CN101879265A - 一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,工艺步骤包括:虎眼万年青为原料粉碎,水回流提取2-3次,ZTC-II沉降剂沉降杂质,大孔树脂富集皂苷分离多糖,多次梯度醇沉、活性炭柱脱色制备多糖,中压氧化镁柱、乙醇溶解重结晶制备总皂苷。采用工艺生产所得总皂苷含量高达90%,多糖含量80%左右,而且原料利用率高。
Description
技术领域:
本发明属于生物分离技术领域,特别是一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺。
背景技术:
虎眼虎眼万年青(Ornithogalum caudatum Ait)又名胡连虎眼万年青、海葱、葫芦兰,为百合科虎眼虎眼万年青,属常绿多年生球根植物,原产于非洲南部。在我国北方有栽培.民间用全草或球茎入药主要用于消炎和抗癌。虎眼虎眼万年青有极高的药用价值,药理学研究表明虎眼虎眼万年青中的虎眼虎眼万年青皂苷OSW21对肺癌、乳腺癌有明显的抗癌活性,体外抗p338淋巴细胞白血病活性结果表明,OSW21是常见抗癌药物喜树碱、阿霉索、紫杉醇抗癌活性的10~100倍,而且对正常细胞没有毒性,因此,是一种极具开发潜力的中草药。
现有提取分离虎眼万年青皂苷工艺,多是传统老工艺。即虎眼万年青叶子水温浸提取,乙酸铅沉淀杂质,活性炭吸附,乙醇再次提取,粗苷水溶解,依次用二硫化碳、***洗涤,氯仿再萃取,再用氯仿乙醇水混溶液萃取和氧化铝柱分离,重结晶得到三种单体成分,工艺复杂繁琐,试剂种类繁多,给回收带来困难。也有利用大孔树脂吸附工艺制备皂苷的,如肖冲等发表的“虎眼虎眼万年青皂苷的分离提取”采用乙醇提取,石油醚脱脂,AB-8树脂吸附,D-280树脂脱色。现有专利公开的方法也多是粗提物的制备,如专利200510069273“虎眼虎眼万年青活性提取物的制备方法及用途”,该方法采用乙醇提取,树脂分离,得到粗提物。
现有公开的虎眼万年青多糖工艺,提取方法简单,产品含量较低,如专利200510017123“治疗肝癌的虎眼虎眼万年青多糖药物”,该专利公开的方法是水提,低醇沉淀沉淀物弃去,再高醇沉淀多糖,乙醇洗涤即可,多糖含量50%。
发明内容:
本发明要解决的技术问题是提供一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,该工艺适合虎眼万年青多种有效成分的分离,能够提高了虎眼万年青原料的利用率。
本发明的目的是这样来实现的:
一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于包括以下几个步骤:
1)提取:取虎眼万年青药材粉碎,加入5-8倍量水回流提取1-2小时,提取2-3次,合并提取液加入澄清剂沉淀过滤,收集滤液;
2)大孔树脂吸附:将上述滤液加入大孔树脂吸附,收集下柱液,水-醇梯度洗脱,收集醇洗脱液;
3)总皂苷纯化:将步骤2)中的醇洗脱液,浓缩小体积,加入氧化镁中压柱,乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱,收集皂苷流分浓缩小体积,加入***沉析,沉析物滤出乙醇溶解结晶2-3次,干燥即得虎眼万年青总皂苷;
4)多糖纯化:将步骤2)下柱液减压浓缩至密度1.1-1.3,加入乙醇梯度醇沉,滤出沉淀物热水溶解,多糖用活性炭柱脱色,脱色液浓缩加入乙醇沉析,滤出沉淀物,低温真空干燥即得虎眼万年青多糖。
步骤1)中澄清剂为ZTC-II澄清剂,用量1-3‰。
步骤2)中大孔树脂可选D101、AB-8和HZ816中的一种。优选HZ816。
步骤2)中水-醇梯度洗脱为6-8倍柱体积水洗再5-6倍柱体积50-70%乙醇洗脱。
步骤3)中乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱为8-10倍柱体积乙酸乙酯洗脱再4-8倍柱体积50-90%乙醇洗脱。优选85%乙醇。
步骤3)中结晶条件为:90-99%乙醇回流溶解,回收至原体积的1/2-1/3,静置结晶。
步骤4)中的梯度醇沉为最终乙醇浓度90%-70%-50%三个梯度。
综上所述,本发明存在以下优点:水回流提有利于皂苷多糖同时溶出,沉降剂可以除去大分子物质和部分鞣质,提高了大孔树脂寿命;氧化镁中压柱处理速度快、效果好、总皂苷含量高;梯度醇沉和活性炭柱纯化多糖,多糖产品品质好。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明,但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施方式:
实施例1:
取1kg虎眼虎眼万年青,粉碎,加入5L去离子水,回流提取1小时,提取3次,合并提取液加入3gZTC-II沉降剂搅拌均匀,充分沉降,滤过加入500mlHZ816树脂柱中吸附,下柱液收集备用。取4L去离子水洗脱树脂中杂质,再取3L50%的乙醇溶液,洗脱皂苷成分。
1:总皂苷洗纯化:皂苷洗脱液,减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5),泵入中压氧化镁柱,先8倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质,再用4倍柱体积85%乙醇洗脱总皂苷,收集总皂苷流分浓缩无醇,加入20ml***沉析,沉析物滤出,90%乙醇溶解回流溶解,浓缩1/3静止结晶,结晶三次,得总皂苷6g含量90%。
2:多糖纯化:将下柱液减压浓缩至密度1.1,放出加入无水乙醇至醇90%,加入过程充分搅拌,沉淀物再70%和50%两个梯度醇沉,粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱,收集脱色液浓缩加入乙醇至80%醇沉,滤出真空干燥得多糖30g含量80%。
实施例2:
取1kg虎眼虎眼万年青,粉碎,加入8L去离子水,回流提取2小时,提取2次,合并提取液加入4gZTC-II沉降剂搅拌均匀,充分沉降,滤过加入500mlAB-8树脂柱中吸附,下柱液收集备用。取3L去离子水洗脱树脂中杂质,再取2.5L70%的乙醇溶液,洗脱皂苷成分。
1:总皂苷洗纯化:皂苷洗脱液,减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5),泵入中压氧化镁柱,先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质,再用4倍柱体积90%乙醇洗脱总皂苷,收集总皂苷流分浓缩无醇,加入25ml***沉析,沉析物滤出,99%乙醇溶解回流溶解,浓缩1/2静止结晶,结晶三次,得总皂苷6.2g,含量86%。
2:多糖纯化:将下柱液减压浓缩至密度1.2,放出加入无水乙醇至醇90%,加入过程充分搅拌,沉淀物再70%和50%两个梯度醇沉,粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱,收集脱色液浓缩加入乙醇至70%醇沉,滤出真空干燥得多糖28g,含量78%。
实施例3:
取1kg虎眼虎眼万年青,粉碎,加入5L去离子水,回流提取1小时,提取3次,合并提取液加入3gZTC-II沉降剂搅拌均匀,充分沉降,滤过加入500mlD101树脂柱中吸附,下柱液收集备用。取4L去离子水洗脱树脂中杂质,再取3L60%的乙醇溶液,洗脱皂苷成分。
1:总皂苷洗纯化:皂苷洗脱液,减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5),泵入中压氧化镁柱,先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质,再用4倍柱体积50%乙醇洗脱总皂苷,收集总皂苷流分浓缩无醇,加入10ml***沉析,沉析物滤出,95%乙醇溶解回流溶解,浓缩1/2静止结晶,结晶三次,得总皂苷5.5g含量85%。
2:多糖纯化:将下柱液减压浓缩至密度1.15,放出加入无水乙醇至醇90%,加入过程充分搅拌,沉淀物再70%和50%两个梯度醇沉,粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱,收集脱色液浓缩加入乙醇至80%醇沉,滤出真空干燥得多糖26g,含量75%。
实施例4:
取10kg虎眼虎眼万年青,粉碎,加入50L去离子水,回流提取1小时,提取3次,合并提取液加入40gZTC-II沉降剂搅拌均匀,充分沉降,滤过加入6LHZ816树脂柱中吸附,下柱液收集备用。取40L去离子水洗脱树脂中杂质,再取30L60%的乙醇溶液,洗脱皂苷成分。
1:总皂苷洗纯化:皂苷洗脱液,减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5),泵入中压氧化镁柱,先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质,再用6倍柱体积85%乙醇洗脱总皂苷,收集总皂苷流分浓缩无醇,加入200ml***沉析,沉析物滤出,90%乙醇溶解回流溶解,浓缩1/3静止结晶,结晶三次,得总皂苷63g含量90%。
