CN104119457A - 一种联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺，本发明以肠粘膜为原料，经过酶解、树脂吸附后以不同浓度的氯化钠溶液洗脱，低浓度氯化钠溶液洗脱出硫酸皮肤素，高浓度氯化钠溶液洗脱出肝素钠，在分别乙醇沉淀干燥得到肝素钠和硫酸皮肤素。本发明提高了肠粘膜的利用价值，使肝素钠和硫酸皮肤素有效的分离。本发明工艺简单，成本低，收益高，可大大增加生产经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及肝素钠和肠膜蛋白的提取工艺，具体涉及一种联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺。
背景技术
小肠粘膜液是指在制备肠衣的工业加工中，将动物肠道经过刮制去除粘膜（包括附着在粘膜上的附着物或粘液）时的一种废液，该废液中粘膜与水的质量比约为1：5，很多肠衣加工企业将该小肠粘膜液当作废水直接进入后续污水处理工序，造成了不必要的浪费。
肝素钠又称肝素，是一种含有硫酸基的酸性粘多糖类天然抗凝血物质。肝素钠为白色或类白色粉末，无臭无味，有引湿性，易溶于水，不溶于乙醇、丙酮、二氧六环等有机溶剂。
肝素钠广泛存在于哺乳动物肝、肺、肠黏膜中，多与蛋白质结合成复合体存在。酶解蛋白可分离肝素钠，肝素钠是含硫酸、氨基、醛糖酸的粘多糖。在pH8-9 时，带负电荷，可与阴离子交换剂进行离子交换，进行粗分离，多糖液在高浓度乙醇中沉淀进行精纯。肝素钠是血液化学成分测定中最好的抗凝剂。肝素钠是一种含硫酸基团的黏多糖，分子量为1.5 万，其抗凝机制是与抗凝酶Ⅱ一起，在低浓度能抑制因子Ⅸ a、Ⅷ和PF3 之间的作用，并能加强抗凝血酶Ⅲ灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成；还有抑制凝血酶的自我催化及抑制因子X 的作用。
硫酸皮肤素(dermatan sulfate，简称DS)，是一种天然的糖胺聚糖，由重复的二糖单位组成，其二糖为乙酰氨基硫酸半乳糖和艾杜糖醛酸，主要为N- 乙酰半乳糖胺4- 硫酸和L- 艾杜糖醛构成的双糖链结构。DS 广泛分布于动物组织中，具有抗血栓、抗水肿、促进皮肤更新、阻止皮肤的过度角质化和棘皮症、滋润皮肤、保持水分的作用，近年来受到国内外专家的日益重视。
长期以来，动物皮层是制备硫酸皮肤素的主要原料，也是商品硫酸皮肤素的主要来源。早在60 年代，Clifonelli J A 和Roden L 等人(BiochemicalPrep 12，5-12，1968)就曾利用猪皮为原料制备硫酸皮肤素，采用木瓜蛋白酶降解后利用不同浓度的氯化十六烷基吡啶进行结合与解析硫酸皮肤素粗品，将粗品溶于水，以氢氧化钠和班式试剂沉淀，将沉淀溶于乙酸中，用氢氧化钠中和后透析，透析液通过强酸型阳离子树脂脱铜，脱铜液以乙酸调至pH4-5，最后以2 倍乙醇沉淀出硫酸皮肤素。
发明内容
鉴于上述不足之处，本发明的目的在于提供一种充分利用小肠粘膜液联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺，使小肠粘膜液得到最大有效利用。
为了达到上述目的，本发明采用了以下制备工艺：
一种联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺包括以下步骤：以小肠粘膜液为原料，经过酶解、树脂吸附后以不同浓度的氯化钠溶液洗脱，低浓度氯化钠溶液洗脱出硫酸皮肤素，高浓度氯化钠溶液洗脱出肝素钠，再分别用乙醇沉淀干燥得到硫酸皮肤素和肝素钠。
联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺具体包括以下步骤：
（1）酶解：先在小肠粘膜液中加入2709碱性蛋白酶，加酶量为每1L小肠粘膜液加酶1g，然后用调整混合物的PH 为8.5 ～ 9，升温至54 ～ 56℃，保温4小时，然后再升温至85 ～ 90℃，保温15-20分钟，用100目滤布过滤得到酶解液；
（2）吸附，过滤：将步骤（2）所得的酶解液降温至55～57℃后加入树脂，搅拌吸附8小时，用80目尼龙布过滤袋将树脂滤出；
（3）洗涤、洗脱：
①将盛有树脂的尼龙布袋放入清水中清洗，直至无杂物为止；
②将收集在尼龙布袋中的树脂用浓度为2%-5%的氯化钠溶液洗涤30～40分钟，洗去蛋白等杂质；
③然后用浓度为5%～10%的氯化钠溶液两次洗脱树脂，收集洗脱液A；
④最后用浓度为20%-24%的氯化钠溶液三次洗脱树脂，收集洗脱液B；
