CN104181309A - 一种灵敏度高的肌钙蛋白i检测试剂盒 - Google Patents
一种灵敏度高的肌钙蛋白i检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒，包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，试剂R1组成及含量：Hopes缓冲液pH7.6、氯化钠80～150mmol/L、曲拉通X-1141～10g/L、亚铁***1ug/L~2ug/L、吡唑0.1～1g/L ；试剂R1组成及含量：甘氨酸缓冲液pH7.6 、羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒1～5mL/L、N-乙酰顺丁烯二酰亚胺0.1～1g/L、吡唑0.1～1g/L；本发明提供的试剂盒的检测灵敏度高于现有同类试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定血清中肌钙蛋白I（Tn I）含量的试剂盒，属于临床体外检测技术领域。
背景技术
肌钙蛋白(Troponin,Tn)是组成横纹肌细丝的结构蛋白,其亚单位I、T、C组成复合物，在肌肉收缩和舒张过程中起重要作用。其中，心肌肌钙蛋I(CaldiaetroponinI,CTnI)经大量的研究，已被证实为心肌损伤最特异性、最敏感的血清标志物之一，正逐渐取代肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)成为判断心肌损伤，特别是急性心肌梗塞(AMI)的“金标准”。因此，肌钙蛋白I目前已成为诊断心肌损伤的前提条件。
TnI是心肌细胞中的特有蛋白质。临床上其它非急性心肌梗死（AMI）也可由TnI释放，如不稳定心绞痛、充血性心衰，冠状动脉分流术造成的缺血性损伤。在急性心肌梗死时，血清心肌肌钙蛋白T(TnT)及心肌肌钙蛋白I(TnI)在2.7～4.9小时开始升高，5.8～29小时达到高峰值，83～168小时恢复正常。所以，血清心肌肌钙蛋白测定，有助于早期及中后期急性心肌梗死的诊断，尤其对于微小的、小灶性心肌梗死的诊断更有价值。不稳定型心绞痛、围手术期心肌损害及其他心肌损害等，心肌肌钙蛋白也均可增高。在急性心肌梗死后1～4天，血清中心肌肌钙蛋白I(TnI)浓度之比，可作为溶栓是否成功的指标之一。
AMI病人于发病后3～6小时升高，发病10～120小时内检测敏感性达100%，peaktime于发病后l0～48小时左右出现，可达参考值的30～40倍。出现峰值较晚或峰值较高的病人增高可持续2～3周。对于非Q波MI、亚急性MI或用CK-MB无法判断预后的病人更有意义。因此心肌肌钙蛋白I的检测对心肌损伤病的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义。
目前市场上适用的肌钙蛋白I的检测方法有：ELISA法、放射免疫法、ELFA法、化学发光法，金标免疫法等，但分别收到检测线性范围小、操作复杂，稳定时间短、价格昂贵、只能定性分析，受主观因素影响大等原因受到了一定的局限。而目前市场上心肌肌钙蛋白I诊断试剂盒，在其性能及价格方面都有了较大的改善，并有全自动生化分析仪，形成了完整的检测***，提高了心肌损伤的早期诊断效率。但是仍然存在低值灵敏度不够，阳性检测率相对较低的问题，使在检测时存在假阳性的问题，因此在检出率上还存在一定的局限。所以发明一种特异性好、灵敏度高的试剂盒具有非常重要的临床意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测肌钙蛋白I的方法，在试剂R1中加入亚铁***，试剂R2中加入一定浓度的N-乙酰顺丁烯二酰亚胺，以克服现有技术的缺陷，显著提高试剂盒低值检测时的灵敏度及与‘金标准’化学发光相比阳性检测率的一致性。
本试剂盒包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，其组成分别为：
试剂1（R1）：
Hopes缓冲液 PH 7.6
氯化钠 80～150mmol/L
曲拉通X-114 1～10g/L
亚铁*** 1ug/L~2 ug/L
吡唑 0.1～1 g/L ;
试剂2（R2）：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 1～5mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺 0.1～1 g/L
吡唑 0.1～1 g/L 。
制备方法：取各组分用缓冲溶液溶解达到规定浓度即可。
本发明提供的试剂盒，与其灵敏度和一致性显著提高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
1）本实施例所描述的肌钙蛋白I的检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2：
其R1的组成为：
Hopes缓冲液 PH 7.6
氯化钠 120mmol/L
曲拉通X-114 3g/L
亚铁*** 2 ug/L
吡唑 0.8g/L ；
