BR112013028914B1 - Uso de um peptídeo inibidor de integrina que consiste em glicinil-arginil-glicinil-cisteico (ácido)-treonil-prolina-cooh para tratar edema macular - Google Patents

Uso de um peptídeo inibidor de integrina que consiste em glicinil-arginil-glicinil-cisteico (ácido)-treonil-prolina-cooh para tratar edema macular Download PDF

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Abstract

antagonistas de receptores de integrina e seus métodos de uso. compostos que compreendem ácido r-g-ácido cisteico (iso é, r-g-nh-ch(ch2-so 3h)cooh ou arg-gly-nh-ch(ch2-so3h)cooh) e derivados dos mesmos, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, estereoisômeros, multímeros, formas cíclicas, formas lineares, conjugados de fármacos, pró-fármacos e seus derivados. são também divulgados métodos para a produção e utilização de tais compostos incluindo métodos para a inibição de integrinas incluindo, mas não necessariamente limitados a (alfa)5(beta)1-integrina, (alfa)v(beta)3-integrina e (alfa)v(beta)5-integrina, inibição de adesão celular a sítios de ligação de rgd, prevenção ou tratamento viral ou de outras infecções microbianas, inibição da angiogênese em tumores, tecido da retina ou outros tecidos ou fornecimento de outros agentes de diagnóstico ou terapêuticos aos sítios de ligação a rgd em indivíduos humanos ou animais.

Description

PEDIDOS DE PATENTES RELACIONADOS
[001]Este pedido de patente reivindica prioridade a cada um dos Pedidos de Patentes U.S. Provisórios No. de Série 61/484.194 depositado em 9 de maio de 2011, 61/486.725 depositado em 16 de maio de 2011 e 61/643.118 depositado em 4 de maio de 2012, a divulgação inteira de cada tal pedido de patente provisório sendo expressamente incorporada aqui como referência. Adicionalmente, este pedido de patente é uma continuação em parte do a) Pedido de Patente Internacional copen- dente No. PCT/US2010/056227 depositado em 10 de novembro de 2010 e b) Pedido de Patente U.S. No. de Série 12/943,900 depositado em 10 de novembro de 2010, dos quais ambos reivindicam prioridade ao Pedido de Patente Provisório U.S. No. de Série 61/259.748 depositado em 10 de novembro de 2009. A divulgação inteira de cada um dos pedidos de patentes anteriores é expressamente incorporada aqui como referência.
CAMPO DA INVENÇÃO
[002]A presente invenção refere-se de forma geral aos campos de química e medicina e mais particularmente aos antagonistas de receptores de integrina e seus métodos de uso.
FUNDAMENTO DA INVENÇÃO
[003]A sequência de tripeptídeos RGD é encontrada em um número de proteínas, onde desempenha uma função na adesão celular. Os exemplos de proteínas em que a sequência de tripeptídeos RGD está presente incluem colágenos, fibronec- tina, vitronectina, fator de von Willebrand (VWF), certas desintegrinas e certas dis- coidinas.
[004]As integrinas são receptores de superfície celular que medeiam a ade- são entre as células e a matriz extracelular (ECM) através da ligação a ligantes que possuem uma sequência de RGD exposta. Acredita-se que a ligação de integrina- RGD normal desempenha uma função na expressão gênica envolvida no crescimento, na migração e na sobrevivência celular. A regulação defeituosa de tal crescimento, migração e sobrevivência celular pode resultar em um número de estados de doença incluindo trombose, inflamação e câncer. Assim, os peptídeos RGD foram investigados como imitadores potenciais de proteínas de adesão celular e em relação a sua capacidade de se ligar às integrinas para finalidades terapêuticas tais como inibição da adesão celular, migração celular, proliferação celular, diferenciação celular, apoptose, angiogênese, tumorigênese, para a inibição da entrada de microorganismos nas células, para uso em sua forma multimérica como agentes radiote- rapêuticos internos bem como agentes de obtenção de imagens de câncer e em relação as suas capacidades de carregamento de fármacos anticâncer.
[005]No olho, as integrinas afetam um número de processos incluindo o desenvolvimento ocular, a migração celular, a cicatrização e alguns processos patológicos. As integrinas também podem modular a inflamação e a trombose no tecido ocular. O peptídeo RGD injetado de forma intravitreal também foi relatado como causando descolamento vitreorretinal posterior em um modelo de animal e, assim, pode ser útil no tratamento de certos distúrbios da retina e/ou para facilitar a remoção do corpo vítreo em um procedimento de vitrectomia. Ver Olivera, L.B. e outros, RGD Peptide-Assisted Vitrectomy to Facilitate Induction of a Posterior Vitreous Detachment: a New Principle in Pharmacological Vitreolysis; Current Eye Research (8):333-40 (25 de dezembro de 2002).
[006]É também sabido que as integrinas são utilizadas por vários vírus enve- lopados e não envelopados e bactérias na infecção de células hospedeiras. Schorn- berg, Kathryn L.; α5β1-Integrina Controls Ebolavirus Entry by Regulating Endosomal Cathespins; Proc. Nat. Acad. Sci. USA; Vol. 106, No. 19, pp. 8003-8008 (2009)
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[007]A presente invenção fornece novos compostos que compreendem Ácido R-G-Cisteico (isto é, R-G-NH-CH(CH2-SO3H)COOH ou Arg-Gly-NH-CH(CH2- SO3H)COOH) e derivados do mesmo (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, estereoisômeros, multímeros, formas cíclicas, formas lineares, conjugados de fármacos, pró-fármacos e seus derivados).
[008]A presente invenção fornece ainda composições e métodos para inibição terapêutica ou profilática de receptores de integrina em indivíduos humanos ou animais. Tal inibição de receptores de integrina pode ser utilizada para o tratamento ou para a prevenção de neovascularização ou formação de vasos sanguíneos em tumores ou outros tecidos (por exemplo, a retina do olho), para tratar ou prevenir doenças virais, impedir vários distúrbios virais incluindo retinopatia diabética e outros estados de saúde envolvendo neovascularização indesejada para prevenir ou para tratar a inibição da adesão celular aos sítios de ligação de RGD ou fornecimento de outros agentes diagnósticos ou terapêuticos aos sítios de ligação de RGD em indivíduos humanos ou animais através da administração ao indivíduo de uma quantidade eficiente de uma composição que compreende um peptídeo do Ácido R-G-Cisteico ou um derivado do mesmo (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, estereoisômeros, multímeros, formas cíclicas, formas lineares, conjugados de fár- macos, pró-fármacos e seus derivados). Os exemplos específicos do peptídeo do Ácido R-G-Cisteico desta invenção incluem uma forma linear de Arg-Gly-NH- CH(CH2-SO3H)COOH (exemplo referido aqui como Composto 1) e uma forma cíclica de Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH) (exemplo referido aqui como Composto 2).
