CN104080467A

CN104080467A - 整联蛋白受体拮抗剂及其使用方法

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Publication number: CN104080467A
Application number: CN201280034143.3A
Authority: CN
Inventors: M.J.麦克尔; J.Y.帕克; H.L.卡拉乔齐安; V.H.卡拉乔齐安
Original assignee: Allegro Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Allegro Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2011-05-09
Filing date: 2012-05-09
Publication date: 2014-10-01
Anticipated expiration: 2032-05-09
Also published as: JP2018165286A; US20130129621A1; AU2018264033B2; KR102019970B1; CN104080467B; AU2018264033A1; ZA201308325B; JP2020196725A; MX2013012953A; IL229299A0; WO2012154894A3; US10590166B2; CA2835214C; AU2020250268A1; BR112013028914B1; RU2721907C2; WO2012154894A2; AU2017204193A1; KR20190107147A; BR112013028914A2

Abstract

本发明公开了包括R-G-磺基丙氨酸(即R-G-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH或Arg-Gly-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH)和其衍生物(包括药学上可接受的盐、水合物、立体异构体、多聚体、环状形式、线性形式、药物缀合物、前药及其衍生物)的化合物。还公开了制备和使用这种化合物的方法，包括在人或动物受试者中抑制整联蛋白包括，但不必限于α₅β₁-整联蛋白、α_vβ₃-整联蛋白和α_vβ₅-整联蛋白，抑制细胞粘附到RGD结合位点上，预防或治疗病毒性感染或其它微生物感染、抑制肿瘤血管生成、视网膜组织或其它组织或将其它诊断剂或治疗剂递送到RGD结合位点的方法。

Description

整联蛋白受体拮抗剂及其使用方法

相关申请

本申请要求2011年5月9日提交的美国临时专利申请顺序号61/484,194、2011年5月16日提交的美国临时专利申请顺序号61/486,725和2012年5月4日提交的美国临时专利申请顺序号61/643,118的每一篇的优先权，每一篇这样的临时专利申请的完整公开内容通过引用明确结合到本文中。此外，本申请是a) 2010年11月10日提交的同时待审的PCT 国际专利申请号PCT/US2010/056227和 b) 2010年11月10日提交的美国专利申请顺序号12/943,900 (此两篇专利申请要求2009年11月10日提交的美国临时专利申请顺序号61/259,748的优先权)的部分继续申请。前述专利申请的每一篇的完整公开内容通过引用明确结合到本文中。

发明领域

本发明总的来说涉及化学和医学领域，且更具体地讲涉及整联蛋白受体拮抗剂及其使用方法。

发明背景

RGD三肽序列存在于许多蛋白质中，其中其在细胞粘附中发挥作用。其中存在RGD三肽序列的蛋白质的实例包括胶原、纤连蛋白、玻连蛋白、冯维勒布兰德因子(VWF)、某些解联蛋白和某些网柄菌凝素。

整联蛋白是异二聚体细胞表面受体，其通过与具有暴露的RGD序列的配体结合而介导细胞与胞外基质(ECM)间的粘附。认为正常的整联蛋白-RGD结合在参与细胞生长、迁移和存活的基因表达中起作用。这种细胞生长、迁移和存活的错误调节可导致许多疾病状态，包括血栓形成、炎症和癌症。因此，作为细胞粘附蛋白潜在模拟物研究了RGD肽，并针对其与整联蛋白结合的能力、针对治疗目的(例如抑制细胞粘着、细胞迁移、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、血管生成、肿瘤发生)、针对抑制微生物进入细胞、针对以其多聚体形式作为内部放射治疗药以及癌症成像剂的用途及其携带抗癌药物的能力进行了研究。

在眼中，整联蛋白影响包括眼发育、细胞迁移、愈合在内的许多过程和一些病理过程。整联蛋白还可在眼组织中介导炎症和血栓形成。另据报道，在动物模型中，玻璃体内注射RGD肽引起玻璃体视网膜后部脱离，因此，可用于治疗某些视网膜病症和/或在玻璃体切除术中促进玻璃体的摘除。参见Olivera，L.B.等，RGD Peptide-Assisted Vitrectomy to Facilitate Induction of a Posterior Vitreous Detachment: a New Principle in Pharmacological Vitreolysis (有利于诱导玻璃体后部脱离的RGD肽辅助的玻璃体切除术：药理学玻璃体溶解的新原理)；Current Eye Research (8):333-40 (2002年12月25日)。

也已知整联蛋白被各种包膜病毒和非包膜病毒以及感染的宿主细胞利用。Schornberg, Kathryn L.; α₅β₁-整联蛋白通过调节内体组织蛋白酶控制埃博拉病毒的进入(α ₅ β ₁ -Integrin Controls Ebolavirus Entry by Regulating Endosomal Cathespins); Proc. Nat. Acad. Sci. USA; Vol. 106, No. 19, pp. 8003-8008 (2009)

发明概述

本发明提供包括R-G-磺基丙氨酸(即R-G-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH或Arg-Gly-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH)及其衍生物(包括药学上可接受的盐、水合物、立体异构体、多聚体、环状形式、线性形式、药物缀合物、前药及其衍生物)的新的化合物。

本发明还提供用于人或动物受试者的整联蛋白受体的治疗性抑制或预防性抑制作用的组合物和方法。这样的整联蛋白受体抑制作用可在人或动物受试者中通过将有效量的包含R-G-磺基丙氨酸肽或其衍生物(包括药学上可接受的盐、水合物、立体异构体、多聚体、环状形式、线性形式、药物缀合物、前药及其衍生物)的组合物给予受试者而用于治疗或预防肿瘤或其它组织(例如，眼睛的视网膜)的血管再生或血管形成，治疗或预防病毒性疾病，阻止各种病毒性紊乱包括糖尿病性视网膜病和其它涉及不需要的新血管形成的病症，以预防或治疗性抑制细胞粘附至RGD结合位点或将其它诊断剂或治疗剂递送到RGD结合位点。本发明的R-G-磺基丙氨酸肽的具体实例包括Arg-Gly-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH的线性形式(在本文称为化合物 1的实例)和Arg-Gly-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH)的环状形式(在本文称为化合物 2的实例)。

本发明的R-G-磺基丙氨酸衍生物的通式包括但不限于具有下列通式I-VII的化合物：

通式 I ：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H，Y = OH或NH₂。

通式 II ：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H。

通式 III ：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H，其中Z选自：H或SO₃H。

通式 IV ：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H；Y选自OH或NH₂。

通式 V ：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H。

通式 VI ：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H。

通式 VII ：

X₁-R-G-磺基丙氨酸-X

其中X和X₁选自：环状或线性的-Phe-Val-Ala、-Phe-Leu-Ala、-Phe-Val-Gly、-Phe-Leu-Gly、-Phe-Pro-Gly、-Phe-Pro-Ala、-Phe-Val或以下氨基酸的D-异构体或L-异构体的任何组合的任何盐：Arg、Gly、磺基丙氨酸、Phe、Val、Ala、Leu、Pro、Thr。

通式VII的环状形式的实例包括但不必限于：

其中X’选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H；Z选自H或Me；Y选自OH、NH₂。

磺酸是强于相应羧酸的酸类。磺酸基团的这种较高极性导致较强的分子间结合。例如，R-G-磺基丙氨酸(其具有更极化的O-H键)可与整联蛋白结合位点中蛋白质的酰胺基团形成比R-G-天冬氨酸(RGD肽) (其具有相对较不极化的O-H键)强的氢键和/或与整联蛋白结合位点中络合的金属离子具有较强的相互作用。

如本文其它部分更详细描述的一样，合成了通式VII的一个具体实例甘氨酰(Glycinyl)-精氨酰-甘氨酰-磺基丙氨酸-苏氨酰-脯氨酸-COOH (GRG磺基丙氨酸TP；下文称为化合物 1)，并在动物中进行了测试，发现其通过抑制整联蛋白-胞外基质(ECM)相互作用，而有效地诱导视网膜表面上的玻璃体后部脱离(PVD)。另如本文其它部分更详细描述的一样，使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)，在伤口愈合模型中对化合物 1进行了试验，并且表明其与环状-RGD肽抑制(40%)相比，在12小时内抑制细胞粘附达74%。这些研究表明和证实了甘氨酰-精氨酰-甘氨酰-磺基丙氨酸-苏氨酰-脯氨酸-COOH甚至可比RGD肽本身更强地与整联蛋白结合的基本原理。

可呈L-形式或D-形式的RG磺基丙氨酸肽序列是整联蛋白-ECM相互作用的竞争性抑制剂。RG磺基丙氨酸肽序列可以是蛋白酶抗性衍生物或环状衍生物或前药衍生物或与药物递送***有关或为单克隆抗体。

本发明的组合物可用于抑制血管生成，其可用于治疗炎症、伤口愈合、血栓形成、癌症转移和肿瘤。其它有益的应用可发现于眼科学中，包括增殖性或非增殖性糖尿病性视网膜病、玻璃体液化、诱导玻璃体视网膜后部脱离(PVD)、玻璃体视网膜疾病的发病机制，例如特发性黄斑裂孔、黄斑水肿、漂浮物、玻璃体黄斑牵引、年龄相关性黄斑变性、湿性黄斑变性、脉络膜新生血管形成、玻璃体视网膜手术、静脉闭塞的治疗，以及在青光眼手术中防止瘢痕形成。再者，本发明的多聚体组合物和/或放射性标记的组合物可用作检测肿瘤的诊断/成像剂和***的放射治疗剂及因其肿瘤定向性质而用作抗癌药物载体。

掺入RG磺基丙氨酸肽的生物材料还可为细胞长期存活和生长及为应用于组织工程学和再生医学的活组织工程提供合成的粘性微环境。通过其结合整联蛋白粘附受体的性质，RG磺基丙氨酸肽当与生物材料或支架连接时，可提供促粘附信号。基于RG磺基丙氨酸的材料介导细胞粘附、细胞扩散和迁移。此外，整联蛋白介导的细胞粘附促进细胞增殖和存活，并在多细胞结构和组织的装配和组构中起关键作用。

用于治疗黄斑变性的药物像Lucentis和阿瓦斯丁以抑制VEGF为基础，否则VEGF引用新血管生长、血管生成，随之造成黄斑水肿。已知小肽RGD可通过竞争性结合，通过抑制细胞与胞外基质¹附着来诱导细胞凋亡，如Brooks等人的美国专利号6,500,924中所示。

RGD肽结合基序或识别基序可存在于胞外基质的蛋白质中和通过识别RGD粘附表位而连接细胞的胞内细胞骨架与ECM的整联蛋白中。参见例如Foos，R Y., Invest. Opthalmol. Vis. Sci. (1972) 11，801-808。不与ECM附着的细胞通常进行细胞凋亡。

一般而言，成纤维细胞和胞外基质的糖蛋白组分间的相互作用引起主要通过在细胞表面整联蛋白上相互作用的含RGD氨基酸序列介导的严重瘢痕形成。还已知RGD序列在炎症反应和稳态反应期间参与细胞-ECM相互作用(参见Hershkoviz，S. M.等, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., (1994)，35，2585-2591)，且整联蛋白在伤口愈合或病理过程中的细胞迁移中以及在调节炎症和血栓形成中起重要作用。因此，有效的整联蛋白拮抗剂，像RGD肽，作为药理剂如抗炎剂、抗转移剂或抗血栓剂可以是非常有用的(参见Elner，S.G.和Elner，V.M.，IOVS (1996) 37:696-701。文献中还报道了透明质酸的CD44受体通过其对透明质酸的亲和力，以及可能还通过其对其它配体(例如骨桥蛋白、胶原和基质金属蛋白酶(MMP))的亲和力，介导细胞-细胞和细胞-基质相互作用。

与乙酰透明质酸的粘附在细胞迁移、肿瘤生长和进展中起重要作用，还参与淋巴细胞活化、再循环和归巢以及血细胞生成。表达改变或功能障碍引起多种致病表型(参见例如Jiang D., Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. (2007) 23：435-461；以及Knudson，W.等, Matrix Bio. (2002)，21：15-23)。

最近，研究表明CD44和细胞基质组分(例如HA)的相互作用在各种炎性疾病的发生中起重要作用，乙酰透明质酸-CD44相互作用的中断可导致脉络膜新生血管形成的改善(参见Hiroshi Mochimaru等, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2009) 50：4410-4415)。

这些证据表明，细胞-细胞和细胞-ECM相互作用中的粘附分子像RGD肽或CD44在各种病原性疾病的发生中起重要作用，相互作用的抑制中可以是治疗和治愈疾病方面的新的治疗靶标。

