CN104215772A - 心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法；所述试剂盒包括试剂R1、试剂R2及标准品组成；所述试剂R1的组成为：溶剂是pH7.0～7.6的缓冲液、溶质为表面活性剂、螯合剂、加速剂、防腐剂和纯化水；所述试剂R2为抗人H-FABP抗体胶乳试剂；所述标准品为所述标准品为含有定量H-FABP的重组蛋白。本发明解决了目前市场上乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒抗干扰能力差、特异性低、试剂稳定性不好和检测线性范围窄等问题。另外，本发明试剂盒试剂在检测过程中具有操作简单、准确度高、重复性好、灵敏度高等特性，且能够在全自动生化分析仪或者特种蛋白仪以及分光光度计上使用，具有广泛的应用前景。

Description

心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种利用乳胶增强免疫比浊法技术提高心脏型脂肪酸结合蛋白检测灵敏度的检测试剂盒。
背景技术
急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)是严重威胁人类健康的疾病之一，近年来，其发病率及死亡率逐年上升，且有越来越年轻化的趋势。据统计，在中国每年超过100万人死于AMI。现代治疗学认为，AMI发病后能迅速得到确诊并进行再灌注治疗，对于降低死亡率及改善预后十分重要。
在完全排除急性心肌梗死(AMI)之前，住院患者通常至少要接受6～12小时的检测，才能考虑出院。因此，许多医院承认大多数此类患者(74％～88％)，需要进一步的检测，这就给临床检测AMI提出了非常巨大的市场和挑战。迄今为止，临床应用的检测指标如肌钙蛋白I(cTnI)、心肌型肌酸激酶同工酶(CKMB)，在AMI发病后的早期(2h～4h)阳性率不高；肌红蛋白(MB)虽出现较早，但特异性较差。心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid binding protein，H-FABP)是近些年推出的心肌标志物，受到业界重视。
脂肪酸结合蛋白(FABP)是一种小分子蛋白质(相对分子量为15000)，存在于机体多种组织细胞的胞浆中，主要担负着结合脂肪酸并调节其细胞内代谢的功能。按照组织特异性不同可以分为心脏型(H-FABP)、小肠型(I-FABP)、肝脏型(L-FABP)、脂肪细胞型(A-FABP)、脑细胞型(B-FABP)、肾脏型(K-FABP)、骨骼肌型(S-FABP)、牛皮癣相关性(PA-FABP)、表皮型(E-FABP)9种亚型。它们分布于哺乳动物的心脏、小肠、肝脏、脂肪组织、脑、表皮等组织细胞中，在蛋白质序列上显示有很大的同源性。9种FABPs都有不同的表达模式，这些蛋白有多种功能，包括促进细胞摄取和运输脂肪酸，寻找参与特殊新陈代谢途径的脂肪酸，参与基因表达和细胞生长的调节。
H-FABP在心肌损伤后6～8小时左右达到浓度峰值，然后在24～30小时左右恢复至正常水平。如此迅速恢复至正常水平得益于高肾清除率，这意味着H-FABP不仅能够用作AMI早期标志物，还是理想的心肌梗死复发诊断标志物。
早期诊断AMI及评估心肌梗死面积大小新的心肌标记物必须在病人胸痛开始1～2h内有较高的敏感度,也即在心肌发生不可逆损伤前。有研究表明，在急性心肌梗死患者发病极早期，胞浆中的H-FABP会迅速释放到血浆中，能够直接提示心脏患者的发病情况，故可作为早期诊断心肌梗死程度的有效标志物，且因为其准确性、敏感性和特异性的原因，目前还没有更优越的AMI标志物以取代它的位置。H-FABP与其他心肌标志物在急性心肌梗死中的价值比较很有意义。H-FABP能及早发现超急期AMI患者。对于鉴别出需急诊住院、冠状动脉造影、介入治疗的患者有很高的敏感性，尤其那些胸痛发病6h内的患者的早期诊断和预后判断有很大帮助。H-FABP如与传统的标记物cTnI、CK-MB结合起来一起检测，早期检测H-FABP，恢复期检测cTnI,有利于筛选出有心脏疾患高风险的患者，不仅方便采取积极的治疗策略，还可节约患者开支和实验室资源，H-FABP与cTnI合理互补监测也许是将来一种临床诊治缺血性心脏病的理想选择。