[009]As fórmulas gerais para os derivados do Ácido R-G-Cisteico da presente invenção incluem, mas não estão limitadas a compostos que possuem as Fórmulas Gerais I-VII como a seguir:
[010]Fórmula Geral I:
Figure img0001
em que X é selecionado de: H, Ci - C6 alquila, Ph ou SO3H e Y = OH ouNH2.Fórmula Geral II:
Figure img0002
em que X é selecionado de: H, C1 - C6 alquila, Ph ou SO3H.
Figure img0003
em que X é selecionado de: H, C1 - C6 alquila, Ph ou SO3H e em que Z é selecionado de: H ou SO3HFórmula Geral IV:
Figure img0004
em que X é selecionado de: H, C1 - C6 alquila, Ph ou SO3H; Y é selecionado de OH ou NH2.Fórmula Geral V:
Figure img0005
em que X é selecionado de: H, Ci - C6 alquila, Ph ou SO3H.Fórmula Geral VI:
Figure img0006
em que X é selecionado de: H, C1 - C6 alquila, Ph ou SO3H.Fórmula Geral VII:Ácido-X X1-R-G-Cisteicoem que X e X1 são selecionados de: -Phe-Val-Ala, -Phe-Leu-Ala, -Phe-Val- Gly, -Phe-Leu-Gly, -Phe-Pro-Gly, -Phe-Pro-Ala, -Phe-Val cíclicos ou lineares ou qualquer sal de qualquer combinação do D-isômero ou do L-isômero de: Arg, Gly, Cisteico, Phe, Val, Ala, Leu, Pro, Thr.
[011]Os exemplos de formas cíclicas da Fórmula Geral VII incluem, mas não estão necessariamente limitados a: z
Figure img0007
em que X’ é selecionado de: H, C1 - C6 alquila, Ph ou SO3H e Z é selecionado de H ou Me; Y é selecionado de OH, NH2.
[012]Os ácidos sulfônicos são ácidos mais fortes que os ácidos carboxílicos correspondentes. Esta polaridade mais alta do grupo do ácido sulfônico leva à ligação intermolecular mais forte. Por exemplo, o Ácido R-G-Cisteico, que possui uma ligação O-H mais polarizada, pode formar ligações de hidrogênio mais fortes que o ácido R-G-Aspártico (peptídeo RGD), que possui uma ligação O-H relativamente menos polarizada, com os grupos amida das proteínas no sítio de ligação da integri- na e/ou possuem interações mais fortes com íons metálicos complexados no sítio de ligação da integrina.
[013]Como descrito em maiores detalhes em algum lugar aqui, um exemplo específico da Fórmula Geral VII, Glicinil-Arginil-Glicinil-Cisteico-Treonil-Prolina- COOH (Ácido GRG Cisteico TP; referido abaixo como Composto 1) foi sintetizado e testado em animais e foi observado que era eficiente na indução do descolamento vítreo posterior (PVD) da superfície da retina através da inibição das interações de integrina-matriz extracelular (ECM). Como descrito ainda em maiores detalhes em algum lugar aqui, o Composto 1 foi testado em um modelo de cicatrização de ferimentos utilizando células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC) e foi mostrado que inibe a adesão celular em 74% em 12 horas comparado com uma inibição de 40% pelo peptídeo cíclico-RGD. Estes estudos sugerem e corroboram para o argumento de que Glicinil-Arginil-Glicinil-Cisteico-Treonil-Prolina-COOH pode se ligar à integrina ainda mais fortemente que os peptídeos RGD por si só.
[014]A sequência peptídica do Ácido RG Cisteico, que pode estar na forma L ou na forma D, é um inibidor competitivo de interações de integrina-ECM. A sequência peptídica do Ácido RG Cisteico pode ser derivados resistentes a proteases ou de derivados cíclicos ou de derivados de pró-fármacos ou associada com sistemas de fornecimento de fármacos ou de anticorpos monoclonais.
[015]As composições da presente invenção podem ser utilizadas para inibir a angiogênese, que pode ser útil para o tratamento de inflamação, cicatrização de ferimentos, trombose, metástases de câncer e tumores. Uma aplicação útil adicional pode ser encontrada na oftalmologia incluindo o tratamento de, retinopatia diabética proliferativa ou não proliferativa, liquefação do vítreo, indução do descolamento ví- treo-retinal posterior (PVD), patogênese de doenças vitreorretinais, tais como orifício macular idiopático, edema macular, corpos flutuantes, tração vitreomacular, degene- ração macular relacionada à idade, degeneração macular úmida, neovascularização coroidal, cirurgia vitreorretinal, oclusão da veia e prevenção de formação de cicatriz na cirurgia de glaucoma. Ainda adicionalmente, composições multiméricas e/ou marcadas radioativamente da presente invenção podem ser utilizadas como agentes para diagnóstico/obtenção de imagens para a detecção de tumores e agentes radio- terapêuticos para o tratamento de tumores e como carregadores de fármacos anti- câncer devido as suas propriedades de direcionamento ao tumor.
[016]Materiais biológicos que incorporam um peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO também pode fornecer um microambiente adesivo sintético para a sobrevivência a longo prazo e o crescimento de células e para a engenharia de tecidos vivos para aplicações na engenharia de tecidos e medicina regenerativa. Através de sua propriedade de ligação de receptores de adesão à integrina, os peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO podem fornecer um sinal promotor de adesão quando este está preso sobre o material biológico ou armação. Os materiais à base do ÀCIDO RG CISTEICO medeiam a adesão celular, o espalhamento e a migração de células. Em adição, a adesão de células mediada pela integrina promove a proliferação e a sobrevivência celular e desempenha uma função importante na montagem e na organização de estruturas multicelulares e tecidos.
[017]Fármacos para o tratamento de degeneração macular como Lucentis e Avastin se baseiam na inibição de VEGF, que de outra maneira causa o crescimento de novos vasos, angiogênese e consequentemente contribui para edema macular. Foi sabido que um pequeno peptídeo RGD pode induzir a apoptose através da inibição da adesão célula à matriz extracelular1por ligação competitiva como é mostrado na Patente U.S. No 6.500.924 a Brooks e outros.
[018]O motivo de ligação ou de reconhecimento do peptídeo RGD pode ser encontrado nas proteínas de matriz extracelular e integrinas que ligam o citoesquele- to intracelular das células com a ECM através do reconhecimento dos epítopos de adesão de RGD. Ver, por exemplo, Foos, R Y., Invest. Opthalmol. Vis. Sci. (1972) 11, 801-808. As células, sem a adesão à ECM, normalmente sofrem apoptose.
