CN104208126A - 一种防治肾病综合征的新组方及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种防治肾病综合征的新组方及其制备方法，属于中医药领域；所述新组方包括：药用成分以及赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，所述药用成份包含黄芪、当归和发酵虫草菌粉；产品无毒副作用，可应用于肾脏的保护或促进受损肾脏的恢复，能降低肾病综合征患者尿蛋白，增加机体内血蛋白总量，降低血脂，达到防治肾病综合征的目的，弥补市场上缺乏防治肾病综合征药品的空缺。

Description

一种防治肾病综合征的新组方及其制备方法

技术领域

本发明涉及中医药领域，特别涉及一种防治肾病综合征的新组方及其制备方法。

背景技术

肾脏疾病是原发于肾脏或继发于其它脏器病变而影响到肾脏的一类疾病，其临床表现主要是尿的异常和肾脏局部的一些症状。国际肾脏病学会发布公告：目前世界上超过5亿人患有不同的肾脏疾病，每年超过百万人死于与慢性肾脏病相关连的心脑血管疾病。慢性肾脏病已成为继心脑血管病、肿瘤、糖尿病之后又一个威胁人类健康的重要疾病，成为全球性公共卫生问题。

肾病综合征是指一组肾脏疾病的临床症状，包括大量的蛋白尿、低蛋白血症、高脂血症和水肿。临床特点：三高一低，即大量蛋白尿、水肿、高脂血症、低血浆蛋白。

肾的病变主要反映在生长发育，生殖机能，水液代谢的异常方面，临床常见症状有腰膝酸软而痛，耳鸣耳聋，发白早脱，齿牙动摇，阳萎遗精，精少不育，女子经少经闭，以及水肿，二便异常等。膀胱的病变主要反映为小便异常及尿液的改变，临床常见尿频、尿急、尿痛、尿闭以及遗尿小便失禁等症。

临床在治疗上常以免疫抑制剂治疗为主，对症治疗为辅。如糖皮质激素具有抑制炎症反应、免疫反应、醛固酮少抗利尿激素分泌，影响肾小球基底膜通透性等综合作用，可发挥利尿、消除尿蛋白等效果。但其副作用也较也明显，且具一定的危险性，如可引起骨髓抑制、肝功能损害、性功能损害、胃肠功能紊乱等副作用，临床推荐尽可能的减少其用量或停用。普通的肾病中药制剂则主要成分为人参、鹿茸等滋补药品，对于肾病起不到防治效果；黄芪、当归、虫草均是常用的中药材料，广泛应用于心血管、呼吸***等各种疾病的预防和治疗，但尚未见这三种药材组成的组方应用于治疗肾病综合征的相关报道；市场上仍然缺少一种能防治肾病综合征的药品。

发明内容

针对存在的问题，本发明提供了一种防治肾病综合征的新组方及其制备方法，所述药品可以益气活血、升血总蛋白、降低尿蛋白、降血脂，改善肾脏功能，预防和治疗肾病综合征；且制备方法操作简单。

本发明的技术方案是：

一种防治肾病综合征的新组方，包括药用成分以及赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，所述药用成份包含黄芪、当归和发酵虫草菌粉。

可选的，各组成成分的重量比例为：黄芪10～100份、当归10～100份、发酵虫草菌粉5～50份，赋形剂0.1～5份、矫味剂0～6份、助溶剂0～4份。

可选的，各组成成分的重量比例为：黄芪10份、当归10份、发酵虫草菌粉20份，赋形剂0.5份、矫味剂0.3份、助溶剂0.5份。

可选的，所述防治肾病综合征的新组方可以根据药剂学要求制成口服制剂或注射制剂；所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、液体制剂、或者其它形态物质；所述注射制剂包括小容量注射液、粉针剂、大输液、或者其它可注射状态物质。

可选的，所述赋形剂、矫味剂、助溶剂，均为乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、糊精、倍他环糊精、甘露醇、木糖醇、微晶纤维素或者淀粉等制剂学中所用辅料。

可选的，所述黄芪，包括黄芪饮片、黄芪药材、黄芪提取物、黄芪皂苷、或其它黄芪药品；所述当归，包括当归饮片、当归药材、当归提取物、或其它当归药品；所述发酵虫草菌粉，包括冬虫夏草、不同菌种的发酵菌粉及提取物、或其它虫草制品。

