CN104267110A - 一种当归药材的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种当归药材的检测方法。该检测方法包括当归药材中藁本内酯和阿魏酸的含量测定以及农药残留量的测定。本发明的检测方法不仅检测的准确度高，方法简单、快速，而且可同时完成多个检测指标，准确率及实用效果均较好，更有利于对当归药材质量的控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。

Description

一种当归药材的检测方法

技术领域

本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种当归药材的质量检测方法。

背景技术

当归为伞形科植物当归的干燥根，当归味甘、辛、性温，具有补血活血、调经止痛、促进血液循环、抗炎镇痛、保肝利胆、润肠通便等功效。当归药用历史悠久，历代本草均有记载，是中医常用中草药之一，素有“十方九归”之称。在***公布的《关于进一步规范保健食品原料管理的通知》中，当归为可用于保健食品的原料。当归为甘肃道地药材，甘肃岷县当归(俗称“岷归”)，已有1700多年的栽培历史，是中国当归原产地和主产地，2002年获得中国当归原产地地理标记【中华人民共和国质检总局(2002)年第133号】，种植面积产量占全国90％。

当归的成分大体上分为两部分：一部分为脂溶性物质(当归油)，另一部分为水溶性物质(当归多糖类物质)。当归油具有补血活血、促进血液循环、缓解血管平滑肌痉挛、抗炎镇痛、平喘、保肝利胆等作用，可治疗***、痛经、子宫肌瘤及哮喘治疗等病症，也被用于治疗心脑血管疾病，是目前市场上较为畅销的医药中间体和保健食品原料，同时当归油也还广泛应用于化妆品及香料工业。

中药材的质量直接影响中药产品的品质及药效，衡量中药材质量标准除中药自身的有效成分外，还包括化学农药及重金属的污染情况。近年来，中药领域的大力发展以及中药材需求量的加大，导致大量伪劣药材的上市，其中不少伪品的农药残留量严重超标，给当归药材的质量、用药的安全性及有效性造成了很大的冲击。药材农药残留问题日益引起世界各国的重视，国际上从1970年起开始研究药材农药残留量问题，1980年世界卫生组织将农药残留测定单独列为检测项目，近年来成为世界性的研究热点。

但是，现存的当归药材的检测方法或者只进行有效成分的含量测定，或者只测定其农药残留量，检测指标比较单一，而且对农药的检测也大多借鉴于其他产品的检测方法，并没有针对当归药材常见农药的一次性检出方法，导致对于当归药材常见农药的检测需要多次检测才能完全，不利于当归药材的质量控制以及当归使用的安全性和稳定性。因此，建立一种快速、全面、针对性强的当归药材的质量检测方法具有重要的意义。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中当归药材检测指标单一，不利于当归药材的质量控制，进而提供一种快速、全面、针对性强的当归药材的检测方法。

本发明的当归药材的检测方法，该方法包括如下有效成分的含量测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中，

A、藁本内酯的含量测定包括如下步骤：

(1)精密称取藁本内酯对照品10.14mg，加乙腈定容至10mL，得到每1mL含1.014mg的储备溶液；精密吸取5mL上述储备溶液，加乙腈定容至50mL，得到每1mL含101.4μg的对照品溶液；

(2)精密称定待测当归药材粉末0.2g，精密加入70％甲醇20mL，称定重量，超声40分钟；用70％甲醇补足减失的重量，摇匀静置，取上清液经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以Diamonsil ODS C18柱为色谱柱；以乙腈为流动相A、以1％的乙酸水溶液为流动相B，控制流速为1.0mL/min进行梯度洗脱，上述洗脱梯度程序具体为：0-15min，A：B为38％：62％；15-20min，A：B为38％：62％→70％：30％；20-40min，A：B为70％：30％；在328nm检测波长，柱温为室温条件下测定；分别精密吸取对照品、供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，测定；理论板数按藁本内酯峰计算应不低于5000；

B、阿魏酸的含量测定包括如下步骤：

(1)精密称取阿魏酸对照品10mg，置棕色量瓶中，加70％甲醇溶解并稀释至50mL；精密量取3mL溶液，加70％甲醇定容至50mL，摇匀得每1mL含12μg阿魏酸的对照品溶液；

(2)精密称取待测当归药材粉末0.2g，加入70％甲醇20mL，称定重量，加热回流30分钟，放冷后再称定重量，并用70％甲醇补足减失的重量，静置取上清液以微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为17：83的乙腈-0.085％磷酸溶液为流动相洗脱；检测波长为316nm；柱温35℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定；