[019]Em geral, interações entre fibroblastos e componentes de glicoproteína da matriz extracelular causam uma maior formação de cicatrizes mediada primariamente pelo RGD que contém sequência de aminoácidos que interage sobre as inte- grinas de superfície celular. Foi também sabido que a sequência de RGD está envolvida nas interações de célula-ECM durante reações inflamatórias e homeostáticas (ver Hershkoviz, S. M. e outros, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., (1994), 35, 2585-2591) e as integrinas desempenham uma função importante na migração celular na cicatri- zação de ferimentos ou processos patológicos e na modulação de inflamação e trombose. Assim, potentes antagonistas de integrina, como peptídeos RGD, poderiam ser muito úteis como agentes farmacológicos como agentes anti-inflamatórios, antimetastásicos ou antitrombóticos (ver Elner, S.G. e Elner, V.M., IOVS (1996) 37:696-701. Foi também relatado na literatura que o receptor CD44 para o ácido hia- lurônico medeia as interações célula-célula e célula-matriz através de sua afinidade pelo ácido hialurônico e possivelmente também através de sua afinidade por outros ligantes tais como osteopontina, colágenos e metaloproteases de matriz (MMPs).
[020]A adesão com hialuronana desempenha uma função importante na migração celular, no crescimento e na progressão de tumores e está também envolvida na ativação de linfócitos, recirculação e residência e hematopoiese. A expressão alterada ou a disfunção causa vários fenótipos patogênicos (ver, por exemplo, Jiang D., Annu. Rev. Cell. Dev. Biol. (2007) 23: 435-461; e Knudson, W. e outros, Matrix Bio. (2002), 21: 15-23).
[021]Recentemente, foi mostrado que a interação de CD44 e componentes de matriz celular (por exemplo, HA) desempenha uma função significativa no desenvolvimento de várias doenças inflamatórias e interrupção de interações de hialuro- nana-CD44 levariam à melhora da neovascularização coroidal (ver Hiroshi Mochima- ru e outros., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2009) 50: 4410-4415).
[022]Estas evidências demonstram que uma molécula de adesão como o peptídeo RGD ou CD44 em interações célula-célula e célula-ECM desempenha uma função importante no desenvolvimento de várias doenças patogênicas e a inibição das interações pode ser um novo alvo terapêutico no tratamento e na cura das do-enças.
[023]Foi também mostrado que peptídeos sintéticos se ligam às integrinas e fatores de crescimento. Foi observado que pentapeptídeos ciclizados contendo sequências de RGD inibem a ligação da vitronectina com a αvβ3 integrina (ver Michael A. Dechantsreiter e outros, J. Med. Chem. (1999) 42:3033-3040) e tanto a vitronecti- na quanto a fibronectina às αvβ3 e αIIbβ3 integrinas (ver Roland Haubner e outros., J. Am. Chem. Soc., (1996)118:7461-7472). Foi mostrado que esta inibição é útil no tratamento de várias doenças não relacionadas. Em estudos com hamster, os penta- peptídeos cíclicos retardaram o crescimento e a metástase de tumores em comparação com animais de controle (ver M. A. Buerkle e outros., British J. Cancer (2002) 86: 788-795). Também foi mostrado que os pentapeptídeos reduzem a ligação de células sanguíneas vermelhas falciformes ao endotélio vascular e aprimoravam o comportamento hemodinâmico (ver Eileen M. Finnegan e outros., Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol., (2007) 293: H1038-H1045). Outros peptídeo cíclico contendo a sequência de RGD mostrou forte ligação a α4β1, uma integrina conhecida por desempenhar uma função na ligação de leucócitos nas respostas inflamatórias e imu- nológicas (ver Pina M. Cardarelli e outros., J. Biol. Chem. (1994) 269:18668-18673). Um tetrapeptídeo sulfatado sintético mostrou se ligar fortemente a VEGF (ver Maynard, J.A. Hubbell, Acta Biomaterialia (2005) 1: 451-459).
[024]Em adição, em uma aplicação importante e útil, um conjugado de pep- tídeo RGD dimérico-fármaco mostrou ser útil para o fornecimento de fármacos direcionados para a integrina para direcionamento a tumores (ver Chen e outros., J. Med. Chem., (2005) 48(4): 1098-1106).
[025]Em outra aplicação igualmente importante e útil, peptídeos RGD marcados radioativamente multiméricos mostraram ser úteis como agentes de diagnósti- co/obtenção de imagens para a detecção de tumores e, como agentes radioterapêu- ticos para direcionamento específico a tumores e tratamento através do direcionamento à integrina αvβ3 (see Zi-Bo Li e outros., J. Nucl. Medicine, (2007) 48: 11621171).
[026]Na oftalmologia, a formação de cicatrizes na cicatrização de ferimentos por fibroblasto é um dos problemas principais, particularmente no glaucoma. Isto surge partindo das interações entre o fibroblasto e os componentes de glicoproteína da ECM. O reconhecimento de glicoproteínas da ECM ocorre através de integrinas da superfície celular que são específicas para os epítopos de adesão, tal como a sequência Arg-Gly-Asp (ou RGD). A sequência de RGD, que está presente em várias matrizes de proteínas do plasma, incluindo fibronectina (FN) e vitronectina (VN), está envolvida nas interações de célula-ECM que ocorrem durante reações inflamatórias e homeostáticas. A inibição das interações entre fibroblasto e glicoproteínas da ECM aliviou a formação de cicatrizes (ver Rami Hershkoviz e outros., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1994) 35: 2585-2591).
[027]As fibrilas de colágeno do córtex vítreo posterior se aderem à interface vitreorretinal, especificamente à lâmina limitante interna da superfície da retina (ver Sebag J., Eye (1992), 6: 541-552). A aderência na base vítrea, o disco óptico, ao longo dos vasos retinais principais e de uma maneira facial ao posterior inteiro desempenha uma função importante na patogênese de doenças vitreorretinais, tais como orifício macular idiopático, tração vitreomacular, retinopatia diabética prolifera- tiva etc. (Akiba J. Quiroz M.A. e outros, Ophthalmol. (1990) 97, 1619-1655).
