CN104198642A - 一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法，步骤分为样品的制备、萃取、净化与浓缩，后在一定的色谱条件和质谱条件条件下进行标准曲线的具备并进行最终的检测。本发明以甲醇为提取液，选择强极性的SPE小柱净化，采用液相色谱-串联三重四极杆质谱进行检测，方法在准确度、精密度及加标回收率方面均能满足国家对农药残留分析质量控制要求，方法检测限，满足GB 2763-2014对氯氨吡啶酸的监管要求。

Description

一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法

技术领域

本发明涉及一种农药残留的简称工艺，尤其涉及一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法。

背景技术

氯氨吡啶酸(aminopyralid)，其化学名称为4-氨基-3，6-二氯吡啶-2-羧酸，是一种吡啶羧酸类合成激素型除草剂，广泛应用于山地、草原、种植地和非耕地的杂草防除，药剂持久期长；在新版《国家食品安全标准食品中农药最大残留限量GB 2763-2014》中，氯氨吡啶酸为新增加的65种农药之一，其在谷物(大麦、大麦、燕麦、小黑麦)中的最大残留限量为0.1mg/kg，该标准自2014年8月1日起实施，经检索，该农药尚无检测方面的标准与文献报导。氯氨吡啶酸用于农作物种植的土地上使用时，常常会或多或少的喷洒到农作物上，比如大麦的种植地中，常常会使大麦中含有一定残留的氯氨吡啶酸；为了科学的使用氯氨吡啶酸进行大麦种植地中的除草并保证大麦中的氯氨吡啶酸残留达到最低，因此需要一套可靠的用于大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法。

发明内容

为了解决上述问题中的不足之处，本发明提供了一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法。

为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法，检测步骤如下：

(1)、大麦样品的制备、萃取、净化与浓缩：

将大麦粉碎过40目筛，称取4.00g样品，加入40ml色谱级纯甲醇作为提取液，旋涡混匀5min，静置取上清液20ml，采用HR-XA3ml，200mg固相萃取小柱按下述步骤净化浓缩：

(a)、柱活化：5ml色谱级纯甲醇，5ml水；

(b)、上样：将上清液在抽真空条件下加入萃取柱；

(c)、柱清洗：依次加入2.5ml浓度为50mmol/L的乙酸钠水溶液、2.5ml色谱级纯甲醇，使用氮气吹干萃取柱；

(d)、洗脱：使用5ml色谱级纯甲醇洗脱被测样品，收集洗脱液；

(e)、浓缩定容：将洗脱液在60℃下氮吹至近干，用1ml色谱级纯甲醇溶解样品中，过0.45μm滤膜，供分析测试用；

(2)、绘制标准曲线：

(a)色谱条件：以100％乙腈为A相，5mmol乙酸铵水溶液为B相，将A相与B相按体积比60∶40混合作为流动相，使用阴离子交换柱DIONEX Acclaim Mix-Mode WAX-1，流速为500μl/min，进样体积25μl；

(b)质谱条件：电喷雾离子源，负离子电离模式，离子源温度300℃，毛细管电压为3000V，鞘气流速40L/min，辅助气流速15L/min，毛细管温度350℃，碰撞电压18，11eV，采用选择反应监控模式；

上述条件下，氯氨吡啶酸参考保留时间为15.5min；母离子m/z 204.8，2个子离子m/z 125.1，m/z 161.1，优化后选择m/z 161.1子离子作为定量离子；

以色谱级甲醇为溶剂配制质量浓度为0.005、0.010、0.020、0.050、0.10mg/L氯氨吡啶酸标准溶液，在上述条件下分别对其进行检测，以氯氨吡啶酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算机绘制标准曲线，标准曲线线性回归方程如下：

y＝＝54638.7+34022.1*x   (1)

式中x为氯氨吡啶酸浓度，单位mg/L；y为峰面积响应值相关系数r²＝0.9996；

按步骤(1)进行样品处理，按步骤(2)进行检测，按照公式(2)计算样品中氯氨吡啶酸浓度：

X_i＝c_i*V/m   (2)

式中：X_i表示样品中氯氨吡啶酸含量，单位mg/kg；c_i表示从标准工作曲线得到的试样溶液中氯氨吡啶酸的浓度，单位mg/L；V表示试样溶液定容体积，单位ml；m代表样品溶液中试样质量，单位g。

本发明以甲醇为提取液，选择强极性的SPE小柱净化，采用液相色谱-串联三重四极杆质谱进行检测，方法在准确度、精密度及加标回收率方面均能满足国家对农药残留分析质量控制要求，方法检测限，满足GB 2763-2014对氯氨吡啶酸的监管要求。

