CN104272978A - 一种杏鲍菇固体菌种液化工艺 - Google Patents
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Abstract
一种杏鲍菇固体菌种液化工艺,包括如下步骤:(1)液体培养;(2)固体培养;(3)粉碎;(4)稀释,即得。本发明工艺简单,接种简便,发菌快,出菇早,优质高产,效率高,污染风险小,投资和运行成本低,经济效益好。使用该方法制备的杏鲍菇液化菌种接种后,菌种的渗透力强,发菌快。而且,杏鲍菇液化菌种的栽培出菇时间大大缩短、出菇整齐、生长速度快,产量明显提高。
Description
技术领域
本发明涉及一种固体菌种液化工艺,尤其是涉及一种杏鲍菇固体菌种液化工艺。
背景技术
杏鲍菇,别名剌芹侧耳,隶属于真菌门中的担子菌纲,是我国近年来开发栽培成功的集食用、药用、食疗于一体的珍稀食用菌新品种。杏鲍菇具有杏仁香味,不仅肉质肥厚、口感鲜嫩、味道清香,而且营养丰富。研究表明,杏鲍菇富含蛋白质、碳水化合物、维生素及钙、镁、铜等矿物质。此外,杏鲍菇还具有降血脂、降胆固醇、促进胃肠消化、增强机体免疫能力、抗癌、防止心血管病及美容等功效。杏鲍菇以其良好的口感和较长的货架期深受消费者的青睐。
目前的杏鲍菇工厂化生产和菌种生产,主要还是采用传统的三级固体菌种繁育工艺和人工接种法。但是由于菌种退化、错种等生产事故每年均有发生,杏鲍菇集约化、工厂化生产受到严重制约。而日本、韩国等食用菌产业技术先进国家,在菌种繁育领域已普遍采用液体菌种技术,特别是近两年日本开发成功了国际上最先进的还原型液体菌种技术(又称第三代液体菌种),并在我国多个省份的工厂化生产中进行应用,菌种由日方公司按时定量提供,在收取高额设备和工艺转让费的同时,还按接种生产量收取推广应用费,对我国和我省食用菌产业的持续、安全生产提出了严峻挑战。此外,以往使用的发酵液体菌种由于含有糖分,培养基经常会粘在喷嘴周围,容易造成污染,因此开机接种半个小时左右就要停机,对喷嘴进行清洗,影响了产率。
发明内容
本发明要解决的技术问题是,克服现有技术的不足,提供一种成本较低,菌菇产率高,工艺较简单的杏鲍菇固体菌种液化工艺。
本发明解决其技术问题采用的技术方案是,一种杏鲍菇固体菌种液化工艺,包括如下步骤:
(1)液体培养:将杏鲍菇菌种接种在液体培养基上,杏鲍菇菌种的接种量为相当于液体培养基质量的3-5%(装瓶量优选250mL的培养瓶装100mL),进行液体培养,培养温度23-25℃(优选24℃),初始pH 7-7.5,摇床转速250-280r/min(优选270r/min),培养时间6-7d,得菌丝体;
所述液体培养基的配方:无菌水1000ml、马铃薯80-120克、红糖12-18克、葡萄糖8-12克、麦麸38-42克、蛋白胨1.8-2.2克、磷酸二氢钾1.8-2.2克、硫酸镁0.8-2.2克、维生素B1 5-10mg ,pH值自然;
液体培养基的优选配方:无菌水1000ml、马铃薯100克、红糖15克、葡萄糖10克、麦麸40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁1.0克、维生素B1 10mg,pH值自然;
(2)固体培养:将步骤(1)所得菌丝体在麦粒培养基上进行纯培养,培养温度为24-25℃,培养20-22天,得菌丝体的菌块;
所述麦粒培养基由以下质量百分比的原料制成:小麦96-98%,石膏1-2%,碳酸钙1-2%;所述麦粒培养基优选含水量50±1wt%,pH7.5-8.8;