可选的，所述发酵虫草菌粉，优选虫草头孢菌粉。

所述防治肾病综合征新组方的制备方法，包括以下步骤：

(1)按组方组成成分重量比例称取黄芪、当归，粉碎，加入5～10倍蒸馏水，煮沸0.5～5小时，过滤；药渣再加入5～10倍蒸馏水，煮沸0.5～5小时，过滤；将所述滤液浓缩成浸膏后，烘干，粉碎成细粉；

(2)按组方组成成分重量比例，称取发酵虫草菌粉，粉碎，与步骤(1)中得到的细粉混合均匀，再加入赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，过50～100目筛，置于高速混合制粒机中，搅拌25～30分钟，充分混合分散均匀，在上述高速混合制粒机中加入粘合剂搅拌混合，时间为25～35分钟，启动切碎电机用30～80％乙醇制成湿颗粒；制粒机中转速为15～20r/min；然后将湿颗粒摊放于盘中，置烘箱中干燥；然后将干颗粒加入快速整粒粉碎机中，整粒粉碎机转速为15～20r/min，10～30目过筛整粒，得到粒度为0.5～1.7毫米的颗粒；

(3)将步骤(2)中得到的颗粒加入混合机中，加入粘合剂、润滑剂，混合均匀，混合时间为10～30分钟；

(4)将混合好的颗粒加到压片机料斗中，压片、干燥后密闭包装，储藏于干燥处。

可选的，步骤(2)中干燥温度为40℃～60℃，时间为3～4小时。

本发明的有益效果是：

1、本发明提供了一种全新的防治肾病综合征的中药处方，与普通的肾病中药制剂比较，本组方从精、气、血三个方面作用于人体，可以益气活血、升血总蛋白、降低尿蛋白、降血脂，改善肾脏功能，预防和治疗肾病综合征；

2、现代药理证实，黄芪能降压，增强免疫；当归改善血流动学指标，增加器官血流量；发酵虫草菌粉能减轻慢性病的肾脏病变，改善肾功能，减轻毒性物质对肾脏的损害；三药合用，可以协同增效，提高肾病防治效果；

3、本发明主要以黄芪、当归、发酵虫草菌粉为药用成份，无毒副作用。

附图说明

图1是本发明组方防治肾病综合征的示意图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

中医认为，肾藏元阴元阳，为人体生长发育之根，脏腑机能活动之本，一有耗伤，则诸脏皆病，故肾多虚证。中医素有“正气存内，邪不可干”和“邪之所凑，其气必虚”之说，从正反两个方面述说了人体的正气。所谓正气即指人体抵御外邪的能力，正气不足是发生疾病、肥胖和衰老的基本因素，也是疾病发展、变化、预后、转归的重要因素。所以，肾脏疾病在治疗上应在“驱邪”基础上“扶正”。

中药黄芪具益气固表、敛汗固脱、托疮生肌、利水消肿之功效，迄今已有2000多年的历史，其有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。当归功能补血活血，现代药理研究证实，它可心肌毛细血管开放增多，降低心肌兴奋性，使不应期延长，具有抗心率失常和降血脂等作用。虫草味甘性温，有秘精益气、保肺补肾、止血化痰的功效。近代医学临床研究表明，冬虫夏草能治疗劳咳痰血、盗汗、阳痿、遗精、黄胆病、肺结核及老年衰弱、慢性咳喘等症，有强壮兼收敛镇静的效果。青海冬虫夏草含有虫草酸约7％，蛋白质约25％，脂肪约8.4％，其中82.2％为人体不能合成而又必需的不饱和脂肪酸，还含有碳水化合物28.9％，游离氨基酸12种，水解液氨基酸18种，与人工发酵虫草菌粉成分和功效相当。

黄芪、当归、虫草均是常用的中药材料，广泛应用于心血管、呼吸***等各种疾病的预防和治疗，但尚未见这三种药材组成的组方应用于治疗肾病综合征的相关报道。

本发明提供一种了新的肾病综合征治疗药物，包括药用成分以及赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，所述药用成份包含黄芪、当归和发酵虫草菌粉。

所述赋形剂、矫味剂、助溶剂，均为乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、糊精、倍他环糊精、甘露醇、木糖醇、微晶纤维素或者淀粉等制剂学中所用辅料；