本方法是胶乳颗粒增强免疫比浊法：将抗体结合到胶乳颗粒上，病人血清(或标准品)中的被测抗原在缓冲液中与胶乳颗粒表面的抗体结合，使胶乳颗粒彼此交联，致使溶液浊度增加。在一定范围内，反应液浊度与被测抗原的量呈线性相关。乳胶增强免疫比浊法是测定血清中H-FABP浓度的常用方法，操作简单、灵敏度高、线性范围宽、无污染、应用范围广等显著的特点。因此，胶乳免疫比浊法有着极大的研究价值，但是目前市场上的乳胶增强免疫比浊法检测试剂盒抗干扰能力差、特异性低、试剂稳定性不好或检测线性范围窄等问题，有待改进。
发明内容
针对现有技术中的缺陷，本发明的目的是提供一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒及其制备方法，建立一种通过抗人的心型脂肪酸结合蛋白抗体(或者单抗)与胶乳颗粒偶联、采用胶乳增强比浊法来测定人体血清中H-FABP的含量的方法，运用该方法的试剂盒具有操作简单，准确度高，重复性好，灵敏度高，且能够在全自动生化分析仪或者特种蛋白仪以及分光光度计上使用。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
第一方面，本发明提供一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，包括试剂R1、试剂R2和标准品；
所述试剂R1包括组分及含量如下：
所述试剂R2包括组分及含量如下：
所述标准品包括6支不同浓度H-FABP重组蛋白、溶质含量均相同的标准品溶液。
优选地，所述试剂R1、试剂R2中的缓冲液包括MOPSO缓冲液、巴比妥缓冲液、DIPSO缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、盐酸溶液、甘氨酸缓冲液中的一种或几种。
优选地，所述试剂R1、试剂R2中的防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、Proclin-300、苯酚中的一种或几种。
优选地，所述试剂R1中的表面活性剂包括非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、两性表面活性剂中的一种或几种；
优选地，所述表面活性剂为非离子表面活性剂；
优选地，所述非离子表面活性剂为Tween20。
优选地，所述试剂R1中的螯合剂包括乙二胺四乙酸二钠、氨基三乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、二亚乙基三胺五乙酸盐中的一种或几种。
优选地，所述试剂R1中的加速剂包括葡聚糖4000～12000中的一种或几种。
优选地，所述试剂R2中稳定剂包括无关蛋白、氨基酸、表面活性剂、助悬剂中的一种或几种；所述无关蛋白包括牛血清白蛋白或明胶；所述表面活性剂包括Tween20；所述助悬剂包括乙二醇、丙三醇、麦芽糖中的一种或几种。
优选地，所述试剂R2中无机盐包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾、醋酸钠、醋酸钾中的一种或几种。
优选地，所述标准品中不同浓度H-FABP重组蛋白具体是指H-FABP重组蛋白的含量分别为0ng/ml、7.8ng/ml、15.5ng/ml、31ng/ml、62ng/ml、124ng/ml；所述溶质及含量为磷酸氢二钠1.5～3g/L、磷酸二氢钠2.5～5g/L、氯化钠30～80mmol/L、乙二胺四乙酸二钠30～80mmol/L、牛血清白蛋白0.5～1.5％、蔗糖1～5％、叠氮化钠0.5～1.5‰，百分比和千分比表示质量分数；