[028]A inibição da angiogênese vem exibindo uma promessa precoce com a retinopatia diabética e a degeneração macular, que ambas resultam de um super- crescimento de vasos sanguíneos oculares. Nestes distúrbios, os vasos interferem com as estruturas normais no olho ou bloqueiam a luz de atingir a parte posterior do olho. Os novos vasos sanguíneos são por si só a patologia primária e a interrupção do crescimento dos vasos sanguíneos poderia prevenir a cegueira. Assim, a angioi- nibição poderia resultar não somente em um tratamento destes distúrbios; esta poderia ser uma cura. Além disso, foi postulado que a separação do vítreo da retina pode aliviar a tração macular, reduzindo o risco de formação de orifício macular. Consequentemente, o descolamento vítreo posterior através da inibição de fibronec- tina e laminina que se ligam às integrinas sobre a interface vitreorretinal interface, pode prevenir a neovascularização retinal nos olhos com retinopatia diabética e oclusão da veia retinal (ver Akiba J. Quiroz MA, Ophthalmol. (1990) 97, 1619-1655; Kelly N.E. e outros, Arch. Ophthalmol. (1991) 109, 654-659; e Kado M e outros, Am. J. Ophthalmol. (1988) 105: 20-24).
[029]Nos últimos anos, procedimentos cirúrgicos vítreos foram enormemente aprimorados para aliviar trações vitreorretinais e para reduzir edema da retina. Apesar do aprimoramento continuado nas técnicas cirúrgicas e na instrumentação, ainda permanecerá difícil atingir uma remoção não traumática do córtex vítreo em alguns pacientes particularmente em pacientes com retinopatia diabética e pediátricos devido às complicações tais como rompimentos da retina, descolamento da retina e danos na fibra nervosa da retina (ver Sebag J., Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. (1987) 225: 89-93; e Han D.P. e outros, Arch. Ophthalmol. (1998) 106: 998-1000) etc. Assim, uma abordagem menos traumática para perfurar o vítreo sem danificar a retina é altamente desejável. Nos últimos anos, relatos em relação a um número de agentes farmacológicos para a separação da interface vitreorretinal apareceram na literatura (ver Trese M.T., Eye. (2002) 16: 365-368; Gandorfer A. e outros, Am. J. Ophthalmol. (2002) 133: 156-159; e Hesse L. e outros, Eye Res. (2000) 70: 31-39). A vitreólise farmacológica utilizando enzimas tais como hialuronidase (see US Patent No. 6,863,886 to Karageozian e outros.) e plasmina autóloga (Sakuma T e outros, Nippon Ganka Gakkai Zassi (2003) 107: 709-718) foi explorada para promover a digestão da matriz extracelular e para induzir o descolamento vítreo posterior no passado. Ainda, uma destruição inespecífica de tecidos adjacentes pelas enzimas empregadas impede o sucesso de sua aplicação terapêutica. Nos últimos anos, uma nova abordagem utilizando agentes farmacológicos não enzimáticos como a ureia (ver Nickerson, C. e outros, in J. Biomechanics, (2008) 41: 1840-1846 e in Macromol. Symp. (2005): 183-189) e peptídeo RGD (ver Leonardo B. Oliviera e outros, Curr. Eye Res. (2002) 25: 333-340) foi investigada através da concentração na separação da interface vitreorretinal. Foi mostrado que um análogo sintético do peptídeo RGD compete pelo motivo de RGD de proteínas da ECM para romper as interações de integrina - ECM interactions e para afrouxar as ligações in-vitro (Williams J.A., Pathol. Bio. (1992) 40: 813-821; Gehlsen K.R. e outros, J. Cell. Biol. (1988) 106: 925930; Pierschbacher, M.D. e outros, J. Biol. CHem., (1987) 262: 17294-17298; e Zhon L.L. e outros, IOVS. (1996) 37: 104-113) e in-vivo. Assim, a injeção intravitreal de peptídeos RGD solúveis leva a uma liberação de epítopos de RGD partindo das proteínas da ECM insolúveis da superfície retinal, consequentemente facilitando o PVD não enzimático em modelos com coelhos. Claramente, estes resultados indicam que a interface vitreorretinal envolve a conexão da integrina com o motivo de RGD da ECM bem como a adesão de colágenos corticais vítreos à lamela limitante interna (ILL). Os peptídeos RGD e seus derivados promovem a migração de células epiteli- ais em um ferimento (ver P.M. Mertz e outros, J. Burn Care Res. (1996) 17: 199-206) e mantêm sua atividade biológica quando incorporados dentro de biomateriais sintéticos tais como hidrogéis (ver MP Lutolf e outros, Proc. Nat. Acad. Sci. (2003) 100: 5413-5418; e MP Lutolf e outros, Nature Biotechnol. (2003) 21: 513 - 518), outras matrizes poliméricas (ver Horng-Ban Lin e outros., J. Biomed. Material. Res. (2004) 28: 329-342) ou na forma de filmes de superfície sobre substratos rígidos (D.M. Fer ris e outros., Biomaterials (1999) 20: 2323-2331). Os peptídeos RGD também promovem uma maior adesão de células epiteliais ou endoteliais às próteses vasculares (ver K.Walluscheck e outros, Eur. J. Vascular and Endovascular Surgery (1996) 12: 321-330) e outros órgãos artificiais (ver Jeschke, Brigette, Biomaterials (2002) 23: 3455-3463) revestidos com a sequência peptídica e foi mostrado que sustentam o novo crescimento de nervos (ver M. Rafiuddin Ahmed e outros., Brain Res. (2003) 993:208-216). A superfície biologicamente ativa da prótese pode conter fibras de resinas sintéticas ou polímeros.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[030] A Figura 1 mostra o efeito de três peptídeos, a saber, cíclico-RGD- peptídeo, peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO (Composto 1) e peptídeo RGE, sobre a cinética de cicatrização de ferimentos.
[031] A Figura 2 mostra o cromatograma de HPLC do peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO (Composto 1).
[032] A Figura 3 mostra um cromatograma de massa por eletrospray do pep- tídeo do ÁCIDO RG CISTEICO (Composto 1).
[033] A Figura 4 mostra o cromatograma de HPLC do peptídeo cíclico- ÁCIDO RG CISTEICO (Composto 2).
[034] A Figura 5 mostra um cromatograma de massa por eletrospray de pep- tídeo cíclico-ÁCIDO RG CISTEICO (Composto 2).
[035] A Figura 6 é um diagrama esquemático que ilustra o mecanismo de ação dos compostos da presente invenção.
[036] As Figuras 7A e a Figura 7B são diagramas esquemáticos que ilustram adicionalmente o mecanismo de ação de composições da presente invenção.
[037] A Figura 8 é um gráfico que mostra a área total de neovascularização em um modelo de camundongo CNV 14 dias após o tratamento com várias doses do Composto 1 e do controle (somente o veículo).
[038] A Figura 9 é um gráfico de barras que compara a área medida de neo- vascularização em um modelo de camundongo ROP após várias doses do composto 1 e do controle (somente o veículo).
