CN104132899B - 青霉素类抗生素的外观评定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种青霉素类抗生素的外观评定方法，通过分光光度法确定某种青霉素类抗生素的外观标准，再通过其它批次该种青霉素类抗生素溶液的吸光度与所确定的外观标准进行比较来评定所测批次的该种青霉素类抗生素产品外观是否合格。该方法代替了青霉素类抗生素外观的肉眼观察法，使外观的标准可量化，易于控制，客观、准确，不随时间、地点、人员的改变而发生变化。本发明在工业生产的推广应用中具有低成本、高精确、高效率的特点。

Description

青霉素类抗生素的外观评定方法

技术领域

本发明涉及药物质量控制领域，尤其是指青霉素类抗生素的外观评定方法。

背景技术

药品的外观颜色是药品内在质量的一个客观表征，其与规定颜色的差异能在一定程度上反映药物的纯度。各国药典都将药品颜色或者药品溶液的颜色作为药品质量控制的一个重要检查项目。

青霉素类抗生素是一种含有β-内酰胺环的抗生素，结构如式Ⅰ所示。在pH为4左右的环境中，青霉素类抗生素分子内的β-内酰胺环会发生分子重排，生成青霉烯酸(penicillenic acid)，其结构如式Ⅱ所示。青霉烯酸具有噁唑酮结构，容易吸潮而导致发黄变质，青霉素类抗生素中混有青霉烯酸就会引起青霉素类抗生素产品外观颜色的改变。

青霉素母核6-APA虽然没有α氨基，但是研究过程中发现也存在这样的现象。

目前，对上述青霉素类抗生素的外观质量控制，一般都采用人工目视法，即通过目视法直接肉眼观察并判定，颜色为白色的青霉素类抗生素是合格产品，而颜色为类白色或黄色的青霉素类抗生素则为不合格产品。但是对于白色和类白色的界定很难，不同的人有不同的标准，主观影响因素太大。通过人工目视法来判定药品的质量的方法不够客观科学；工人在长期查看颜色的情况下，也 容易产生视觉疲劳，从而加大了误判的可能性。

因此，寻找一种客观、准确的青霉素类抗生素的外观评定方法是十分必要的。

紫外-可见吸收光谱法的定量依据为Lamber-Beer定律。Lamber-Beer定律适用于任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质。溶液对光的吸收程度，与溶液浓度、液层厚度及入射光波长等因素有关。如果保持入射光波长不变，则溶液对光的吸收程度只与溶液浓度和液层厚度有关，而液层厚度在紫外-可见光扫描色谱仪中是固定不变的，因此，溶液对光的吸收程度只与溶液浓度有关。因为青霉烯酸的吸光度要高于青霉素类抗生素的吸光度，所以，选用同样的入射光波长来检测不同溶液的吸光度时，溶液中青霉烯酸的含量越高，溶液的吸光度越大；青霉烯酸的含量越大，该青霉素类抗生素的外观颜色越接近于黄色。因此，本发明的使用原理如下：

青霉素类抗生素颜色∝青霉烯酸浓度∝318nm-342nm处吸光度。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种客观的、准确的青霉素类抗生素的外观评定方法。

为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案如下：

青霉素类抗生素的外观评定方法，针对任意一种青霉素类抗生素，包括以下步骤：

A.取目测外观为白色、类白色和黄色的该种青霉素类抗生素各一份，分别配制成相同浓度的定波溶液，以水为空白对照对三份定波溶液进行全波长扫描，确定检测该种青霉素类抗生素溶液用的入射光波长；

B.取不少于三个批次的目测为白色的该种青霉素类抗生素，分别配制成相同浓度的定标溶液，以水为空白对照组，以步骤A确定的检测波长，用分光光度法测定每份定标溶液的吸光度；