所述麦粒培养基的制备方法:①称量小麦:用500毫升的菌种瓶时,每瓶用小麦干重0.18-0.22千克;用750毫升的菌种瓶时,每瓶用干小麦0.28-0.32千克;②漂洗:用清水将麦粒漂洗2-3遍,除去灰尘、麦糠等杂物,同时也减少培养基中杂菌的基数;③浸泡:在制种的前一天下午,用质量浓度为0.8-1.2wt%的石灰水浸泡小麦,夏天一般浸泡10-12小时,春秋冬季气温低时浸泡15-20小时;④煮沸:小麦捞出后在煮麦锅内煮沸,水沸腾后再煮18-22分钟,当麦粒达到“无白心,不开花”的标准后及时捞出,沥干多余水分;煮麦时加水不可偏少(加水量优选为相当于麦粒重量的110-120%),麦粒成熟度是关系麦粒菌种制作成败的关键;⑤晾晒:将麦粒摊开,晾去表面水分,麦粒不沾手时及时收起;⑥加辅料:把石膏、碳酸钙按比例加入,搅拌均匀;⑦装瓶、加棉塞:麦粒装至瓶肩即可,棉塞大小、松紧度要适宜;⑧灭菌:采用高压锅在0.14-0.16MPa(优选0.15MPa)灭菌,灭菌过程参照母种的灭菌,不过,由于麦粒培养基中杂菌基数大,培养基体积大,热不易穿透,控温灭菌时间应保持在2-2.5小时,才能保证灭菌彻底;灭菌是否彻底是影响制种成功率的关键;⑨冷却:灭菌结束后,自然冷却,当压力回复到0时,打开锅盖,利用锅体余热烘干棉塞,当培养基温度降低到45-50℃时取出,放到干净的地方冷却到常温后才能接种;如果温度很高时就取出培养基,瓶内麦粒上会有大量的冷凝水,对菌丝生长不利;⑩将冷却后的培养基移入接种室接种;
(3)粉碎:将步骤(2)所得菌丝体的菌块采用菌块粉碎机粉碎至40目筛以下;
粉碎优选转速≤2000r/min,优选FFC— 2 3A型爪式粉碎机,卸下筛片效果不错,被粉碎的物料的温升不会很高的,如效果不理想就再粉一次;
(4)稀释:将粉碎后的菌块经无菌水稀释,以无菌操纵取菌块10g,放于800-1000mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内,瓶内预置3-5个的玻璃珠,经振荡或研磨制成1∶80-100的均匀稀释液,即得。
本发明所制备的液化菌种的接种培养工艺与液体菌种工艺相同。
液化菌种是把特殊加工的块状的菌丝打碎后,用无菌水稀释而成的液体菌种。液化菌种不同于通常的发酵液体菌种,也不同于传统的固体菌种。它是将利用微生物发酵技术生产的菌丝块进行粉碎、稀释后做成的菌种。有如下几个特点:一是使用方便,由专业企业生产浓缩菌种块,菇厂只要把菌种稀释搅拌即可使用,200克的菌丝块可以接种5万瓶,生产2吨食用菌;二是可以任意选择菌丝浓度,发菌快,培养与生育时间缩短。以杏鲍菇的生产效率为例,利用固体木屑种的生长周期为55天,利用发酵液体菌种生长周期为48天,而利用本发明制得的固体液化菌种生长周期为42天;三是菇厂所需设备少,初期投资成本低,只需要接种机、接种罐、菌丝块搅拌机及简易无菌箱,而且由于不需要液体发酵罐进行深层培养,因此可以有效控制菌种来源的污染,能解决使用液体菌种污染率高的问题;四是还原型液体菌种不含糖,黏度低,接种时喷射压力低,不容易喷溅,降低污染率。
本发明制得之液化菌种属还原型液体菌种,不含糖分,能避免培养基粘在喷嘴周围、造成污染这一问题,不仅可以提高生产效率,而且能降低运营成本。 本发明之液化菌种的制备方法也适用于其他菇种。
杏鲍菇液化菌种接种与常规固体菌种接种工艺相比,优势显著:一是菌种用种量节省90%;二是节约接种环节成本78.2%;三是提高接种成品率20%;四是能提高杏鲍菇品质;五是发菌迅速,出菇比较整齐,固体接种工厂化要28天才能满瓶,液化接种只要24天就能满瓶;利用固体木屑种的生长周期为55天,利用发酵液体菌种生长周期为48天,而利用本发明制得的固体液化菌种生长周期为42天,能大大缩短生长周期,提高经济效益;三是从目前的产量来看,固体菌种接种平均每1100毫升的单瓶产量是150克,而液化菌种接种平均每1100毫升的单瓶产量可高达200克,总产提高34%。
本发明所用设备,与日本开发出的还原型液体菌种技术所需的全套设备相比,企业应用所耗费用只占设备总值200余万元的十分之一,而结果却有异曲同工之效。
本发明所得液化菌种菌丝含量高,菌种培养时间短(原来的固体菌种的菌种培养时间为28天,本发明液化菌种的菌种培养时间为24天),设备投资少,成本低。