[039] As Figuras 10A até 10J são gráficos e diagramas que mostram os resultados de um teste clínico de várias doses em humanos do Composto 1.
[040] As Figuras 11A até 11C são gráficos de barras que comparam os efeitos de ranibizumab e do Composto 1 isoladamente e em combinação sobre a neo- vascularização retinal em camundongos produtores de VEGF transgênicos.
DESCRIÇÃO DETALHADA E EXEMPLOS
[041]A presente invenção fornece novos compostos, incluindo aqueles das Fórmulas Gerais I até VII acima. Os exemplos específicos incluem a forma linear de Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH (exemplo referido aqui como Composto 1) e a forma cíclica de Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH) (exemplo referido aqui como Composto 2) bem como derivados dos mesmos, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, estereoisômeros, multímeros, formas cíclicas, formas lineares, formas multiméricas, conjugados de fármacos, pró-fármacos e seus derivados.
Síntese dos Compostos 1 e 2
[042]A síntese de peptídeos em fase sólida convencional (SPPS; ver R.B. Merrifield, J. Am. Chem. Soc. (1963) 85 (14): 2149-2154) conhecida por um perito comum na arte pode ser realizada. A SPPS é um método preferido de síntese por causa de seus altos rendimentos. Em geral, o primeiro estágio da técnica de síntese de peptídeos em fase sólida consiste de montagem da cadeia peptídica com derivados de aminoácidos protegidos sobre um suporte polimérico. O segundo estágio da técnica é a clivagem do peptídeo do suporte de resina com a clivagem concorrente de todos os grupos protetores de cadeia lateral para fornecer o peptídeo livre bruto. O princípio geral da SPPS é um de ciclos repetidos de acoplamento-desproteção. A amina N-terminal livre de um peptídeo ligado à fase sólida é acoplada a uma única unidade de aminoácido protegida em N. Esta unidade é então desprotegida, revelando uma nova amina N-terminal à qual um aminoácido adicional pode ser ligado. Ver Asymmetric Synthesis by Von G. M. Coppola e H. F. Schuster; John Wiley & Sons, New York 1987 para estratégias de síntese, proteção e desproteção e Greene's Protective Groups in Organic Synthesis by Peter G.M. Wuts e Theodora W. Greene, (2a edição) J. Wiley & Sons, 1991. para estratégias de proteção e desproteção.
[043]Das duas formas principais utilizadas de síntese de peptídeos em fase sólida - Fmoc (9-fluorenilmetiloxicarbonila; grupo protetor de alfa-amino de base lá- bil) e t-Boc (t-butiloxicarbonila; grupo protetor de ácido lábil), Fmoc pode ser utilizado preferencialmente na síntese dos presentes peptídeos. Cada método envolve resinas diferentes e etapas de proteção de cadeia lateral de aminoácido e de cliva- gem/desproteção consequentes. Após a clivagem da resina, os peptídeos são ge-ralmente purificados por HPLC em fase inversa utilizando colunas tais como C-18, C-8 e C-4.Um exemplo de síntese de peptídeos em fase sólida
[044]A seguir está um resumo das etapas de síntese para a síntese de pep- tídeos sobre a resina Wang como o suporte sólido, utilizando um grupo protetor de 9-fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc) de base lábil.
Desproteção de Fmoc
[045]Carregar 0,08 mmol de resina Fmoc-Pro-Wang dentro de uma coluna calcinada equipada com uma capa plástica. Lavar a resina com 2 x porções de 3 mL de DMF (dimetilformamida) durante 1 minuto cada. A seguir, adicionar aproximadamente 3 mL de 20% de piperidina em DMF e permitir que a desproteção de Fmoc continue durante 15 minutos. Durante este tempo, girar ou agitar suavemente a coluna para garantir uma misturação completa. Após a reação ser completada (aproximadamente 15 min.), drenar a coluna de reação e lavar a resina novamente com DMF (4 x 3 mL).
Acoplamento da Ligação de Amida
[046]O aminoácido protegido por Fmoc desejado, Fmoc-Thr-tBu, (3 eq.; relativo à carga de resina indicada pelo fornecedor) e DIEA (6 eq.) em DCM (0,5 M em relação ao aminoácido) são então adicionados à resina. A mistura é resfriada a -20° C durante 20 minutos. A seguir, o hexafluorofosfato de benzotriazol-1-il- oxitripirrolidinofosfônio (PyBOP), um reagente de acoplamento de peptídeo utilizado na síntese de peptídeos em fase sólida (3 eq.) é adicionado à reação. Após agitação a -20° C durante 8 horas, a mistura de reação é drenada e a resina é lavada com DCM (3x).
[047]Após a desproteção de Fmoc utilizando 20% de piperidina em DMF (15 min) e a lavagem com DMF (3x), o aminoácido protegido por Fmoc seguinte (3eq.; relativo à carga da resina), PyBop é acoplado da mesma maneira que anteriormente.
[048]ClivagemCom a finalidade de se obter o peptídeo na forma de ácido livre, a ligação éster é clivada utilizando condições fortemente ácidas tal como TFA (ácido trifluoroacético). Tratar a resina com 2-3 mL de uma solução de ácido trifluoroacético e água 95:5. Agitar gentilmente a resina durante um período de 25 minutos. A seguir, drenar a coluna e coletar cuidadosamente o filtrado dentro de um recipiente de coleta de vidro.Síntese do Composto 1 (Ácido GRG Cisteico TP):
Figure img0008
[049]Etapa 1. Carregamento da resina: Uma resina de o-clorotritila pré- carregada com prolina é utilizada como o material de partida.
[050]Etapa 2. Montagem do peptídeo: A síntese de Fmoc é utilizada para montar o peptídeo. Os aminoácidos protegidos são ativados com PyBOP e os grupos Fmoc terminais removidos com 20% de piperidina em DMF. Os aminoácidos protegidos a seguir são utilizados na ordem em que aparecem:a.Fmoc-Thr-tBu (Fmoc treonina-t-butil éster)b.Fmoc-ácido cisteico-Pfp (Fmoc ácido cisteico-pentafluorofenil éster) c.Fmoc-Gly (Fmoc glicina)d.Fmoc-Arg-Pbf (Nα-Fmoc-Nw-(2,2,4,6,7 pentametildihidrobenzofuran-5- sulfonil)-L-arginina)e.Fmoc-Gly (Fmoc glicina)
[051]Etapa 3. Clivagem do Peptídeo da Resina: O peptídeo resultante é clivado do suporte sólido e os grupos protetores removidos com uma solução de 85,5% de TFA, 5% de fenol, 2% de água, 5% de tioanisol e 2,5% etanoditiol.
[052]Etapa 4. Purificação: Cromatografia Líquida de Alto Desempenho (HPLC), é utilizada para purificar os peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO resultantes.