所述黄芪，包括黄芪饮片、黄芪药材、黄芪提取物、黄芪皂苷、或其它黄芪药品；

所述当归，包括当归饮片、当归药材、当归提取物、或其它当归药品；

所述发酵虫草菌粉，包括冬虫夏草、不同菌种的发酵菌粉及提取物、或其它虫草制品，优选虫草头孢菌粉。

上述各组成成分的重量比例为：黄芪10～100份、当归10～100份、发酵虫草菌粉5～50份，赋形剂0.1～5份、矫味剂0～6份、助溶剂0～4份。

可选的，上述各组成成分的重量比例为：黄芪10份、当归10份、发酵虫草菌粉20份，赋形剂0.5份、矫味剂0.3份、助溶剂0.5份。

所述防治肾病综合征的新组方可以根据药剂学要求制成口服制剂或注射制剂；其中，口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、液体制剂、或者其它形态物质，注射制剂包括小容量注射液、粉针剂、大输液、或者其它可注射状态物质。

所述防治肾病综合征新组方的制备方法，包括以下步骤：

(1)按组方组成成分重量比例称取黄芪、当归，粉碎，加入5～10倍蒸馏水，煮沸0.5～5小时，过滤；药渣再加入5～10倍蒸馏水，煮沸0.5～5小时，过滤；将所述滤液浓缩成浸膏后，烘干，粉碎成细粉；

(2)按组方组成成分重量比例，称取发酵虫草菌粉，粉碎，与步骤(1)中得到的细粉混合均匀，再加入赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，过50～100目筛，置于高速混合制粒机中，搅拌25～30分钟，充分混合分散均匀，在上述高速混合制粒机中加入粘合剂搅拌混合，时间为25～35分钟，启动切碎电机用30～80％乙醇制成湿颗粒，制粒机中转速为15～20r/min；然后将湿颗粒摊放于盘中，置烘箱中干燥，干燥温度为40℃～60℃，时间为3～4小时；然后将干颗粒加入快速整粒粉碎机中，整粒粉碎机转速为15～20r/min，10～30目过筛整粒，得到粒度为0.5～1.7毫米的颗粒；

(3)将步骤(2)中得到的颗粒加入混合机中，加入粘合剂、润滑剂，混合均匀，混合时间为10～30分钟；

(4)将混合好的颗粒加到压片机料斗中，压片、干燥后密闭包装，储藏于干燥处。

慎言先生在《肾虚血瘀论》中写道：“久病及肾，久病则虚，虚者肾虚也。五脏六腑之虚，经络阴阳之虚，气血津液之虚，机体官窍之虚，四肢百骸之虚，百虚皆以脏腑之虚为要，脏腑之虚则以肾虚为本。本者，其根本也。”肾病综合征者常见脾肾衰竭，精气不足，则脏腑虚弱，气血运行无力而不畅，则瘀滞丛生。脾气虚弱，气机不畅，则水湿聚集，水肿日久不愈，身重困倦或精神萎靡；气虚运血无力，血行瘀滞，则肾络瘀阻，故面色晦暗，唇暗舌紫。

图1是本发明组方防治肾病综合征的示意图，如图1所示，虫草菌粉甘平益肾，补精髓，入肺肾二经，既能补肾阳，又能滋肾阴，是唯一能同时平衡、调节阴阳的中药；黄芪味甘，气微温，功能补气固表，利尿托毒，乃补气之圣药，且其气薄而味浓，可升可降，为阳中之阳药，能助君药之补肾阳之功；当归性温，味甘、辛，功能补血活血，为补血之圣药，能增君药之滋肾阴之力，且有黄芪之气助，生血之力倍增。本组方三药合用，补精益气活血，相得益彰，简略而力强，助肾阳中寓滋阴，阴平阳秘，精神乃治，肾功自强。

实施例2

制备本发明所述防治肾病综合征的新组方：

(1)称取黄芪、当归各3000g，粉碎，按重量加8倍蒸馏水，煮沸1小时，过滤；药渣再加入6倍蒸馏水，煮沸1小时，过滤，将上述滤液浓缩成浸膏，烘干，粉碎成细粉，备用；

(2)称取发酵虫草菌粉300g，粉碎，与步骤(1)中得到的细粉混合均匀，再加入赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，过100目筛，置于高速混合制粒机中，搅拌25分钟，充分混合分散均匀，在上述高速混合制粒机中加入粘合剂搅拌混合，时间为25分钟，启动切碎电机用60％乙醇制成湿颗粒；制粒机中转速为20r/min；然后将湿颗粒摊放于盘中，置烘箱中干燥，干燥温度为60℃，时间为4小时；然后将干颗粒加入快速整粒粉碎机中，整粒粉碎机转速为20r/min，10目过筛整粒，得到粒度为1.6毫米左右的颗粒，备用；