合成肽还显示与整联蛋白和生长因子结合。已经发现，含环化五肽的RGD序列抑制玻连蛋白与α_vβ₃整联蛋白(integin)的结合(参见Michael A. Dechantsreiter等, J. Med. Chem. (1999) 42:3033-3040)和玻连蛋白和纤连蛋白两者与α_vβ₃和α_IIbβ₃整联蛋白的结合(参见Roland Haubner等, J. Am. Chem. Soc., (1996)118:7461-7472)。已经表明这种抑制可用于治疗多种无关联的疾病。在仓鼠研究中，与对照动物相比，环状五肽延迟肿瘤的生长和转移(参见M. A. Buerkle等, British J. Cancer (2002) 86：788-795)。五肽还显示降低镰刀形红细胞与血管内皮的结合并改进血液动力学行为(参见Eileen M. Finnegan等, Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., (2007) 293：H1038-H1045)。另一种含RGD序列的环状肽表明与α4β1的强烈结合，α4β1是已知在炎症反应和免疫应答中的白细胞结合中起作用的整联蛋白(参见Pina M. Cardarelli等，J. Biol. Chem. (1994) 269:18668-18673)。研究表明一种合成的硫酸化四肽与VEGF强烈结合(参见Maynard，J.A. Hubbell, Acta Biomaterialia (2005) 1：451-459)。

此外，在一个重要和有用的应用中，二聚RGD肽-药物缀合物显示可用于肿瘤靶向的靶向整联蛋白的药物递送(参见Chen等, J. Med. Chem., (2005) 48(4)：1098-1106)。

在另一个同样重要和有用的应用中，已显示多聚体放射性标记的RGD肽可通过靶向整联蛋白α_vβ₃而用作肿瘤检测的诊断/成像剂，和用作肿瘤特异性靶向和治疗的放射治疗剂(参见Zi-Bo Li等, J. Nucl. Medicine, (2007) 48：1162–1171)。

在眼科学中，在伤口愈合中(特别是在青光眼中)通过成纤维细胞形成瘢痕是主要问题之一。这起因于成纤维细胞和ECM的糖蛋白组分之间的相互作用。ECM糖蛋白的识别通过对粘附表位(例如Arg-Gly-Asp (或RGD)序列)特异的细胞表面整联蛋白而发生。存在于血浆蛋白质(包括纤连蛋白(FN)和玻连蛋白(VN))的若干基质中的RGD序列，参与在炎症反应和稳态反应期间发生的细胞-ECM相互作用。抑制成纤维细胞与ECM的糖蛋白之间的相互作用缓解瘢痕形成(参见Rami Hershkoviz等, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1994) 35：2585-2591)。

玻璃体后皮质的胶原原纤维粘附至玻璃体视网膜界面，准确说是视网膜表面的内界层(inner limiting lamina)上(参见Sebag J.，Eye (1992)，6：541-552)。沿主要的视网膜血管并以表面方式，在玻璃体基底、视神经盘上与整个后极的粘附在以下玻璃体视网膜疾病的发病机制中起重要作用：例如特发性黄斑裂孔、玻璃体黄斑牵引、增殖性糖尿病性视网膜病等(Akiba J. Quiroz M.A.等, Ophthalmol. (1990) 97，1619-1655)。

血管生成抑制为糖尿病性视网膜病和黄斑变性显示了早期希望，所述两种病症均由眼血管增生引起。在这些病症中，血管干扰眼中的正常结构，或者它们阻断光线达到眼后。新血管本身就是主要病理，终止血管生长可防止失明。因此，血管抑制(angioinhibition)不仅可导致治疗这些病症；它还可导致治愈。此外，已假定玻璃体与视网膜相分离可减轻黄斑牵引，降低了黄斑裂孔形成的风险。因此，通过抑制纤连蛋白和层粘连蛋白与玻璃体视网膜界面上的整联蛋白结合而引起的玻璃体后部脱离，可在患有糖尿病性视网膜病和视网膜静脉闭塞的眼中防止视网膜新血管形成(参见Akiba J. Quiroz MA, Ophthalmol. (1990) 97, 1619-1655; Kelly N.E.等, Arch. Ophthalmol. (1991) 109, 654-659; 以及Kado M等, Am. J. Ophthalmol. (1988) 105: 20-24)。

近年来，玻璃体手术操作大大改进，减轻了玻璃体视网膜牵引并减少视网膜水肿。尽管手术技术和仪器不断改进，但在一些患者中，特别是在糖尿病性视网膜病和儿科患者中，由于视网膜断裂、视网膜脱离和视网膜神经纤维损伤等并发症所致，仍难以实现玻璃体皮质的无创取出(参见Sebag J., Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. (1987) 225: 89-93；以及Han D.P.等, Arch. Ophthalmol. (1998) 106: 998-1000)等。因此，十分需要选择性切割玻璃体界面而又不损伤视网膜的较少创伤的方法。近年来，文献中出现有关用于分离玻璃体视网膜界面的多种药理剂的报道(参见Trese M.T.，Eye. (2002) 16: 365-368；Gandorfer A.等, Am. J. Ophthalmol. (2002) 133: 156-159；以及Hesse L.等, Eye Res. (2000) 70: 31-39)。在过去，已开发出使用酶例如透明质酸酶(参见Karageozian等人的美国专利号6,863,886)和自体纤溶酶(Sakuma T等，Nippon Ganka Gakkai Zassi (2003) 107：709-718)的药理学玻璃体溶解，以促进胞外基质的消化，并诱导玻璃体后部脱离。然而，邻近组织被所用酶非特异性破坏阻碍了其治疗应用的成功。最近几年来，通过集中于玻璃体视网膜界面的分离，对使用非酶药理剂像脲(参见Nickerson，C.等，载于J. Biomechanics, (2008) 41: 1840-1846和载于Macromol. Symp. (2005): 183-189)和RGD肽(参见Leonardo B. Oliviera等, Curr. Eye Res. (2002) 25: 333-340)的新方法进行了研究。研究表明，RGD肽的合成类似物与ECM蛋白的RGD基序竞争以破坏整联蛋白-ECM相互作用，并且在体外(Williams J.A., Pathol. Bio. (1992) 40: 813-821；Gehlsen K.R.等, J. Cell. Biol. (1988) 106: 925-930；Pierschbacher，M.D.等, J. Biol. CHem., (1987) 262: 17294-17298；以及Zhon L.L.等，IOVS. (1996) 37: 104-113)和在体内松开附着。因此，在兔模型中，玻璃体内注射可溶性RGD肽导致从视网膜表面的可溶性ECM蛋白上释放出RGD-表位，因此有利于非酶促PVD。显然，这些结果表明，玻璃体视网膜界面参与整联蛋白与ECM的RGD基序连接以及玻璃体皮质胶原与内界层(inner limiting lamella，ILL)的粘附。RGD肽及其衍生物在伤口中促进上皮细胞的迁移(参见P.M. Mertz等, J. Burn Care Res. (1996) 17: 199-206)，并且当掺入合成生物材料例如水凝胶(参见MP Lutolf等, Proc. Nat. Acad. Sci. (2003) 100: 5413-5418；以及MP Lutolf等, Nature Biotechnol. (2003) 21: 513-518)、其它聚合物基质(参见Horng-Ban Lin等, J. Biomed. Material. Res. (2004) 28: 329-342)或作为硬基底上的表面膜(D.M. Ferris等，Biomaterials (1999) 20: 2323-2331)时，保持其生物活性。RGD肽还促进上皮或内皮细胞与用肽序列包覆的血管假体(参见K.Walluscheck等, Eur. J. Vascular and Endovascular Surgery (1996) 12: 321-330)和其它人工器官(参见Jeschke，Brigette，Biomaterials (2002) 23: 3455-3463)的粘附增强，并表明支持神经再生长(参见M. Rafiuddin Ahmed等，Brain Res. (2003) 993: 208-216)。假体的生物活性表面可含有合成树脂纤维或聚合物。

附图简述

图1表示3种肽即环状-RGD-肽、RG磺基丙氨酸肽(化合物 1)和RGE肽对伤口愈合动力学的作用。

图2表示RG磺基丙氨酸肽(化合物 1)的HPLC色谱图。

图3表示RG磺基丙氨酸肽(化合物 1)的电喷雾质量色谱图。

图4表示环状-RG磺基丙氨酸肽(化合物 2)的HPLC色谱图。

图5表示环状-RG磺基丙氨酸肽(化合物 2)的电喷雾质量色谱图。

图6是说明本发明化合物的作用机理的示意图。

图7A和图7B是进一步说明本发明的组合物的作用机理的示意图。

图8是表示在CNV小鼠模型中用不同剂量的化合物1和对照品(仅有媒介物)处理14天后的新血管形成的总面积的图。

图9是比较ROP小鼠模型中用不同剂量的化合物1和对照品(仅有媒介物)处理后新血管形成的测量面积的条形图。

图10A至10J是化合物1的人多剂量临床试验结果的图解和图示的表现。

图11A至11C是比较兰尼单抗(ranibizumab)和化合物1单独和组合对产生转基因VEGF-小鼠中视网膜新血管形成的效果的条形图。

发明详述和实施例

本发明提供新的化合物，包括上述通式I-VII的化合物。具体实例包括Arg-Gly-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH的线性形式(在本文称为化合物 1的实例)和Arg-Gly-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH)的环状形式(在本文称为化合物 2的实例)及其衍生物，包括药学上可接受的盐、水合物、立体异构体、多聚体(mutimer)、环状形式、线性形式、多聚体形式、药物缀合物、前药及其衍生物。

化合物 1 和 2 的合成

可进行本领域普通技术人员已知的常规固相肽合成(SPPS；参见R.B. Merrifield，J. Am. Chem. Soc. (1963) 85 (14)：2149-2154)。SPPS因高产量而是合成的优选方法。总的来讲，固相肽合成技术的第一阶段包括聚合物支持体上具有受保护的氨基酸衍生物的肽链装配。该技术的第二阶段是将肽从树脂支持体上切割下来，其中所有侧链保护基被同时切割，得到粗制游离肽。SPPS的普遍原理是偶联-脱保护重复循环的原理。固相连接的肽的游离N端胺与单个N保护的氨基酸单元偶联。然后使该单元脱保护，这就暴露出另一个氨基酸可与之连接的新的N端胺。对于合成、保护和脱保护策略参见Von G. M. Coppola和H. F. Schuster的Asymmetric Synthesis；John Wiley & Sons，New York 1987，对于保护和脱保护策略参见Peter G.M. Wuts和Theodora W. Greene的Greene's Protective Groups in Organic Synthesis，(第2版) J. Wiley & Sons，1991。

固相肽合成的两种主要使用形式—Fmoc (9-芴基甲基氧基羰基；碱不稳定α-氨基保护基)和t-Boc (叔丁基氧基羰基；酸不稳定保护基)，在本发明肽合成中可优选使用Fmoc。各方法包括不同的树脂和氨基酸侧链保护，及随后的切割/脱保护步骤。在从树脂上裂解后，通常通过使用C-18、C-8和C-4等柱的反相HPLC纯化肽。

固相肽合成的一个实例

以下是使用碱不稳定的9-芴基甲基氧基羰基(Fmoc)保护基，在作为固相支持体的Wang树脂上，进行肽合成的合成步骤的概述。

Fmoc脱保护

将0.08 mmol Fmoc-Pro-Wang树脂加载到配备塑料盖的烧结柱中。树脂用2 × 3-ml份的DMF (二甲基甲酰胺)洗涤各1分钟。接下来，加入约3 ml 20%哌啶/DMF，允许Fmoc脱保护持续15分钟。在此期间，将柱轻轻旋转或搅动以确保完全混合。在反应完成后(约15分钟)，使反应柱流干，树脂用DMF (4 × 3ml)再次洗涤。

酰胺键偶联

然后将所需要的Fmoc保护的氨基酸Fmoc-Thr-tBu (3当量；相对于由供应商表明的树脂负载)和DIEA (6当量)/DCM (0.5 M，相对于氨基酸)加入树脂中。使混合物在-20℃下冷却20分钟。接下来，将用于固相肽合成的肽偶联试剂六氟磷酸苯并***-1-基-氧基三吡咯烷 (PyBOP) (3当量)加到反应物中。在-20℃下振荡8小时后，使反应混合物流干，树脂用DCM洗涤(3×)。

在使用20%哌啶/DMF (15分钟)进行Fmoc脱保护和用DMF洗涤(3×)后，将下一个Fmoc保护的氨基酸(3当量；相对于树脂负载)以与上述相同的方式进行PyBop偶联。

裂解

为了得到游离酸形式的肽，使用强酸性条件例如TFA (三氟乙酸)裂解酯键。树脂用2-3 ml三氟乙酸和水95:5的溶液处理。在25分钟时间内轻轻搅动树脂。接下来，使柱流干，小心地将滤液收集到玻璃收集容器中。

化合物 1 (GRG磺基丙氨酸TP)的合成：

化合物 1

步骤1. 树脂加载：预载有脯氨酸的邻氯三苯甲基树脂用作起始原料。

步骤2. 肽装配：使用Fmoc合成装配肽。受保护的氨基酸用PyBOP激活，用20%哌啶/DMF脱去末端Fmoc基团。按其出现的顺序使用下列受保护的氨基酸：

a. Fmoc-Thr-tBu (Fmoc苏氨酸-叔丁酯)

b. Fmoc-磺基丙氨酸-Pfp (Fmoc磺基丙氨酸-五氟苯酯)

c. Fmoc-Gly (Fmoc甘氨酸)

d. Fmoc-Arg-Pbf (N_α-Fmoc-Nω-(2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基)-L-精氨酸)

e. Fmoc-Gly (Fmoc甘氨酸)

