CN104250279A

CN104250279A - 一种24-羟基甘草酸制备方法

Info

Publication number: CN104250279A
Application number: CN201310274465.1A
Authority: CN
Inventors: 金显友; 杨永安; 汤文建; 朱海亮
Original assignee: Jiangsu Tiansheng Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Jiangsu Tiansheng Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2013-06-28
Filing date: 2013-06-28
Publication date: 2014-12-31

Abstract

木发明提供一种24-羟基甘草酸及其制备方法，本制备方法是以甘草酸粗粉为原料，经提取、结晶、分离、结晶、重结晶等一系列步骤，制备得到高含量的24-羟基甘草酸，采用高效液相色谱法测定，其含量范围为70％～99.5％；本发明提供的24-羟基甘草酸及其制备方法采用中药现代化分离纯化技术，工艺新颖，适合工业化生产，具有很强的实用性。

Description

一种24-羟基甘草酸制备方法

技术领域

本发明涉及一种24-羟基甘草酸的制备方法，属于医药领域范畴。

背景技术

甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza in flata Bat.、或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的根和根茎，主产于内蒙古、新疆、甘肃等地。甘草入药已有悠久历史，《神农本草经》就将其列为药之上乘，古代医学家尊称其为“国老”。由于其资源珍贵，被国家列入国家二级保护野生药材。

甘草中含有包括黄酮类、三萜类、多糖100多种有效成分，其中以甘草甜素、甘草次酸、甘草甘元、和甘草多糖为主。药理作用作用主要集中在甘草酸、总黄酮、单黄酮等化学物质。甘草皂苷，又称甘草酸，由于有甜味，又称为甘草甜素。随着对甘草酸抗病毒、抗炎、保肝等方面作用研究的深入，以甘草酸和甘草酸盐类为原料的各种制剂在临床上得到了广泛的应用，如甘草酸单铵盐、甘草酸单铵注射液、甘草酸单钾盐片、异甘草酸镁及其注射液等。

经研究表明本发明提供的24-羟基甘草酸与甘草酸的不同在于24-羟基甘草酸24位的甲基变为羟甲基，由甲基变为羟甲基使得其水溶性得到了提高，更加有利于吸收，提高了生物利用度，因此比具有更好的抗肝炎和抗病毒作用，且理化性质稳定，毒副作用用小，具有很好的应用前景。

本发明的目的在于提供一种高纯度的24-羟基甘草酸的制备方法。

在已经公开的文献与专利中，还没有检索到与本发明相关或类似的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种结构明确、高含量的24-羟基甘草酸，采用高效液相色谱法测定，含量70％～99.5％，其结构式如下：

24-羟基甘草酸

根据本发明的比较优选的实施方案，提取24-羟基甘草酸的制备方法包括如下步骤：

(1)取甘草酸粗粉，加适量溶剂加热回流提取，合并提取液；

(2)提取液浓缩至一定体积，过滤，滤液在一定温度下滴加氨水至一定pH，冷却，放置，结晶，过滤；

(3)滤液减压浓缩成稠膏，减压干燥，粉碎，得24-羟基甘草酸粗品；

(4)取24-羟基甘草酸粗品，加入适量水加热回流提取，收集提取液，滴加氨水至一定PH，过滤，残渣弃去，冷却；

(5)滤液上大孔树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大极性杂质后，改用乙醇洗脱，至洗脱液中无24-羟基甘草酸，收集洗脱液；

(6)洗脱液减压浓缩成稠膏，加入适量有机溶剂加热回流提取，过滤，残渣弃去，冷却，加入微量纯度大于99％的结晶24-羟基甘草酸作为晶种，静置结晶，重结晶，重结晶步骤重复2～4次，得含量大于70～99.5％的24-羟基甘草酸。

上述步骤(1)中，提取溶剂可以是丙酮、乙酸乙酯、甲醇或乙醇，为了更大程度的保证提取率，优选使用乙醇作为提取溶剂，其浓度为80％～95％，优选95％；提取溶剂的用量为甘草酸粗粉量的5～10倍(m/V)，优选为7倍量；提取次数为1～3次，优选2次；提取时间1～3小时，优选2小时。

