CN104083767B - 一种疫苗保护剂预混辅料及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种疫苗保护剂预混辅料及其制备方法，它包括如下重量配比的成分：海藻糖：50‑100份、蔗糖：5‑50份、乳糖：5‑40份、氯化钠：8.5份、十二水合磷酸氢二钠：3.5份、二水合磷酸二氢钠：0.25份。该预混辅料不含明胶和人血白蛋白，组成成分之间不会发生相互反应，使用方便，可直接用于疫苗的制备，在疫苗制备和贮存过程中能够有效起到保护作用。

Description

一种疫苗保护剂预混辅料及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种疫苗保护剂预混辅料及其制备方法，属于疫苗生产工艺技术生物医药领域。

背景技术

为了便于活菌疫苗的运输和储存，通常将其制成冻干制剂。为了确保活菌疫苗在冻干过程以及在运输和储存过程中的活菌率，现有技术在制备活菌疫苗的过程中一般会使用冻干保护剂。传统的冻干保护剂配方中往往含有明胶或人血白蛋白，但是使用明胶和人血白蛋白有一定的安全隐患，也受到一定的限制。

明胶或明胶的衍生物能直接引起被接种者的***反应。明胶既可以引起细胞介导免疫反应，也可以引起非细胞介导免疫反应；另外，明胶中细菌内毒素含量很高，可导致人体产生发热反应。国家药典会病毒类制品专业委员会也在2007 年7 月17 日至7 月19 日北京会议纪要中明确要求，“作为稳定剂成分的明胶注射到人体后可发生过敏反应，生产企业应进行取代明胶成分的相关研究工作，以进一步提高制品的安全性”。而且明胶批间质量差异较大，不利于制得均一稳定的产品。人血白蛋白虽然源于检测合格的健康人血，但是受到现在检测技术水平的限制，可影响某些病原体的检测如肝炎方面等，由此可能对疫苗造成隐性污染，最终对被接种者造成潜在的危害。人血白蛋白来源于健康人血，其来源有限。因此必须开发无明胶、人血白蛋白的冻干保护剂。

目前，已有报道利用其它合适的物质替代明胶和人血白蛋白作为疫苗的保护剂，如专利CN 102228687B报道了一种不含明胶、不含人血白蛋白的冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗保护剂及其制备方法。该保护剂含有海藻糖、右旋糖酐40、L- 半胱氨酸、精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、氯化镁、硫酸镁、山梨醇、甘露醇、三羟甲基氨基甲烷。专利CN 102921002 A公开了一种乙型脑炎减毒活疫苗冻干保护剂，该冻干保护剂以Earl’s 液为溶剂，各成分的浓度为：蔗糖6 - 28g/100ml、海藻糖3 -12g/100ml、右旋糖酐5 - 24g/100ml。

以上报道虽然解决了明胶和人血白蛋白引起的问题，但是在制备疫苗的过程中，需临时选择各种成分配置稳定剂，而且要花费大量的时间研究所配置的稳定剂对活菌疫苗的稳定性能，以及各添加成分之间是否会发生相互作用，这不利于新型疫苗的研制和快速投产。

在片剂制备领域，近年来出现了一种新型的药用辅料—预混辅料，它并不是对几种单一的药用辅料简单的相互混合，而是通过大量的试验，将多种具备特定功能的单一辅料通过优选配比以及特殊工艺，制成一种整体发挥要求性能的辅料。预混辅料仅进行物理形态的改变，并未产生化学性质的变化。因此，预混辅料保留原来各个成分的辅料性质，是一种多功能的混合体。

目前，未见疫苗保护剂预混辅料的相关报道。本发明提供了一种疫苗保护剂预混辅料及其制备方法，该预混辅料不含明胶和人血白蛋白，组成成分之间不会发生相互反应，实际使用方便，而且该预混辅料较各辅料单一混合具有更优的冻干保护效果。

发明内容

本发明提供了一种疫苗保护剂预混辅料及其制备方法，该预混辅料组成简单，使用方便，可直接用于疫苗的制备，在疫苗制备和贮存过程中能够有效起到保护作用。

本发明的有益之处是通过以下步骤实现的：

一种疫苗保护剂预混辅料包括如下重量配比的成分：海藻糖：50-100份、蔗糖：5-50份、乳糖：5-40份、氯化钠：8.5份、十二水合磷酸氢二钠：3.5份、二水合磷酸二氢钠：0.25份。