步骤3. 从树脂上裂解肽：从固相支持体上裂解所得肽，用85.5% TFA、5%苯酚、2%水、5%苯硫基甲烷和2.5%乙二硫醇的溶液脱去保护基。

步骤4. 纯化：使用高效液相色谱法(HPLC)纯化所得到的RG磺基丙氨酸肽。

如上所述制备的化合物 1的量通过高效液相色谱法分析纯度为>98%面积/面积[HPLC条件：缓冲液A：0.1%三氟乙酸(TFA)/水，缓冲液B：0.1% TFA/乙腈，流动相(MP) A：97%缓冲液A和3%缓冲液B，流动相B：79%缓冲液A和21%缓冲液B，流动相C：50%缓冲液A和50%缓冲液B；有关梯度参见下表1；流速：1.0 mL/分钟；柱：Waters Symmetry® C18，5μ，4.6 × 250 mm；柱温：30℃；检测器：UV@220nm；样品注射体积：20.0μL；样品制备：用1.0 mL流动相A稀释的20 μL样品(约0.5mg/mL)]。相应的HPLC色谱图见图2。此外，根据用于合成肽序列的相应氨基酸的逐步加入，通过电喷雾质谱法测定纯化的化合物 1的分子量为638.3amu (理论质量：637.7 amu)，证实了化合物 1的身份。化合物 1的电喷雾质谱图见图3。

表 1 ：通过 HPLC 检测化合物 1 的泵梯度程序

化合物 2 (环状-RG磺基丙氨酸(CYSTEIC ACIDysteic Acid) fN(CH₃)V)的合成：

化合物 2

步骤 1. 加载树脂：邻氯三苯甲基树脂用作起始原料。将Fmoc-N-甲基-L-Val与树脂连接。

步骤 2. 肽装配：2. Fmoc合成用于肽装配。受保护的氨基酸用PyBOP激活，用20%哌啶/DMF脱去末端Fmoc基团。以其出现的顺序使用下列受保护的氨基酸：

a. Fmoc-Phe (Fmoc-苯丙氨酸)

b. Fmoc-磺基丙氨酸-PfP (Fmoc-磺基丙氨酸五氟苯酯)

c. Fmoc-Gly (Fmoc-甘氨酸)

步骤 3. 从树脂上裂解肽：使用乙酸/TFA/DCM (1:3:3)从固相支持体上裂解肽

步骤 4. 环化和脱保护成所需环状肽：在高稀释度下，使用二苯基磷酰基叠氮化物和碳酸氢钠通过原位活化进行环化。使用85.5%TFA、5%苯酚、2%水、5%苯硫基甲烷、2.5%乙二硫醇使侧链脱保护。

步骤 5. 纯化：HPLC用于纯化。

如上制备的化合物2的量通过高效液相色谱法分析纯度为>99%面积/面积(HPLC条件：流动相A：0.1%三氟乙酸/水，B：0.1% TFA/(80%乙腈加20%水)；20分钟内的梯度26%-36% B；流速：1.0 mL/分钟；柱:Phenomenex C18(2) 4.6×150mm，5μ，100A；检测器：UV@220nm；样品注射体积：100.0μL)。相应的HPLC色谱图见图4。此外，根据用于肽序列合成的相应氨基酸的逐步加入，通过电喷雾质谱法测定纯化的化合物2的分子量为625.3amu (理论质量：625.77amu)，证实了化合物2的身份。化合物2的电喷雾质谱图见图5。

抑制细胞粘附的方法

本发明还提供通过给予受试者有效量的R-G-磺基丙氨酸(即R-G-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH的线性形式或R-G-NH-CH(CH₂-SO₃H)COOH的环状形式)或其衍生物(包括药学上可接受的盐、水合物、立体异构体、多聚体、环状形式、线性形式、药物缀合物、前药及其衍生物)而在人或动物受试者中抑制细胞粘附至RGD结合位点的方法。

申请人发现，本发明的合成RG磺基丙氨酸肽通过竞争性抑制细胞与ECM组分附着而诱导细胞凋亡。因此，本发明的合成RG磺基丙氨酸肽及其衍生物可用作有效的整联蛋白拮抗剂，如针对血管生成、炎症、癌症转移、血栓形成、预防和治疗瘢痕形成的治疗剂以及药理学玻璃体溶解剂。此外，在本发明的一个重要方面，设想使用多聚化和放射性标记的RG磺基丙氨酸肽的α,β整联蛋白的改进靶向法用作检测肿瘤(诊断剂或成像剂)和***的内部放射治疗剂。在另一个重要方面，改进的RG磺基丙氨酸肽缀合物或多聚体RG磺基丙氨酸肽缀合物起药物载体的作用，例如作为有效靶向肿瘤的抗癌药物载体。

如本文其它部分的描述一样，与RDG-肽中的相应羧酸相比，RG磺基丙氨酸肽中的磺酸是较强酸。磺酸基团的这种较高极性导致较强的分子间结合。例如，R-G-磺基丙氨酸(其具有更极化的O-H键)，可与整联蛋白结合位点中蛋白质的氨基酸的酰胺基和/或侧链形成比R-G-天冬氨酸(其具有相对较不极化的O-H键)强的氢键和/或与整联蛋白结合位点中络合的金属离子有较强的相互作用。因此，本发明的新的RG磺基丙氨酸肽及其衍生物提供在整联蛋白受体识别和结合方面优于相应RGD肽的改良的化合物和组合物。

此外，在患有慢性高血糖症伴发IOP升高的糖尿病患者中，特别报道了开角型青光眼与纤连蛋白在小梁网组织中蓄积有关，且认为纤连蛋白过量抑制房水流出(参见Oshitari，T等, Am. J. Ophthalmol. (2007) 143:363-365)。纤连蛋白在小梁网中参与细胞-ECM相互作用表明原发性开角型青光眼(参见Mark S. Filla等, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2002) 43:151-161；以及Cheryl R. Hann等, Ophthalmic Res. (2001) 33：314-324)。另据报道，在影响流出能力方面，巩膜静脉窦的内皮细胞与胞外基质相互作用(参见Cindy K. Bahler等, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2004) 45：2246-2254)。根据房水流出受存在的过量胞外基质组分(例如纤连蛋白)抑制，应用RG磺基丙氨酸肽及其衍生物治疗糖尿病患者的IOP升高可能极有益于糖尿病患者。

优选的RG磺基丙氨酸肽可以是融合多肽、环状或线性多肽、衍生化多肽(包括用/与药物递送***或其它药物(例如抗癌药物)衍生化或缔合或偶联的RG磺基丙氨酸肽)、多聚化RG磺基丙氨酸肽、与整联蛋白的结合位点或其功能片段免疫反应的含有RG磺基丙氨酸序列的单克隆抗体。

含有RG磺基丙氨酸的多肽可具有与天然整联蛋白粘附结合区的氨基酸残基序列相当的序列，所述结合区为例如血纤蛋白原、纤连蛋白、玻连蛋白、冯维勒布兰德因子、层粘连蛋白、血小板反应蛋白等配体中存在的结合区。

本发明的肽序列由具有末端胍基、磺酸基和羧基的3个氨基酸及其与药物递送***偶联和/或缔合的衍生物组成，所述药物递送***包括肽片段、糖蛋白和聚合物基团(例如PEG、Pluronic和其它聚合物基团)以及脂质体和纳米粒。包含所述肽序列以治疗各种病理病症的药物组合物包括可注射剂、凝胶剂、混悬剂、软膏剂、固体剂型和液体剂型。

与细胞粘附基序(例如纤连蛋白、玻连蛋白、层粘连蛋白、血纤蛋白原、血小板反应蛋白和冯维勒布兰德因子)缔合的整联蛋白受体是RG磺基丙氨酸肽及其衍生物的靶表位。已经发现三肽RG磺基丙氨酸为可被细胞结合结构域识别的最小氨基酸序列。该序列还可干扰与整联蛋白无关的免疫功能。因此，发现合成的RG磺基丙氨酸序列模拟RGD细胞结合结构域，且天冬氨酸α-碳的取代提供与靶标整联蛋白更强的结合亲和力。与RDG-肽中的相应羧酸相比，RG磺基丙氨酸-肽中的磺酸是较强的酸。磺酸基团的这种较高极性导致更强的分子间结合。例如R-G-磺基丙氨酸(其具有更极化的O-H键)可与整联蛋白结合位点的氨基酸的酰胺基和/或侧链形成比R-G-天冬氨酸(其具有相对较不极化的O-H键)强的氢键和/或与整联蛋白结合位点中络合的金属离子具有较强的相互作用。

本发明的RG磺基丙氨酸序列的大部分通式如下：

式 A:

其中X= -CH(R₁)-S(=O)₂-Y；

-CH(R₁)-SH；

- CH(R₁)-OZ；

-CH(R₁)S(=O)Y；

-CH(R₁)-O-S(=O)₂-OX₁；和

-CH(R₁)-O-P(=O)₂-OX₁；和

其中Y = OX₁、NH₂；X₁ = -H、C₁-C₆直链烷基、苯基；

R₁ = H、C₁-C₆直链烷基、苯基或SO₃H

Z = H、SO₃H

式B ：

其中X = -CH(R₁)-S(=O)₂-Y；

-CH(R₁)-SH；

- CH(R₁)-OZ；

-CH(R₁)S(=O)Y；

-CH(R₁)-O-S(=O)₂-OX₁；和

-CH(R₁)-O-P(=O)₂-OX₁；和

其中Y = OX₁、NH₂；X₁ = -H、C₁-C₆直链烷基、苯基；

R₁ = H、C₁-C₆直链烷基、苯基或SO₃H

Z = H、SO₃H；和

A₂选自：-Phe-Val-Ala、-Phe-Leu-Ala、-Phe-Val-Gly、-Phe-Leu-Gly、-Phe-Pro-Gly、-Phe-Pro-Ala、-Phe-Val或其盐或N-烷基化衍生物。可以使用Arg、Gly、磺基丙氨酸、Phe、Val、Ala、Leu、Pro、Thr的D-形式或L-形式的任何组合以及上述序列的环状形式。

环状形式的实例包括：

式 C:

其中X’选自：H、C₁–C₆烷基、Ph、SO₃H；Y = OH、NH₂；Z = H、CH₃。

环状形式还包括五肽和七肽，例如通式C的具体化合物即化合物 2 (环状-RG磺基丙氨酸fN(CH₃)V)，表示如下：

化合物 2

式A包括本文其它部分描述的通式I-VI。式B包括本文其它部分描述的通式VII。

式 D:

A₁—Arg—Gly—NH—CH(X)—CO—A₂

其中X = -CH(R₁)-S(=O)₂-Y；

-CH(R₁)-SH；

-CH(R₁)-OZ；

-CH(R₁)S(=O)Y；

-CH(R₁)-O-S(=O)₂-OX₁；和

-CH(R₁)-O-P(=O)₂-OX₁；和

其中Y = OX₁、NH₂；X₁ = -H、C₁-C₆直链烷基、苯基；

R₁ = H、C₁-C₆直链烷基、苯基或SO₃H

Z = H、SO₃H；和

A₁和A₂选自：-Phe-Val-Ala、-Phe-Leu-Ala、-Phe-Val-Gly、-Phe-Leu-Gly、-Phe-Pro-Gly、-Phe-Pro-Ala、-Phe-Val或其盐或N-烷基化衍生物。可以使用Arg、Gly、磺基丙氨酸、Phe、Val、Ala、Leu、Pro、Thr的D-形式或L-形式的任何组合以及上述序列的环状形式。

取代RG磺基丙氨酸序列包括环状RG磺基丙氨酸类似物。

可通过使用药物递送***或注射制剂或固体制剂或软膏制剂的任何药学上可接受的剂型，经皮下、皮肤、眼和全身进行RG磺基丙氨酸及其衍生物的施用。

本发明的化合物可通过适于产生预期治疗效果的任何途径给予，包括但不限于：口服、直肠、静脉内、动脉内、真皮内、皮下、肌内、鞘内、舌下、口腔、鼻内、经粘膜、经皮、局部、眼内、玻璃体内、其它肠内、其它胃肠外和/或其它可行的给药途径。

可以提供预期治疗效果同时避免不当作用或毒性作用的任何剂量给予本发明的化合物。可给予人受试者的本发明化合物的典型剂量的范围为约1ng/kg-约1.0g/kg。

如可行和适当时，本发明的化合物可任选以脂质体或纳米粒的形式(例如纳米囊)制备。脂质体的形成和使用一般为本领域技术人员所知。脂质体由磷脂形成，所述磷脂分散在含水介质中，使得它们自发地形成多层同心双层囊泡，有时称为多层囊泡(MLV)。MLV的直径通常为25 nm-4 μm。超声处理时，MLV形成直径约200-500埃的小多层囊泡(SUV)，具有含有水溶液的核心。一般而言，当分散在含水介质中时，磷脂可形成非脂质体的各种结构，这取决于脂质与水的摩尔比率。在脂质与水的低摩尔比率下，可形成脂质体。脂质体的物理特性取决于pH、张力和二价阳离子存在与否。脂质体可通过不同机制与细胞相互作用，所述机制包括1)胞吞(例如脂质体被巨噬细胞和嗜中性粒细胞等细胞吞噬)、吸附在细胞表面，2)与细胞-表面组分相互作用，3)通过将脂质体的脂质双层***血浆膜中而与血浆细胞膜融合，或4)脂质体脂质转移到细胞膜或亚细胞膜，反之亦然。改变脂质体制剂可改变脂质体赖以与鼻旁窦、鼻黏膜等中的细胞相互作用的机制。