（4）沉淀、干燥：
①按乙醇与洗脱液A的体积比为2～2.5：1加入乙醇，然后用塑料棒搅匀直至出现颗粒为止，此时乙醇浓度为30～40%；
②沉淀24小时后去除上清液，收集硫酸皮肤素沉淀；
③干燥：将步骤②得到的硫酸皮肤素置于65～70℃温度条件下干燥10～12小时，取得固体，即得到硫酸皮肤素；
④按乙醇与洗脱液B的体积比为2～2.5：1加入乙醇，然后用塑料棒搅匀直至出现颗粒为止，此时乙醇浓度为30～40%；
⑤沉淀24小时后去除上清液，收集肝素钠沉淀；
⑥干燥：将步骤②得到的肝素钠置于65～70℃温度条件下干燥10～12小时，取得固体，即得到肝素钠。
本发明提高了肠粘膜的利用价值，使肝素钠和硫酸皮肤素有效的分离。本发明工艺简单，成本低，收益高，可大大增加生产经济效益。
具体实施方式
下面我们将结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺包括以下步骤：
小肠粘膜液的制备：通过对小肠进行刮制，取得小肠粘膜物，然后按小肠粘膜物与水按1:5的质量比混合得小肠粘膜液。
（1）酶解：先在小肠粘膜液中加入2709碱性蛋白酶，加酶量为每1L小肠粘膜液加酶1g，然后用调整混合物的PH 为9，升温至55℃，保温4小时，然后再升温至90℃，保温15分钟，用100目滤布过滤得到酶解液；
（2）吸附，过滤：将步骤（2）所得的酶解液降温至56℃后加入树脂，搅拌吸附8小时，用80目尼龙布过滤袋将树脂滤出；
（3）洗涤、洗脱：
①将盛有树脂的尼龙布袋放入清水中清洗，直至无杂物为止；
②将收集在尼龙布袋中的树脂用浓度为3%的氯化钠溶液洗涤35分钟，洗去蛋白等杂质；
③然后用浓度为8%的氯化钠溶液两次洗脱树脂，收集洗脱液A；
④最后用浓度为22%的氯化钠溶液三次洗脱树脂，收集洗脱液B；
（4）沉淀、干燥：
①按乙醇与洗脱液A的体积比为2.5：1加入乙醇，然后用塑料棒搅匀直至出现颗粒为止，此时乙醇浓度为40%；
②沉淀24小时后去除上清液，收集硫酸皮肤素沉淀；
③干燥：将步骤②得到的硫酸皮肤素置于70℃温度条件下干燥12小时，取得固体，即得到硫酸皮肤素；
④按乙醇与洗脱液B的体积比为2.5：1加入乙醇，然后用塑料棒搅匀直至出现颗粒为止，此时乙醇浓度为40%；
⑤沉淀24小时后去除上清液，收集肝素钠沉淀；
⑥干燥：将步骤②得到的肝素钠置于70℃温度条件下干燥12小时，取得固体，即得到肝素钠。
Claims (2)
1.一种联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺，其特征在于，该制备工艺包括以下步骤：以小肠粘膜液为原料，经过酶解、树脂吸附后以不同浓度的氯化钠溶液洗脱，低浓度氯化钠溶液洗脱出硫酸皮肤素，高浓度氯化钠溶液洗脱出肝素钠，再分别用乙醇沉淀干燥得到硫酸皮肤素和肝素钠。
2.根据权利要求1所述的联产肝素钠和硫酸皮肤素的工艺，其特征在于：该制备工艺包括以下步骤：
（1）酶解：先在小肠粘膜液中加入2709碱性蛋白酶，加酶量为每1L小肠粘膜液加酶1g，然后用调整混合物的PH 为8.5 ～ 9，升温至54 ～ 56℃，保温4小时，然后再升温至85 ～ 90℃，保温15-20分钟，用100目滤布过滤得到酶解液；
（2）吸附，过滤：将步骤（2）所得的酶解液降温至55～57℃后加入树脂，搅拌吸附8小时，用80目尼龙布过滤袋将树脂滤出；
（3）洗涤、洗脱：
①将盛有树脂的尼龙布袋放入清水中清洗，直至无杂物为止；
②将收集在尼龙布袋中的树脂用浓度为2%-5%的氯化钠溶液洗涤30～40分钟，洗去蛋白等杂质；
③然后用浓度为5%～10%的氯化钠溶液两次洗脱树脂，收集洗脱液A；
④最后用浓度为20%-24%的氯化钠溶液三次洗脱树脂，收集洗脱液B；
（4）沉淀、干燥：
①按乙醇与洗脱液A的体积比为2～2.5：1加入乙醇，然后用塑料棒搅匀直至出现颗粒为止，此时乙醇浓度为30～40%；
②沉淀24小时后去除上清液，收集硫酸皮肤素沉淀；
③干燥：将步骤②得到的硫酸皮肤素置于65～70℃温度条件下干燥10～12小时，取得固体，即得到硫酸皮肤素；
④按乙醇与洗脱液B的体积比为2～2.5：1加入乙醇，然后用塑料棒搅匀直至出现颗粒为止，此时乙醇浓度为30～40%；
⑤沉淀24小时后去除上清液，收集肝素钠沉淀；
⑥干燥：将步骤②得到的肝素钠置于65～70℃温度条件下干燥10～12小时，取得固体，即得到肝素钠。
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