C.计算所测定标溶液吸光度的平均值，所得平均值保留小数点后三位，将 小数点后第三位数值取零，所得数值作为该种青霉素类抗生素的外观标准；

D.取任意批次的该种青霉素类抗生素，配制成待测溶液，以水为空白对照组，以步骤A确定的检测波长，用分光光度法测定待测溶液的吸光度，若待测溶液的吸光度大于步骤C中所确定的外观标准，则所测批次的该种青霉素类抗生素外观不合格；若待测溶液的吸光度小于等于步骤C中所确定的外观标准，则所测批次的该种青霉素类抗生素外观合格。

本发明所述青霉素类抗生素为6-APA、氨苄西林、阿莫西林、阿扑西林、阿帕西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、甲氧西林、萘夫西林、阿洛西林、美洛西林、哌拉西林、呋布西林、羧苄西林、卡茚西林、替卡西林、替卡西林二钠、替莫西林、磺苄西林、巴氨西林、匹氨西林、酞氨西林、仑氨西林、海他西林、美西林、匹美西林、巴美西林、青霉素V钾、非奈西林、左普皮西林、丙匹西林、异丙西林、阿度西林、环己西林、非布西林、喹那西林、依匹西林、美坦西林、沙匹西林、沙莫西林、呋洛西林、吡苄西林、苯明青霉素、普唑西林、匹氨西林中的任意一种。

本发明所述定波溶液、定标溶液和待测溶液所用的溶剂是相同的，所述溶剂是碱液、碱性缓冲液或水中的一种；所述定波溶液、定标溶液和待测溶液的浓度是相同的，为0.1g/ml～0.35g/ml，优选0.1g/ml～0.13g/ml。。

本发明所述碱液是有机碱和/或无机碱溶液。

本发明所述有机碱是甲胺、脲、乙胺、乙醇胺、乙二胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、丙胺、异丙胺、1,3-丙二胺、1,2-丙二胺、三丙胺、三乙醇胺、丁胺、异丁胺、叔丁胺、己胺、辛胺、苄胺、环己胺、吡啶、六甲基四胺、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺中的任意一种或几种，所述无机碱溶液是氨水、氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、碳酸氢钠溶液中的任意一种或几种。

本发明所述碱性缓冲溶液是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、硼酸-硼砂缓冲 液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中的任意一种或几种。

本发明所述步骤A中的检测波长为318nm～342nm，优选323nm～329nm。

本发明所述步骤B和步骤D中的定标溶液和待测溶液的吸光度测定在溶液配制完成后的15分钟内完成；定标溶液和待测溶液的测定温度为0℃～30℃。

由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步如下：

本发明通过分光光度法测定目测为白色的任意一种青霉素类抗生素溶液的吸光度，确立该种青霉素类抗生素的外观标准；再通过其它批次的该种青霉素类抗生素溶液的吸光度与所确定的外观标准进行比较来评定所测批次的该种青霉素类抗生素产品外观是否合格。该方法代替了传统的青霉素类抗生素外观的肉眼观察法，使外观的标准可量化，易于控制，客观、准确，不随时间、地点、人员的改变而发生变化。本发明在工业生产的推广应用中具有低成本、高精确、高效率的特点。

本发明中的溶剂选用碱液、碱性缓冲液或水，杜绝了青霉素类抗生素在酸性条件下的降解，从而避免了降解产物青霉烯酸对溶液吸光度的影响，使得检测结果更加客观、准确。本发明通过对青霉素类抗生素溶液进行全波长扫描实验来确定检测波长，在检测波长下青霉烯酸的出峰最大化，增加了检测的准确性。318nm～342nm为检测青霉素类抗生素溶液吸光度的通用波长。本发明中对青霉素类抗生素溶液的吸光度测定控制在溶液配制完成后的15分钟内完成，这样就能有效避免由于溶液放置时间过长而出现的青霉素类抗生素降解、生成青霉烯酸的副反应，避免在测试过程中使溶液的吸光度值产生误差。待测溶液的温度控制在0℃～30℃，优选10℃～25℃，能够有效避免溶液温度过高而导致青霉素类抗生素的降解；而且溶液温度接近于室温，操作简单方便。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作更进一步详细说明，但是本发明并不仅限于下述实施例。