第二方面，本发明提供一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，所述试剂R2的制备包括如下步骤：
步骤1：将抗人H-FABP抗体在pH值为4.0～6.0的溶液中进行酸化；
步骤2：将步骤1所得抗人H-FABP抗体溶液用碱溶液调节pH至7.4～8.2，加入粒径为100～300nm的聚乙烯基苄基氯胶乳悬浮溶液，在37℃孵育2～4小时；
步骤3：将步骤2所得悬浮溶液用pH值为7.0～8.5的封闭液在37℃封闭5个小时以上；所述封闭液的溶剂为50mmol/L MES缓冲液，溶质及其在所述封闭液中的含量为牛血清白蛋白0.1mg/ml、氯化钠150mM；
步骤4：将步骤3所得悬浮溶液经离心或过滤后，取沉淀用含有稳定剂、无机盐和防腐剂的缓冲液洗涤分散即得；
所述洗涤为高速冷冻离心机离心或者是用孔径小于100nm的中空纤维管状进行过滤。
优选地，所述步骤1中人H-FABP抗体包括鼠抗人H-FABP抗体、兔抗人H-FABP抗体、羊抗人H-FABP抗体中的一种或多种；所述溶液包括甘氨酸缓冲液、盐酸溶液、MES缓冲液中的一种或多种。
优选地，所述步骤2中聚乙烯基苄基氯胶乳悬浮溶液中溶剂为pH7.4～8.2溶液为MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液或PBS缓冲液中的一种或多种。
优选地，所述步骤4中稳定剂包括无关蛋白、氨基酸、表面活性剂、助悬剂中的一种或几种；所述无关蛋白包括牛血清白蛋白或明胶；所述表面活性剂包括Tween20；所述助悬剂包括乙二醇、丙三醇、麦芽糖中的一种或几种；所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾、醋酸钠、醋酸钾中的一种或几种；
所述防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、Proclin-300、苯酚中的一种或几种；
所述缓冲液包括MOPSO缓冲液、巴比妥缓冲液、DIPSO缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、盐酸溶液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。
本发明的检测原理是是胶乳颗粒增强免疫比浊法。将抗体结合到胶乳颗粒上，病人血清(或标准品)中的被测抗原在缓冲液中与胶乳颗粒表面的抗体结合，使胶乳颗粒彼此交联，致使溶液浊度增加。在一定范围内，反应液浊度与被测抗原的量呈线性相关。
与现有技术相比，本发明具有如下的有益效果：
(1)本发明加入葡聚糖，加快抗原抗体的免疫反应速度，明显缩短检测时间，与现有其他方法学技术相比，检测时间紧需10分钟；
(2)本发明加入悬浮剂和表面活性剂，悬浮剂可以提高溶液的密度和粘度，使胶乳颗粒能够长期悬浮在溶液中不会沉降而起到很好的稳定作用；表面活性剂使胶乳粒子的表面形成机械性或电性的保护膜，可以抑制胶乳颗粒的絮凝；根据胶乳颗粒的比重，通过适当助悬剂调节缓冲液比重和粘度，能够使胶乳颗粒稳定悬浮而不会沉降；聚乙烯基苄基氯胶乳颗粒是一种核壳形式的胶乳颗粒，其胶乳核是甲苯乙烯聚合物，胶乳壳为乙烯基苄基氯的聚合物，是一种疏水性胶乳。在壳的表面具有高密度的氯甲基基团，这些活性表面功能基团能够在温和的水溶液中直接与抗体、抗原或其它配体的氨基基团反应，通过一步反应产生一种稳定的共价化合物，明显提高了试剂稳定性；
(3)本发明检测试剂盒，通过组分及含量的优化，使得检测线性范围宽，可在3.00ng/ml～120.00ng/ml线性范围内保持良好相关性，而市售试剂(如安徽拓特生物工程有限公司剂盒)的检测范围只有5.00～100ng/ml；
(4)本发明检测试剂盒在制备中，将抗体经酸处理，使得更多可利用的H-FABP抗原结合位点暴露，提高胶乳抗体的反应活性，从而可以减少胶乳试剂制备中抗体的用量，降低成本，同时也提高分析灵敏度。
