CN104101678A - 一种复方α-酮酸片中五种钙盐的含量测定方法 - Google Patents
一种复方α-酮酸片中五种钙盐的含量测定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱,检测波长为205~220nm,流动相由A相和B相组成,流动相A是pH2.0~4.0的水溶液,流动相B是乙腈,流动相A/流动相B(体积比)为85:15~99:1,A相的pH通过酸或缓冲盐调节。
Description
技术领域:
本发明涉及复方α-酮酸片中α-酮缬氨酸钙、α-酮异亮氨酸钙、α-酮亮氨酸钙、α-羟蛋氨酸钙以及α-酮苯丙氨酸钙含量的测定方法。
背景技术:
复方α-酮酸片是1996年由德国费森尤斯卡比公司首次在德国上市,临床上用于慢性肾衰患者的营养,预防和治疗因慢性肾功能不全而造成蛋白质代谢失调引起的损害。本品为含有五种钙盐(α-酮缬氨酸钙、α-酮异亮氨酸钙、α-酮亮氨酸钙、α-羟蛋氨酸钙以及α-酮苯丙氨酸钙)和5种人体必需氨基酸(L-赖氨酸醋酸盐、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-组氨酸、L-酪氨酸)的复方制剂。
关于复方α-酮酸片中五种钙盐的含量测定方法的文献报道不多。陈菊在《中国药师》,2010,第13卷,第10期报道了采用氢型强阳离子交换色谱柱对复方α-酮酸片中的5种钙盐进行色谱分离,进而进行含量测定,基于的色谱分离原理是离子排斥。然而这种方法的弊端是,对色谱柱的要求比较苛刻,不同的氢型强阳离子交换色谱柱对分离效果影响较大,即方法的耐用性较差,在这篇文献中比较了菲罗门Rezex ROA-organicAcid(H+8%)(300mm*7.8mm) 和Varian METACARB 87H(300mm*7.8mm)氢型阳离子交换色谱柱对α-酮酸片中酮代氨基酸钙和羟代氨基酸钙的分离效果。结果表明,酮苯氨酸钙在Rezex ROA-organicAcid(H+8%)(300mm*7.8mm)柱中色谱峰严重拖尾,影响定量的准确性,而在Varian METACARB 87H(300mm*7.8mm)柱中分离效果好,定量准确。另外,杨丹等在《沈阳药科大学学报》,2011,第28卷,第4期报道了采用反相离子对色谱方法测定酮亮氨酸钙的含量和有关物质,然而此文献也指出离子对色谱存在色谱体系不容易平衡,色谱重现性差的固有缺点。
发明内容:
为克服现有技术中的上述缺陷,本专利应用目前使用最为普遍的反相C18柱为分离色谱柱,采用反相色谱的流动相体系,实现了复方α-酮酸片中五种氨基酸钙盐的含量测定,方法简便,准确,重复性好。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱,检测波长为205~220nm,流动相由A相和B相组成,流动相A是pH2.0~4.0的水溶液,流动相B是乙腈,流动相A/流动相B(体积比)为85:15~99:1,A相的pH通过酸或缓冲盐调节。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:优选梯度洗脱,采用梯度洗脱程序如下:
时间 / 分钟 | 流动相A/流动相B(体积比) |
0 | a |
T1 | a |
T2 | b |
T3 | b |
T4 | a |
T5 | a |
a=89:11~94:6; b=94:6~98:2, b>a, T1=3~6, T2= T1+0.5~2, T3>35,T4>T3,T5>T4。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:采用梯度洗脱程序如下:
时间 / 分钟 | 流动相A/流动相B(体积比) |
0 | a |
T1 | a |
T2 | b |
T3 | b |
T4 | a |
T5 | a |
a=90:10~93:7; b=95:5~97:3,b>a, T1=3~5, T2= T1+0.5~2, T3≥35,T4>T3+2,T5>T4+8。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:流动相A是pH2.0~4.0的磷酸缓冲体系,醋酸缓冲体系或柠檬酸缓冲体系。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:流动相A是pH2.2~3.0的磷酸缓冲体系,醋酸缓冲体系或柠檬酸缓冲体系。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:流动相A是pH2.2~3.0的磷酸缓冲体系。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:流动相A是pH2.5的 KH2PO4—H3PO4缓冲溶液。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:流动相A优选0.05mol/L pH2.0~4.0的磷酸缓冲体系,醋酸缓冲体系或柠檬酸缓冲体系。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:所用的检测波长优选210nm。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:所用的检测温度为25℃ ~ 40℃。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:色谱条件如下:检测波长为210nm;检测温度为30℃; 采用梯度洗脱程序如下:A相:pH2.5±0.05的KH2PO4—H3PO4缓冲溶液B相:乙腈
时间 / 分钟 | 流动相A/流动相B(体积比) |
0 | 93:7 |
5 | 93:7 |
5.5 | 96:4 |
45 | 96:4 |
50 | 93:7 |
70 | 93:7 |
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:检测波长为210nm;检测温度为30℃;流动相A是pH 2.0±0.05的 H3PO4水溶液,流动相B是乙腈,流动相A/流动相B(体积比)为98:2。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:检测波长为210nm;检测温度为30℃; 流动相A是pH 2.5±0.05 KH2PO4—H3PO4水溶液,流动相B是乙腈,流动相A/流动相B(体积比)为94:6。
本发明提供一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:色谱条件如下:检测波长为210nm;检测温度为30℃; 采用梯度洗脱程序如下:A相:pH2.5±0.05的KH2PO4—H3PO4缓冲溶液B相:乙腈;梯度条件:
时间(min) | 流动相A/流动相B(体积比) |
