CN104181309B - 一种灵敏度高的肌钙蛋白i检测试剂盒 - Google Patents
一种灵敏度高的肌钙蛋白i检测试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒,包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2,试剂R1组成及含量:Hopes缓冲液pH7.6、氯化钠80~150mmol/L、曲拉通X-1141~10g/L、亚铁***1ug/L~2ug/L、吡唑0.1~1g/L;试剂R1组成及含量:甘氨酸缓冲液pH7.6、羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒1~5mL/L、N-乙酰顺丁烯二酰亚胺0.1~1g/L、吡唑0.1~1g/L;本发明提供的试剂盒的检测灵敏度高于现有同类试剂盒。
Description
技术领域
本发明涉及一种测定血清中肌钙蛋白I(Tn I)含量的试剂盒,属于临床体外检测技术领域。
背景技术
肌钙蛋白(Troponin,Tn)是组成横纹肌细丝的结构蛋白,其亚单位I、T、C组成复合物,在肌肉收缩和舒张过程中起重要作用。其中,心肌肌钙蛋I(CaldiaetroponinI,CTnI)经大量的研究,已被证实为心肌损伤最特异性、最敏感的血清标志物之一,正逐渐取代肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)成为判断心肌损伤,特别是急性心肌梗塞(AMI)的“金标准”。因此,肌钙蛋白I目前已成为诊断心肌损伤的前提条件。
TnI是心肌细胞中的特有蛋白质。临床上其它非急性心肌梗死(AMI)也可由TnI释放,如不稳定心绞痛、充血性心衰,冠状动脉分流术造成的缺血性损伤。在急性心肌梗死时,血清心肌肌钙蛋白T(TnT)及心肌肌钙蛋白I(TnI)在2.7~4.9小时开始升高,5.8~29小时达到高峰值,83~168小时恢复正常。所以,血清心肌肌钙蛋白测定,有助于早期及中后期急性心肌梗死的诊断,尤其对于微小的、小灶性心肌梗死的诊断更有价值。不稳定型心绞痛、围手术期心肌损害及其他心肌损害等,心肌肌钙蛋白也均可增高。在急性心肌梗死后1~4天,血清中心肌肌钙蛋白I(TnI)浓度之比,可作为溶栓是否成功的指标之一。
AMI病人于发病后3~6小时升高,发病10~120小时内检测敏感性达100%,peaktime于发病后l0~48小时左右出现,可达参考值的30~40倍。出现峰值较晚或峰值较高的病人增高可持续2~3周。对于非Q波MI、亚急性MI或用CK-MB无法判断预后的病人更有意义。因此心肌肌钙蛋白I的检测对心肌损伤病的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义。
目前市场上适用的肌钙蛋白I的检测方法有:ELISA法、放射免疫法、ELFA法、化学发光法,金标免疫法等,但分别收到检测线性范围小、操作复杂,稳定时间短、价格昂贵、只能定性分析,受主观因素影响大等原因受到了一定的局限。而目前市场上心肌肌钙蛋白I诊断试剂盒,在其性能及价格方面都有了较大的改善,并有全自动生化分析仪,形成了完整的检测***,提高了心肌损伤的早期诊断效率。但是仍然存在低值灵敏度不够,阳性检测率相对较低的问题,使在检测时存在假阳性的问题,因此在检出率上还存在一定的局限。所以发明一种特异性好、灵敏度高的试剂盒具有非常重要的临床意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测肌钙蛋白I的方法,在试剂R1中加入亚铁***,试剂R2中加入一定浓度的N-乙酰顺丁烯二酰亚胺,以克服现有技术的缺陷,显著提高试剂盒低值检测时的灵敏度及与‘金标准’化学发光相比阳性检测率的一致性。
本试剂盒包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2,其组成分别为:
试剂
1
(
R1
):
Hopes缓冲液
pH 7.6
氯化钠
80~150mmol/L
曲拉通X-114
1~10g/L
亚铁***
1ug/L~2 ug/L
吡唑
0.1~1
g/L ;
试剂
2
(
R2
):
甘氨酸缓冲液
pH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒
1~5mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺
0.1~1 g/L
吡唑
0.1~1 g/L 。
制备方法:取各组分用缓冲溶液溶解达到规定浓度即可。
本发明提供的试剂盒,与其灵敏度和一致性显著提高。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
1)本实施例所描述的肌钙蛋白I的检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2:
其R1的组成为:
Hopes缓冲液
pH 7.6
氯化钠
120mmol/L
曲拉通X-114
3g/L