上述步骤(2)中，提取液浓缩至甘草酸粗粉量的5～10倍(m/V)，优选为7～8倍量；滤液加热至40～60℃，优选为50℃；pH为4～6，优选为5；结晶时间为12～36小时，优选为24小时。

上述步骤(3)中，滤液55～75℃下减压回收，优选60℃；减压干燥温度为65～75℃，优选为70℃；粉碎后颗粒粒度为40～80目，优选为60目。

上述步骤(4)中，水的用量为24-羟基甘草酸粗粉的2～4倍，优选为3；提取次数为1～3次，优选为2次；提取液滴加氨水至pH5～7，优选为6。

上述步骤(5)中，所用的大孔树脂型号可为HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600，或D101、D1300，优选树脂型号为D101的大孔树脂；上柱完成后，用水洗净杂质，然后用乙醇洗脱，通过对洗脱率、样品得率、样品含量的综合筛选，洗脱用乙醇的浓度为50～95％，最佳浓度为60％；根据洗脱溶剂的不同，洗脱溶剂用量为24-羟基甘草酸粗粉量的10～20倍(m/V)，优选为15倍。

上述步骤(6)中，乙醇洗脱液在55～75℃下减压回收，优选60℃；稠膏量为24-羟基甘草酸粗品量的1～3倍，优选为2倍；回流提取结晶所用的溶剂水、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、异丙醚或冰醋酸，或是以上溶剂中两种或几种溶剂的组合，优选为乙醇-水组合，更优选的比例为乙醇∶水(60∶40)；有机溶剂用量为稠膏量的2～4倍，优选为3倍；所用晶种纯度越高越好，一般不低于98.3％，否则影响结晶效果；结晶时间为6～24小时，优选为12小时。

具体实施方式

以下实施例中所用甘草酸粗粉购于新疆天瑞药业，含量测定用对照品由江苏天晟药业有限公司提供，所用乙醇为药用级，水为纯化水，其他溶剂为分析纯。

实施例一：

取甘草酸粗粉50kg，分别加95％乙醇350L加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液；提取液浓缩至350L，过滤，滤液加热至50℃后滴加氨水至pH5，冷却，静置24小时结晶，过滤；收集滤液，60℃减压浓缩至稠膏，稠膏于70℃减压干燥，粉碎成60目粉末，得24-羟基甘草酸粗品10.50kg；

将上述24-羟基甘草酸粗品，分别加入30L水加热回流提取2次，收集提取液，滴加氨水至pH6，过滤，残渣弃去，冷却，上D-101大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大极性杂质后，改用150L60％乙醇洗脱，至洗脱液中无24-羟基甘草酸，收集洗脱液，60℃减压浓缩至稠膏19.3kg；

将上述稠膏，加入60L60％乙醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量纯度为99.3％的24-羟基甘草酸作为晶种，静置结晶24小时，过滤，并按上述操作步骤重结晶2次，得白色晶体0.87kg，即24-羟基甘草酸，含量为99.4％。

实施例二：

取甘草酸粗粉50kg，分别加丙酮350L加热回流提取2次，每次3小时，合并提取液；提取液浓缩至350L，过滤，滤液加热至50℃后滴加氨水至pH4.5，冷却，静置36小时结晶，过滤；收集滤液，60℃减压浓缩至稠膏，稠膏于70℃减压干燥，粉碎成60目粉末，得24-羟基甘草酸粗品9.56kg；

将上述24-羟基甘草酸粗品，分别加入30L水加热回流提取2次，收集提取液，滴加氨水至pH7，过滤，残渣弃去，冷却，上HPD-100大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大极性杂质后，改用100L95％乙醇洗脱，至洗脱液中无24-羟基甘草酸，收集洗脱液，60℃减压浓缩至稠膏11.3kg；

将上述稠膏，加入30L60％乙醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量纯度为99.3％的24-羟基甘草酸作为晶种，静置结晶24小时，过滤，并按上述操作步骤重结晶1次，得白色晶体0.76kg，即24-羟基甘草酸，含量为84.4％。