C、农药残留量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1mL含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；

分别精密量取各农药对照品贮备溶液1mL及上述内标贮备液1mL，加丙酮定容至100mL，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/mL的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；

另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1mL含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1mL含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1mL混匀，加乙腈定容至10mL，作为分析保护剂；

(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100mL，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60mL减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10mL，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；

向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5mL溶解，并转移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15mL洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入上述内标贮备液5μL，加乙腈定容至1mL，作为供试品溶液；

(3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入上述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其中，

上述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3mL/分钟，进样量1μL，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；

上述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。

本发明的当归药材的检测方法，上述农药残留量的测定中，上述GPC凝胶渗透色谱净化步骤的条件具体为：填料为Bio-Beads S-X3200-400目，净化柱为2.5mm×40cm，具体洗脱参数为净化去杂900s，目标物收集1200s，柱子清洗300s。

本发明的当归药材的检测方法，农药残留量的测定中，上述农药对照品包括敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、***酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、***醇A、***醇B、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀螨砜、伏杀硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。

本发明的当归药材的检测方法，藁本内酯的含量测定中，上述供试品制备的超声条件为功率200W，频率40kHz。

本发明的当归药材的检测方法，藁本内酯的含量测定中，上述对照品溶液于-80℃保存。

本发明的的当归药材的检测方法，农药残留量的测定中，上述待测药材的粒径为180-2000μm。

本发明上述方法通过对当归药材所含的有效成分含量的测定以及对当归药材农药残留量的检测，进行当归药材真伪优劣的判定标准。本发明通过高效液相色谱法检测阿魏酸和藁本内酯的含量，不仅准确且简单易行。本发明通过气相色谱-质谱联用的方式检测药材的残留农药量，不仅检测的准确度高，方法简单、快速，而且通过对检测条件的特定筛选，可一次性将当归药材中常见的农药种类进行一次性的有效检测，可同时完成多个检测指标，上述方法准确率及实用效果均较好，更有利于对当归药材质量的控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。

附图说明

为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：

图1为实施例2中藁本内酯对照品的色谱图；

图2为实施例2中藁本内酯样品的测定色谱图；

图3为实施例3中农药标准品的全扫描气相色谱图；

图4为实施例3中农药标准品的0-10分钟扫描气相色谱图；

图5为实施例3中农药标准品的10-20分钟全扫描气相色谱图；

图6为实施例3中农药标准品的20-40分钟全扫描气相色谱图。

具体实施方式

下述实施例用于进一步说明本发明但不限于本发明。

实施例1当归药材中阿魏酸的含量测定

供试当归药材来源和产地见表1，按不同批次予以编号检测，检测的具体步骤如下：

(1)精密称取阿魏酸对照品10mg，置棕色量瓶中，加70％甲醇溶解并稀释至50mL；精密量取3mL溶液，加70％甲醇定容至50mL，摇匀得每1mL含12μg阿魏酸的对照品溶液；

(2)精密称取待测当归药材粉末0.2g，加入70％甲醇20mL，称定重量，加热回流30分钟，放冷后再称定重量，并用70％甲醇补足减失的重量，静置取上清液以微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为17：83的乙腈-0.085％磷酸溶液为流动相洗脱；检测波长为316nm；柱温35℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，理论板数按阿魏酸峰计算应不低于5000；按干燥品当归药材计算，含阿魏酸不得少于0.070％。

对上述药材中阿魏酸含量的检测结果见表1。

表1 当归样品产地、来源及阿魏酸含量测定结果(％)

实施例2当归药材中藁本内酯的含量测定

1仪器与试药

1.1仪器

岛津LC-20AT型高效液相色谱仪；

岛津SPD-M10A VP型二极管阵列检测器；

梅特勒AL-204型电子天平；SPSS11.5软件。

1.2试剂

藁本内酯对照品(天津马克生物技术有限公司，含量为99.0％)；

甲醇、乙腈为色谱纯，冰乙酸、磷酸为分析纯，水为纯净水。

1.3供试药材

供试当归药材来源和产地见表3，以下按不同批次予以编号检测。

2方法与结果

2.1对照品溶液的制备

精密称取藁本内酯对照品10.14mg，置于10mL棕色量容量瓶中，乙腈定容至刻度，得到每1mL含1.014mg的储备溶液。精密吸取5mL，置于50mL棕色量容量瓶中，乙腈定容至刻度，得到每1mL含101.4μg的溶液。对照品溶液置-80℃保存。