[053]Uma quantidade de Composto 1, preparado como descrito anteriormente, foi analisada por Cromatografia Líquida de Alto Desempenho como sendo >98% de área/área em pureza [condições de HPLC: Tampão A: 0,1% de ácido trifluoroacé- tico (TFA) em água, Tampão B: 0,1% de TFA em acetonitrila, Fase Móvel (MP) A: 97% de Tampão A e 3% de Tampão B, Fase Móvel B: 79% de Tampão A e 21% de Tampão B, Fase Móvel C: 50% de Tampão A e 50% de Tampão B; para o gradiente ver a Tabela 1 abaixo; vazão: 1,0 mL/minuto; coluna: Waters Symmetry® C18, 5μ, 4,6 x 250 mm; temperatura da coluna: 30°C; detector: UV@220nm; volume de injeção da amostra: 20,0 μL; preparação da amostra: 20 μL de amostra diluída com 1,0 mL de Fase Móvel A (aproximadamente 0,5 mg/mL)]. O cromatograma de HPLC correspondente é mostrado na Fig. 2. Em adição, com base na adição em etapas dos aminoácidos correspondentes para a síntese da sequência peptídica, o peso molecular do Composto 1 purificado foi determinado por Espectrometria de Massa por Eletrospray como sendo de 638,3amu (massa teórica: 637,7 amu), confirmando a identidade do Composto 1. O Espectrograma de massa por eletrospray do Composto 1 é mostrado na Fig.3.Tabela 1: Programa de Gradiente de Bomba para detectar o Composto 1 porHPLC
Figure img0009
[054]Síntese de Composto 2 (Ciclo-RG Ácido CISTEICO ACIDisteico fN(CH3)V):
Figure img0010
[055]Etapa 1. Carregamento da Resina: Uma resina de o-clorotritila é utilizada como o material de partida. Fmoc-ND- metil-L-Val é ligado à resina.
[056]Etapa 2. Montagem do peptídeo: 2. A síntese de Fmoc é utilizada para a montagem do peptídeo. Os aminoácidos protegidos são ativados com PyBOP e os grupos Fmoc terminais removidos com 20% de piperidina em DMF. Os aminoácidos protegidos a seguir são utilizados na ordem em que aparecem:a.Fmoc-Phe (Fmoc-fenil alanina) b.Fmoc-ácido cisteico-PfP (Fmoc-ácido cisteico pentafluorofenil éster) c.Fmoc-Gly (Fmoc-glicina)d.Fmoc-Arg-Pbf (Nα-Fmoc-Nw-(2,2,4,6,7 pentametildihidrobenzofuran-5-sulfonil)-L-arginina)
[057]Etapa 3. Clivagem do peptídeo da resina: O peptídeo é clivado do suporte sólido utilizando ácido acético/TFA/DCM (1:3:3)
[058]Etapa 4. Ciclização e desproteção no peptídeo cíclico desejado: Cicli- zação via ativação in situ utilizando difenilfosforilazida e bicarbonato de sódio sob alta diluição. As cadeias laterais são desprotegidas utilizando 85,5% de TFA, 5% de fenol, 2% de água, 5% de tioanisol, 2,5% de etanoditiol.
[059]Etapa 5. Purificação: HPLC é utilizada para a purificação.
[060]Uma quantidade de Composto 2, preparado como descrito anteriormente, foi analisada por Cromatografia Líquida de Alto Desempenho como sendo >99% de área/área em pureza (condições de HPLC: Fase Móvel A: 0,1% de ácido trifluo- roacético em água, B: 0,1% de TFA em (80% de acetonitrila mais 20% de água); gradiente 26% até 36% de B em 20 minutos; vazão: 1,0 mL/minuto; colu- na:Fenomenex C18(2) 4,6x150mm, 5α, 100A; detector: UV@220nm; volume de injeção da amostra: 100,0 μL). O cromatograma de HPLC correspondente é mostrado na Fig. 4. Em adição, com base na adição em etapas dos aminoácidos correspondentes para a síntese da sequência peptídica, o peso molecular do Composto 2 puri-ficado foi determinado por Espectrometria de Massa por Eletrospray como sendo de 625,3amu (massa teórica: 625,77amu), confirmando a identidade do Composto 2. O Espectrograma de massa por eletrospray do Composto 2 é mostrado na Fig.5.Métodos para Inibição da Adesão Celular
[061]A presente invenção fornece ainda métodos para a inibição da adesão celular aos sítios de ligação de RGD em um indivíduo humano ou animal através da administração ao indivíduo de uma quantidade eficiente de Ácido R-G-Cisteico (isto é, a forma linear de R-G-NH-CH(CH2-SO3H)COOH ou a forma cíclica de R-G-NH- CH(CH2-SO3H)COOH) ou um derivado do mesmo (incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, hidratos, estereoisômeros, multímeros, formas cíclicas, formas lineares, conjugados de fármacos, pró-fármacos e seus derivados).
[062]O requerente descobriu que os peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO sintéticos da presente invenção induzem a apoptose através da inibição de forma competitiva da adesão celular aos componentes da ECM. Portanto, os presentes peptí- deos do ÁCIDO RG CISTEICO sintéticos e seus derivados podem ser utilizados co-mo potentes antagonistas de integrina como agente terapêutico contra angiogênese, inflamação, metástase de câncer, trombose, prevenção e tratamento de formação de cicatrizes bem como agentes de vitreólise farmacológica. Em adição, em um aspecto importante da presente invenção, um direcionamento aprimorado das α, β integrinas utilizando peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO multimerizados e marcados radioativamente, para uso como agentes radioterapêuticos internos para detecção de tumores (agente de diagnóstico ou de obtenção de imagens) e tratamento de tumores é considerado. Em outro aspecto importante, conjugados do peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO aprimorados ou conjugados multiméricos do peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO funcionam como carreadores de fármacos, por exemplo, como carreado- res de fármacos anticâncer para direcionamento eficiente para tumores.
[063]Como descrito em algum lugar aqui, os ácidos sulfônicos nos peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO são ácidos mais fortes que os ácidos carboxílicos correspondentes nos peptídeos RGD. Esta maior polaridade do grupo do ácido sulfônico leva a ligação intermolecular mais forte. Por exemplo, Ácido R-G-Cisteico, que possui uma ligação O-H mais polarizada, pode formar ligações de hidrogênio mais fortes que o R-G-ácido Aspártico, que possui uma ligação O-H relativamente menos polarizada, com os grupos amida e/ou cadeias laterais dos aminoácidos das proteínas no sítio de ligação da integrina e/ou possuem interações mais fortes com íons metálicos complexados no sítio de ligação da integrina. Portanto, os novos peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO e seus derivados da presente invenção apresentam compostos e composições aprimorados em relação aos peptídeos RGD correspondentes no reconhecimento e na ligação de receptores de integrina.