亚铁***
2 ug/L
吡唑
0.8g/L ;
试剂R2的组分为:
甘氨酸缓冲液
pH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒
3mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺
0.5 g/L
吡唑
0.8 g/L 。
2)市场同类肌钙蛋白I的检测试剂盒,包试剂R1和试剂R2:
其R1的组成为:
Hopes缓冲液
pH 7.6
氯化钠
120mmol/L
表面活性剂
3g/L
吡唑
0.8g/L;
试剂R2的组分为:
甘氨酸缓冲液
pH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒
3mL/L
吡唑
0.8 g/L 。
3)本实施例试剂的使用方法:
本实施例描述的肌钙蛋白I检测试剂,在使用时采用具有双试剂功能的全自动生化分析仪,如东芝40全自动分析仪等,利用双试剂终点法进行测定。将R1和R2按照3:1的比例放置到对应的试剂位上,在样品盘的对应位置放置好蒸馏水、标准品和样本,操作如表1:
表1肌钙蛋白I检测试剂检测方法
计算:肌钙蛋白I浓度=(∆A测定÷∆A标准)×C标准
4)检测结果显示:
使用东芝40生化仪分别将两种肌钙蛋白I试剂进行水空白测试,分别做两次重复(表2),结果结果表明:专利中的肌钙蛋白I试剂盒与市场同类产品相比,水空白吸光度变化较小。
表2两种肌钙蛋白I检测试剂盒水空白检测结果
然后将两种试剂分别检测20个新鲜血清样本(表3),结果显示:在检测低值样本时,市场同类产品检测值为0。专利中提及的试剂盒能够检测其含量,灵敏度更好。
表3两种肌钙蛋白I检测试剂盒水空白检测结果
将已通过金标准化学发光检测确定的20个阳性样本分别使用两种试剂盒检测,检测方法同实施例1。试剂盒检测参考范围0~1.68μg/L,此为阳性区间。
检测结果如(表4),与化学发光已确定为阳性(+)的样本,在市场同类产品中有两个样本检测为阴性,而专利中制备产品检测结果与化学发光保持一致。
表4 试剂盒检测结果与化学发光相比
本发明提供了一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒,在对低值血清样本检测灵敏度及阳性样本检测率都有了较大的改善。增强了市场竞争力,有利于试剂的市场推广。
实施例2
其R1的组成为:
Hopes缓冲液
pH 7.6
氯化钠
80mmol/L
曲拉通X-114
1g/L
亚铁***
1ug/L
吡唑
0.1 g/L ;
试剂R2的组分为:
甘氨酸缓冲液
pH 7.6 ~8.1
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒
1mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺
0.1 g/L
吡唑
0.1 g/L 。
实施例3
其R1的组成为:
Hopes缓冲液
pH 7.6
氯化钠
150mmol/L
曲拉通X-114
10g/L
亚铁***
12 ug/L
吡唑
01 g/L ;
试剂R2的组分为:
甘氨酸缓冲液
pH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒
5mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺
01 g/L
吡唑
1 g/L。
Claims (1)
1.一种灵敏度高的肌钙蛋白I检测试剂盒,其特征在于, 包括体积比为3:1的试剂R1和试剂R2,其组成及含量分别为:
试剂R1:
Hopes缓冲液 pH 7.6
氯化钠 80~150mmol/L
曲拉通X-114 1~10g/L
亚铁*** 1ug/L~2 ug/L
吡唑 0.1~1 g/L ;
试剂R2:
甘氨酸缓冲液 pH 7.6
羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 1~5mL/L
N-乙酰顺丁烯二酰亚胺 0.1~1 g/L
吡唑 0.1~1 g/L 。
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---|---|---|---|---|
CN101171033A (zh) * | 2005-03-04 | 2008-04-30 | 戴纳瓦克斯技术公司 | 包含具免疫刺激序列iss之寡核苷酸的疫苗:其中iss与抗原缀合并通过缓冲条件和其他赋形剂稳定 |
CN101226198A (zh) * | 2007-01-16 | 2008-07-23 | 温州市第三人民医院 | 一种糖化血清蛋白的酶法测定方法及液体稳定试剂 |
CN103940986A (zh) * | 2014-03-24 | 2014-07-23 | 安徽省煦棠医疗科技有限公司 | 肌钙蛋白i 特定位点抗体制备及其检测试剂盒 |
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