附图说明

下面结合附图和具体实施方式对发明作进一步详细的说明。

图1为本发明的标准溶液色谱图及标准溶液线性回归方程。

图2为标准溶液曲线

图3为离子图。

图4为基质中添加图。

具体实施方式

本发明的具体方法步骤如下：

1、大麦样品的制备、萃取、净化与浓缩：

将大麦粉碎过40目筛，称取4.00g样品，加入40ml色谱级纯甲醇作为提取液(作回收率检测时，标准溶液与甲醇的总用量为40ml)，旋涡混匀5min，静置取上清液20ml，采用HR-XA(3ml，200mg)固相萃取小柱按下述步骤净化浓缩：

(1)、柱活化：5ml色谱级纯甲醇，5ml水(不要让萃取柱挥干)；

(2)、上样：将上清液在抽真空条件下加入萃取柱；

(3)、柱清洗：依次加入2.5ml浓度为50mmol/L的乙酸钠水溶液、2.5ml色谱级纯甲醇，使用氮气吹干萃取柱；

(4)、洗脱：使用5ml色谱级纯甲醇洗脱被测样品，收集洗脱液；

(5)、浓缩定容：将洗脱液在60℃下氮吹至近干，用1ml色谱级纯甲醇溶解样品中，过0.45μm滤膜，供分析测试用。

2、绘制标准曲线：

(1)色谱条件：以100％乙腈为A相，5mmol乙酸铵水溶液为B相，将A相与B相按体积比60∶40混合作为流动相，使用阴离子交换柱(DIONEX AcclaimMix-Mode WAX-1)，流速为500μl/min，进样体积25μl。

(2)质谱条件：电喷雾离子源，负离子电离(ESI-)模式，离子源温度300℃，毛细管电压为3000V，鞘气流速40L/min，辅助气流速15L/min，毛细管温度350℃，碰撞电压(CE)18，11eV，采用选择反应监控模式(SRM)。

上述条件下，氯氨吡啶酸参考保留时间为15.5min(附图1)；母离子(m/z 204.8)，2个子离子(m/z125.1，m/z 161.1)(附图3)，优化后选择m/z161.1子离子作为定量离子。

以色谱级甲醇为溶剂配制质量浓度为0.005、0.010、0.020、0.050、0.10mg/L氯氨吡啶酸标准溶液，在上述条件下分别对其进行检测，以氯氨吡啶酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算机绘制标准曲线，标准曲线线性回归方程如下：

y＝＝54638.7+34022.1*x   (1)

式中x为氯氨吡啶酸浓度，单位mg/L；y为峰面积响应值相关系数r²＝0.9996(附图2)。

一、检验待测大麦样品氯氨吡啶酸的含量：

按步骤1进行样品处理，按步骤2进行检测，按照公式(2)计算样品中氯氨吡啶酸浓度：

X_i＝c_i*V/m   (2)

式中：X_i表示样品中氯氨吡啶酸含量，单位mg/kg；c_i表示从标准工作曲线得到的试样溶液中氯氨吡啶酸的浓度，单位mg/L；V表示试样溶液定容体积，单位ml；m代表样品溶液中试样质量，单位g。

二、测定大麦中氯氨吡啶酸的加标回收率

将不含氯氨吡啶酸的大麦粉碎过40目筛，向4.00g样品加入0.010、0.020、0.10mg/L氯氨吡啶酸标准溶液2ml，混匀后加入色谱级纯甲醇38ml作为提取液，旋涡混匀5min，静置取上清液20ml，按步骤1中的方法进行净化浓缩，按步骤2进行检测，按公式(3)计算加标回收率

X＝C_测*100％/C_标   (3)

式中C_测表示大麦中氯氨吡啶酸的测定值，单位mg/kg；C_标表示大麦中氯氨吡啶酸标准品的加入量，单位mg/kg。

实施例：大麦中氯氨吡啶酸的检测

进行标准曲线绘制：

用色谱级纯甲醇为溶剂配制质量浓度为0.005、0.010、0.020、0.050、0.10mg/L氯氨吡啶酸标准溶液，以100％乙腈为A相，5mmol乙酸铵水溶液为B相，将A相与B相按体积比60∶40混合作为流动相，使用阴离子交换柱(DIONEXAcclaim Mix-Mode WAX-1)，流速为500μl/min，进样体积25μl；采用选择反应监控模式(SRM)(质谱条件：电喷雾离子源，负离子电离(ESI-)模式，离子源温度300℃，毛细管电压为3000V，鞘气流速40L/min，辅助气流速15L/min，毛细管温度350℃，碰撞电压(CE)18，11eV)；以质荷比m/z161.1为定量离子，氯氨吡啶酸参考保留时间为15.5min(附图1)。