(3)将步骤(2)中得到的颗粒加入混合机中，加入粘合剂、润滑剂，混合均匀，混合时间为：30分钟，备用；

(4)将混合好的颗粒加到压片机料斗中，压片，干燥后密闭包装，储藏于干燥处，即得到本发明新组方片剂10000片。

实施例3

制备本发明所述防治肾病综合征的新组方：

(1)称取黄芪、当归各1500g，粉碎，按重量加10倍蒸馏水，煮沸2小时，过滤；药渣再加入10倍蒸馏水，煮沸2小时，过滤，将上述滤液浓缩成浸膏，烘干，粉碎成细粉，备用。

(2)称取发酵虫草菌粉3000g，与步骤(1)中得到的细粉混合均匀，再加入赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，搅拌混合后，过80目筛，置于高速混合制粒机中，搅拌30分钟，充分混合分散均匀，在上述高速混合制粒机中加入粘合剂搅拌混合，时间为30分钟，启动切碎电机用60％乙醇制成湿颗粒；制粒机中转速为15r/min；然后将湿颗粒摊放于盘中，置烘箱中干燥，干燥温度为40℃～60℃，时间为3小时；然后将干颗粒加入快速整粒粉碎机中，整粒粉碎机转速为20r/min，30目过筛整粒，得到粒度为0.5毫米左右的颗粒，备用；

(3)将上述颗粒加入混合机中，加入粘合剂、润滑剂，混合均匀，混合时间为10分钟，备用；

(4)干燥后，通过12目筛，使大颗粒磨碎，再通过60目筛，除去细小颗粒和细粉；

(5)包装：将上述颗粒密封包装和干燥贮藏，即得本发明新组方颗粒剂。

本发明所提供的防治肾病综合征新组方药品可应用于正常人体肾脏的保护，或促进受损肾脏的恢复，包括肾小球肾炎、糖尿病肾病、高血压肾病、肾病综合征、***等各种肾病所致的肾脏受损；尤其是对肾病综合征的治疗，能降低肾病综合征患者尿蛋白，增加机体内血蛋白总量，降低血脂，达到防治肾病的目的。

为了对本发明作进一步说明，提供以下验证实验。

一.小鼠急性毒性试验

将上述实施例2、实施例3中所制本发明药物制剂，分别命名为样品一、样品二。将样品一、样品二分别制成混悬液，分别给小鼠灌胃。测定其小鼠LD₅₀剂量(以总生药量计)分别为243g/kg以上(达给药量的极限)，相当于成人剂量的231倍以上。上述动物解剖后，其肝、肠、心、肾、脾等主要脏器均未发现明显异常。

急性毒性试验结果表明，由黄芪、当归、发酵虫草菌粉为药用成分组成的新组方非常安全，对心、肝、肾主要脏器均无明显毒副作用。

二.本发明新组方防治肾病综合征的正交实验

1实验材料：

1.1药物

A药：黄芪、当归提取物，共4kg生药，每1g提取物相当于1.494g生药；

B药：虫草头孢菌粉，共1.5kg；配制方法详见表1。

表1各给药组A药与B药的配制比例

试验	A药g/kg	B药g/kg
			A1B1	2.5	1.25

A1B2	2.5	2.5
			A1B3	2.5	5.0
A2B1	5.0	1.25
			A2B2	5.0	2.5
A2B3	5.0	5.0
			A3B1	10.0	1.25
A3B2	10.0	2.5
			A3B3	10.0	5.0

按表格1中A药和B药的比例，分别用0.5％CMC-Na溶液配制所需浓度。

马来酸依那普利片：批号1209120，规格10mg/片，济南利民制药有限责任公司。临用前用0.5％CMC-Na溶液充分研磨均匀，配制成浓度为1mg/ml的混悬液备用。

辛伐他汀片：批号120524，规格20mg/片，杭州默沙东制药有限公司。临用前用0.5％CMC-Na溶液充分研磨均匀，配制成浓度为1mg/ml的混悬液备用。

阿霉素：批号：D1515，规格：50mg/瓶，sigma公司出品。配制方法：取一定量阿霉素放入烧杯中，加入0.9％氯化钠注射液混均，配制成浓度为3.5mg/ml。

1.2实验溶媒

羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，成都科龙化工试剂厂，500g/瓶，批号20100302。

1.3动物

SPF大鼠，体重：160-230g，全雄；均由四川省中医药科学院实验动物中心提供，许可证号：SCXK(川)2008-19。

2.统计学分析所有数据均用均数±标准差，单因素方差分析，组间差异采用t检验，协同作用研究采用正交设计方差分析。

3.试验环境

四川省中医药科学院药理毒理研究所SPF屏障***，合格证号为SYXK(川)2008-100。室内温度20～22℃，相对湿度52％左右，照明12小时明亮，12小时黑暗。

