(2)中，上述减压浓缩的步骤是将上述提取液的体积于50-60℃下浓缩至上述丹参重量的1-1.5倍量。

本发明上述的提取方法，上述步骤(4)中，上述减压浓缩步骤控制温度低于50℃。

本发明上述的提取方法，上述步骤(1)中，还包括在加入乙醇溶液前将上述丹参进行粉碎的步骤。

本发明上述的提取方法，上述步骤(4)中，上述冷冻干燥步骤的条件为：

(1)取所述浓缩液于-80℃条件下预冷6h；

(2)连接真空泵与冷冻机，接通电源，预冷至-40℃；

(3)打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上，关闭密封管开关；

(4)打开真空压缩机开关，抽真空(真空度：10Pa)；

(5)样品完全干燥后，取出样品，密封保存。

本发明上述提取方法由于丹参提取物处于有机溶剂中，解决了丹酚酸B降解的问题，使得丹酚酸B在丹参总酚酸中的含量＞70％，使产品质量更优；同时优化了各种提取方法，使提取率更高；同时本发明的方法可使得所述丹酚酸B的提取省略现有技术中常规的醇沉的操作步骤，操作更简便，更适于工业化生产。

具体实施方式

以下各实施例中，丹酚酸B的含量测定按照中国药典2010版第一部中丹参药材的测定中记载的方法进行检测：

(1)取丹酚酸B对照品适量，精密称定，加75％甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，作为对照品溶液；

(2)取供试品粉末(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

(3)按照高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-乙腈-甲酸-水(30:10:1:59)为流动相；

(4)分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，于286nm波长下测定。

实施例1

取陕西丹参90g，加12倍量的40％乙醇，浸泡2小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，53℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH＝3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，具体程序包括：取所述浓缩液于-80℃条件下预冷6h；连接真空泵与冷冻机，接通电源，打开冷冻开关，预冷至-40℃时，打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上，关闭密封管开关；抽真空(真空度：10Pa)；样品完全干燥后，取出样品，密封保存。

得到丹酚酸总提物3.04g，经检测其中丹酚酸B的含量为81.1％，丹酚酸产率为2.74％。

实施例2

取陕西丹参100g，加12倍量的40％乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH＝3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，具体程序包括：取所述浓缩液于-80℃条件下预冷6h；连接真空泵与冷冻机，接通电源；打开冷冻开关，预冷至-40℃时，打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上，关闭密封管开关；抽真空(真空度：40Pa)；样品完全干燥后，取出样品，密封保存。

得到丹酚酸总提物3.32g，经检测其中丹酚酸B的含量为81％，丹酚酸产率为2.69％。

实施例3

取四川丹参100g，加12倍量的40％乙醇，浸泡1.5小时，回流提取2小时，提取两次。过滤提取液并合并滤液，52℃减压浓缩至150mL，将浓缩液酸化至pH＝3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，分离出有机溶剂层，48℃减压浓缩，浓缩液去除残留乙酸乙酯，并进行冷冻干燥，具体程序包括：取所述浓缩液于-180℃条件下预冷6h；连接真空泵与冷冻机，接通电源；打开冷冻开关，预冷至－40℃时，打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上，关闭密封管开关；抽真空(真空度：40Pa)；样品完全干燥后，取出样品，密封保存。

得到丹酚酸总提物2.51g，经检测其中丹酚酸B的含量为83.4％，丹酚酸产率为2.1％。

实施例4

取丹参饮片100g，粉碎机粉碎，过120目筛子，然后加入20倍量30％的乙醇溶液，于40℃水浴锅中浸泡12小时。提取液过滤，离心，备用。重复浸提一次，合并提取液。将提取液55℃以下浓缩至1-1.5倍量，用10％的盐酸酸化至pH为2.5-3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，50℃以下减压浓缩乙酸乙酯层，回收溶剂，得到固形物2.37g，经检测其中丹酚酸B含量为73.96％，迷迭香酸含量为3.62％，丹参素钠含量为5.09％，丹酚酸产率为2.37％。