大麦样品的处理与氯氨吡啶酸的检测

将大麦粉碎过40目筛，称得4.05g样品，加入40ml色谱级甲醇提取，旋涡混匀5min，静置取上清液20ml，采用HR-XA(3ml，200mg)固相萃取小柱按发明步骤1净化浓缩，步骤2进行检测，结果小于0.1mg/kg，为阴性。

大麦中氯氨吡啶酸的加标回收率

1、样品处理

将不含氯氨吡啶酸的大麦粉碎过40目筛，向4.00g样品加入0.010、0.020、0.10mg/L氯氨吡啶酸标准溶液2ml，混匀后加入甲醇提取液38ml，旋涡混匀5min，静置取上清液20ml，按步骤1方法进行净化浓缩，按步骤2进行检测，按公式(3)计算大麦中氯氨吡啶酸的加标回收率，结果见表1：

表1 加标回收率试验结果

加标浓度(mg/kg)	回收率(％)
		0.005	76.5
0.010	75.2
		0.050	88.4

为了证明本发明的有益效果，发明人进行了大量的实验室研究试验，各种试验情况如下：

1、本发明检测方法的加标回收率

对氯氨吡啶酸标准溶液、阴性样品以及添加氯氨吡啶酸标准溶液的谷物样品进行液质联用分析，试验结果见图1～4及表1。由图表可以看出15.5min目标组分氯氨吡啶酸得到良好分离。采用质荷比m/z 161.1作为定量离子，在三水平(0.005、0.010、0.050mg/kg)上的加标回收率为75.2％～88.4％，方法是准确可靠的。

2、本发明检测方法的检出限和定量限

在不含氯氨吡啶酸的阴性样品中加入不同浓度的氯氨吡啶酸标准溶液，按照步骤1、2的方法时进行检测，以S/N＝3为检出限，S/N＝10为定量限，试验结果表示，本发明方法测定谷物中氯氨吡啶酸的检出限为0.005mg/kg，定量限为0.010mg/kg

综合上述试验结果表示可见，本发明方法在准确度、精密度以及加标回收率等方面均能满足国家对农药残留分析质量控制要求，可以用于谷物中氯氨吡啶酸残留的检测。

Claims (1)

1.一种大麦中氯氨吡啶酸农药残留的检测方法，其特征在于：检测步骤如下：

(1)、大麦样品的制备、萃取、净化与浓缩：

将大麦粉碎过40目筛，称取4.00g样品，加入40ml色谱级纯甲醇作为提取液，旋涡混匀5min，静置取上清液20ml，采用HR-XA3ml，200mg固相萃取小柱按下述步骤净化浓缩：

(a)、柱活化：5ml色谱级纯甲醇，5ml水；

(b)、上样：将上清液在抽真空条件下加入萃取柱；

(c)、柱清洗：依次加入2.5ml浓度为50mmol/L的乙酸钠水溶液、2.5ml色谱级纯甲醇，使用氮气吹干萃取柱；

(d)、洗脱：使用5ml色谱级纯甲醇洗脱被测样品，收集洗脱液；

(e)、浓缩定容：将洗脱液在60℃下氮吹至近干，用1ml色谱级纯甲醇溶解样品中，过0.45μm滤膜，供分析测试用；

(2)、绘制标准曲线：

(a)色谱条件：以100％乙腈为A相，5mmol乙酸铵水溶液为B相，将A相与B相按体积比60∶40混合作为流动相，使用阴离子交换柱DIONEX Acclaim Mix-Mode WAX-1，流速为500μl/min，进样体积25μl；

(b)质谱条件：电喷雾离子源，负离子电离模式，离子源温度300℃，毛细管电压为3000V，鞘气流速40L/min，辅助气流速15L/min，毛细管温度350℃，碰撞电压18，11eV，采用选择反应监控模式；

上述条件下，氯氨吡啶酸参考保留时间为15.5min；母离子m/z 204.8，2个子离子m/z 125.1，m/z 161.1，优化后选择m/z 161.1子离子作为定量离子；

以色谱级甲醇为溶剂配制质量浓度为0.005、0.010、0.020、0.050、0.10mg/L氯氨吡啶酸标准溶液，在上述条件下分别对其进行检测，以氯氨吡啶酸浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算机绘制标准曲线，标准曲线线性回归方程如下：

y＝＝54638.7+34022.1*x   (1)

式中x为氯氨吡啶酸浓度，单位mg/L；y为峰面积响应值相关系数r²＝0.9996；

按步骤(1)进行样品处理，按步骤(2)进行检测，按照公式(2)计算样品中氯氨吡啶酸浓度：

X_i＝c_i*V/m   (2)

式中：X_i表示样品中氯氨吡啶酸含量，单位mg/kg；c_i表示从标准工作曲线得到的试样溶液中氯氨吡啶酸的浓度，单位mg/L；V表示试样溶液定容体积，单位ml；m代表样品溶液中试样质量，单位g。