4.方法与结果

取体重为160-230g的雄性大鼠，放入实验环境中适应2天后。其中9只大鼠单次尾静脉注射等量生理盐水，做为空白对照组；其余大鼠均尾静脉单次注射阿霉素7mg/kg。将造模后的只大鼠参照体重指标按两因子3水平正交设计分为模型组、A1B1、A1B2、A1B3、A2B1、A2B2、A2B3、A3B1、A3B2、A3B3组以及阳性组。阳性组在注射阿霉素后次日开始灌胃依那普利10mg/kg加辛伐他汀10mg/kg，其它给药组按表1所示灌胃给药，每天一次，连续4周。逐日观察动物的一般情况，每周称体重1次，并以此来调整用药量。于造模后14、28d用代谢笼收集大鼠尿液，做尿蛋白含量测定；末次给药后24小时采血测定甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、尿素氮(BUN)、肌肝(Crea)含量。取动物两侧肾脏称重，按g/100g体重计算脏器系数(％)。实验结果见表2～5。

从表2可见，大鼠在静脉注射阿霉素1个月后，血清白蛋白和总蛋白显著降低，而尿素氮显著升高，与对照组比较有统计学差异。A2.5g/kg+B2.5g/kg可显著升高阿霉素大鼠血清总蛋白及白蛋白水平，与模型组比较有统计学差异。A2.5g/kg+B5.0g/kg可显著升高阿霉素大鼠血清白蛋白水平，与模型组比较有统计学差异。其它药物对阿霉素大鼠血清白蛋白、总蛋白、肌酐以及尿素氮均无明显影响，与模型组比较无统计学差异。

表2A药、B药不同配方对阿霉素肾病大鼠血清蛋白质、肾功能的影响

与模型组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。

从表3可见，大鼠在静脉注射阿霉素1个月后，其血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)以及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)均显著升高，与对照组比较有统计学差异。A2.5g/kg+B2.5g/kg和A2.5g/kg+B5.0g/kg均可显著降低阿霉素大鼠血清TG、TC以及HDL-C水平，与模型组比较有统计学差异。A5.0g/kg+B1.25g/kg可显著降低阿霉素大鼠血清HDL-C水平，与模型组比较有统计学差异。阳性药可显著降低阿霉素大鼠血清TC水平，与模型组比较无统计学差异。

表3A药、B药不同配方对阿霉素肾病大鼠血清脂质的影响

与模型组比较：*P＜0.05；**P＜0.01。

从表4可见，大鼠在静脉注射阿霉素后，其尿蛋白排出量以及肾脏指数均显著增加，与对照组比较有统计学差异。各药物组对上述指标均无明显影响，与模型组比较无统计学差异。

表4A药、B药不同配方对阿霉素肾病大鼠24小时尿蛋白的影响

与模型组比较：*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。

表5血清总蛋白方差分析表

方差来源	方和	自由度	均方	F	p
						虫草菌粉	249.4108255	2	124.7054128	4.972168498	＜0.01
当归黄芪	680.4039625	2	340.2019812	13.56429955	＜0.01
						交互作用	184736.9889	4	46184.24724	1841.42656	＜0.01
误差	1128.631014	45	25.08068921

对药物增加阿霉素大鼠血清总蛋白水平作用进行方差分析发现：虫草头孢菌、当归黄芪提取物单独使用时均有增加阿霉素大鼠血清总蛋白浓度的作用，二者合用的作用更显著，从方差分析结果可以看出两者合用在增加阿霉素大鼠血清总蛋白方面存在显著的协同增效作用，如表5所示。

表6血清白蛋白方差分析表

方差来源	方和	自由度	均方	F	p
						虫草菌粉	9.122116189	2	4.561058094	1.000395861	＞0.05
当归黄芪	65.00420844	2	32.50210422	7.128821835	＜0.01
						交互作用	13755.18978	4	3438.797444	754.2457602	＜0.01
误差	205.1663969	45	4.559253264

对药物增加阿霉素大鼠血清白蛋白水平作用进行方差分析发现：虫草头孢菌对阿霉素大鼠血清白蛋白水平无明显作用，当归黄芪提取物单独使用时可显著增加阿霉素大鼠血清总蛋白。虫草头孢菌与当归黄芪提取物合用在增加阿霉素大鼠血清白蛋白水平方面存在显著的协同增效作用，如表6所示。