一种疫苗保护剂预混辅料的制备方法，包括以下步骤制成：

a、糖液制备：分别称取海藻糖、蔗糖、乳糖，加入纯化水溶解，再加入活性炭，搅拌30min，再通过0.22μm的过滤膜过滤，滤液再经装有中空纤维超滤膜的超滤器超滤；

步骤a海藻糖、蔗糖、乳糖的添加量为：海藻糖50-100份、蔗糖5-50份、乳糖5-40份。

b、盐溶液制备：分别称取氯化钠、十二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠，加入纯化水溶解，再加入活性炭，搅拌30min，再通过0.22μm的过滤膜过滤，滤液再经装有中空纤维超滤膜的超滤器超滤；

步骤b氯化钠、十二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠的添加量为：氯化钠8.5份、十二水合磷酸氢二钠3.5份、二水合磷酸二氢钠0.25份。

步骤a和步骤b的目的是除去各原料有色杂质以及内毒素，其中所述的中空纤维超滤膜的分子截留范围为5000〜10000；所述的活性炭，其用量一般为溶液中含有成分质量的0.5%。

c、将步骤a所得糖液和步骤b所得盐溶液分别在真空压为-0.085Mpa，温度为50℃的条件下，浓缩结晶得混合糖晶和混合盐。

将混合糖晶是3中糖共结晶生成，混合盐是三种盐共结晶生成，共结晶的有益之处在于使各单一物料能够成分混合。

d、将步骤c所得的混合盐加纯化水溶解后，再加入步骤c所得的混合糖晶，溶解后经喷雾干燥既得。

步骤d中混合盐和混合糖分的添加质量比为1:4.5~8。

按上述组成和方法制得的疫苗保护剂预混辅料在使用时，只需加入预混辅料8-14倍重量的注射用水，再加入一定量的疫苗，即可制成相应的疫苗制剂。

本发明提供了一种疫苗保护剂预混辅料及其制备方法，其特点在于：

（1）本发明提供的疫苗保护剂预混辅料包含明胶、人血白蛋白成分，而且预混辅料中各组成成分均无毒，使用更加安全；

（2）预混辅料可直接用于制备疫苗，疫苗生产企业和研制单位使用更加方便。

（3）本发明提供的预混辅料经共结晶、喷雾干燥制得，使用时较单一辅料简单混合具有更优的效果。

具体实施实例

以下结合数个实施例进一步说明本发明以及创新之处。应当理解，所列出的实施例仅用于具体说明本发明而非对本发明的进一步限定，本领域技术人员在充分理解之后可以对实施例进行适当调整，这些仍然在本发明的保护范围之内。

实施例 1

糖液准备：分别称取海藻糖60g、蔗糖10g、乳糖10g，加入200ml纯化水溶解，再加入活性炭0.4g，搅拌30min，再通过0.22μm的过滤膜过滤，滤液再经装有分子截留范围为5000-10000d的中空纤维超滤膜的超滤器超滤。

盐溶液制备：分别称取氯化钠8.5g、十二水合磷酸氢二钠3.5g、二水合磷酸二氢钠0.25g，加入50ml纯化水溶解，再加入活性炭0.1g，搅拌30min，再通过0.22μm的过滤膜过滤，滤液再经装有分子截留范围为5000〜10000d的中空纤维超滤膜的超滤器超滤。

将以上所得糖液和所得盐溶液分别在真空压为-0.085Mpa，温度为50℃的条件下，浓缩结晶得混合糖晶和混合盐。

将以上所得的混合盐10g加50ml纯化水溶解后，再加入所得的混合糖晶70g，加适量水完全溶解后，经过喷雾装置进行雾化，雾化装置可以采用压力式喷雾器、气流式喷雾器和离心式喷雾器。雾化后的料液再干燥塔中进行干燥，干燥温度为60-80℃，干燥后的粉末收集到专用容器中既得预混辅料。

实施例 2

取实施例1疫苗保护剂预混辅料10g，加入100ml注射用水，0.1um 过滤除菌，4℃备用。再按每人份装量0.6ml，内含病毒量7.00-7.38 lgCCID₅₀/ml，加入甲型肝炎病毒活病毒原液，搅拌混匀后所得到疫苗混合物于-20℃- -50℃的温度预冷3-5 小时，冻干箱搁板温度-35℃- -50℃，开真空、升华，二次冻干箱搁板温度15℃- 30℃，即制成冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗。