试剂R2的组分为：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺 0.5 g/L
吡唑 0.8 g/L 。
2）市场同类肌钙蛋白I的检测试剂盒，包试剂R1和试剂R2：
其R1的组成为：
Hopes缓冲液 PH 7.6
氯化钠 120mmol/L
表面活性剂 3g/L
吡唑 0.8g/L；
试剂R2的组分为：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3mL/L
吡唑 0.8 g/L
3）本实施例试剂的使用方法：
本实施例描述的肌钙蛋白I检测试剂，在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪，如东芝40全自动分析仪等，利用双试剂终点法进行测定。将R1和R2按照3:1的比例放置到对应的试剂位上，在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本，操作如表1：
表1肌钙蛋白I检测试剂检测方法
计算：肌钙蛋白I浓度＝（?A测定÷?A标准）×C标准
4）检测结果显示：
使用东芝40生化仪分别将两种肌钙蛋白I试剂进行水空白测试，分别做两次重复（表2），结果结果表明：专利中的肌钙蛋白I试剂盒与市场同类产品相比，水空白吸光度变化较小。
表2两种肌钙蛋白I检测试剂盒水空白检测结果
然后将两种试剂分别检测20个新鲜血清样本（表3），结果显示：在检测低值样本时，市场同类产品检测值为0。专利中提及的试剂盒能够检测其含量，灵敏度更好。
表3两种肌钙蛋白I检测试剂盒水空白检测结果
将已通过金标准化学发光检测确定的20个阳性样本分别使用两种试剂盒检测，检测方法同实施例1。试剂盒检测参考范围0～1.68μg/L，此为阳性区间。
检测结果如（表4），与化学发光已确定为阳性（+）的样本，在市场同类产品中有两个样本检测为阴性，而专利中制备产品检测结果与化学发光保持一致。
表4 试剂盒检测结果与化学发光相比
本发明提供了一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒，在对低值血清样本检测灵敏度及阳性样本检测率都有了较大的改善。增强了市场竞争力，有利于试剂的市场推广。
实施例2
其R1的组成为：
Hopes缓冲液 PH 7.6
氯化钠 80mmol/L
曲拉通X-114 1g/L
亚铁*** 1ug/L
吡唑 0.1 g/L ；
试剂R2的组分为：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6 ～8.1
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 1mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺 0.1 g/L
吡唑 0.1 g/L 。
实施例3
其R1的组成为：
Hopes缓冲液 PH 7.6
氯化钠 150mmol/L
曲拉通X-114 10g/L
亚铁*** 12 ug/L
吡唑 01 g/L ；
试剂R2的组分为：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 5mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺 01 g/L
吡唑 1 g/L。
Claims (1)
1.一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒，其特征在于， 包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2，其组成及含量分别为：
试剂R1：
Hopes缓冲液 PH 7.6
氯化钠 80～150mmol/L
曲拉通X-114 1～10g/L
亚铁*** 1ug/L~2 ug/L
吡唑 0.1～1 g/L ;
试剂R2：
甘氨酸缓冲液 PH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 1～5mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺 0.1～1 g/L
吡唑 0.1～1 g/L 。
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| CN101171033A (zh) * | 2005-03-04 | 2008-04-30 | 戴纳瓦克斯技术公司 | 包含具免疫刺激序列iss之寡核苷酸的疫苗：其中iss与抗原缀合并通过缓冲条件和其他赋形剂稳定 |
| CN101226198A (zh) * | 2007-01-16 | 2008-07-23 | 温州市第三人民医院 | 一种糖化血清蛋白的酶法测定方法及液体稳定试剂 |
| CN103940986A (zh) * | 2014-03-24 | 2014-07-23 | 安徽省煦棠医疗科技有限公司 | 肌钙蛋白i 特定位点抗体制备及其检测试剂盒 |
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