表7血清总胆固醇方差分析表

方差来源	方和	自由度	均方	F	p
						虫草菌粉	4.159330489	2	2.079665244	2.214301423	＞0.05
当归黄芪	21.99916163	2	10.99958081	11.71168654	＜0.01
						交互作用	690.7410026	4	172.6852506	183.8647817	＜0.01
误差	42.26386481	45	0.939196996

对药物降低阿霉素大鼠血清总胆固醇水平作用进行方差分析发现：虫草头孢菌对阿霉素大鼠血清总胆固醇水平无明显影响，而当归黄芪提取物单独使用时可显著降低阿霉素大鼠血清总胆固醇水平。虫草头孢菌与当归黄芪提取物合用在降低阿霉素大鼠血清总胆固醇方面存在显著的协同增效作用，如表7所示。

表8血清高密度脂蛋白胆固醇方差分析表

方差来源	方和	自由度	均方	F	p
						虫草菌粉	0.526318998	2	0.263159499	2.672532995	＞0.05
当归黄芪	2.099930565	2	1.049965283	10.66298908	＜0.01
						交互作用	71.35615961	4	17.8390399	181.1655021	＜0.01
误差	4.431068754	45	0.098468195

对药物降低阿霉素大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇水平作用进行方差分析发现：虫草头孢菌对阿霉素大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇水平无明显影响，而当归黄芪提取物单独使用时可显著降低阿霉素大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇水平。虫草头孢菌与当归黄芪提取物合用在降低阿霉素大鼠血清高密度脂蛋白胆固醇方面存在显著的协同增效作用，如表8所示。

表9血清甘油三酯方差分析表

方差来源	方和	自由度	均方	F	p
						虫草菌粉	7.590428492	2	3.795214246	3.760782431	＜0.05
当归黄芪	26.06410941	2	13.03205471	12.91382231	＜0.01
						交互作用	404.2027717	4	101.0506929	100.1339176	＜0.01
误差	45.41199715	45	1.009155492

对药物降低阿霉素大鼠血清甘油三酯水平作用进行方差分析发现：虫草头孢菌、当归黄芪提取物单独使用时均有降低阿霉素大鼠血清甘油三酯水平的作用，二者合用的作用更显著，从方差分析结果可以看出两者合用在降低阿霉素大鼠血清甘油三酯方面存在显著的协同增效作用，如表9所示。

本试验研究发现大鼠在注射阿霉素后出现大量的蛋白尿，低蛋白血症以及高脂血脂等典型的肾病综合征症状，提示，本模型复制成功。

本研究采用正交设计探讨防治肾病综合征的最佳配方，初步研究结果表明当归、黄芪以及虫草头孢菌的比例为1∶1∶2时能够显著升高阿霉素大鼠血清总蛋白、白蛋白水平，降低血清脂质水平；当归、黄芪以及虫草头孢菌的比例为1∶1∶3时也能够显著升高阿霉素大鼠血清白蛋白、降低血清脂质水平，而其它配方均对阿霉素大鼠各项检测指标无明显作用，提示这两个配方均可能对肾病综合征具有较好的防治作用；其中以当归、黄芪以及虫草头孢菌的比例为1∶1∶2时最佳。方差分析发现当归、黄芪以及虫草头孢菌之间在升高阿霉素大鼠血清总蛋白、降低血清脂质水平方面存在显著的协同增效作用，为其配方提供了科学的实验依据。

三.本发明组方对肾病综合征大鼠系膜细胞增生的影响实验

1实验动物及分组

70只SD大鼠，SPF级，(240±20)g♀♂兼用，由四川大学华西实验动物中心提供，实验动物使用许可证：SYXK(川)2007-003。随机分为正常对照组、模型对照组、样品高剂量组、样品低剂量组、黄芪组、当归组、虫草菌粉组等7组，每组10只。

2实验样品

样品为本发明专利组方提取浓缩液；另单独制备当归、黄、发酵虫草菌粉的提取浓缩液备用，制备方法同上。

3实验方法

3.1模型制备

肾病综合征模型的制备方法同上。

3.2实验给药

自造模第1天起，样品高剂量组给予本发明组方样品10g/kg；样品低剂量组给予本发明组方样品5g/kg；黄芪组给予黄芪5g/kg；当归组给予当归5g/kg；虫草菌粉组给予发酵虫草菌粉5g/kg。正常对照组和模型对照组灌服等量生理盐水，至第八周末试验结束。