附图说明
通过阅读参照以下附图对非限制性实施例所作的详细描述，本发明的其它特征、目的和优点将会变得更明显：
图1为显示6种不同含量的H-FABP参考标准的标准曲线；
其中，每个点代表不同含量H-FABP的参考标准，X轴表示H-FABP的含量，Y轴表示吸光度；
图2为采用日立全自动生化分析仪对50份人血清(包含正常和异常标本)按各自参数同时进行测定，对测定值进行相关分析，以本发明检测试剂盒与试剂市售H-FABP(英国朗道公司试剂盒)的乳胶增强免疫比浊法试剂进行比较；
其中X轴表示的是本发明试剂测定的病人血清结果，Y轴表示的是英国朗道公司试剂盒测定的病人血清结果，相关系数R2＝0.9947，回归方程为y＝0.9854x+0.3527；
图3为对本发明检测试剂盒的线性范围进行验证；
其中，X轴表示的是本发明检测试剂盒试剂实际测试结果，Y轴表示的是稀释理论浓度，相关系数为R2＝0.9966，回归方程为y＝1.0002x+1.5965。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1
本实施例涉及一种H-FABP检测试剂盒的配制，包括组分及含量如下：
试剂R1：
组分 具体种类 含量描述
pH＝7.0～7.6的缓冲液 甘氨酸缓冲液 120mmol/L、pH7.4
表面活性剂 吐温20 10ml/L
螯合剂 乙二胺四乙酸二钠 50mmol/L
加速剂 葡聚糖8000 200mmol/L
防腐剂 NaN3 1‰
各种成分可以室温下依次添加，密封保存，备用。或者是分别单独包装并与检测之前在即时配制。
试剂R2：抗人H-FABP抗体的胶乳试剂的制备包括以下步骤。
步骤1：将鼠抗人H-FABP抗体在pH值为4.0～6.0的MES溶液中进行酸化；
步骤2：将步骤1所得溶液用碱溶液(NaOH)调节pH至7.4～8.2，加入粒径为10～300nm的聚乙烯基苄基氯胶乳溶液，在37℃孵育2～4小时；
步骤3：将步骤2所得溶液用pH值为7.0～8.5的封闭液在37℃封闭5个小时以上；所述封闭液的溶剂为50mmol/LMES缓冲液，溶质及其在所述封闭液中的含量为牛血清白蛋白0.1mg/ml、氯化钠150mmol/L；
步骤4：将步骤3所得溶液经离心或过滤后，取沉淀用含有BSA0.5mg/ml、氯化钠150mmol/L和NaN3 1‰的50mM pH7.4的MES缓冲液洗涤分散即得试剂R2，具体组分及含量如下表所述：
具体种类 特性及含量
乳胶颗粒 鼠抗人FDP抗体乳胶颗粒 3％
缓冲液 MES PH7.4 50mM
稳定剂 BSA 0.5mg/ml
无机盐 氯化钠 150mM
防腐剂 NaN3 1‰
H-FABP标准品稀释液制备：
在纯化水中依次加入磷酸氢二钠2.3g/L、磷酸二氢钠3.6g/L、氯化钠50mmol/L、乙二胺四乙酸二钠50mmol/L、BSA1％、蔗糖3％、叠氮化钠1‰得到标准品稀释液。
用H-FABP的重组蛋白溶于制备标准品稀释液，制备不同浓度的标准品(0ng/ml、7.8ng/ml、15.5ng/ml、31ng/ml、62ng/ml、124ng/ml)。
实施例2
本实施例描述的H-FABP检测试剂盒，适用于各种类型的全自动生化仪，以日立7170全自动生化仪为例，其操作如表1。分析方法：两点终点法，即试剂R1、试剂R2的用量分别为150ul和50ul，样本量10ul。
采用本发明试剂盒试剂及上述测定方法，采用日立7170生化分析仪测得的6种不同含量的H-FABP标准品(自制)的曲线(如图1所示)，每个点代表一个含量的参考标准品，其中X轴表示H-FABP含量(ng/ml)；Y轴表示吸光度。
表1
实施例3：检测试剂的相关性试验
使用本法发明试剂(具体配方同实施例1)和对照试剂英国朗道公司的H-FABP乳胶增强免疫比浊法试剂，采用自动7170全自动生化分析仪对50份人血清(正常和异常标本)按各自参数同时进行测定，对测定值进行相关性分析。