下列实施例中所使用的仪器型号为岛津紫外可见分光光度计UV2550；所使用的青霉素类抗生素均由华北制药集团有限责任公司生产。

青霉素类抗生素的外观评定方法，针对任意一种青霉素类抗生素，包括以下步骤：

A.取目测外观为白色、类白色和黄色的一种青霉素类抗生素各一份，分别配制成相同浓度的定波溶液，以水为空白对照对三份定波溶液进行全波长扫描，确定检测该种青霉素类抗生素溶液用的入射光波长；

B.取不少于三个批次的目测为白色的该种青霉素类抗生素，分别配制成相同浓度的定标溶液，以水为空白对照组，以步骤A确定的检测波长，用分光光度法测定每份定标溶液的吸光度；

C.计算步骤B中所有定标溶液吸光度的平均值，所得平均值保留小数点后三位，将小数点后第三位数值取零，所得数值作为该种青霉素类抗生素的外观标准；

D.取任意批次的该种青霉素类抗生素，配制成待测溶液，以水为空白对照组，以步骤A确定的检测波长，用分光光度法测定待测溶液的吸光度，若待测溶液的吸光度大于步骤C中所确定的外观标准，则所测批次的该种青霉素类抗生素外观不合格；若待测溶液的吸光度小于等于步骤C中所确定的外观标准，则所测批次的该种青霉素类抗生素外观合格。

本发明所述青霉素类抗生素包括6-APA、氨苄西林、阿莫西林、阿扑西林、阿帕西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、甲氧西林、萘夫西林、阿洛西林、美洛西林、哌拉西林、呋布西林、羧苄西林、卡茚西林、替卡西林、替卡西林二钠、替莫西林、磺苄西林、巴氨西林、匹氨西林、酞氨西林、仑氨西林、海他西林、美西林、匹美西林、巴美西林、青霉素V钾、非奈西林、左普皮西林、丙匹西林、异丙西林、阿度西林、环己西林、非布西林、喹那西林、依匹西林、美坦西林、沙匹西林、沙莫西林、呋洛西林、吡苄西林、苯明青霉素、普唑西林、匹氨西林。

本发明所述定波溶液、定标溶液和待测溶液所用的溶剂是相同的，所述溶剂是碱液、碱性缓冲液或水中的一种；所述定波溶液、定标溶液和待测溶液的浓度是相同的，均取0.1g/ml～0.35g/ml范围中的任一数值，并优选0.1g/ml～0.13g/ml范围中的任一数值。

所述碱液是有机碱和/或无机碱溶液，有机碱是甲胺、脲、乙胺、乙醇胺、乙二胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、丙胺、异丙胺、1,3-丙二胺、1,2-丙二胺、三丙胺、三乙醇胺、丁胺、异丁胺、叔丁胺、己胺、辛胺、苄胺、环己胺、吡啶、六甲基四胺、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺中的任意一种或几种，所述无机碱溶液是氨水、氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、碳酸氢钠溶液中的任意一种或几种的混合。

所述碱性缓冲溶液是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中的任意一种或几种的混合。

本发明所述步骤A中的检测波长为318nm～342nm，优选323nm～329nm。

本发明所述步骤B和步骤D中的定标溶液和待测溶液的吸光度测定在溶液配制完成后的15分钟内完成，优选在溶液配制完成后10分钟内完成；定标溶液和待测溶液的测定温度为0℃～30℃，优选10℃～25℃。

实施例1

氨苄西林的外观评定方法，包括以下步骤：

A.取目测外观为白色、类白色和黄色的氨苄西林各1份，每份药品取1.7g，不断搅拌下投入3ml纯化水中，搅拌下滴加3ml10％氨水，定容至10ml，配制成相同浓度的三份定波溶液，定波溶液浓度为0.17g/ml，以水为空白对照对三份定波溶液进行全波长扫描，对比三份定波溶液的全波长扫描结果，发现三份定波溶液在325nm处吸光度差别很大，因此确定检测氨苄西林溶液的波长为 325nm；