实施例三：

取甘草酸粗粉50kg，分别加甲醇250L加热回流提取3次，每次1小时，合并提取液；提取液浓缩至350L，过滤，滤液加热至40℃后滴加氨水至pH5，冷却，静置24小时结晶，过滤；收集滤液，55℃减压浓缩至稠膏，稠膏于70℃减压干燥，粉碎成60目粉末，得24-羟基甘草酸粗品11.30kg；

将上述24-羟基甘草酸粗品，分别加入30L水加热回流提取2次，收集提取液，滴加氨水至pH6，过滤，残渣弃去，冷却，上HPD-600大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大极性杂质后，改用150L60％乙醇洗脱，至洗脱液中无24-羟基甘草酸，收集洗脱液，60℃减压浓缩至稠膏23.2kg；

将上述稠膏，加入60L60％甲醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量纯度为99.3％的24-羟基甘草酸作为晶种，静置结晶24小时，过滤，并按上述操作步骤重结晶1次，得白色晶体1.03kg，即24-羟基甘草酸，含量为75.4％。

实施例四：

取甘草酸粗粉50kg，分别加95％乙醇350L加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液；提取液浓缩至360L，过滤，滤液加热至60℃后滴加氨水至pH6，冷却，静置24小时结晶，过滤；收集滤液，70℃减压浓缩至稠膏，稠膏于70℃减压干燥，粉碎成60目粉末，得24-羟基甘草酸粗品8.60kg；

将上述24-羟基甘草酸粗品，分别加入24L水加热回流提取2次，收集提取液，滴加氨水至pH6，过滤，残渣弃去，冷却，上D-101大孔吸附树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大极性杂质后，改用150L60％乙醇洗脱，至洗脱液中无24-羟基甘草酸，收集洗脱液，60℃减压浓缩至稠膏16.3kg；

将上述稠膏，加入60L60％乙醇加热回流溶解，过滤，滤液冷却，加入微量纯度为99.3％的24-羟基甘草酸作为晶种，静置结晶24小时，过滤，并按上述操作步骤重结晶3次，得白色晶体0.87kg，即24-羟基甘草酸，含量为94.3％。

Claims

1.一种24-羟基甘草酸，其制备方法由以下几步组成：

步骤(1)取甘草酸粗粉，加6～10倍(m/V)有机溶剂加热回流提取1～3次，合并提取液；

步骤(2)提取液浓缩至甘草酸粗粉量的5～10倍(m/V)，过滤，滤液在40～60℃下滴加氨水至一定pH4～6，冷却，放置结晶12～36小时，过滤；

步骤(3)滤液在55～75℃下减压浓缩成稠膏，在65～75℃减压干燥，粉碎至40～80目，得24-羟基甘草酸粗品；

步骤(4)取24-羟基甘草酸粗品，加入2～4倍量的水加热回流提取1～3次，收集提取液，滴加氨水至pH5～7，过滤，残渣弃去，冷却；

步骤(5)滤液上一定型号的大孔树脂柱，上柱完成后，加水洗脱去除大极性杂质后，改用10～20倍(m/V)24-羟基甘草酸粗品量的50～95％乙醇洗脱，至洗脱液中无24-羟基甘草酸，收集洗脱液；

步骤(6)洗脱液在55～75℃减压浓缩至24-羟基甘草酸粗品的1～3倍稠膏，加入2～4倍量有机溶剂加热回流提取，过滤，残渣弃去，冷却，加入微量纯度大于99％的结晶24-羟基甘草酸作为晶种，静置结晶6～24，重结晶，重结晶步骤重复2～4次，得含量70～99.5％的24-羟基甘草酸。

步骤(1)中所述的提取有机溶剂是丙酮、乙酸乙酯、甲醇或乙醇。

步骤(5)中所述的一定型号的大孔树脂的型号是HPD-100、HPD-400、HPD-500、HPD-600，或D101、D1300的大孔树脂。

步骤(6)中所述的回流提取的溶剂是水、甲醇、乙醇、丙酮、异丙醇、乙酸乙酯、异丙醚或冰醋酸，或是以上溶剂中两种或几种溶剂的组合。