纳米囊是由壳和在其中可置入所需物质的空间组成的任何纳米粒。用于形成纳米囊的技术是本领域已知的。可以特殊尺寸和形状制备聚合物纳米囊。它们可作为单分散粒子产生，所述粒子具有精确界定的理化性质，因此，可以订制成在响应特定的双分子引发机制时利于治疗物质或诊断物质的释放，所述引发机制为例如鼻旁窦或其中植入了装置的耳、鼻或喉的其它区域内存在的pH、粘液流量或其它条件。纳米囊可用于本发明，作为具有可与特定靶细胞(例如癌细胞或炎症病况相关细胞)结合的特异性化学受体或结合位点的“聪明药(smart drug)”。

下面是含有本发明化合物的药物制备物的非限制性制剂实例。还包括在抑制细胞粘附中使用示例性RG磺基丙氨酸肽或衍生物证实的安全性和/或功效的实例。如本文可用的，术语“RG磺基丙氨酸肽(RG CYSTEIC ACID Peptide)”、“RG磺基丙氨酸肽(RGCysteic Acid peptide)”、“RGC肽”、“RGCys-肽”和“本发明的化合物”应同义地意指含有序列R-G-磺基丙氨酸及其衍生物的组合物，包括但不限于本文所述通式I-VII和化合物1和3-5界定的组合物。

用于治疗眼病的靶向整联蛋白受体疗法的方法

包括在本发明组合物的许多潜在治疗应用中的是某些眼病的治疗，这些眼病的特征在于视网膜的过度血管形成(本文一般称为“新生血管性眼病)”。以下的非限制性实施例讨论本发明的组合物单独，以及与其它药物组合以治疗这样的新生血管性眼病的用途。

如果用于本专利申请，以下缩写和简称应具有以下含义：

AE　　　　　不利事件

Allegro　　　对眼病快速有效的，LLC

AMD　　　　年龄相关性黄斑变性

BCVA　　　最佳矫正视力

CNV　　　　脉络膜新血管形成

CRA　　　　临床研究协会

DME　　　　糖尿病黄斑水肿

DR　　　　　糖尿病性视网膜病

Dry AMD　　干性年龄相关性黄斑变性

ERG　　　　视网膜电描记术

ETDRS　　早期治疗糖尿病性视网膜病研究

FDA　　　　食品和药物管理署

GCP　　　　临床实践规范

IOP　　　　眼内压/眼压测量法

IRB　　　　组织伦理委员会

OCT　　　　光波相干性断层摄影

OD　　　　右眼

OS　　　　左眼

PI　　　　　主要研究者

PDR　　　　增生性糖尿病性视网膜病

PVD　　　　玻璃体后面脱离

RVO　　　　视网膜静脉阻塞

SAE　　　　严重不良事件

SC　　　　研究协调者

USP　　　　美国药典

VEGF　　　血管内皮生长因子

Wet AMD　　湿性年龄相关性黄斑变性

年龄相关性黄斑变性(AMD)是西方世界失明的主要原因，且罹患这种病症的患者患有对黄斑，或视网膜中心部分的不可逆损害。干性AMD缓慢地引起进行性视力丧失，而湿性AMD可导致中心视力的快速衰退。湿性AMD引起绝大多数受影响患者的严重视力丧失，但两种形式代表了21^st世纪的主要公共卫生关切。约150万美国人患有继发于AMD的脉络膜新血管形成(CNV)，并且每年发生200,000个新病例。已有文件证明，AMD的流行、发病率和进展的速率均随年龄的增长而增加。在美国，65岁以上的人群占人口的最大扇面之一，并且预计这种人口统计学分类在即将来临的几十年间将显著增加。在美国85岁以上的人口预期到2020年将翻一番。因此AMD代表了美国的重大公共卫生问题。特别是，湿性AMD是引起罹患AMD患者的不良视力的最重要的因素。湿性AMD的特征在于脉络膜血管生成，即在视网膜下异常血管的发生。这些血管渗漏液体、出血并转变为维管组织的疤痕组织。这种过程破坏了覆盖在上面的光感受器并引起严重的视力丧失。有充分的证据表明，减少脉络膜灌注会导致AMD中的视网膜色素上皮(RPE)功能障碍和光感受器丧失。糖尿病黄斑水肿(DME)是由于糖尿病引起的视网膜毛细血管损伤所致的视网膜中心部分增厚的结果。DME是就业年龄人群失明的主要原因，也引起该人群以及不能再工作的人群的轻度至中度视力损害。对在增厚的视网膜内受损的毛细血管应用激光一直是过去25年来的主要治疗支柱。来自糖尿病性视网膜病临床研究网络的最近结果证实，在因涉及黄斑中心的DME引起的视敏度降低的眼睛中，用Lucentis联合使用聚焦/格栅样光凝(grid laser)的抗-VEGF疗法，提供与先前的单独激光标准治疗比较的优良的视觉效果和可接受的安全特性。涉及前-视网膜(pre-retinal)和脉络膜新血管形成发生的分子事件尚未完全阐明；然而，已表明血管内皮生长因子(VEGF)在该过程中起主要的作用。整联蛋白α₅β₁、α_vβ₃和α_vβ₅也涉及血管生成过程，并且已知在患有湿性AMD和PDR的患者的新血管眼组织中表达。也存在许多起重要作用的其它分子：bFGF、IL-8、PDGF、各种蛋白酶包括血纤维蛋白溶酶原活化剂和基质金属蛋白酶、趋化因子(chemokines)和其它炎症介质。内皮细胞增殖，血管渗透性增加，炎症，以及VEGF的过度产生是湿性AMD和DME的主要病理学发展中的一些。

本发明提供一类用于视网膜血管疾病，包括湿性AMD、DR和DME的新的治疗药物。本发明的化合物具有多种对抗视网膜血管疾病的作用机制，包括a) 通过直接抑制VEGF产生，引起抗-血管生成作用，b) 导致VEGF-2受体的抑制，c) 引起酪氨酸激酶的下调或抑制，以及d) 引起玻璃体和前玻璃体脱离的液化，从而允许VEGF从眼睛向外扩散。作用机制可单独采用(例如，通过仅使用本发明的化合物的疗法)或可以是现有的VEGF的辅助或补充抑制作用(例如，通过采用本发明的化合物与粘合、捕获、清除或另外阻止已经产生的VEGF的效果的组合物组合的联合疗法，其实例包括但不必限于：Avastin、Lucentis和/或Eylea). Avastin (贝伐单抗)是一种抗-VEGF单克隆抗体. Lucentis (兰尼单抗)是一种重组体人源化IgG1κ同种型单克隆抗体片段。Eylea (阿柏西普(aflibercept))是一种由人血管内皮生长(VEGF)受体1和2的部分组成的重组体融合蛋白。

通过下调VEGF生产而不是螯合先前已经存在的VEGF供应，本发明的化合物具有独特的作用机理，该机理允许与目前的护理标准比较在血管生成级联中的更早期的干预。这在图6中得到示意性的说明。除了在血管生成级联的更早期阶段工作外，本发明的化合物还结合多个整联蛋白亚单位，与仅对一个整联蛋白亚单位有500倍更大的和更特异性的单克隆抗体途径形成对比(如在图7A中所示)。相反，寡肽能更有效得多地结合于参与血管生成的多种整联蛋白亚单位，如在图7B中所示。

可有效地用本发明化合物治疗的新血管生成性眼病的实例包括糖尿病性视网膜病(DR)、糖尿病黄斑水肿(DME)和年龄相关性黄斑变性(AMD)。目前可用的对这些疾病的药物治疗包括粘合、捕获、清除或另外的阻止已经产生的VEGF的效果(在此一般称为VEGF捕获)的某些药物。这样的“VEGF捕获”的可市售获得的实例包括贝伐单抗(Avastin)、兰尼单抗(Lucentis)和阿柏西普(Eylea)。贝伐单抗被描述为抗-VEGF单克隆抗体。兰尼单抗被描述为一种重组体人源化IgG1κ同种型单克隆抗体片段。阿柏西普被描述为由人血管内皮生长(VEGF)受体1和2的部分组成的重组体融合蛋白。这些基于抗-VEGF抗体-的治疗通常以4-6周的时间间隔，可能无限期的和基本上不方便的，成本和感染的累积风险大的方式，经重复的玻璃体内(intravitreal)注射来给药。

与现有的VEGF捕获不同，本发明的组合物具有多个对抗新血管生成性眼病的作用机制，特别是：通过直接抑制VEGF产生，抑制VEGF-2受体，下调酪氨酸激酶和诱导玻璃体内液化和玻璃体后部剥离(其促进VEGF或其它有害的实体的扩散以远离视网膜和离开眼睛)。下文提出的一些实例描述化合物1单独和与其它药物(VEGF捕获)组合在治疗新血管生成性眼病中的用途。

要理解的是，除了治疗新血管生成性眼病外，本发明的组合物也可用于治疗各种其它引起或不引起视网膜新血管形成的眼疾。可用本发明的组合物治疗的眼疾的实例包括，但不必限于湿性年龄相关性黄斑变性、糖尿病黄斑水肿、增生性或非-增生性糖尿病性视网膜病、玻璃体液的液化、玻璃体-视网膜后部脱离的诱导(PVD)、玻璃体视网膜病的发病机理，例如特发性黄斑裂孔、玻璃体黄斑牵引、年龄相关性黄斑变性、脉络膜新血管形成、玻璃体视网膜手术、静脉阻塞、角膜新血管形成、局部缺血性视神经、虹膜发红和在青光眼手术中防止瘢痕形成。

药物制剂

下面是药物制剂I-X的实例，其含有本发明的R-G-磺基丙氨酸肽，例如本文所述通式I-VII或化合物 1-5任一种界定的任何R-G-磺基丙氨酸肽。

制剂 I

R-G-磺基丙氨酸肽(RGCys-肽) 0.0001mg-10g

NaCl 0.01mg-0.9g

水适量至100.0mL

制剂 II

RG磺基丙氨酸肽(RGCys-肽) 0.0001mg-10g

EDTA 0.001mg-100mg

NaCl 0.01mg-0.9g

水适量至100.0mL

制剂 III

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

EDTA 0.001mg-100mg

NaCl 0.01mg-0.9g

柠檬酸 0.0001mg-500mg

水适量至100.0mL

制剂 IV

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

NaCl 0.01mg-0.9g

磷酸盐缓冲液至 pH = 3.0-9.0

水适量至100.0mL

制剂 V

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

EDTA 0.001mg-100mg

NaCl 0.01mg-0.9g

磷酸盐缓冲液至 pH = 3.0-9.0

水适量至100.0mL

制剂 VI

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

NaCl 0.01mg-0.9g

硼酸盐缓冲液至 pH = 3.0-9.0

水适量至100.0mL

制剂 VII

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

透明质酸钠盐 0.01-10%

硼酸 0.01-1.0%

聚乙二醇(PEG 8000) 0.01-10%

氯化钠 0.10-0.9%

氯化钾 0.01-0.20%

氯化钙二水合物 0.001-0.05%

氯化镁六水合物 0.01-0.20%

防腐剂

pH 4.0-8.0

水适量至100.0mL

制剂 VIII

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

透明质酸钠盐 0.01-10%

羧甲基纤维素 0.01-10%

硼酸 0.01-1.0%

聚乙二醇(PEG 8000) 0.01-10%

氯化钠 0.10-0.9%

氯化钾 0.01-0.20%

氯化钙二水合物 0.001-0.05%

氯化镁六水合物 0.01-0.20%

防腐剂

pH 4.0-8.0

水适量至100.0mL

制剂 IX

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

透明质酸钠盐 0.01-10%

藻酸钠 0.01-10%

硼酸 0.01-1.0%

聚乙二醇(PEG 8000) 0.01-10%

氯化钠 0.10-0.9%

氯化钾 0.01-0.20%

氯化钙二水合物 0.001-0.05%

氯化镁六水合物 0.01-0.20%

防腐剂

pH 3.0-8.0

水适量至100.0mL

制剂 X

RG磺基丙氨酸-肽 0.0001mg-10g

透明质酸钠盐 0.01-10%

海藻酸 0.01-10%

硼酸 0.01-1.0%

聚乙二醇(PEG 8000) 0.01-10%

氯化钠 0.10-0.9%

氯化钾 0.01-0.20%

氯化钙二水合物 0.001-0.05%

氯化镁六水合物 0.01-0.20%

防腐剂

pH 3.0-8.0

水适量至100.0mL

兔中 RGD 肽和甘氨酰 - 精氨酰 - 甘氨酰 - 磺基丙氨酸 - 苏氨酰 - 脯氨酸 -COOH ( GRG 磺基丙氨酸 TP ；化合物 1 ) 的 PVD 诱导作用的比较