实验末分别是收集各组大鼠24h尿标本备用，腹主动脉取血分离血清置-20℃冰箱保存备用。取肾脏组织行免疫组化检测及光镜检测。

3.3检测方法

周期调控蛋白P21、P27、PCNA、CyclinDl及TGF-β1的免疫组化检测：(1)所有试剂购自武汉博士德生物有限公司。(2)方法：采用VSAB。3μm石蜡切片脱蜡水化后，3％的盐酸-甲醇-过氧化氢封闭内源性过氧化物酶，洗涤，微波修复抗原子核10min，牛血清白蛋白封闭，依次加入一抗、二抗及链霉素/卵白素复合物孵育后，DAB显色，苏木素复染，树胶封片。用PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性片作阳性对照。(3)实验结果观察：随机选取10个肾小球系膜区进行计数，每个肾小球随机计数5个系膜区，计算其阳性细胞百分率，并取其平均值。

3.4统计学方法

同上述正交实验。

4结果

与正常对照组比较，模型对照组在鼠系膜细胞CyclinDl、P21、TGF-β1、PCNA水平明显增高，P27水平明显降低(P＜0.01)。样品高剂量组、样品低剂量组、黄芪组、当归组、虫草菌粉组CyclinDl、P21、TGF-β1、PCNA水平较模型对照组明显降低，P27水平明显升高(P＜0.05)，其中样品高剂量组、样品低剂量组CyclinDl、P21、P27、TGF-β1、PCNA水平变化更为显著，与黄芪组、当归组、虫草菌粉组比较均有统计学差异(P＜0.05)，详细结果见表10。

表10本发明组方对大鼠实验末肾小球系膜细胞中CyclinDl、P21、P27、TGF-β1及PCNA表达

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

正常大鼠肾组织中存在适量的CyclinDl的表达，而在肾病大鼠的肾小球系膜细胞中P21、CyclinDl、PCNA的表达明显增高，P27的表达水平显著下降，说明肾病鼠确实存在细胞周期调控蛋白表达紊乱，同时提示此时存在肾系膜细胞增生。与模型对照组相比，样品高剂量组、样品低剂量组、黄芪组、当归组、虫草菌粉组大鼠肾小球系膜细胞中CyclinDl、PCNA、TGF-β1表达明显下降，提示儿茶素治疗对系膜细胞增生有一定的抑制作用。与此同时，各组大鼠肾组织中P27的表达明显增高，提示本发明组方可能是通过促进P27表达而抑制系膜细胞的增生。试验结果也表明，本发明组方的抗系膜细胞增生作用比单用黄芪、当归、虫草菌粉更强，提示三者合用具有协同增效的作用。

四.本发明组方的肾脏保护作用实验

1材料与方法

(1)实验与动物与药品

清洁级雄性SD大鼠，70只，体重220～250g(购自四川大学华西实验动物中心，饲养于四川大学华西医院高新科技园实验动物中心)，适应性喂养10d(正常饮食)后，随机分为七组。CsA由杭州中美华东制药公司提供，用橄榄油溶解。样品为本发明专利组方提取浓缩液；另单独制备当归、黄芪、发酵虫草菌粉的提取浓缩液备用，制备方法同上。

(2)实验动物分组及模型制备

70只SD大鼠随机分为四组：正常对照组(N)、模型组(M)、样品高剂量组、样品低剂量组、黄芪组、当归组、虫草组。正常对照组不用CsA与其他药品，仅用两者的溶剂灌胃；M组用20mg/(kg·d)的CsA灌胃。样品高剂量组给予样品10g/kg；样品低剂量组给予样品5g/kg；黄芪组给予黄芪5g/kg；当归组给予当归5g/kg；虫草组给予发酵虫草菌粉5g/kg。且分别灌服CsA20mg/(kg·d)。大鼠均接受低盐饮食(饮食中钠含量为0.0367％)，饮用自来水，每隔3天称一次体重，调整药物用量。于给药后第四周末后处死作相关指标的检测。

(3)内生肌酐清除率计算：实验第四周末，收集大鼠24h尿液，检测尿肌酐，血肌酐，应用公式：肌酐清除率＝尿肌酐×24h尿量/血肌酐/1440。

2结果

(1)体重变化

实验开始测量各组大鼠体重之间无明显差异(P＞0.05)，四周后M组及样品组大鼠的体重与N组相比有明显差异(P＜0.05)，体重明显下降，但是样品组体重下降幅度比单用黄芪、当归、虫草组更小，详见表11。

表11体重变化情况(g)