2.2供试品溶液的制备

分别取上述各批次供试当归药材粉碎(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20mL，称定重量，超声40分钟。用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.3色谱条件

以Diamonsil ODS C18柱为色谱柱；以乙腈为流动相A、以1％的乙酸水溶液为流动相B，控制流速为1.0mL/min进行梯度洗脱，所述洗脱梯度程序具体为：0-15min，A：B为38％：62％；15-20min，A：B为38％：62％→70％：30％；20-40min，A：B为70％：30％；在328nm检测波长，柱温为室温条件下测定；分别精密吸取对照品、供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，测定；理论板数按藁本内酯峰计算应不低于5000。

2.4方法学验证

2.4.1线性关系考察

精密吸取对照品溶液1，2，4，6，8，10mL于10mL棕色容量瓶中，乙腈稀释至刻度，分别取10μL进样测定峰面积。以对照品平均峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归，回归方程及r值：藁本内酯:A＝17901C+13305，r＝0.9996，线性范围为10.14～101.4μg/mL。

2.4.2精密度试验

精密称取藁本内酯对照品10.14mg，置于10mL棕色量容量瓶中，乙腈定容至刻度，得到每1mL含1.014mg的储备溶液。精密吸取5mL，置于50mL棕色量容量瓶中，乙腈定容至刻度，得到每1mL含101.4μg的溶液。对照品溶液置-80℃保存，即得1号当归样品供试溶液，连续进样5次，记录峰面积，结果藁本内酯峰面积的RSD为0.84％，表明仪器精密度良好。

2.4.3重现性试验

取当归药材粉碎(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20mL，称定重量，超声40分钟。用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得1号当归样品供试溶液5份，分别进样，记录峰面积，计算5份样品中藁本内酯含量，其RSD分别为1.72％，表明重现性良好。

2.4.4供试品稳定性试验

取当归药材粉碎(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20mL，称定重量，超声40分钟。用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得1号当归供试品溶液，在0～24h内选取10个时间点测定藁本内酯峰的峰面积，结果24h内藁本内酯峰面积的RSD为5.53％，可看出供试品中的藁本内酯在前12小时可基本保持稳定，12h后峰面积有显著下降。

2.4.5加样回收率试验

称取适量已知含量的当归样品，精密加入13.35μg的藁本内酯，取当归药材粉碎(过三号筛)约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇20mL，称定重量，超声40分钟。用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，静置，取上清液，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液，测定并计算藁本内酯的平均回收率，平均回收率为98.12％，RSD为2.74％。

2.4.6色谱条件耐用性试验

取同一份供试品溶液，精密吸取10μL，分别在不同变动因素：流动相pH值、柱温、波长、流速和两种不同的色谱柱，分别进样，记录峰面积，考察色谱条件的耐用性。结果各色谱条件下，藁本内酯的峰面积RSD均小于4.0％，表明色谱条件耐用性良好，结果见表2。

表2 耐用性试验

2.5测定法

分别吸对照品、供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。藁本内酯对照品和藁本内酯样品的色谱图见图1和图2，30批当归药材中阿魏酸和藁本内酯的含量测定结果见表3。

表3 当归样品产地、来源及藁本内酯含量测定结果(％)

3测定结果与分析

对30批当归药材测定结果显示，藁本内酯的含量分布在0.121％～1.096％之间，最低与最高相差8倍，平均值在0.61％，拟定含藁本内酯(C12H14O2)不得少于0.40％。据此，30批当归药材中5批不合格。

实施例3当归药材中农药残留量检测

1仪器与试药

1.1仪器

Clarus600气相色谱-质谱联用仪(美国PE公司)，HS10260D超声提取器(昆山市超声仪器有限公司)，RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

1.2试药

敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、***酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、***醇A、***醇B、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀螨砜、伏杀硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等64种农药对照品纯品贮备溶液，由中国食品药品检定研究院提供。

三苯基磷酸酯、丙酮、乙腈、环已烷、乙酸乙酯为进口农残级；核糖酸内酯、山梨醇、氯化钠、无水硫酸钠为优级纯。

1.3样品

当归等道地批样品购买于产地、或购于兰州黄河药材市场，均为原药材，以下按不同批次予以编号检测。

2方法与结果

2.1内标贮备液及分析保护剂的配制

精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1mL含100μg的溶液，即得内标贮备液。

分析保护剂的配制：取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解并制成每1mL含20mg的溶液；另取山梨醇适量，加水溶解并制成每1mL含10mg的溶液。分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1mL，至同一10mL量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2混合对照品溶液的制备