本发明工艺简单,接种简便,发菌快,出菇早,优质高产,效率高,污染风险小,投资和运行成本低,经济效益好。使用该方法制备的杏鲍菇液化菌种接种后,菌种的渗透力强,发菌快。而且,杏鲍菇液化菌种的栽培出菇时间大大缩短、出菇整齐、生长速度快,产量明显提高。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1
本实施例包括以下步骤:
(1)液体培养:将杏鲍菇菌种接种在液体培养基上,杏鲍菇菌种的接种量为相当于液体培养基质量的4%(装瓶量为250mL的培养瓶装100mL),进行液体培养,培养温度24℃,初始pH7-7.5,摇床转速270r/min,培养时间6d,得菌丝体;
所述液体培养基的配方:无菌水1000ml、马铃薯100克、红糖15克、葡萄糖10克、麦麸40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁1.0克、维生素B1 10mg,pH值自然;
(2)固体培养:将步骤(1)所得菌丝体在麦粒培养基上进行纯培养,培养温度为24℃,培养22天,得菌丝体的菌块;
所述麦粒培养基由以下质量百分比的原料制成:小麦98%,石膏1%,碳酸钙1%;含水量50±1wt%,pH8.0;
所述麦粒培养基的制备方法:①称量小麦:用500毫升的菌种瓶,每瓶用小麦干重0.2千克;②漂洗:用清水将麦粒漂洗3遍,除去灰尘、麦糠等杂物,同时也减少培养基中杂菌的基数;③浸泡:在制种的前一天下午,用质量浓度为1.0wt%的石灰水浸泡小麦,夏天浸泡12小时,春秋冬季气温低时浸泡20小时;④煮沸:小麦捞出后在煮麦锅内煮沸,水沸腾后再煮20分钟,当麦粒达到“无白心,不开花”的标准后及时捞出,沥干多余水分;煮麦时加水量为相当于麦粒重量的1.2倍;⑤晾晒:将麦粒摊开,晾去表面水分,麦粒不沾手时及时收起;⑥加辅料:把石膏、碳酸钙按比例加入,搅拌均匀;⑦装瓶、加棉塞:麦粒装至瓶肩即可,棉塞大小、松紧度要适宜;⑧灭菌:采用高压锅在0.15MPa灭菌,灭菌过程参照母种的灭菌(现有技术),由于麦粒培养基中杂菌基数大,培养基体积大,热不易穿透,控温灭菌时间2.5小时,保证灭菌彻底;⑨冷却:灭菌结束后,自然冷却,当压力回复到0时,打开锅盖,利用锅体余热烘干棉塞,当培养基温度降低到50℃时取出,放到干净的地方冷却到常温后才能接种;⑩将冷却后的培养基移入接种室接种;
(3)粉碎:将步骤(2)所得菌丝体的菌块采用FFC— 2 3A型爪式菌块粉碎机粉碎至40目筛以下,粉碎转速为1800r/min;
(4)稀释:将粉碎后的菌块经无菌水稀释,以无菌操纵取菌块10g,放于1000mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内,瓶内预置5个玻璃珠,经振荡或研磨制成1∶100的均匀稀释液,即得。
本实施例所制备的的液化菌种的接种培养工艺与液体菌种工艺相同。
本实施例中,200克的菌丝块可以接种5万瓶,生产2吨食用菌;利用本发明制得的固体液化菌种24天就能满瓶,生长周期为42天,出菇比较整齐;杏鲍菇整齐,菇形好;固体菌种接种平均每1100毫升的单瓶产量是150克,而液化菌种接种平均每1100毫升的单瓶产量可高达200克,总产提高34%。
Claims (10)
1.一种杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,包括如下步骤:
(1)液体培养:将杏鲍菇菌种接种在液体培养基上,杏鲍菇菌种的接种量为相当于液体培养基质量的3-5%,进行液体培养,培养温度23-25℃,初始pH 7-7.5,摇床转速250-280r/min,培养时间6-7d,得菌丝体;
所述液体培养基的配方:无菌水1000ml、马铃薯80-120克、红糖12-18克、葡萄糖8-12克、麦麸38-42克、蛋白胨1.8-2.2克、磷酸二氢钾1.8-2.2克、硫酸镁0.8-2.2克、维生素B1 5-10mg ,pH值自然;