0 | 90:10 |
3.5 | 90:10 |
4 | 95:5 |
40 | 95:5 |
60 | 90:10 |
70 | 90:10 |
本发明通过外标法计算样品中五种钙盐的含量。
本发明设定的pH,使用经pH4.00和6.86两点进行校正过的pH计测定,可能受仪器等多种因素影响,所以上述流动相A的pH值可以在现有值 ±0.05内变化。
本发明提到分析方法中测试的对照品为对应测试样品精制得到的含量为99.5%以上的标准品或工作对照品。
本发明提到的分析方法,其流动相流速设定为一般技术人员公知的常识。常见的范围一般为0.5ml/min至2.0ml/min之间。
经试验发现温度对该分析方法的影响不大,只是随温度的升高可以缩短所有峰的保留时间,我们选择了常见的温度范围25℃~40℃。
经试验发现缓冲溶液的浓度对该分析方法的影响不大,但是缓冲溶液的浓度越高,会影响色谱柱的寿命,所以我们优选0.05mol/L的磷酸缓冲体系,醋酸缓冲体系或柠檬酸缓冲体系。
按照国家食品药品监督管理局颁布的“化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则”(【H】GPH5-1)对上述分析条件进行方法学验证,证明该方法能满足酮酸片含量的测定。
本发明提供的复方α-酮酸片中五种氨基酸钙盐的含量检测的高效液相方法,具有如下优点:
(1)使用普通的十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。
(2)流动相选用的两种介质普通易得,可行性高。
(3)操作过程简单方便,准确,重复性好。
(4)适用性好,可以同时检测复方α-酮酸片中五种钙盐的含量。
附图说明:
图1:实施例1-1所得液相色谱图
图2:实施例1-2所得液相色谱图
图3:实施例2-1所得液相色谱图
图4:实施例2-2所得液相色谱图
具体实施方式
下面将通过实施例对本发明作进一步的描述,这些描述并不是对本发明内容作进一步的限定。相关技术人员应理解,对本发明的技术特征所作的等同替换,或相应的改进,仍属于本发明的保护范围之内。
实施例一 等度洗脱法
实施例1-1
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:210 nm
进样量:20.0μl 柱温:30 ℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:H3PO4水溶液(pH 2.0±0.05):乙腈=98:2
操作:
对照品溶液的配制:
取α-酮缬氨酸钙约0.430g,α-酮异亮氨酸钙约0.335g,α-酮亮氨酸钙约0.505g,α-羟蛋氨酸钙约0.295g,α-酮苯丙氨酸钙约0.340 g,以上对照品均按干燥品计算,精密称定,置于100ml量瓶中,加水超声15min使其溶解,定容至刻线,摇匀。精密移取上述溶液5ml置于50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的配制:
取本品20片,精密称定,计算平均片重。将其研磨成粉,精密称量细粉适量(约相当于α-酮缬氨酸钙0.430g),将其置于100ml量瓶中,加水超声15min使主药溶解,定容至刻线,摇匀,过滤;弃去初滤液,精密移取续滤液5ml置于50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
测定方法:
照高效液相色谱法(中国药典2010版二部附录 D)测定。
精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪,记录色谱图;按外标法以峰面积计算,即得含量。
检测结果:如图1所示,有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 9.888 | 99.4 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 15.237 | 101.1 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 24.893 | 98.9 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 30.057 | 98.4 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 39.851 | 99.9 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例1-2
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:210 nm
进样量:20.0μl 柱温:30 ℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:0.2mol/L KH2PO4—H3PO4水溶液(pH 2.5±0.05):乙腈 = 94:6
操作:对照品溶液、供试品溶液的配制以及测定方法:参考实施例1-1。
检测结果:如图2所示,有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 7.241 | 99.5 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 14.459 | 99.4 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 16.079 | 101.4 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 19.910 | 99.1 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 33.205 | 98.9 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例1-3
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:205 nm
进样量:20.0μl 柱温:40℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:HCl水溶液(pH 4.0±0.05):乙腈=85:15
操作:对照品溶液、供试品溶液的配制以及测定方法:参考实施例1-1。