在本实施例中，对RGD肽和甘氨酰-精氨酰-甘氨酰-磺基丙氨酸-苏氨酰-脯氨酸-COOH (RG磺基丙氨酸肽；GRG磺基丙氨酸TP；化合物 1)在兔中的PVD诱导作用进行了比较。本项研究的方案如下：

方案：

动物模型

a) 20只雄性和雌性兔

b) 重约1.5-2.5kg

c) 分成2组

i) 10只兔用pH=6.5的2.5% RGD溶液玻璃体内注射

a) 10只右眼用2.5% RGD溶液注射

b) 5只左眼用作BSS对照

c) 5只左眼用pH=6.5的2.5% RGD +0.02% EDTA注射

ii) 10只兔用pH = 6.5的2.5% RG磺基丙氨酸溶液玻璃体内注射

a) 10只右眼用pH=6.5的2.5% RG磺基丙氨酸溶液注射

b) 10只左眼pH=6.5的2.5% RG磺基丙氨酸溶液+ 0.02% EDTA注射

活性化学物质

d) EDTA钠–99.0-100.5%，得自Spectrum Chemical Corp.

e) RG磺基丙氨酸– cGMP供应商(纯度>98%)。

f) RGD–cGMP供应商(纯度>98%)。

g) BSS溶液

将RG磺基丙氨酸、RGD、RG磺基丙氨酸+ EDTA钠、RGD + EDTA钠和BSS溶液都在手术前24小时注射至玻璃体腔。肌内注射2.0ml 1:1组合的赛拉嗪(100mg/ml)和盐酸***(100mg/ml)使兔(10mg/kg体重)麻醉。用局部盐酸环喷托酯1%和盐酸去氧肾上腺素10%散瞳。

所有动物最初用裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查，排除预先存在玻璃体视网膜异常情况的任何动物。使用与1.0cc注射器连接的30规针，在鼻上象限中的缘后部2mm处给予玻璃体内注射0.10cc。必须小心以避免损伤晶状体或视网膜。

注射后24小时和临开始机械玻璃体切除术之前，进行B型扫描超声检查(B-scan ultrasonography)，以确定玻璃体后部状态以及玻璃体的液化。使用与玻璃体切除术设备连接的输注纤维光学管(infusion fiberoptic)和玻璃体切除器，进行两切口经睫状体平坦部玻璃体切除术(two-port pars plana vitrectomy)。在30秒钟核心玻璃体切除术之后，将玻璃体切除器对准视***周围的视网膜表面，在此处采用低吸(low aspiration) (<30mmHg)，尝试在4个象限中将玻璃体后皮质与视网膜表面相分离。对巩膜切开处进行缝合，并进行术后B型扫描超声检查以确定各象限中存在的任何PVD的存在情况和程度。用心脏内戊巴比妥钠注射使动物安乐死，立即摘出各眼。

根据术后B型扫描超声检查，按照以下这种分级***对玻璃体液化和PVD的分类进行分级，以评价PVD的程度；

0 级. a) 未观察到玻璃体后部脱离。

b) 玻璃体液化

1 级 . a) 由其中玻璃体在2个以下象限中脱离的眼组成。

b) 玻璃体液化

2 级 . a) 由其中玻璃体在3个以上象限中脱离，但沿髓放线保持局部附着的眼组成

b) 玻璃体液化

3 级 . a) 由其中玻璃体从视网膜表面完全脱离的眼组成

b) 玻璃体液化

所有眼在摘出后立即在几乎接近(sub-adjacent)睫状体平坦部的上极(superior pole)处经受锋利剃刀穿通以确保固定液的快速穿透。要小心避免损伤邻近的视网膜和晶状体。在4摄氏度下，将眼浸入2%低聚甲醛加2.5%戊二醛最少24小时。取出单个后半球(posterior calotte)，在甲醇中脱水，在二氧化碳中干燥至临界点，用金溅射包覆后，使用扫描电子显微镜拍照。

结果：

注射：2.5% RG磺基丙氨酸

第1组. 基线上所有动物双眼均无PVD

注射：2.5% RGD

第2组. 基线上所有动物双眼均无PVD

注射：2.5% RG磺基丙氨酸+ 0.02% NaEDTA

第3组. 基线上所有动物双眼均无PVD

注射：2.5% RGD + 0.02% NaEDTA

第4组. 基线上所有动物双眼均无PVD

本项研究的结果表明，RGD和RG磺基丙氨酸(GRG磺基丙氨酸TP；化合物 1)具有类似性质，玻璃体内注射2.5% RG磺基丙氨酸在24小时内引起玻璃体与视网膜完全分离，另外，RGD和RG磺基丙氨酸兔两者的玻璃体完全液化。

总之，在兔中在诱导完全PVD和液化玻璃体方面，RG磺基丙氨酸的活性等于或略好于RGD的活性。这可能是因其对整联蛋白的结合位点-胞外基质相互作用的竞争性结合能力强于RGD所致。如本文其它部分的描述一样，磺酸是比相应羧酸强的酸。磺酸基团的这种较高极性导致较强的分子间结合。例如，R-G-磺基丙氨酸(其具有更极化的O-H键)可与整联蛋白结合位点中的氨基酸的酰胺基和/或侧链形成比R-G-天冬氨酸(其具有相对较不极化的O-H键)强的氢键和/或与在整联蛋白结合位点中络合的金属离子具有较强的相互作用。

结果还表明，当这些化合物与0.02%乙二胺四乙酸钠一起给予时，RGD以及RG磺基丙氨酸两者的活性均不改变。

结果还表明，玻璃体内注射RG磺基丙氨酸化合物化合物 1或RGD化合物没有不良作用或不良安全性作用。

兔眼中多次注射 RG磺基丙氨酸肽化合物 1 (GRG 磺基丙氨酸 TP) 的安全性研究

在本实施例中，将RG磺基丙氨酸肽化合物 1多次注射给予重约1.5-2.5 kg的5只雄性和4只雌性新西兰兔眼部，按照以下段落所述检查眼。

于是研究方案如下：

A) 基线检查：在基线上，用裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查全部9只兔的右眼和左眼，以证实动物均无预先存在的玻璃体视网膜异常情况。另外还对全部9只动物的左眼和右眼进行了β型扫描超声检查(β-scan ultrasonography)以及ERG扫描，以获得基线读数。

B) 实验治疗：然后，全部9只兔接受玻璃体内注射溶液或盐水(对照)。治疗溶液如下制备：

RG磺基丙氨酸溶液：2.5mg/100μl RG磺基丙氨酸(化合物1)溶液，其含有0.02mg EDTA二钠+ 0.80mg氯化钠和USP无菌注射用水，pH调节至6.5。

盐水 ( 对照 )：pH调节至6.5的USP等渗无菌盐水溶液。

如下进行给药：

1) 9只兔每只的右眼玻璃体内注射100μl的2.5 mg/100μl RG磺基丙氨酸溶液(递送剂量 =2.5mg的化合物1)

2) 9只兔每只的左眼玻璃体内注射100μl的盐水(对照)。

3) 初始玻璃体内注射后一天，通过裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查全部9只兔的右眼和左眼，以查明任何兔是否因注射而有任何不良作用。

4) 第1次注射后第7天，再次通过裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查全部9只兔的右眼和左眼，以确定任何兔是否因注射而有不良作用。另外，对全部动物的右眼和左眼进行了ERG扫描，以确定是否自基线有任何变化。

5) 然后随机选出一组3只兔，编号901、904和909，对所选的3只动物的右眼和左眼进行了机械玻璃体切除术以确定玻璃体后部的状态。

6) 3只随机选择的动物，编号901、904和909，用心脏内戊巴比妥钠注射使之安乐死，立即摘出眼。所有眼在摘出后立即在几乎接近睫状体平坦部的上极处经受锋利剃刀穿通以确保固定液的快速穿透。要小心以避免损伤邻近的视网膜和晶状体。在4摄氏度下，将眼浸入2%低聚甲醛加2.5%戊二醛(gluteraldehyde)中最少24小时。取出单个后半球，在甲醇中脱水，在二氧化碳中干燥至临界点，用金溅射包覆后，使用扫描电子显微镜拍照。其它样品进行组织病理学检查。

第一次注射后7天给其余的6只兔(编号902、903、905、906、907和908)第二次注射。

1) 其余6只兔每只的右眼再次用100μl的2.5 mg/100μl RG磺基丙氨酸溶液(递送第二次2.5mg剂量的化合物1)玻璃体内注射。

2) 其余6只兔每只的左眼再次用100μl的盐水(对照)玻璃体内注射。

3) 第二次玻璃体内注射后1天，通过裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查其余全部6只兔的右眼和左眼，以检查任何兔是否因注射而有任何不良作用。

4) 在第2次注射后第7天，通过裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查其余全部6只兔的右眼和左眼，以查明注射的任何不良作用。另外，对全部动物的左眼和右眼进行了ERG扫描，以确定是否自基线有任何改变。

5) 然后随机从其余6只动物中选出3只兔，编号902、903和907，对随机选出的3只动物的右眼和左眼进行了机械玻璃体切除术以确定玻璃体后部的状态。

6) 3只随机选择的动物(编号902、903和907)然后用心脏内戊巴比妥钠注射使之安乐死，立即摘出眼。所有眼在摘出后立即在几乎接近睫状体平坦部的上极处经受锋利剃刀穿通以确保固定液的快速穿透。要小心以避免损伤邻近的视网膜和晶状体。在4摄氏度下，将眼浸入2%低聚甲醛加2.5%戊二醛中最少24小时。取出单个后半球，在甲醇中脱水，在二氧化碳中干燥至临界点，用金溅射包覆后，使用扫描电子显微镜拍照。其它样品进行组织病理学检查。

然后在第一次注射后14天，如下给剩余组的3只兔(编号905、906和908)第三次注射：

1) 其余3只兔每只的右眼再次用100μl的2.5 mg/100μl RG磺基丙氨酸溶液(递送第三次2.5mg剂量的化合物1)玻璃体内注射。

2) 其余3只兔每只的左眼再次用100μl的盐水(对照)玻璃体内注射。

3) 第3次玻璃体内注射后1天，通过裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查其余全部6只兔的右眼和左眼，以查明任何兔是否因注射而有任何不良作用。

4) 第3次注射后第7天，其余全部3只兔的右眼和左眼再次通过裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜间接检查法检查，以查明注射的任何不良作用。另外，对全部动物的左眼和右眼进行了ERG扫描以确定是否自基线有任何改变。

5) 对其余3只动物(编号905、906和908)的右眼和左眼进行了机械玻璃体切除术以确定玻璃体后部的状态。

6) 其余3只动物(编号905、906和908)用心脏内戊巴比妥钠注射使之安乐死，立即摘出眼。所有眼在摘出后立即在几乎接近睫状体平坦部的上极处经受锋利剃刀穿通以确保固定液的快速穿透。要小心以避免损伤邻近的视网膜和晶状体。在4摄氏度下，将眼浸入2%低聚甲醛加2.5%戊二醛中最少24小时。取出单个后半球，在甲醇中脱水，在二氧化碳中干燥至临界点，用金溅射包覆后，使用扫描电子显微镜拍照。其它样品进行组织病理学检查。

3) 活性化学物质

用于本项研究的活性化学物质如下：

a. EDTA二钠–99.0-100.5%，得自Spectrum Chemical Corp.

b. RG磺基丙氨酸肽(化合物 1)

c. USP无菌等渗盐水溶液

4) 研究制剂

a) RG磺基丙氨酸溶液：2.5mg/100μl的RG磺基丙氨酸溶液，其含有0.02mg EDTA二钠+ 0.80mg氯化钠和USP无菌注射用水，调节至pH=6.5。通过0.22μ过滤器无菌过滤入2.0 mL小瓶中。

b) 盐水 ( 对照 ) ：调节至pH 6.5的USP等渗无菌盐水溶液。通过0.22μ过滤器无菌过滤入无菌小瓶中。

5) 用于注射准备的麻醉

a) 肌内注射2.0mL赛拉嗪(100mg/ml)和盐酸***(100mg/ml)的1:1组合

b) 用局部盐酸环喷托酯1%和盐酸去氧肾上腺素10%散瞳

6) 玻璃体内注射准备：

提供装有调节至pH 6.5的含2.5mg/100μl的RG磺基丙氨酸溶液和等渗无菌盐水溶液的无菌小瓶。

注射前，研究人员确认1.0 cc注射器中有0.10 cc (100微升)的溶液。

7) 注射方法：

由于玻璃体内注射不会引起足以破坏兔的正常日常活动的某种水平的视力伤残，因此按照视力与眼科学研究协会(Association for Research in Vision and Ophthalmology)指引的动物决议，这不被视为重大生存手术。

在对兔完成裂隙灯活组织显微镜检查法、检眼镜检查和ERG的基线检查之后，将RG磺基丙氨酸溶液以及无菌盐水溶液两者注射入玻璃体腔中。通过肌内注射2.0ml赛拉嗪(100mg/ml)和盐酸***(100mg/ml)的1:1组合，使兔(10mg/kg体重)麻醉。用局部盐酸环喷托酯1%和盐酸去氧肾上腺素10%散瞳。