测定结果见图2，X，Y轴均为测定值(H-FABP的含量ng/ml)，由图2的结果看出，两种试剂的相关系为R2＝0.9947，回归方程为y＝0.9854x+0.3527。结果表明本发明试剂盒试剂与英国朗道测定病人血清相关性良好，具有很好的特异性和准确性。
此外，以上实验是采用日立公司制造的7170全自动生化仪进行的，但本发明的试剂不限于上述仪器，还适用于其他全自动或半自动生化分析仪。
实施例4：线性范围
将接近线性范围上限的H-FABP的高浓度样本(120.62ng/ml)，用H-FABP稀释液将其按1/2，1/10，1/15，1/30，1/60稀释，共配制成6个不同浓度的溶液，用实施例2所述方法检测各浓度，每浓度重复测定3次，将测定浓度的平均值与理论浓度进行线性回归分析，计算回归方程为y＝1.0002x+1.5965，相关系数为R2＝0.9966，表明本发明试剂盒在3.00ng/ml～120.00ng/ml线性范围内相关性较好，见图3。
实施例5
本实施例与实施例1的技术方案相同，所设不同组分及含量如下：
试剂R1：
组分 具体种类 含量描述
pH7.0～7.6的缓冲液 MOPSO缓冲液 80mmol/L、pH7.0
表面活性剂 吐温20 5ml/L
螯合剂 氨基三乙酸 30mmol/L
加速剂 葡聚糖4000 150mmol/L
防腐剂 硫柳汞 0.5‰
试剂R2：
具体种类 特性及含量
乳胶颗粒 兔抗人FDP抗体乳胶颗粒 1％
缓冲液 DIPSO缓冲液 30mM pH6.5
稳定剂 麦芽糖 0.1mg/ml
无机盐 醋酸钾 100mmol/L
防腐剂 Proclin-300 0.5‰
标准品：
溶质及含量为磷酸氢二钠1.5g/L、磷酸二氢钠2.5g/L、氯化钠30mmol/L、乙二胺四乙酸二钠30mmol/L、牛血清白蛋白0.5％、蔗糖1％、叠氮化钠0.5‰。
实施例6
本实施例的技术方案与实施例1相同，所设不同组分及含量如下所述：
试剂R1：
组分 具体种类 含量描述
pH7.0～7.6的缓冲液 Tris缓冲液 150mmol/L、pH7.6
表面活性剂 吐温20 15ml/L
螯合剂 二亚乙基三胺五乙酸 80mmol/L
加速剂 葡聚糖12000 250mmol/L
防腐剂 苯酚 2.5‰
试剂R2：
具体种类 特性及含量
乳胶颗粒 羊抗人FDP抗体乳胶颗粒 5％
缓冲液 巴比妥缓冲液 80mM pH8.5
稳定剂 Tween20 1mg/ml
无机盐 硫酸钠 200mmol/L
防腐剂 苯酚 2.5‰
标准品：溶质及含量为磷酸氢二钠3g/L、磷酸二氢钠5g/L、氯化钠80mmol/L、乙二胺四乙酸二钠80mmol/L、牛血清白蛋白1.5％、蔗糖％、叠氮化钠1.5‰。
实施例7对照试剂的线性范围
本实施例是实施例4的对照实施例，采用相同的检测方法，对安徽拓特生物工程有限公司的H-FABP乳胶增强免疫比浊法试剂盒进行线性检测，结果安徽拓特生物工程有限公司剂盒的试剂线性范围为5.00ng/ml～100.00ng/ml，与本发明相比线性范围较窄。
以上对本发明的具体实施例进行了描述。需要理解的是，本发明并不局限于上述特定实施方式，本领域技术人员可以在权利要求的范围内做出各种变形或修改，这并不影响本发明的实质内容。

Claims (10)

1.一种心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，包括试剂R1、试剂R2和标准品；
所述试剂R1包括组分及含量如下：
所述试剂R2包括组分及含量如下：
所述标准品包括6支不同浓度H-FABP重组蛋白、溶质及含量均相同的标准品溶液。