分别精密量取各农药对照品贮备溶液1mL及内标贮备液1mL，置100mL量瓶中，用丙酮稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品贮备溶液(1μg/mL)。分别精密量取适量，加乙腈制成20-1000ng/mL不同浓度系列的混合对照品溶液，即得。

2.3供试品溶液的制备

精密称取各批次供试品细粉10g，置100mL锥形瓶中，加入1g氯化钠，精密加入丙酮100mL，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟。精密量取60mL减压浓缩至近干，加入少量的环已烷：乙酸乙酯(1：1)溶液溶解样品并定量稀释至10mL，混匀，滤过，滤液经凝胶渗透色谱(GPC)净化，进样5mL，(GPC主要参数：填料Bio-Beads S-X3200--400目，净化柱2.5mm×40cm，洗脱参数：pre run900s,main run1200s,tail run300s)，以环已烷：乙酸乙酯(1：1)为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干。

2.4供试品溶液的净化

加乙酸乙酯-丙酮(1:1)混合溶液5mL溶解并定量转移至石墨碳(500mg)-氨基(500mg)混合固相萃取小柱上,以乙酸乙酯-丙酮(1:1)混合溶液15mL洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，残渣加乙腈溶解，并加内标贮备液5μL，乙腈定容至1mL，即得。

2.5气-质联用分析

气相色谱分析条件：弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)DB17ms，载气为高纯氦气，柱流速1.3mL/min；进样口温度为230℃，进样量1μL，高压不分流进样。

具体升温程序：初始温度60℃，以30℃/min升至120℃，以10℃/min升至200℃，以2℃/min升至230℃，以30℃/min升至300℃，保持7min。

质谱(EI源)测定条件：70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。

各待测品SIM条件见表4，各个农药标准品的全扫描气相色谱图及0-10分钟、10-20分钟、20-40分钟扫描气相色谱图分别见图3、4、5和6所示。

表4 GC-MS检测指标及SIM测定条件

2.6方法学验证

2.6.1精密度试验

精密吸取稀释后混合标准溶液1μL，重复进样5次，计算RSD值，见表5。

表5 64种农药的精密度试验

2.6.2加样回收率试验

在样品中分别加入一定的混合标准溶液，形成3种添加水平3份样品，按选定方法提取挣化和检测，扣除本底计算各种农药在样品中的回收率，结果见表6。

表6 64种农药的加样回收率试验

2.6.3检出限测定

将农药标准品溶液稀释成不同浓度，进行测定组分的最低检出量，结果见表7。

表7 64种农药的检出限

2.6.4线性关系

将农药标准品溶液稀释成不同浓度，进行测定组分的线性范围，结果见表8。

表8 64种农药的线性方程

2.7测定法

分别精密量取混合对照品溶液、供试品溶液各400μL，加分析保护剂100μL，混匀，分别精密吸取1μL，注入气相色谱质谱联用仪，测定，计算，即得，12批当归药材的农药残留结果见表9。

表9 当归样品中农药残留检测结果(mg/kg)

表9 当归样品中农药残留检测结果(mg/kg)(续表)

表9 当归样品中农药残留检测结果(mg/kg)(续表)

表9 当归样品中农药残留检测结果(mg/kg)(续表)

3测定结果与分析

3.1农药残留测定结果在12批样品全部检出农药残留，检出率为100％，当归中农药残留现状比较普遍。涉及有机氯类、有机磷类和拟虫菊酯类共24种不同的农药。具体农药残留批次有：四氯硝基苯1批、乐果1批、久效磷1批、磷胺3批、甲基毒死蜱1批、甲基对硫磷1批、七氯1批、甲霜灵2批、甲基嘧啶磷1批、杀螟硫磷2批、甲基五氯苯基硫醚2批、***醇A1批、杀扑磷4批、狄氏剂1批、PP'-DDT3批、甲氧DDT3批、甲氰菊酯1批、伏杀硫磷2批、反式氯菊酯2批、顺式氯氰菊酯1批、克菌丹1批、马拉硫磷4批、三氯杀螨醇3批。

3.2受到环境、种植技术、加工和储藏等因素影响，造成当归药材农药残留的原因比较复杂。当归药材中农药残留数有差别，少数品种为1种农药残留，多数为2-3种农药残留，个别品种达到7种农药残留，农药残留现象严重。