组别	动物数	实验前	第四周末
				正常对照组	10	225.3±15.9	340.5±16.4##
模型组	10	209.6±17.1	225.1±17.0**
				样品高剂量组	10	211.3±16.2	333.8±18.1##
样品低剂量组	10	222.8±17.7	302.3±17.2#
				黄芪组	10	203.5±16.6	254.6±15.5*
当归组	10	219.4±16.0	250.1±16.3*
				虫草组	10	220.7±15.9	280.8±17.7#

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

(2)肌酐清除率变化：

试验4周后，模型组[(0.28±0.07)ml/min]与N组[(1.03±0.13)mL/min]相比，其肌酐清除率显著下降(P＜0.01)。模型组与样品高剂量组、低剂量组比较，其肌酐清除率下降明显(P＜0.05)，如表12所示。

表12肌酐清除率变化情况(ml/min)

组别	动物数	肌酐清除率
			正常对照组	10	1.03±0.13##
模型组	10	0.28±0.07**
			样品高剂量组	10	0.99±0.09##
样品低剂量组	10	0.84±0.06#
			黄芪组	10	0.48±0.10*
当归组	10	0.51±0.12*
			虫草组	10	0.71±0.11#

注：与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

结果表明，本发明组方、黄芪、当归、冬草夏草均具有保护肾脏功能的药理作用，但本发明组方的保护肾脏功能的药理作用比单用黄芪、当归、发酵虫草菌粉更强，而且随着剂量的增大，其作用也更强。

Claims (9)

1.一种防治肾病综合征的新组方，其特征在于：包括药用成分以及赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，所述药用成份包含黄芪、当归和发酵虫草菌粉。

2.根据权利要求1所述的防治肾病综合征的新组方，其特征在于，各组成成分的重量比例为：黄芪10～100份、当归10～100份、发酵虫草菌粉5～50份，赋形剂0.1～5份、矫味剂0～6份、助溶剂0～4份。

3.根据权利要求2所述的防治肾病综合征的新组方，其特征在于，各组成成分的重量比例为：黄芪10份、当归10份、发酵虫草菌粉20份，赋形剂0.5份、矫味剂0.3份、助溶剂0.5份。

4.根据权利要求1所述的防治肾病综合征的新组方，其特征在于：

可以根据药剂学要求制成口服制剂或注射制剂；

所述口服制剂包括片剂、胶囊剂、丸剂、液体制剂、或者其它形态物质；所述注射制剂包括小容量注射液、粉针剂、大输液、或者其它可注射状态物质。

5.根据权利要求1所述的防治肾病综合征的新组方，其特征在于：

所述赋形剂、矫味剂、助溶剂，均为乳糖、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖、糊精、倍他环糊精、甘露醇、木糖醇、微晶纤维素或者淀粉等制剂学中所用辅料。

6.根据权利要求1所述的防治肾病综合征的新组方，其特征在于：

所述黄芪，包括黄芪饮片、黄芪药材、黄芪提取物、黄芪皂苷、或其它黄芪药品；

所述当归，包括当归饮片、当归药材、当归提取物、或其它当归药品；

所述发酵虫草菌粉，包括冬虫夏草、不同菌种的发酵菌粉及提取物、或其它虫草制品。

7.根据权利要求6所述的防治肾病综合征的新组方，其特征在于：所述发酵虫草菌粉，优选虫草头孢菌粉。

8.根据权利要求1～7任一项所述的防治肾病综合征新组方的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)按组方组成成分重量比例称取黄芪、当归，粉碎，加入5～10倍蒸馏水，煮沸0.5～5小时，过滤；药渣再加入5～10倍蒸馏水，煮沸0.5～5小时，过滤；将所述滤液浓缩成浸膏后，烘干，粉碎成细粉；

(2)按组方组成成分重量比例，称取发酵虫草菌粉，粉碎，与步骤(1)中得到的细粉混合均匀，再加入赋形剂、和/或矫味剂、和/或助溶剂，搅拌混合后，制成湿颗粒、干燥、粉碎成粒度为0.5～1.7毫米的颗粒；

(3)将步骤(2)中得到的颗粒加入混合机中，加入粘合剂、润滑剂，混合均匀，混合时间为10～30分钟；

(4)将混合好的颗粒加到压片机料斗中，压片、干燥后密闭包装，储藏于干燥处。

9.根据权利要求8所述的防治肾病综合征新组方的制备方法，其特征在于：步骤(2)中干燥温度为40℃～60C，时间为3～4小时。