[064]Adicionalmente, em pacientes diabéticos com hiperglicemia crônica associada com IOP elevado, o glaucoma de ângulo aberto é particularmente relatado como estando relacionado com o acúmulo de fibronectina no tecido de sistema de malhas trabeculares e acredita-se que o excesso de fibronectina inibe o escoamento aquoso (ver Oshitari, T e outros, Am. J. Ophthalmol. (2007) 143:363-365). O envolvimento da fibronectina na interação célula-ECM no sistema de malhas trabeculares foi indicado no glaucoma de ângulo aberto primário (ver Mark S. Filla e outros, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2002) 43:151-161; e Cheril R. Hann e outros,Ophthalmic Res. (2001) 33: 314-324). Foi também relatado que as células endoteliais do canal de Schlemm interagem com a matriz extracelular influenciando a facilidade de escoamento (ver Cindy K. Bahler e outros., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2004) 45: 22462254). À luz da inibição do escoamento aquoso pela presença de um excesso de componentes da matriz extracelular tal como a fibronectina, a aplicação de peptí- deos do ÁCIDO RG CISTEICO e seus derivados para tratar o IOP elevado de pacientes diabéticos seria altamente benéfica para pacientes diabéticos.
[065]Os peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO preferidos podem ser um poli- peptídeo de fusão, um polipeptídeo cíclico ou linear, um polipeptídeo derivatizado, incluindo peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO derivatizado ou associado ou acoplado com sistemas de fornecimento de fármacos ou outros fármacos, tais como, por exemplo, fármacos anticâncer, um peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO multimeriza- do, um anticorpo monoclonal contendo a sequência do ÁCIDO RG CISTEICO que reage imunologicamente com o sítio de ligação das integrinas ou fragmento funcional do mesmo.
[066]Os polipeptídeos contendo o ÁCIDO RG CISTEICO podem ter uma sequência que corresponde à sequência de resíduos de aminoácidos da região de ligação adesiva de integrina natural, tal como aqueles presentes no fibrinogênio, na fibronectina, na vitronectina, no fator de von Willebrand, na laminina, na trombos- pondina e ligantes similares.
[067]A presente sequência peptídica consiste de três aminoácidos que possuem grupos guanidinos, sulfônicos e carboxílicos terminais e seus derivados acoplados e / ou associados com sistemas de fornecimento de fármacos, incluindo fragmentos peptídicos, glicoproteínas e grupos poliméricos tais como PEG, Plurônico e outros grupos poliméricos e, lipossomos e nanopartículas. As composições farmacêuticas que compreendem os mesmos para o tratamento de vários distúrbios patológicos incluem formas de dosagem injetáveis, em gel, em suspensão, unguento, sólidas e líquidas.
[068]Os receptores de integrina associados com um motivo de adesão celular tais como fibronectina, vitronectina, laminina, fibrinogênio, trombospondina e fator de von Willebrand, são o epítopo alvo do peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO e seus derivados. O tripeptídeo, ÁCIDO RG CISTEICO, foi descoberto como uma sequência de aminoácidos mínima que pode ser reconhecida por domínios de ligação celular. Esta sequência também pode interferir com funções imunológicas não relacionadas com as integrinas. Assim, foi descoberto que a sequência do ÁCIDO RG CISTEICO sintético deve imitar o domínio de ligação celular de RGD e uma substituição no α- carbono do ácido aspártico fornece uma afinidade de ligação mais forte às integrinas alvo. Os ácidos sulfônicos nos peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO são ácidos mais fortes que os ácidos carboxílicos correspondentes nos peptídeos RDG. Esta polaridade mais alta do grupo do ácido sulfônico leva à ligação intermolecular mais forte. Por exemplo, o Ácido R-G-Cisteico, que possui uma ligação O-H mais polarizada, pode formar ligações de hidrogênio mais fortes que o R-G-ácido Aspártico, que pos- sui uma ligação O-H relativamente menos polarizada, com os grupos amida e/ou cadeias laterais dos aminoácidos no sítio de ligação com a integrina e/ou possuem interações mais fortes com íons metálicos complexados no sítio de ligação da inte- grina.
[069]As fórmulas gerais principais para as sequências do ÁCIDO RG CISTEICO da presente invenção são como a seguir:
Figure img0011
Em que X= -CH(R1)-S(=O)2-Y ;i .-CH(R1)-SH;ii .- CH(R1)-OZ;iii .-CH(R1)S(=O)Y;iv .-CH(R1)-O-S(=O)2-OX1; ev .-CH(R1)-O-P(=O)2-OX1 ; eEm que Y = OX1, NH2; X1 = -H, C1-C6 alquila de cadeia reta, fenila;R1 = H, C1-C6 alquila de cadeia reta, fenila ou SO3HZ = H, SO3HFórmula B:
Figure img0012
Em que X =-CH(R1)-S(=O)2-Y ;vi .-CH(R1)-SH;vii .- CH(R1)-OZ;viii .-CH(R1)S(=O)Y;ix .-CH(R1)-O-S(=O)2-OX1; ex .-CH(R1)-O-P(=O)2-OX1 ; e Em que Y = OX1, NH2; X1 = -H, C1-C6 alquila de cadeia reta, fenila;R1 = H, C1-C6 alquila de cadeia reta, fenila ou SO3HZ = H, SO3H; e
[070]A2 é selecionado de: -Phe-Val-Ala, -Phe-Leu-Ala, -Phe-Val-Gly, -Phe- Leu-Gly, -Phe-Pro-Gly, -Phe-Pro-Ala, -Phe-Val ou sal ou derivado N-alquilado dos mesmos. Qualquer combinação de forma D ou forma L de Arg, Gly, Cisteico, Phe, Val, Ala, Leu, Pro, Thr, bem como a forma cíclica das sequência anteriores podem ser utilizados.Os exemplos de formas cíclicas incluem:Fórmula C:
Figure img0013
em que X’ é selecionado de: H, Ci - C6 alquila, Ph, SO3H; Y = OH, NH2 e Z = H, CH3.