3.3我国中药材GAP生产中，禁止使用的农药有13类54种。当归中检出了有机磷达到6种，有机氯2种和1种有机氯杀螨剂，分别为久效磷、磷胺、甲基对硫磷、杀螟硫磷、杀扑磷、伏杀硫磷、狄氏剂、DDT和三氯杀螨醇。其他检出农药中，属于生产中可以使用的农药。

3.4中国药典2010年版仅规定9种有机氯残留的检测。对其他农药，采用国家标准GB2763-2005食品中农药最大残留限量[8]规定进行分析，超过食品残留标准：甲基毒死蜱(原粮5mg/kg、谷物0.1mg/kg)超标8.9-9.8倍、久效磷(粮食、蔬菜0.03mg/kg)超标189倍、磷胺(蔬菜0.05mg/kg)超标220-360倍、七氯(蔬菜0.02mg/kg)105倍、甲霜灵(黄瓜0.5mg/kg，葡萄1mg/kg)超标0.25-1.5倍、三氯杀螨醇(果实1mg/kg)超标1-3倍、***醇(玉米0.1mg/kg)超标9倍、杀扑磷(果实2mg/kg)超标1-6倍、DDT超标0.8-7倍、伏杀硫磷(果实1mg/kg)超标20-25倍。

3.5根据本次的测定结果，建议对我国中药材GAP生产中禁止使用的农药，以及生产中允许使用而容易超标的农药进行限量检查。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (6)

1.一种当归药材的检测方法，该方法包括如下藁本内酯和阿魏酸的含量测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中，

A、藁本内酯的含量测定包括如下步骤：

(1)精密称取藁本内酯对照品10.14mg，加乙腈定容至10mL，得到每1mL含1.014mg的储备溶液；精密吸取5mL所述储备溶液，加乙腈定容至50mL，得到每1mL含101.4μg的对照品溶液；

(2)精密称定待测当归药材粉末0.2g，精密加入70％甲醇20mL，称定重量，超声40分钟；用70％甲醇补足减失的重量，摇匀静置，取上清液经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以Diamonsil ODS C18柱为色谱柱；以乙腈为流动相A、以1％的乙酸水溶液为流动相B，控制流速为1.0mL/min进行梯度洗脱，所述洗脱梯度程序具体为：0-15min，A：B为38％：62％；15-20min，A：B为38％：62％→70％：30％；20-40min，A：B为70％：30％；在328nm检测波长，柱温为室温条件下测定；分别精密吸取对照品、供试品溶液各10μL注入液相色谱仪，测定；理论板数按藁本内酯峰计算应不低于5000；

B、阿魏酸的含量测定包括如下步骤：

(1)精密称取阿魏酸对照品10mg，置棕色量瓶中，加70％甲醇溶解并稀释至50ml；精密量取3mL溶液，加70％甲醇定容至50mL，摇匀得每1mL含12μg阿魏酸的对照品溶液；

(2)精密称取待测当归药材粉末0.2g，加入70％甲醇20mL，称定重量，加热回流30分钟，放冷后再称定重量，并用70％甲醇补足减失的重量，静置取上清液以微孔滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以体积比为17：83的乙腈-0.085％磷酸溶液为流动相洗脱；检测波长为316nm；柱温35℃；分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定；

C、农药残留量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1mL含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；

分别精密量取各农药对照品贮备溶液1mL及所述内标贮备液1mL，加丙酮定容至100mL，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/mL的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；

另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1mL含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1mL含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1mL混匀，加乙腈定容至10mL，作为分析保护剂；

(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100mL，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60mL减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10mL，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；

向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5mL溶解，并转移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15mL洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μL，加乙腈定容至1mL，作为供试品溶液；

(3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入所述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其中，

所述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3mL/分钟，进样量1μL，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；

所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。

2.根据权利要求1所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量的测定中，所述GPC凝胶渗透色谱净化步骤的条件具体为：填料为Bio-Beads S-X3200-400目，净化柱为2.5mm×40cm，具体洗脱参数为净化去杂900s，目标物收集1200s，柱子清洗300s。

3.根据权利要求1或2所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量的测定中，所述农药对照品包括敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、***酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、***醇A、***醇B、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀螨砜、伏杀硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。

4.根据权利要求1-3任一所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述藁本内酯的含量测定中，所述供试品制备的超声条件为功率200W，频率40kHz。

5.根据权利要求1-4任一所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述藁本内酯的含量测定中，所述对照品溶液于-80℃保存。

6.根据权利要求1-5任一所述的当归药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量的测定中，所述待测药材的粒径为180-2000μm。