检测结果:有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 6.3 | 99.8 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 11.555 | 99.7 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 12.853 | 100.5 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 15.875 | 99.3 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 25.466 | 99.0 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例1-4
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:220 nm
进样量:20.0 μl 柱温:25℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:HCl水溶液(pH 3.0±0.05):乙腈=99:1
操作:对照品溶液、供试品溶液的配制以及测定方法:参考实施例1-1。
检测结果:有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 11.441 | 99.7 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 17.237 | 99.6 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 26.125 | 99.8 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 34.214 | 99.4 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 43.556 | 99.5 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例二 梯度洗脱法
实施例2-1
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:210 nm
进样量:20.0 μl 柱温:30 ℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:A相:0.05 mol/L KH2PO4—H3PO4水溶液(pH 2.5±0.05)
B相:乙腈
梯度条件:
时间 / 分钟 | 流动相A/流动相B(体积比) |
0 | 93:7 |
5 | 93:7 |
5.5 | 96:4 |
45 | 96:4 |
50 | 93:7 |
70 | 93:7 |
操作:
对照品溶液的配制:
取α-酮缬氨酸钙约0.430g,α-酮异亮氨酸钙约0.335g,α-酮亮氨酸钙约0.505g,α-羟蛋氨酸钙约0.295g,α-酮苯丙氨酸钙约0.340 g,以上对照品均按干燥品计算,精密称定,置于100ml量瓶中,加水超声15min使其溶解,定容至刻线,摇匀。精密移取上述溶液5ml分别置于50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
供试品溶液的配制:
取本品20片,精密称定,计算平均片重。将其研磨成粉,精密称量细粉适量(约相当于α-酮代缬氨酸钙0.430g),将其置于100ml量瓶中,加水超声15min使主药溶解,定容至刻线,摇匀,过滤;弃去初滤液,精密移取续滤液5ml置于50ml量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀,即得。
测定方法:
照高效液相色谱法(中国药典2010版二部附录 D)测定。
精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μl注入液相色谱仪,记录色谱图;按外标法以峰面积计算,即得含量。
检测结果:如图3所示,有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 6.646 | 101.1 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 14.503 | 99.3 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 16.624 | 98.9 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 21.927 | 98.5 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 40.756 | 98.8 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例2-2
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:210 nm
进样量:20.0μl 柱温:30 ℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:A相:0.05 mol/L KH2PO4—H3PO4水溶液(pH 2.5±0.05)
B相:乙腈
梯度条件:
时间(min) | 流动相A/流动相B(体积比) |
0 | 90:10 |
3.5 | 90:10 |
4 | 95:5 |
40 | 95:5 |
60 | 90:10 |
70 | 90:10 |
操作:对照品溶液、供试品溶液的配制以及测定方法:参考实施例2-1。
检测结果:如图4所示,有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 5.595 | 100.2 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 10.493 | 99.8 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 12.628 | 99.9 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 17.467 | 99.5 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 33.276 | 99.5 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例2-3
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:220 nm
进样量:20.0μl 柱温:40 ℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:A相:0.05mol/L CH3COONa—CH3COOH (pH 3.0±0.05)