所有动物最初用裂隙灯活组织显微镜检查法和检眼镜直接检查法检查，以排除预先存在玻璃体视网膜异常情况的任何动物。使用与1.0cc注射器连接的30规针，在鼻上象限(supronasal quadrent)中的缘后部2mm处给予玻璃体内注射0.10cc。要小心以避免损伤晶状体或视网膜。

注射后七(7)天，对动物进行机械玻璃体切除术。使用与玻璃体切除术设备连接的输注纤维光学管和玻璃体切除器，进行两切口经睫状体平坦部玻璃体切除术。在30秒钟核心玻璃体切除术后，将玻璃体切除器对准视***周围的视网膜表面，在此处采用低吸(<30mmHg)，尝试在4个象限中使玻璃体后皮质与视网膜表面相分离。用心脏内戊巴比妥钠注射使动物安乐死，立即摘出各眼。

所有眼在摘出后立即在几乎接近睫状体平坦部的上极处经受锋利剃刀穿通以确保固定液的快速穿透。要小心以避免损伤邻近的视网膜和晶状体。在4摄氏度下，将眼浸入2%低聚甲醛加2.5%戊二醛中最少24小时。取出单个后半球，在甲醇中脱水，在二氧化碳中干燥至临界点，用金溅射包覆后，使用扫描电子显微镜拍照。

结果分析

采用下列技术，针对安全性对用RG磺基丙氨酸溶液和无菌盐水溶液治疗的各眼间的安全性数据进行了分析：

i) 裂隙灯活组织显微镜检查法；

ii) 检眼镜检查；

iii) ERG；

iv) 组织病理学；和

v) 电子显微镜检查。

安全性概况 :

第一次玻璃体内给予编号为901、902、903、904、905、906、907、908、909的一组9只兔100μl 2.5% RG磺基丙氨酸溶液，在所有时间点上均不与任何明显毒性有关。在2.5% RG磺基丙氨酸组和等渗盐水溶液组之间经报告的不良作用无显著差异。通过临床检查、检眼镜间接检查法和超声β型扫描及机械玻璃体切除术确定了没有这种毒性。

在所有研究访查中进行了裂隙灯活组织显微镜检查法，并集中在眼睑、结膜和巩膜、角膜、内皮改变、前房反应、虹膜、晶状体与囊以及前部玻璃体的炎症迹象，以证实对于玻璃体内注射100μl 2.5% RG磺基丙氨酸溶液组和等渗盐水溶液组几乎完全没有炎性反应。在所有研究点和在所有研究组中，似乎没有由试验物引起的明显毒性的任何迹象。

亦在整个研究中接着后段的临床评价，以确保不存在明显的视网膜毒性。在各个评价时间点上进行了检眼镜间接检查法以及裂隙灯眼底评价，其中特别留意视网膜毒性的任何迹象。针对玻璃体密度、玻璃体液化、玻璃体附着的任何变化和可能发生的出血对后段进行评价。针对RPE毒性、视网膜血管损害、视网膜出血、渗出物、视网膜撕裂、破裂或脱离的任何迹象对视网膜进行评价。在治疗前的基线上没有RPE改变，在所有研究点上和在所有研究组中，没有出现由试验物引起的明显的后段改变的任何迹象。重要的是注意到，在玻璃体内注射前对9只动物进行的ERG扫描以及注射后1天和7天对所有动物进行的ERG扫描，似乎没有产生由试验物引起的明显改变或毒性的任何迹象。

第二次玻璃体内给予编号为902、903、905、906、907、908的一组6只兔100μl 2.5% RG磺基丙氨酸溶液，在所有时间点上均不与任何明显毒性有关。在2.5% RG磺基丙氨酸组和等渗盐水溶液组之间经报告的不良作用无显著差异。通过临床检查、检眼镜间接检查法和超声β型扫描及机械玻璃体切除术确定了没有这种毒性。

在所有研究访查中进行了裂隙灯活组织显微镜检查法，并集中在眼睑、结膜和巩膜、角膜、内皮改变、前房反应、虹膜、晶状体与囊以及前部玻璃体的炎症迹象，以证实对于玻璃体内注射100μl 2.5% RG磺基丙氨酸溶液组和等渗盐水溶液组几乎完全缺乏炎性反应。在所有研究点和在所有研究组中，似乎没有由试验物引起的明显毒性的任何迹象。

亦在整个研究中接着后段的临床评价，以确保不存在明显的视网膜毒性。在各个评价时间点上进行了检眼镜间接检查法以及裂隙灯眼底评价，其中特别留意视网膜毒性的任何迹象。针对玻璃体密度、玻璃体液化、玻璃体附着的任何变化和可能发生的出血对后段进行评价。针对RPE毒性、视网膜血管损害、视网膜出血、渗出物、视网膜撕裂、破裂或脱离的任何迹象对视网膜进行评价。在第2次治疗前7天的基线上没有RPE改变，在所有研究点上和在所有研究组中，没有出现由试验物引起的明显的后段改变的任何迹象。重要的是注意到，在玻璃体内注射后第二次对6只动物进行的ERG扫描，以及注射后8天和14天对所有动物进行的ERG扫描，似乎没有产生由试验物引起的明显改变或毒性的任何迹象。

第三次玻璃体内给予编号为905、906、908的一组6只兔100μl 2.5% RG磺基丙氨酸溶液，在所有时间点上均不与任何明显毒性有关。在2.5% RG磺基丙氨酸组和等渗盐水溶液组之间经报告的不良作用无显著差异。这种毒性的缺乏通过临床检查、检眼镜间接检查法和超声β型扫描及机械玻璃体切除术确定。

亦在整个研究中接着后段的临床评价，以确保不存在明显的视网膜毒性。在各个评价时间点上进行了检眼镜间接检查法以及裂隙灯眼底评价，其中特别留意视网膜毒性的任何迹象。针对玻璃体密度、玻璃体液化、玻璃体附着的任何变化和可能发生的出血对后段进行评价。针对RPE毒性、视网膜血管损害、视网膜出血、渗出物、视网膜撕裂、破裂或脱离的任何迹象对视网膜进行评价。在第3次治疗前14天的基线上没有RPE改变，在所有研究点上和在所有研究组中，没有出现由试验物引起的明显的后段改变的任何迹象。重要的是注意到，玻璃体内注射后第3次对3只动物进行的ERG扫描，以及注射后15天和21天对所有动物进行的ERG扫描似乎没有产生由试验物引起的明显改变或毒性的任何迹象。

RG 磺基丙氨酸肽的抗粘附性质：用化合物 1 (GRG 磺基丙氨酸 TP) 、环状 -RGD 和 RGE 进行的伤口愈合的动力学研究

在本实施例中，在伤口愈合模型中，证实了RG磺基丙氨酸肽具有抗粘附性质，因此可防止许多病理性玻璃体视网膜疾病的发生，并可抑制人黑素瘤和结肠癌细胞的转移。

为了测试RG磺基丙氨酸肽的体外抗粘附性质，用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行了伤口愈合试验。将HUVEC接种在纤连蛋白包被的表面上，并使之生长成汇合的单层。将小的移液管尖端横越HUVEC单层拖动来产生伤口(划痕裂缝)。然后将细胞在含有RG磺基丙氨酸肽(化合物 1；10mM)的新鲜生长培养基中孵育，在不同时间点(0、4、8、12、16、20、24小时)对5个不同视野中的伤口区拍照，以测定伤口闭合的动力学。通过测定经HUVEC通过细胞粘附、迁移和增殖重新占据的起始伤口区的分数，来量化伤口闭合水平。

在对照研究中，用下列肽替换RG磺基丙氨酸(化合物 1)：环状-RGD肽(1mM)，阳性对照)和RGE肽(1mM，阴性对照)。

图1提供了所述肽对伤口愈合动力学的作用。结果表示为起始面积的百分比。误差棒相当于2-6次独立试验的伤口大小的标准差。结果表明，24小时后RG磺基丙氨酸肽抑制HUVEC伤口愈合达70%，而24小时后环状RGD (基于RGD的肽；N-甲基化环状-RGDf-N(Me)V；西仑吉肽)抑制HUVEC伤口愈合达45%。将这两者与24小时后抑制HUVEC伤口愈合0%的阴性对照RGE肽相比较。RG磺基丙氨酸(化合物 1)的作用在量上比得上基于RGD的肽(一种已十分确定的整联蛋白结合活性的抑制剂)的活性。此外，RG磺基丙氨酸肽显示与基于RGD的肽的活性相似的性质而不使HUVEC细胞凋亡。环状RGD和化合物1二者在该试验中为有效的整联蛋白抑制剂。

细胞与ECM通过焦点粘连的相互作用是细胞迁移的一种至关重要的要素，其支配伤口闭合的速率。在二维细胞迁移中，具有生长的板状伪足的细胞的前端与底物形成新的粘附物，而在后端上的粘附物在细胞骸收缩后脱离。

如本文其它部分的描述一样，玻璃体和视网膜之间的强烈粘附可能是最终发生许多病理性玻璃体视网膜疾病的原因，所述疾病为例如玻璃体黄斑牵引、增殖性糖尿病性视网膜病、黄斑裂孔、年龄相关性黄斑变性和飘浮物。因此，十分需要获得玻璃体后部脱离的无创性非侵入方法，而不是玻璃体与视网膜内表面的机械分离(参见Tezel，T.H.等，Retina (1998) 18：7 -15；以及Verstraeten,T.C等，Arch. Ophthalmol. (1993)111：849 -854)。

如本文其它部分的描述一样，ECM组分，特别是玻璃体皮质的胶原原纤维，被认为在内界层(ILL)中通过整联蛋白结合位点与视网膜的内表面锚定(参见Foos，R.Y., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1972) 11:801-808)。另已知眼中ILL的主要黏着糖蛋白(例如纤连蛋白和层粘连蛋白)通过RGD (Arg-Gly-Asp)序列与整联蛋白大量连接(参见Curtis, T.M.等, Am. J. Physiol., (1995) 269: L248-L260；Elner, S.G.等, IOVS (1996) 37:696-701；以及Horman, S.M等, Am. J. Physiol. (1995) 269: L248 -L260)，且若干整联蛋白通过ECM蛋白上存在的RGD基序结合。此外，已知纤连蛋白与α_vβ₃以外的若干其它整联蛋白结合，而玻连蛋白是α_vβ₃特异性的。

整联蛋白与ECM的主要连接涉及Arg-Gly-Asp(RGD)序列，且RGD序列与位于整联蛋白头的α-亚基和β-亚基之间的浅裂缝结合(参见Xiong等，Science (2002) 296：151-155)。这种结合有助于调节各种细胞信号转导途径，包括细胞粘附、迁移、分化、血管生成和伤口愈合(参见Ruoslahti，E.等，Science (1987) 238：491-497；和J. Clin. Invest. (1991) 87：1-5)。

由于玻璃体胞外基质(例如胶原原纤维)通过整联蛋白结合位点与细胞视网膜(cellular retina)连接，因此玻璃体内注射RG磺基丙氨酸肽(寡肽)可通过与相同的整联蛋白受***点竞争性结合而从细胞视网膜释放出玻璃体胞外基质的RGD基序。

数位研究人员(参见Ruoslahti, E.等, Science (1987) 238: 491-497；Hynes, R.A.等,Cell (1992) 68: 303-322；以及Humphries, M.J., J. Cell Sci., (1990) 97: 585 -592)证实，许多整联蛋白(α_vβ₃、α₅β₁、α₁₁β₃等)可被具有RGD序列基序的小肽抑制。已充分证明，α_vβ₃和α₅β₁整联蛋白以及玻连蛋白和纤连蛋白在以下肿瘤中上调：例如人黑素瘤细胞(参见Nip, J., J. Clin. Invest., (1992) 90: 1406-1413)、人乳癌细胞(参见Rong, L.等, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2009) 50: 5988-5996)和人视网膜色素上皮细胞(Peter C. Brooks等, J. Clin. Invest., (1995) 96: 1815-1822)。于是已证实，人黑素瘤细胞的转移潜力与黑素瘤细胞通过α_vβ₃整联蛋白受体与***玻连蛋白的粘附有良好相关性，且含有RGD的肽抑制该粘附(Nip, J., J. Clin. Invest., (1992) 90: 1406-1413)。这就表明RGD肽可为重要的抗血管生成剂。

此外，已经证实，在人结肠癌细胞系中当存在细胞粘附显著增加时，转移活性便增强(Lehmann, M., Cancer Res., (1994), 54：2102-2107)。因此，抑制细胞粘附的药物有效地抑制结肠癌和黑素瘤发生转移。

根据其中RG磺基丙氨酸显示抑制细胞粘附的伤口愈合研究的结果，并根据黑素瘤和结肠癌模型中RGD转移潜力的推断，RG磺基丙氨酸肽及其衍生物可有效地抑制肿瘤转移，例如黑素瘤和结肠癌的转移。

使用 RG 磺基丙氨酸 肽用于引导或递送药物至肿瘤

在本实施例中，提供下述二聚RG磺基丙氨酸肽-紫杉醇缀合物(化合物 3)。该组合物可用作抗肿瘤剂。二聚RG磺基丙氨酸肽与在某些癌细胞中高表达的整联蛋白受体选择性结合，并可通过抑制细胞粘附用于治疗某些转移性癌症，例如转移性乳癌。