(2)固体培养:将步骤(1)所得菌丝体在麦粒培养基上进行纯培养,培养温度为24-25℃,培养20-22天,得菌丝体的菌块;
所述麦粒培养基由以下质量百分比的原料制成:小麦96-98%,石膏1-2%,碳酸钙1-2%;
所述麦粒培养基的制备方法:①称量小麦:用500毫升的菌种瓶时,每瓶用小麦干重0.18-0.22千克;用750毫升的菌种瓶时,每瓶用干小麦0.28-0.32千克;②漂洗:用清水将麦粒漂洗2-3遍;③浸泡:在制种的前一天下午,用质量浓度为0.8-1.2wt%的石灰水浸泡小麦,夏天浸泡10-12小时,春秋冬季气温低时浸泡15-20小时;④煮沸:小麦捞出后在煮麦锅内煮沸,水沸腾后再煮18-22分钟,当麦粒达到“无白心,不开花”的标准后及时捞出,沥干多余水分;⑤晾晒:将麦粒摊开,晾去表面水分,麦粒不沾手时及时收起;⑥加辅料:把石膏、碳酸钙按比例加入,搅拌均匀;⑦装瓶、加棉塞:麦粒装至瓶肩即可;⑧灭菌:采用高压锅在0.14-0.16MPa灭菌,控温灭菌时间保持在2-2.5小时;⑨冷却:灭菌结束后,自然冷却,当压力回复到0时,打开锅盖,利用锅体余热烘干棉塞,当培养基温度降低到45-50℃时取出,放到干净的地方冷却到常温后才能接种;⑩将冷却后的培养基移入接种室接种;
(3)粉碎:将步骤(2)所得菌丝体的菌块采用菌块粉碎机粉碎至40目筛以下;
(4)稀释:将粉碎后的菌块经无菌水稀释,以无菌操纵取菌块10g,放于800-1000mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内,瓶内预置3-5个的玻璃珠,经振荡或研磨制成1∶80-100的均匀稀释液,即得。
2.根据权利要求1所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(1)中,液体培养时液体培养基的装瓶量为250mL的培养瓶装100mL。
3.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(1)中,培养温度为24℃。
4.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(1)中,摇床转速为270r/min。
5.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(1)中,液体培养基的配方:无菌水1000ml、马铃薯100克、红糖15克、葡萄糖10克、麦麸40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁1.0克、维生素B1 10mg,pH值自然。
6.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(2)中,煮麦时加水量为相当于麦粒重量的110-120%。
7.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(2)中,采用高压锅在0.15MPa灭菌。
8.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(3)中,粉碎转速≤2000r/min。
9.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(3)中,粉碎选用FFC— 2 3A型爪式粉碎机,卸下筛片。
10.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺,其特征在于,步骤(2)中,所述麦粒培养基含水量50±1wt%,pH7.5-8.8。
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