B.取3个批次的目测外观为白色的氨苄西林样品，按步骤A中所述方法分别配制成相同浓度的三份定标溶液，定标溶液浓度为0.3g/ml；以水为空白对照组，以325nm为检测波长，测定三份定标溶液的吸光度；定标溶液的温度为15℃，测定过程在定标溶液配制完成后的5min之内结束；测定结果见表1；

表1白色氨苄西林溶液在325nm处的吸光度

C.计算步骤B中所得到的三份定标溶液吸光度的平均值为0.501，将0.501的小数点后第三位数值取零，得0.500，即将氨苄西林溶液在325nm处吸光度0.500作为氨苄西林的外观标准；

D.取目测外观为白色、类白色、黄色的氨苄西林各三个批次，按步骤A中所述方法分别配制成待测溶液，待测溶液的浓度为0.12g/ml，以水为空白对照，以325nm为检测波长，测定每份待测溶液的吸光度，待测溶液的温度为15℃，测定过程在待测溶液配制完成后5min内完成，测定结果见表2。

表2白色、类白色、黄色氨苄西林溶液在325nm处的吸光度

编号	批号	外观颜色	吸光度
				1	201103010	白色	0.525
2	201103011	白色	0.478
				3	201103012	白色	0.485
4	201103004	类白色	0.758
				5	201103005	类白色	0.805
6	201103006	类白色	0.912
				7	201103007	黄色	1.422
8	201103008	黄色	1.377
				9	201103009	黄色	1.352

由表2可以看出，批号为201103010的白色氨苄西林的溶液在325nm处的吸光度大于所确定的外观标准0.500，虽然目测外观为白色，但经过分光光度法 检测确定该批次氨苄西林的外观不合格；另外两个批次的目测为白色的氨苄西林的溶液在325nm处的吸光度均小于0.500，外观是合格的。而目测为类白色和黄色的氨苄西林的溶液在325nm处吸光度均明显大于0.500，外观不合格，目测法和本发明方法的检测结果一致。

实施例2

阿莫西林的外观评定方法，包括以下步骤：

A.取目测外观为白色、类白色和黄色阿莫西林各取1份，每份药品取2.5g，不断搅拌下加入10ml纯化水中，搅拌下滴加三乙胺溶解，定容体积至20ml，配制成相同浓度的三份定波溶液,定波溶液浓度为0.125g/ml，以水为空白对照对三份定波溶液进行全波长扫描，对比三份定波溶液的全波长扫描结果，发现三份定波溶液在328nm处吸光度差别很大，因此确定检测阿莫西林溶液的波长为328nm；

B.取3个批次目测外观为白色的阿莫西林样品，按步骤A所述方法配制成相同浓度的三份定标溶液，定标溶液的浓度为0.125g/ml；以水为空白对照组，以328nm为检测波长，测定三份定标溶液的吸光度；定标溶液的温度为25℃，测定过程在定标溶液配制完成后8min内完成；测定结果见表3；

表3白色阿莫西林的溶液在338nm处的吸光度

C.计算步骤B中所得到的三份定标溶液吸光度的平均值为0.503，将0.503的小数点后第三位数值取零，得0.500，即将阿莫西林溶液在328nm处吸光度0.500作为阿莫西林的外观标准；

D.取目测外观为白色、类白色、黄色的阿莫西林各三个批次，按步骤A中所述方法分别配制待测溶液，待测溶液的浓度为0.125g/ml，以水为空白对照， 以328nm为检测波长，测定每份待测溶液的吸光度，待测溶液的温度为25℃，测定过程在待测溶液配制完成后8min内完成，结果见表4。