化合物 3:

化合物 3

化合物3的相应RGD类似物的合成和作用机制、生物分布和肿瘤选择性描述于Chen，X.等, Synthesis and Biological Evaluation of Dimeric RGD Peptide- Paclitaxel Conjugate as a Model for Integrin-Targeted Drug Delivery (作为整联蛋白靶向药物递送模型的二聚RGD肽-紫杉醇缀合物的合成和生物学评价)；J. Med. Chem., (2005) 48 (4): 1098-1106)。

虽然化合物3包含与二聚RG磺基丙氨酸肽结合的特殊抗肿瘤剂紫杉醇，但要认识到本发明的这个方面包括与任何可行的诊断剂或治疗剂结合的RG磺基丙氨酸肽的所有单体形式或多聚体形式，所述诊断剂或治疗剂可用于诊断、成像或***或其它含整联蛋白的组织或结构。可与本发明的单体或多聚体RG磺基丙氨酸肽结合的抗肿瘤物质的实例可包括抗肿瘤剂(例如癌症化学治疗剂、生物反应调节剂、血管生成抑制剂、激素受体阻断剂、低温治疗剂(cryotherapeutic agent)或破坏或抑制瘤形成或肿瘤发生的其它物质)，例如烷化剂或通过攻击其DNA而直接杀死癌细胞的其它物质(例如环磷酰胺、异磷酰胺(isophosphamide))、亚硝基脲或通过抑制对细胞DNA修复所必需的变化而杀死癌细胞的其它物质(例如卡莫司汀(BCNU)和洛莫司汀(CCNU))、抗代谢物和通过干扰某些细胞功能(通常为DNA合成)而阻断癌细胞生长的其它物质(例如6-巯基嘌呤和5-氟尿嘧啶(5FU)、抗肿瘤抗生素和通过结合或嵌入DNA和防止RNA合成起作用的其它化合物(例如多柔比星、柔红霉素、表柔比星、伊达比星、丝裂霉素-C和博来霉素)、植物(长春花属)生物碱和来源于植物的其它抗肿瘤剂(例如长春新碱和长春碱)、甾类激素、激素抑制剂、激素受体拮抗剂和影响激素反应性癌的生长的其它物质(例如他莫昔芬、赫赛汀、芳香酶抑制剂例如氨鲁米特(aminoglutethamide)和福美坦、***(trriazole)抑制剂例如来曲唑和阿那曲唑、甾体抑制剂例如依西美坦)、抑制肿瘤血管发生或血管生成的抗血管生成蛋白、小分子、基因治疗和/或其它物质(例如meth-1、meth-2、沙利度胺)、贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)、司夸胺、内皮生长抑素、血管生长抑素、血管增生核酶(Angiozyme)、AE-941 (新伐司他)、CC-5013 (Revimid)、medi-522 (αVβ3人源化单抗)、2-甲氧基***(2ME2、2-甲氧基***)、羧基酰胺基***(CAI)、康普瑞汀A4前药(CA4P)、SU6668、SU11248、BMS-275291、COL-3、EMD 121974、IMC-1C11、IM862、TNP-470、塞来考昔(Celebrex)、罗非考昔(Vioxx)、干扰素α、白介素-12 (IL-12)或Science 第289卷第1197-1201页(2000年8月17日)鉴定的任何化合物(其通过引用明确结合到本文)、生物反应调节剂(例如干扰素、卡介苗(BCG)、单克隆抗体、白介素2 (interleukin-12)、粒细胞集落刺激因子(GCSF)等)、PGDF受体拮抗剂、赫赛汀、天冬酰胺酶、白消安、卡铂、顺铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥(cchlorambucil)、阿糖胞苷、达卡巴嗪、依托泊苷、flucarbazine、氟尿嘧啶(flurouracil)、吉西他滨、羟基脲、异环磷酰胺(ifosphamide)、伊立替康、洛莫司汀、美法仑、巯基嘌呤、甲氨蝶呤、硫鸟嘌呤、塞替派、拓优得、托泊替康、曲奥舒凡、长春碱、长春新碱、mitoazitrone、奥沙利铂、丙卡巴肼、链球菌素、泰素、泰素帝、这类化合物的类似物/同源物和衍生物以及本文未列出的其它抗肿瘤剂。

用于整联蛋白表达肿瘤的成像的 ⁶⁴ CU 标记的多聚体 RG 磺基丙氨酸肽

在本实施例中，下面所显示的⁶⁴CU标记的本发明四聚体和八聚体RG磺基丙氨酸肽(分别为化合物4和5)，可用作成像和诊断目的的放射治疗剂(例如肿瘤放射性同位素标记用于PET扫描)以及用于将治疗剂引入或递送至表达整联蛋白的肿瘤或其它细胞中，例如表达α_vβ₃整联蛋白的肿瘤。

化合物 4:

化合物 4

化合物 5:

化合物 5

化合物4和5的相应RGD类似物的合成和作用机制、生物分布、肿瘤选择性和PET相关应用描述于Li，Z.等，⁶⁴CU-Labeled Tetrameric and Octameric RGD Peptides for Small-Animal PET of Tumor α_vβ₃ Integrin Expression(用于肿瘤α_vβ₃整联蛋白表达的小动物PET的⁶⁴CU标记的四聚体和八聚体RGD肽)；J. Nucl. Med. 48 (7) 第1162-1171页(2007)。

化合物 1 对体内脉络膜新血管形成 (CNV) 的抑制

在该实施例中，测试了化合物1以确定是否其在公布的小鼠模型中抑制CNV，参见，Umeda N, Kachi S, Akiyama H, Zahn G, Vossmeyer D, Stragies R, Campochiaro P., 全身给予α₅β₁整联蛋白拮抗剂对脉络膜新血管形成的抑制和消退(Suppression and Regression of Choroidal Neovascularization by Systemic Administration of an α₅β₁ Integrin Antagonist): Molecular Pharmacology:2006, 69,1820-1828。

研究小鼠患有激光-诱导的Bruch’s膜的破裂，随后以1.0µg/1µL、25µg/1µL和以50µg/1µL的浓度单剂量的化合物1，以及在激光治疗后即刻经玻璃体内注射媒介物。激光治疗后第14天，通过图像分析测量CNV的面积。CNV损伤的大小在用1.0µg/1µL和50µg/1µL浓度的化合物1治疗的眼睛中，表现得稍微小一些。图8是显示在CNV小鼠模型中，用各种剂量的化合物1和对照品(只有媒介)处理14天后的新血管形成的总面积的图。

媒介处理的眼睛比较，25µg/1µL浓度的化合物1显示出CNV减少43%的统计学显著性。这提示单次玻璃体内注射25µg/1µL的化合物1足以限制抑制CNV。

体内研究–用于糖尿病性视网膜病的 Rop 模型

在该实施例中，在局部缺血的视网膜病小鼠模型中测试了化合物1以探索抑制前-视网膜新血管形成的可能性。

用0.125µg/1µL、12.5µg/1µL、25.0µg/1µL和50.0µg/1µL的浓度(分别为组B、D、F和H)的单剂量化合物1，以及媒介(BSS) (对照组1、2、3和4)，经玻璃体内注射给予出生后12天的患有局部缺血视网膜病的小鼠。出生后17天，即玻璃体内注射5天后，通过图像分析测量新血管形成的面积。图9是比较用这些不同剂量的化合物1或对照品(仅为媒介)处理的小鼠中新血管形成的测量面积的条形图。如在图 9中所示，在用(B) 0.125µg/1µL处理的眼中新血管形成损伤的尺寸似乎稍微减小。然而，组D (12.5µg/1µL)、F (25.0µg/1µL)和H (50.0µg/1µL)均有很大地减少且发现所有三种浓度与对照组2、3和4比较，均有统计学上的显著意义。

该研究的结果提示，单次玻璃体内注射12.5µg/1µL、25.0µg/1µL和50.0µg/1µL的化合物1足以显著抑制前-视网膜新血管形成。

化合物 1 的动物毒理学

下表A至E概述从以下研究获得的动物毒理学数据：

表 A

在新西兰兔中玻璃体内注射 2.5mg/100µL 化合物 1 加和不加脲的眼睛毒性

表 B

在雄性和雌性新西兰兔中玻璃体内注射 2.5mg/100µL 化合物 1 和 2.5mg/100µL 的 RGD 的眼睛毒性

表 C

在新西兰兔中结膜下注射 5.0mg/100µL 化合物 1 的眼睛毒性

表 D

在新西兰兔中3次玻璃体内注射2.5mg/100µL化合物1的眼睛毒性

表 E

在色素层炎新西兰兔中 3 次玻璃体内注射 2.5mg/100µL 、 5.0mg/100µL 和 10.0mg/100µL 化合物 1 的眼睛毒性

人多剂量研究

15名晚期DME 病人接受每月3次玻璃体内注射化合物1，作为多次注射1期人安全性研究的部分。未有严重不良事件和没有显著的不利事件。虽然该研究是首次安全性研究，但也评价了效力。8名病人的BCVA有3条或更多条线区的改善(代表治疗病人的53%)和4名病人由接近法律上的失明改善为在20/40-20/60范围内的功能性视力。此外，在8名病人中观察到OCT的黄斑解剖学的明显改善，范围从30%至80%。BCVA和OCT中心黄斑厚度的这些改善在停止治疗后的随访中持续90天。这些结果已经获得，虽然存在这些病人患有晚期DME和许多病人已被认为对目前Avastin以及激光凝固法二者的的治疗选项是难治的这一事实。以下表F显示了这些研究患者的概述，他们已经接受先前的采用Avastin或激光凝固疗法的治疗：

表 F

该研究的更详尽的细节和结果示于下表F、图10A至10I的线图和图示以及下文的段落中。

表 G

在罹患糖尿病黄斑水肿病人中 3 次玻璃体内注射 2.5mg/100µL 化合物 1 的安全性和效力

临床试验概述

1期研究的目的是评价晚期糖尿病黄斑水肿(DME)病人中眼玻璃体内注射化合物1的安全性和初始效力。该研究的第一终点是观察剂量极限毒性。该研究的第二终点是观察减少BCVA (ETDRS线)中的糖尿病黄斑水肿和OCT中心黄斑厚度的临床利益。

15名患有慢性晚期DME的病人完成了该开放的标记研究。登记的患者具有20/100或更差的BCVA (这主要是因DME所致)且在登记前90天内未经历抗-VEGF治疗或聚焦激光。许多研究对象对先前的Avastin治疗不应。研究对象接受每个月3次的2.5mg化合物1的玻璃体内注射并在随后的另外3个月里每月如此进行。通过BCVA、裂隙灯评价、扩瞳眼底检查、IOP测量、OCT、FA、眼底照片、B-扫描超声波和ERG进行安全性测量。

本研究登记了总共15名患者。总的说来，所有的研究对象非常良好地耐受研究药物化合物1。没有在或者前房或者玻璃体腔中的炎症反应的报告。注意到没有IOP的持续升高。在该研究期间注意到无角膜代偿失调或白内障进展。在该研究期间注意到无视网膜泪液或视网膜脱离，然而玻璃体后部脱离的高发生率(55%)经B-扫描超声波检查被观察到，如在先前的兔研究中所看到的那样。此外，在这些研究过程中自始至终未观察到血管阻塞。在15名或者中均未报道有严重不良事件或有明显的不良事件。

经接受3次玻璃体内注射后90天的研究，报道53% (8/15)的患者的BCVA增加3线或更多。未有研究对象从基线丧失BCVA。有趣的是，注意到相同比率的患者(53%或8/15)具有OCT中心黄斑厚度至少30%的显著减少。黄斑水肿中的最大减少为505微米(608减少至103)，即黄斑水肿的减少接近80%。BCVA的改善典型地遵循经OCT的黄斑水肿减少的改善。一个研究课题证实从其基线糖尿病黄斑水肿的进展，最初在其治疗过程中的改善，但后来在研究150天时，即在停止玻璃体内疗法3个月时，发展到越过其基线OCT黄斑厚度。该研究对象的BCVA最初改善5条线，但后来在研究150天时返回到基线。

在该研究中，如在图10A至10J中图示的，存在着通过BCVA、OCT中心黄斑厚度、炎症反应的缺失或临床检查的视网膜病变、FA、B-扫描或ERG证实的毒性缺失的一致性。总的来说，化合物1是非常良好地耐受的。

有趣地，不管研究对象的末期性质和小的研究规模，似乎存在具有BCVA探测解剖学改善、OCT中心黄斑厚度的改善的功效的清楚的临床指证。此外，在几乎显示改善的所有研究对象中，临床改善似乎是在采用化合物1的最后玻璃体内治疗后持续至少90天。作者感觉到需要较大的研究以进一步评价和证实这种新型的抗-血管生成药的安全性和功效并更好地理解它的新的作用机理的特点。