2.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的缓冲液包括MOPSO缓冲液、巴比妥缓冲液、DIPSO缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、盐酸溶液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R1、试剂R2中的防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、Proclin-300、苯酚中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，试剂R1中，所述表面活性剂为非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂或两性表面活性剂；
所述螯合剂包括乙二胺四乙酸二钠、氨基三乙酸、二亚乙基三胺五乙酸、二亚乙基三胺五乙酸盐中的一种或几种；
所述加速剂包括葡聚糖4000～12000中的一种或几种。
5.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中稳定剂包括无关蛋白、氨基酸、表面活性剂、助悬剂中的一种或几种；所述无关蛋白包括牛血清白蛋白或明胶；所述表面活性剂包括Tween20；所述助悬剂包括乙二醇、丙三醇、麦芽糖中的一种或几种；
所述无机盐包括氯化钠、氯化钾、硫酸钠、硫酸钾、醋酸钠、醋酸钾中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒，其特征在于，所述标准品中不同浓度H-FABP重组蛋白具体是指H-FABP重组蛋白的含量分别为0ng/ml、7.8ng/ml、15.5ng/ml、31ng/ml、62ng/ml、124ng/ml；所述溶质及含量为磷酸氢二钠1.5～3g/L、磷酸二氢钠2.5～5g/L、氯化钠30～80mmol/L、乙二胺四乙酸二钠30～80mmol/L、牛血清白蛋白0.5～1.5％、蔗糖1～5％、叠氮化钠0.5～1.5‰。
7.一种根据权利要求1～6中任一项所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述试剂R2的制备包括如下步骤：
步骤1：将抗人H-FABP抗体在pH值为4.0～6.0的溶液中进行酸化；
步骤2：将步骤1所得抗人H-FABP抗体溶液用碱溶液调节pH至7.4～8.2，加入粒径为100～300nm的聚乙烯基苄基氯胶乳悬浮溶液，在37℃孵育2～4小时；
步骤3：将步骤2所得悬浮溶液用pH为7.0～8.5的封闭液在37℃封闭5个小时以上；所述封闭液的溶剂为50mmol/L MES缓冲液，溶质及其在所述封闭液中的含量为牛血清白蛋白0.1mg/ml、氯化钠150mM；
步骤4：将步骤3所得悬浮溶液经离心或过滤后，取沉淀用含有稳定剂、无机盐、防腐剂的缓冲液洗涤分散即得；所述洗涤为高速冷冻离心机离心或者是用孔径小于100nm的中空纤维管状进行过滤。
8.根据权利要求7所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤1中抗人H-FABP抗体包括鼠抗人H-FABP抗体、兔抗人H-FABP抗体、羊抗人H-FABP抗体中的一种或多种；所述溶液包括甘氨酸缓冲液、盐酸溶液、MES缓冲液中的一种或多种。
9.根据权利要求7所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤2中聚乙烯基苄基氯胶乳悬浮溶液中溶剂为pH7.4～8.2的MOPSO缓冲液、DIPSO缓冲液或PBS缓冲液中的一种或多种。
10.根据权利要求7所述的心脏型脂肪酸结合蛋白检测试剂盒的制备方法，其特征在于，所述步骤4中稳定剂包括无关蛋白、氨基酸、表面活性剂、助悬剂中的一种或几种；所述防腐剂包括叠氮化钠、硫柳汞、Proclin-300、苯酚中的一种或几种；所述缓冲液包括MOPSO缓冲液、巴比妥缓冲液、DIPSO缓冲液、Tris缓冲液、MES缓冲液、盐酸溶液、甘氨酸缓冲液中的一种或多种。
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