实施例 3

取与实施例1疫苗保护剂预混辅料等组成等量的各辅料混合后，加入100ml注射用水，按实施例2的方法制得冷冻干燥甲型肝炎减毒活疫苗。

实施例 4

按本发明方法冷冻干燥制成的冻干甲型肝炎减毒活疫苗，感染性滴度检测证明，冷冻干燥后与冻前相比较，疫苗的病毒感染性滴度没有明显下降，预混辅料配方制得疫苗的病毒感染性滴度下降幅度明显低于原含明胶的生产配方，表明本发明提供的疫苗保护剂在冻干过程中的保护效果较好。同时，预混辅料病毒感染性滴度下降幅度明显低于单一辅料简单混合，对比结果表明本发明提供的预混辅料使用时较单一辅料简单混合具有更优的效果。见表1。

表1. 实施例2、3与原含明胶的生产配方的比较

实施例 5

实施例2、3与含有明胶（传统）配方的疫苗，和灭菌注射用水，测内毒素含量进行比较, 从检测结果可见，实施例2的内毒素含量明显下降，其检测值与灭菌注射用水相同。同时，预混辅料内毒素检测结果明显低于单一辅料简单混合，对比结果表明本发明提供的预混辅料使用时较单一辅料简单混合具有更优的效果。见表2。

表2. 实施例2、3与原含明胶的生产配方内毒素含量的比较

实施例 6

实施例2、3制得的疫苗，储存2-8℃冰箱内，定期随机取样测定疫苗感染性滴度，结果证明预混辅料按上述制备方法，冷冻干燥制成冻干甲型肝炎活疫苗，2-8℃存放12个月后，疫苗的病毒感染性度没有明显变化，表明疫苗的稳定性良好。同时，预混辅料病毒感染性滴度下降幅度明显低于单一辅料简单混合，对比结果表明本发明提供的预混辅料使用时较单一辅料简单混合具有更优的效果。见表3。

表3. 实施例2、3制得的冻干甲肝疫苗2-8℃保存的稳定性

实施例 7

取与实施例1疫苗保护剂预混辅料等组成等量的各辅料混合后，加入100ml注射用水，按实施例2的方法制得冷冻干燥水痘减毒活疫苗。

实施例 8

按实施例2的方法制得冷冻干燥水痘减毒活疫苗。

实施例 9

实施例7、8制得的疫苗，储存2-8℃冰箱内，定期随机取样测定疫苗感染性滴度，结果证明预混辅料按上述制备方法，冷冻干燥制成冻干甲型肝炎活疫苗，2-8℃存放12个月后，疫苗的病毒感染性度没有明显变化，表明疫苗的稳定性良好。同时，预混辅料病毒感染性滴度下降幅度明显低于单一辅料简单混合，对比结果表明本发明提供的预混辅料使用时较单一辅料简单混合具有更优的效果。见表3。

表4. 实施例7制得的水痘减毒疫苗2-8℃保存的稳定性

Claims (3)

1.一种疫苗保护剂预混辅料的制备方法，其特征在于，它包括以下步骤制成：

a、糖液制备：分别称取海藻糖、蔗糖、乳糖，加入纯化水溶解，再加入活性炭，搅拌30min，再通过0.22μm的过滤膜过滤，滤液再经装有中空纤维超滤膜的超滤器超滤；

b、盐溶液制备：分别称取氯化钠、十二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠，加入纯化水溶解，再加入活性炭，搅拌30min，再通过0.22μm的过滤膜过滤，滤液再经装有中空纤维超滤膜的超滤器超滤；

c、将步骤a所得糖液和步骤b所得盐溶液分别在真空压为-0.085Mpa，温度为50℃的条件下，浓缩结晶得混合糖晶和混合盐；

d、将步骤c所得的混合盐加纯化水溶解后，再加入步骤c所得的混合糖晶，溶解后经喷雾干燥即得；

所述步骤a海藻糖、蔗糖、乳糖的添加量为：海藻糖50-100份、蔗糖5-50份、乳糖5-40份；所述步骤b氯化钠、十二水合磷酸氢二钠、二水合磷酸二氢钠的添加量为：氯化钠8.5份、十二水合磷酸氢二钠3.5份、二水合磷酸二氢钠0.25份。

2.根据权利要求1所述的一种疫苗保护剂预混辅料的制备方法，其特征在于，步骤a和步骤b所述的中空纤维超滤膜的分子截留范围为5000～10000。

3.根据权利要求1所述的一种疫苗保护剂预混辅料的制备方法，其特征在于，步骤d中混合盐和混合糖晶的添加质量比为1:4.5～8，喷雾干燥温度为60-80℃。