兰尼单抗和化合物 1 单独和组合在转基因小鼠中表达人 VEGF 的效果

其中视紫红质促进剂驱动人VEGF在光感受器中的表达的转基因小鼠(rho/VEGF小鼠)被随机分入各分开的治疗组并进行研究以提供以下比较：

A	25 µg化合物1 (5只动物)对比10µ兰尼单抗+ 25 µg化合物1的组合(5只动物)
		B	10 µg兰尼单抗(5只动物)对比10µ 兰尼单抗+25 µg化合物1的组合(5只动物)
C	25 µg化合物1 (3只动物)对比磷酸盐缓冲盐水(媒介/对照) (3只动物)
		D	10 µg兰尼单抗(3只动物)对比磷酸盐缓冲盐水(媒介/对照) (3只动物)

对每只动物的视网膜下(subretinal)新血管形成面积的治疗前测量通过不知情的观察员采用图像分析来进行。每只动物接受其指定的单次眼内注射治疗。给药后7天，再次进行视网膜下新血管形成的面积的测量并与给药前的测量进行比较，以确定视网膜下新血管形成面积的变化。也处死动物并切开视网膜，用GSA凝集素进行免疫染色并通过荧光显微镜检查。

图11A是比较接受25 µg化合物1的动物 (5只动物)相对于接受10µ兰尼单抗+25 µg化合物1的组合的动物(5只动物)的视网膜下新血管形成面积的平均变化的条形图。接受10µ兰尼单抗+25 µg化合物1的组合的动物与单独接受25 µg化合物1的动物相比，其视网膜下新血管形成面积显示出35.34%的更大的减少。这些数据指明，在试验剂量下，兰尼单抗和化合物1的组合在减少视网膜下新血管形成方面比单独使用化合物1更有效。

图11B是比较接受10 µg兰尼单抗的动物(5只动物)相对于接受10µ兰尼单抗+25 µg化合物1的组合的动物(5只动物)的视网膜下新血管形成面积的平均变化的条形图。接受10µ兰尼单抗+25 µg化合物1的组合的动物与单独接受10 µg兰尼单抗的动物相比，其视网膜下新血管形成面积显示出34.70%的更大的减少。这些数据指明，在试验剂量下，兰尼单抗和化合物1的组合在减少视网膜下新血管形成方面比单独使用化合物1更有效。

图11C是比较接受25 µg化合物1的动物(3只动物)相对于接受磷酸盐缓冲盐水(媒介/对照)的动物(3只动物)，其视网膜下新血管形成面积的平均变化的条形图。接受25 µg化合物1的动物与对照动物相比，其视网膜下新血管形成面积显示出37.06%的更大的减少。这些数据指明，在试验剂量下，化合物1在减少视网膜下新血管形成方面比对照品更有效。

图11D是比较接受10 µg兰尼单抗的动物(3只动物)相对于接受磷酸盐缓冲盐水(媒介/对照)的动物(3只动物)，其视网膜下新血管形成面积的平均变化的条形图。接受10 µg兰尼单抗的动物与对照动物相比，其视网膜下新血管形成面积显示出38.96%的更大的减少。这些数据指明，在试验剂量下，兰尼单抗在减少视网膜下新血管形成方面比对照品更有效。

总之，在这些比较研究的试验剂量下，兰尼单抗和化合物1在单独给予时，各自引起视网膜下新血管形成面积的统计学显著意义上的减少。然而，兰尼单抗和化合物1的组合比或者兰尼单抗单独或者化合物1单独使用时，引起视网膜下新血管形成面积的显著更大的减少。基于这些数据，使用化合物1 (或另一种抑制整联蛋白的本发明化合物)与VEGF捕获剂(VEGF Trap) (如兰尼单抗)的组合的联合疗法在患有新血管生成性眼病的患者中具有潜在的临床效益。

与本文所用一样，任何提及疾病或病症的治疗或医治时，除非另外指明，应解释为包括在疾病或病症发生或被检出之前预防或防止所述疾病或病症以及在其发生或检出之后治疗所述疾病或病症。

要理解的是，上文参照本发明的某些实施例或实施方案对本发明进行了描述，但是可在不偏离本发明的既定精神和范围的情况下，对这些实施例和实施方案进行各种添加、删减、改动和修改。例如，一个实施方案或实施例的任何要素或属性可掺入另一实施方案或实施例或者与另一实施方案或实施例一起使用，除非另有说明如果如此做将可能致使实施方案或实施例不适于其既定用途。同样地，如果以特定顺序描述或列举方法或工艺的步骤，则可以改变所述步骤的顺序，除非另有说明或者除非如此做可能致使所述方法或工艺无法实现其既定目的。所有合理的添加、删减、修改和改动应视为所述实施例和实施方案的等同内容，并且包括在所附权利要求书的范围内。本文引用的所有出版物和专利文献均通过引用以其整体结合到本文中用于所有目的，引用程度如同各自如此分别指出一样。

Claims

1.一种用于在人或动物受试者中抑制α₃β₁-整联蛋白、α₅β₁-整联蛋白、α_vβ₃-整联蛋白和α_vβ₅-整联蛋白，和/或其它整联蛋白和/或抑制bFGF产生的方法，所述方法包括以下步骤：

给予受试者有效量的RG磺基丙氨酸肽或其衍生物。

2.权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物是放射性标记的，并用于检测肿瘤。

3.依据权利要求1的方法，其中实施所述方法以产生选自以下的至少一种治疗或诊断作用：

调节核内体组织蛋白酶；治疗或预防微生物(例如，细菌或病毒)感染；阻止微生物进入(例如，细菌或病毒)到细胞中；治疗或预防性抑制血管生成、治疗或预防血管生成相关疾病、抑制肿瘤或新生物的血管生成或血管形成；抑制VEGF产生或可利用性；抑制细胞的粘附、迁移和/或增殖；治疗炎症；治疗癌症；治疗转移；引导或递送治疗剂或诊断剂至肿瘤；治疗血栓形成；引起玻璃体溶解；引起玻璃体视网膜脱离；促进玻璃体切除术性能；促进伤口愈合；表达特定整联蛋白的组织的放射性同位素标记和治疗青光眼。

4.依据权利要求1的方法，其中实施所述方法以治疗选自以下的血管生成相关疾病或病症：癌症、血管畸形、动脉硬化、血管粘连、水肿性硬化症、角膜移植片新血管形成、新生血管性青光眼、糖尿病性视网膜病、翼状胬肉、视网膜变性、干性和湿性黄斑变性、黄斑水肿、漂浮物、角膜新生血管形成、缺血性视神经、虹膜发红、中心静脉闭塞、视网膜前膜的移除、晶状体后纤维组织增生、颗粒性结膜炎、类风湿性关节炎、***性红斑狼疮、甲状腺炎、银屑病、哮喘、毛细管扩张、化脓性肉芽肿、脂溢性皮炎和痤疮。

5.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

其中X选自H、C₁–C₆烷基、Ph和SO₃H，和Y独立地选自OH和NH₂。

6.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph和SO₃H。

7.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H，且其中Z选自：H和SO₃H。

8.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H；Y选自OH或NH₂。

9.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H。

10.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

其中X选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H。

11.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

X₁-R-G-磺基丙氨酸-X

其中X和X₁选自环状或线性的：-Phe-Val-Ala、-Phe-Leu-Ala、-Phe-Val-Gly、-Phe-Leu-Gly、-Phe-Pro-Gly、-Phe-Pro-Ala、-Phe-Val或以下氨基酸的D-异构体或L-异构体的任何组合的任何盐：Arg、Gly、磺基丙氨酸、Phe、Val、Ala、Leu、Pro、Thr。

12.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物具有以下通式：

其中X’选自：H、C₁–C₆烷基、Ph或SO₃H；和Z选自H或Me；Y选自OH、NH₂。

13.依据权利要求1的方法，其中所述RG磺基丙氨酸肽或其衍生物包含多聚体RG磺基丙氨酸肽。

14.依据权利要求13的方法，其中所述多聚体RG磺基丙氨酸肽与抗肿瘤物质结合，且其中实施所述方法以***。

15.依据权利要求14的方法，其中所述多聚体RG磺基丙氨酸肽包含化合物3。

16.依据权利要求14的方法，其中所述抗肿瘤物质选自：癌症化学治疗剂、生物反应调节剂、血管生成抑制剂、激素受体阻断剂、低温治疗剂；破坏或抑制瘤形成或肿瘤发生的物质；烷化剂；通过攻击其DNA而直接杀死癌细胞的物质；环磷酰胺；异磷酰胺；亚硝基脲、通过抑制细胞DNA修复所必需的变化而杀死癌细胞的物质；卡莫司汀(BCNU)；洛莫司汀(CCNU)；抗代谢物；通过干扰DNA合成而阻断癌细胞生长的物质；6-巯基嘌呤；5-氟尿嘧啶(5FU)；抗肿瘤抗生素；通过结合或嵌入DNA和防止RNA合成而起作用的化合物；多柔比星；柔红霉素；表柔比星；伊达比星；丝裂霉素-C；博来霉素；长春花属生物碱；长春新碱；长春碱；甾类激素；激素抑制剂；激素受体拮抗剂；影响激素反应性癌的生长的物质；他莫昔芬；赫赛汀；芳香酶抑制剂；氨鲁米特；福美坦；***抑制剂；来曲唑；阿那曲唑；甾体抑制剂；依西美坦；抗血管生成蛋白；基因治疗剂；抑制肿瘤血管发生或血管生成的物质；meth-1；meth-2；沙利度胺；贝伐珠单抗(阿瓦斯丁)；司夸胺；内皮生长抑素；血管生长抑素；血管增生核酶(Angiozyme)、AE-941 (新伐司他)；CC-5013 (Revimid)；medi-522 (αVβ3人源化单抗)；2-甲氧基***(2ME2，Panzem)；羧基酰胺基***(CAI)；康普瑞汀A4前药(CA4P)；SU6668；SU11248；BMS-275291；COL-3；EMD 121974；IMC-1C11；IM862；TNP-470；塞来考昔(Celebrex)；罗非考昔(Vioxx)；干扰素α；白介素-12 (IL-12)；生物反应调节剂；卡介苗(BCG)；单克隆抗体；白介素2；粒细胞集落刺激因子(GCSF)；PGDF受体拮抗剂；赫赛汀；天冬酰胺酶；白消安；卡铂；顺铂；卡莫司汀；苯丁酸氮芥；阿糖胞苷；达卡巴嗪；依托泊苷；flucarbazine；氟尿嘧啶；吉西他滨；羟基脲；异环磷酰胺；伊立替康；洛莫司汀；美法仑；巯基嘌呤；甲氨蝶呤；硫鸟嘌呤；塞替派；拓优得；托泊替康；曲奥舒凡；长春碱；长春新碱；mitoazitrone；奥沙利铂；丙卡巴肼；链球菌素；泰素和泰素帝。

17.依据权利要求13的方法，其中所述多聚体RG磺基丙氨酸肽与放射性标记的化合物结合，并且实施所述方法以放射性标记肿瘤组织。

18.依据权利要求17的方法，其中与放射性标记的化合物结合的所述多聚体RG磺基丙氨酸肽包含化合物4。

19.依据权利要求17的方法，其中与放射性标记的化合物结合的所述多聚体RG磺基丙氨酸肽包含化合物5。

20.依据权利要求1的方法，其中实施所述方法以治疗或预防病毒或其它微生物感染。

21.依据权利要求20的方法，其中实施所述方法以治疗或预防埃博拉病毒感染。

22.依据权利要求20的方法，其中化合物以调节核内体组织蛋白酶的剂量，以阻止病毒或其它微生物进入受试者体内的细胞的方式给予。

23.依据权利要求1的方法，该方法还包括以下步骤：

给予受试者一种或多种粘合、捕获、清除或另外的阻止已经产生的VEGF的作用的其它组合物。

24.依据权利要求23的方法，其中所述一种或多种其它组合物包含至少一种选自贝伐单抗(Avastin)、兰尼单抗(Lucentis)和阿柏西普(Eylea)的药物。

25.依据权利要求23的方法，其中RG磺基丙氨酸肽或其衍生物以还有效抑制酪氨酸激酶的量给予。

26.依据权利要求23的方法，其中RG磺基丙氨酸肽或其衍生物以还有效引起玻璃体视网膜后部脱离的量给予。

27.依据权利要求23的方法，其中实施所述方法以治疗引起受试者眼睛的视网膜过度血管形成的疾病。

28.依据权利要求27的方法，其中所述疾病选自湿性年龄相关性黄斑变性、糖尿病黄斑水肿、增生性或非-增生性糖尿病性视网膜病、玻璃体液的液化、诱导玻璃体-视网膜后部脱离(PVD)、玻璃体视网膜疾病的病理发生，例如特发性黄斑裂孔、玻璃体黄斑牵引、年龄相关性黄斑变性、脉络膜新血管形成、玻璃体视网膜手术、静脉阻塞、角膜新血管形成、局部缺血性视神经、虹膜发红和在青光眼手术中防止瘢痕形成。

29.依据权利要求27的方法，其中RG磺基丙氨酸肽或其衍生物经玻璃体内注射给予。

30.依据权利要求23的方法，其中RG磺基丙氨酸肽或其衍生物和所述一种或多种其它组合物联合并以单次玻璃体内注射给予。

31.依据权利要求23的方法，其中RG磺基丙氨酸肽或其衍生物和所述一种或多种其它组合物分别经玻璃体内注射给予。