B相:乙腈
梯度条件:
时间(min) | 流动相A/流动相B(体积比) |
0 | 90:10 |
5 | 90:10 |
5.5 | 97:3 |
40 | 97:3 |
60 | 90:10 |
70 | 90:10 |
操作:对照品溶液、供试品溶液的配制以及测定方法:参考实施例2-1。
检测结果:有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 5.574 | 99.6 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 14.623 | 100.3 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 16.750 | 98.8 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 22.195 | 98.5 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 41.524 | 99.4 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例2-4
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:205 nm
进样量:20.0 μl 柱温:30 ℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:A相:磷酸水溶液(pH 2.0±0.05)
B相:乙腈
测定含量的梯度条件:
操作:对照品溶液、供试品溶液的配制以及测定方法:参考实施例2-1。
检测结果:有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 6.909 | 99.4 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 16.821 | 98.8 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 19.931 | 99.1 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 25.205 | 99.0 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 45.003 | 99.3 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
实施例2-5
色谱条件:
高效液相色谱仪:waters 2469
检测器:紫外检测器 检测波长:205 nm
进样量:20.0 μl 柱温:25 ℃
流速:1.0 ml/min 色谱柱:Agilent C18 ,5μm,4.6×250 mm
分析天平:十万分之一, Sartorius BS21S
流动相:A相:0.1 mol/L柠檬酸—Na2HPO4水溶液 (pH 4.0±0.05)
B相:乙腈
测定含量的梯度条件:
操作:对照品溶液、供试品溶液的配制以及测定方法:参考实施例2-1。
检测结果:有关数据列于下表。
序号 | 名称 | 保留时间(分钟) | 计算的含量(%) |
1 | 酮缬氨酸钙 | 5.537 | 99.4 |
2 | 羟蛋氨酸钙 | 10.291 | 98.8 |
3 | 酮异亮氨酸钙 | 12.382 | 99.1 |
4 | 酮亮氨酸钙 | 17.153 | 99.0 |
5 | 酮苯丙氨酸钙 | 33.002 | 99.3 |
相邻峰间的分离度均>1.5。
Claims (10)
1.一种复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的反相色谱柱,检测波长为205~220nm,流动相由A相和B相组成,流动相A相是pH2.0~4.0的水溶液,流动相B相是乙腈,流动相A与流动相B的体积比为85:15~99:1,A相的pH通过酸或缓冲盐调节。
2.如权利要求1所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:梯度洗脱,采用梯度淋洗程序如下:
a=89:11~94:6; b=94:6~98:2, b>a, T1=3~6, T2= T1+0.5~2, T3≥35,T4>T3,T5>T4。
3.如权利要求2所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:采用梯度淋洗程序如下:
a=90:10~93:7; b=95:5~97:3,b>a, T1=3~5, T2= T1+0.5~2, T3>35,T4>T3+2,T5>T4+8。
4.如权利要求1~3所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:流动相A相是pH2.0~4.0的磷酸缓冲体系,醋酸缓冲体系或柠檬酸缓冲体系。
5.如权利要求4所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:所用的检测波长为210nm。
6.如权利要求4所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:所用的检测温度为25℃ ~ 40℃。
7.如权利要求3所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:色谱条件如下:
检测波长为210nm;
检测温度为30℃;
采用梯度淋洗程序如下:
A相:pH2.5±0.05的KH2PO4—H3PO4缓冲溶液
B相:乙腈
。
8.如权利要求1所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:
检测波长为210nm;
检测温度为30℃;
流动相A是pH 2.0±0.05的 H3PO4水溶液,流动相B是乙腈,流动相A与流动相B的体积比为98:2。
9.如权利要求1所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:
检测波长为210nm;
检测温度为30℃;
流动相A是pH 2.5±0.05 KH2PO4—H3PO4水溶液,流动相B是乙腈,流动相A与流动相B的体积比为94:6。
10. 如权利要求3所述的复方α-酮酸片中四种酮代氨基酸钙盐和羟蛋氨酸钙含量的测定方法,其特征是:色谱条件如下:
检测波长为210nm;
检测温度为30℃;
采用梯度淋洗程序如下:
A相:pH2.5±0.05的KH2PO4—H3PO4缓冲溶液
B相:乙腈
梯度条件:
。
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