实施例5

取丹参饮片100g，粉碎机粉碎，过120目筛子，然后加入20倍量30％的乙醇溶液，于40℃发酵罐中搅拌12小时。提取液过滤，离心，备用。重复提取一次，合并提取液。将提取液55℃以下浓缩至1-1.5倍量，用10％的盐酸酸化至pH为2.5-3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，50℃以下减压浓缩乙酸乙酯层，回收溶剂，得到固形物1.98g，经检测其中丹酚酸B含量为78.76％，丹酚酸A含量为1.05％，迷迭香酸含量为4.47％，丹参素钠含量为6.53％，丹酚酸产率为1.98％。

实施例6

取丹参饮片100g，加入10倍量的30％的乙醇溶液浸泡24小时，放入渗漉筒中，流速2滴每秒，进行渗漉。收取20倍量的提取液，备用。将提取液55℃以下浓缩至1-1.5倍量，用10％的盐酸酸化至pH为2.5-3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，50℃以下减压浓缩乙酸乙酯层，回收溶剂，得到固形物2.33g，经检测其中丹酚酸B含量为76.66％，迷迭香酸含量为4.51％，丹参素钠含量为4.51％，丹酚酸产率为2.33％。

实施例7

取丹参饮片100g，加入10倍量的30％的乙醇溶液，置于温度为50℃，转速为180转/分的恒温振荡器中，摇晃24小时后，放入渗漉筒中，流速2滴每秒，进行渗漉。收取20倍量的提取液，备用。将提取液55℃以下浓缩至1-1.5倍量，用10％的盐酸酸化至pH为2.5-3，抽滤，滤液用乙酸乙酯萃取三次，50℃以下减压浓缩乙酸乙酯层，回收溶剂，得到固形物3.35g，其中丹酚酸B含量为73.61％，迷迭香酸含量为2.55％，丹参素钠含量为3.66％，丹酚酸产率为3.35％。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种从丹参中高效提取丹参总酚酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取丹参以体积浓度为30-40％的乙醇溶液进行提取，并合并收集提取液；

(2)将提取液减压浓缩后，调节pH值为2.5-3，得到酸化液；

(3)将所述酸化液抽滤，取滤液加乙酸乙酯萃取，并分离出有机溶剂层；

(4)将有机溶剂层减压浓缩，去除残留的乙酸乙酯后，对浓缩液进行冷冻干燥处理，得到丹参总酚酸。

2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述提取的步骤包括煮沸回流提取、20-40℃温度下浸渍提取、20-50℃温度下发酵罐搅拌提取或者渗漉提取的方式。

3.根据权利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述提取的步骤包括：

加入乙醇溶液，于40℃水浴锅中浸泡提取12小时；或

加入乙醇溶液，煮沸回流提取1.5-2小时；或

加入乙醇溶液，于40℃发酵罐中搅拌提取12小时；或

加入乙醇溶液，置于渗漉筒中，以2-3滴/秒的流速进行渗漉提取。

4.根据权利要求1-3任一所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述提取步骤之前还包括于20-50℃温度下静置浸泡或恒温振荡浸泡2-24h的步骤。

5.根据权利要求1-4任一所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述乙醇的体积份为所述丹参的重量份的10-12倍量；所述重量份与体积份的关系为g/mL的关系。

6.根据权利要求1-5任一所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述调节pH的步骤采用浓度为8-15％的盐酸进行酸化。

7.根据权利要求1-6任一所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述减压浓缩的步骤是将所述提取液的体积于50-60℃下浓缩至所述丹参重量的1-1.5倍量。

8.根据权利要求1-7任一所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述减压浓缩步骤控制温度低于50℃。

9.根据权利要求1-8任一所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中，还包括在加入乙醇溶液前将所述丹参进行粉碎的步骤。

10.根据权利要求1-9任一所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(4)中，所述冷冻干燥步骤的条件为：

(1)取所述浓缩液于-180℃条件下预冷6h；

(2)连接真空泵与冷冻机，接通电源；

(3)打开密封管开关，搬开冷冻舱，将样品置于冷冻舱里的隔板上，关闭密封管开关；

(4)打开冷冻开关，待冷冻舱温度＜-40℃时，开始抽真空，至***压力＜100微米汞柱；

(5)样品完全干燥后，取出样品，密封保存。