表4白色、类白色、黄色阿莫西林的溶液在328nm处的吸光度

编号	批号	外观颜色	吸光度
				1	2011030053	白色	0.485
2	2011030054	白色	0.540
				3	2011030055	白色	0.481
4	2011030013	类白色	0.733
				5	2011030014	类白色	0.987
6	2011030015	类白色	0.899
				7	2011030016	黄色	1.529
8	2011030017	黄色	1.458
				9	2011030018	黄色	1.682

由表4可以看出，批号为201103054的白色阿莫西林的溶液在328nm处的吸光度大于所确定的外观标准0.500，虽然目测外观为白色，但经过分光光度法检测确定该批次的阿莫西林外观颜色不合格，另外两个批次的目测为白色的阿莫西林的溶液在328nm处的吸光度均小于0.500，外观合格；而目测为类白色和黄色的阿莫西林的溶液在328nm处吸光度均大于0.500，外观不合格，目测法和本发明方法的检测结果一致。

实施例3：

6-APA的外观评定方法，包括以下步骤：

A.取白色、类白色和黄色6-APA各取1份，每份药品取1.2g，不断搅拌下加入8.5ml纯化水中，不断搅拌下滴加30％氨水溶液至溶清，定容体积至10ml，配制成三份相同浓度的定波溶液,定波溶液浓度为0.12g/ml，以水为空白对照对三份定波溶液进行全波长扫描，对比三份定波溶液的全波长扫描结果，发现三份定波溶液在325nm处吸光度差别很大，因此确定6-APA溶液检测波长为325nm；

B.取3个批次目测外观为白色的6-APA样品按步骤A所述方法配制成相同浓度的三份定标溶液，定标溶液的浓度为0.12g/ml；以水为空白对照，以325nm为检测波长，测定三份定标溶液的吸光度；定标溶液的温度为25℃，测定过程 在定标溶液配制完成后10min内完成，测定结果见表5；

表5白色6-APA的溶液在325nm处的吸光度值

C.计算步骤步骤所得到的三份定标溶液吸光度的平均值为0.504，将0.504的小数点后第三位数字取零后得到0.500，即取6-APA溶液在325nm处吸光度0.500作为6-APA的外观标准；

D.取目测外观为白色、类白色、黄色的6-APA各三个批次，按步骤A所述方法配制成浓度为0.12g/ml的待测溶液；以水为空白对照，以325nm为检测波长，测定每份待测溶液的吸光度；待测溶液的温度为25℃，测定过程在待测溶液配制完成后10min内完成，结果见表6。

表6白色、类白色、黄色6-APA的溶液在328nm处的吸光度值

编号	批号	外观颜色	吸光度
				1	2011030059	白色	0.512
2	2011030060	白色	0.490
				3	2011030061	白色	0.492
4	2011030031	类白色	1.415
				5	2011030032	类白色	1.381
6	2011030033	类白色	1.849
				7	2011030034	黄色	2.737
8	2011030035	黄色	2.937
				9	2011030036	黄色	2.954

由表6可以看出，批号为201103059的白色6-APA的溶液在325nm处的吸光度大于所确定的外观标准0.500，虽然目测为白色，但经过分光光度法检测确定该批次的6-APA的外观不合格，另外两个批次的目测为白色的6-APA的溶液在325nm处的吸光度均小于0.500，外观是合格的；而目测为类白色和黄色的6-APA的溶液在325nm处吸光度均大于0.500，外观不合格，目测法和本发明方法的检测结果一致。

本发明不能穷举所有种类的青霉素类抗生素的外观质量评定方法，但通过上述3个实施例，将本发明的方法延伸到所有种类青霉素类抗生素，从而对实际生产中的各种、各批次的青霉素类抗生素进行外观质量评定，用数字形式反应所生产的青霉素类抗生素的外观质量，而不再采用目测方式，避免人为因素造成的误差。

Claims (7)

1.一种青霉素类抗生素的外观评定方法，其特征在于包括以下步骤：

A.取目测外观为白色、类白色和黄色的一种青霉素类抗生素各一份，分别配制成相同浓度的定波溶液，以水为空白对照对三份定波溶液进行全波长扫描，确定检测该种青霉素类抗生素溶液用的入射光波长；