2:多糖纯化:将下柱液减压浓缩至密度1.2,放出加入无水乙醇至醇90%,加入过程充分搅拌,沉淀物再70%和50%两个梯度醇沉,粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱,收集脱色液浓缩加入乙醇至80%醇沉,滤出真空干燥得多糖310g,含量80%。
实施例5:
取10kg虎眼虎眼万年青,粉碎,加入80L去离子水,回流提取2小时,提取2次,合并提取液加入35gZTC-II沉降剂搅拌均匀,充分沉降,滤过加入6LAB-8树脂柱中吸附,下柱液收集备用。取48L去离子水洗脱树脂中杂质,再取35L65%的乙醇溶液,洗脱皂苷成分。
1:总皂苷洗纯化:皂苷洗脱液,减压浓缩小体积(浓缩体积不得大于氧化镁体积的1/5),泵入中压氧化镁柱,先10倍柱体积乙酸乙酯洗脱杂质,再用6倍柱体积85%乙醇洗脱总皂苷,收集总皂苷流分浓缩无醇,加入200ml***沉析,沉析物滤出,90%乙醇溶解回流溶解,浓缩1/3静止结晶,结晶三次,得总皂苷61g含量85%。
2:多糖纯化:将下柱液减压浓缩至密度1.2,放出加入无水乙醇至醇90%,加入过程充分搅拌,沉淀物再70%和50%两个梯度醇沉,粗多糖滤出溶解加入糖用活性炭柱,收集脱色液浓缩加入乙醇至80%醇沉,滤出真空干燥得多糖305g,含量75%。
Claims (7)
1.一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于包括以下几个步骤:
1)提取:取虎眼万年青药材粉碎,加入5-8倍量水回流提取1-2小时,提取2-3次,合并提取液加入澄清剂沉淀过滤,收集滤液;
2)大孔树脂吸附:将上述滤液加入大孔树脂吸附,收集下柱液,水-醇梯度洗脱,收集醇洗脱液;
3)总皂苷纯化:将步骤2)中的醇洗脱液,浓缩小体积,加入氧化镁中压柱,乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱,收集皂苷流分浓缩小体积,加入***沉析,沉析物滤出乙醇溶解结晶2-3次,干燥即得虎眼万年青总皂苷;
4)多糖纯化:将步骤2)下柱液减压浓缩至密度1.1-1.3,加入乙醇梯度醇沉,滤出沉淀物热水溶解,多糖用活性炭柱脱色,脱色液浓缩加入乙醇沉析,滤出沉淀物,低温真空干燥即得虎眼万年青多糖。
2.根据权利要求1所述虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于步骤1)中澄清剂为ZTC-II澄清剂,用量1-3‰。
3.根据权利要求1所述虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于步骤2)中大孔树脂可选D101、AB-8和HP100中的一种。
4.根据权利要求1所述虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于步骤2)中水-醇梯度洗脱为6-8倍柱体积水洗再5-6倍柱体积50-70%乙醇洗脱。
5.根据权利要求1所述虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于步骤3)中乙酸乙酯-乙醇梯度洗脱为8-10倍柱体积乙酸乙酯洗脱再4-8倍柱体积50-90%乙醇洗脱。
6.根据权利要求1所述虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于步骤3)中结晶条件为:90-99%乙醇回流溶解,回收至原体积的1/2-1/3,静置结晶。
7.根据权利要求1所述虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺,其特征在于步骤4)中梯度醇沉为最终乙醇浓度90%-70%-50%三个梯度。
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PB01 | Publication | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
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Application publication date: 20101110 |