B.取不少于三个批次的目测为白色的该种青霉素类抗生素，分别配制成相同浓度的定标溶液，以水为空白对照组，以步骤A确定的检测波长，用分光光度法测定每份定标溶液的吸光度；

C.计算步骤B的所有定标溶液吸光度的平均值，所得平均值保留小数点后三位，并将小数点后的第三位数值取零，所得数值作为该种青霉素类抗生素的外观标准；

D.取任意批次的该种青霉素类抗生素，配制成待测溶液，以水为空白对照组，以步骤A确定的检测波长，用分光光度法测定待测溶液的吸光度；若待测溶液的吸光度大于步骤C中所确定的外观标准，则所测批次的该种青霉素类抗生素外观不合格；若待测溶液的吸光度小于等于步骤C中所确定的外观标准，则所测批次的该种青霉素类抗生素外观合格；

所述定波溶液、定标溶液和待测溶液中所用的溶剂相同，所述溶剂是碱液、碱性缓冲液或水中的任意一种；所述定波溶液、定标溶液和待测溶液的浓度是相同的，均取0.1g/ml～0.35g/ml范围中的任一数值；

所述步骤A中的检测波长为318nm～342nm；

所述步骤B和步骤D中，定标溶液和待测溶液的吸光度测定在溶液配制完成后的15分钟内完成；定标溶液和待测溶液的测定温度为0℃～30℃。

2.根据权利要求1所述的青霉素类抗生素的外观评定方法，其特征在于：所述青霉素类抗生素包括6-APA、氨苄西林、阿莫西林、阿扑西林、阿帕西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、氟氯西林、甲氧西林、萘夫西林、阿洛西林、美洛西林、哌拉西林、呋布西林、羧苄西林、卡茚西林、替卡西林、替卡西林二钠、替莫西林、磺苄西林、巴氨西林、匹氨西林、酞氨西林、仑氨西林、海他西林、美西林、匹美西林、巴美西林、青霉素V钾、非奈西林、左普皮西林、丙匹西林、异丙西林、阿度西林、环己西林、非布西林、喹那西林、依匹西林、美坦西林、沙匹西林、沙莫西林、呋洛西林、吡苄西林、苯明青霉素、普唑西林、匹氨西林。

3.根据权利要求1所述的青霉素类抗生素的外观评定方法，其特征在于：所述碱液是有机碱和/或无机碱溶液。

4.根据权利要求3所述的一种青霉素类抗生素的外观评定方法，其特征在于：所述有机碱是甲胺、脲、乙胺、乙醇胺、乙二胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、丙胺、异丙胺、1,3-丙二胺、1,2-丙二胺、三丙胺、三乙醇胺、丁胺、异丁胺、叔丁胺、己胺、辛胺、苄胺、环己胺、吡啶、六甲基四胺、邻甲苯胺、间甲苯胺、对甲苯胺中的任意一种或几种；所述无机碱溶液是氨水、氢氧化钠溶液、碳酸钠溶液、碳酸氢钠溶液中的任意一种或几种的混合。

5.根据权利要求1所述的青霉素类抗生素的外观评定方法，其特征在于：所述碱性缓冲溶液是磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钠缓冲液、磷酸氢二钠-磷酸二氢钾缓冲液、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液、巴比妥钠-盐酸缓冲液、Tris-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液、甘氨酸-氢氧化钠缓冲液、硼砂-氢氧化钠缓冲液、碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液中的任意一种或几种的混合。

6.根据权利要求1所述的青霉素类抗生素的外观评定方法，其特征在于：所述定波溶液、定标溶液和待测溶液的浓度均取0.1g/ml～0.13g/ml中的任一数值。

7.根据权利要求1所述的青霉素类抗生素的外观评定方法，其特征在于：所述步骤A中的检测波长为323nm～329nm。