[071]As formas cíclicas incluem ainda penta e hepta peptídeos, tal como, por exemplo, um composto específico da Fórmula Geral C, a saber, Composto 2 (Ciclo- ÁCIDO RG CISTEICO fN(CH3)V), é mostrado a seguir:
Figure img0014
[072]A Fórmula A abrange das Fórmulas Gerais I-VI descritas em outro lugar aqui. A Fórmula B abrange a Fórmula Geral VII descrita em outro lugar aqui.Fórmula D:A1—Arg—Gly—NH—CH(X)—CO—A2Em que X =-CH(R1)-S(=O)2-Y ;i .-CH(R1)-SH;ii .- CH(R1)-OZ;iii .-CH(R1)S(=O)Y;iv .-CH(R1)-O-S(=O)2-OX1; ev .-CH(R1)-O-P(=O)2-OX1 ; eEm que Y = OX1, NH2; X1 = -H, C1-C6 alquila de cadeia reta, fenila;R1 = H, C1-C6 alquila de cadeia reta, fenila ou SO3HZ = H, SO3H; e
[073]A1 e A2 são selecionados de: -Phe-Val-Ala, -Phe-Leu-Ala, -Phe-Val-Gly, -Phe-Leu-Gly, -Phe-Pro-Gly, -Phe-Pro-Ala, -Phe-Val ou sal ou derivado N-alquilado dos mesmos. Qualquer combinação da forma D ou da forma L de Arg, Gly, Cisteico, Phe, Val, Ala, Leu, Pro, Thr, bem como a forma cíclica da sequência anterior pode ser utilizada.
[074]As sequências do ÁCIDO RG CISTEICO substituídas incluem análogos de ÁCIDO RG CISTEICO cíclicos.
[075]A aplicação do ÁCIDO RG CISTEICO e seus derivados pode ser feita de forma subcutânea, dermatológica, oftálmica e sistêmica, empregando um sistema de fornecimento de fármacos ou quaisquer formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis de injeção ou formulação sólida ou em unguento.
[076]Os compostos da presente invenção podem ser administrados através de qualquer rota que seja adequada para provocar o efeito terapêutico pretendido incluindo, mas não limitada a: oral, retal, intravenosa, intraarterial, intradermal, sub- cutânea, intramuscular, intratecal, sublingual, bucal, intranasal, transmucosal, trans- dermal, tópica, intraocular, intravitreal, outra entérica, outra parenteral e/ou outra(s) rota(s) possível(is) de administração.
[077]Os compostos da presente invenção podem ser administrados em qualquer dosagem que forneça o efeito terapêutico pretendido enquanto evita efeitos adversos ou tóxicos. As dosagens típicas em que os compostos da presente invenção podem ser administrados a indivíduos humanos estão na faixa de aproximadamente 1 ng/kg até aproximadamente 1,0 g/kg.
[078]Quando possível e apropriado, os compostos da presente invenção podem ser opcionalmente preparados na forma de lipossomos ou nanopartículas (por exemplo, nanocápsulas). A formação e o uso de lipossomos são geralmente conhecidos pelo perito na arte. Os lipossomos são formados partindo de fosfolipídeos dispersos em um meio aquoso de forma que formem espontaneamente vesículas de bicamadas concêntricas multilamelares algumas vezes referidas como vesículas multilamelares (MLVs). As MLVs têm tipicamente de 25 nm até 4 μm de diâmetro. Quando submetidas ao ultrassom, as MLVs formam vesículas unilamelares pequenas (SUVs) de aproximadamente 200 até 500 angstroms de diâmetro possuindo cernes que contêm a solução aquosa. Em geral, quando dispersas em um meio aquoso, os fosfolipídeos podem formar várias estruturas sem ser lipossomos, dependendo da proporção molar de lipídeo em relação à água. Em proporções molares de lipídeo em relação à água baixas, serão formados os lipossomos. As características físicas dos lipossomos dependem do pH, da tonicidade e da presença ou não presença de cátions divalentes. Os lipossomos podem interagir com as células através de mecanismos diferentes, incluindo 1) endocitose (por exemplo, fagocitose do lipossomo pelas células tais como macrófagos e neutrófilos), adsorção à superfície celular, 2) interação com componentes da superfície celular, 3) fusão com a membrana celular plasmática através da inserção da bicamada lipídica do lipossomo den- tro da membrana plasmática ou 4) transferência de lipídeos lipossomais para membranas celulares ou subcelulares ou vice versa. A variação da formulação dos lipos- somos pode alterar qual(is) mecanismo(s) através do(s) qual(is) os lipossomos irão interagir com as células no seio paranasal, na mucosa nasal etc.
[079]Uma nanocápsula é qualquer nanopartícula que consiste de uma cápsula e um espaço, no qual substâncias desejadas podem ser colocadas. As técnicas para a formação de nanocápsulas são conhecidas na arte. Nanocápsulas poliméri- cas podem ser produzidas em tamanhos e formatos específicos. Podem ser produ-zidas na forma de partículas monodispersas que possuem propriedades físicas e químicas precisamente definidas e, assim, podem ser produzidas sob medida para facilitar a liberação da substância terapêutica ou de diagnóstico em resposta a me-canismos de ativação biomoleculares particulares, tal como o pH, fluxo de muco ou outras condições presentes dentro do seio paranasal ou outra área no ouvido, nariz ou garganta em que o dispositivo é implantado. As nanocápsulas podem ser utilizadas na presente invenção como “fármacos inteligentes” que possuem receptores químicos específicos ou que se ligam a sítios que se ligarão a células alvos específicas (por exemplo, células cancerosas ou células associadas a condições inflamatórias).
[080]A seguir estão exemplos não limitantes de formulações para preparações farmacêuticas contendo os compostos da presente invenção. Também estão incluídos os exemplos da segurança e/ou da eficácia demonstrada utilizando exemplos de peptídeos do ÁCIDO RG CISTEICO ou derivados na inibição da adesão celular. Como podem ser utilizados aqui, os termos “Peptídeo do ÁCIDO RG CISTEICO”, “peptídeo de RG Ácido Cisteico”, “RGC” e “peptídeo RGCys” e “compostos da presente invenção” devem significar sinonimamente composições que contêm a sequência do Ácido R-G-Cisteico e seus derivados, incluindo, mas não limitadas aquelas definidas pelas Fórmulas Gerais I-VII e Compostos 1 e 3-5 que são descritos aqui.
Métodos para Terapia de Receptor de Integrina Direcionada para Tratamento de Doenças Oculares
[081]Está incluído entre os vários usos terapêuticos potenciais das composições da presente invenção o tratamento de certos distúrbios do olho caracterizados pela vascularização excessiva da retina (geralmente referida aqui como “doença ocular neovascular”). Os exemplos não limitantes a seguir discutem os usos das composições da presente invenção isoladamente e em combinação com outros agentes, para tratar tais distúrbios oculares neovasculares.
[082]Se e quando utilizados neste pedido de patente, os acrônimos e as abreviações a seguir devem ter os significados a seguir:AE Evento AdversoAllegro Allegro Ophthalmics, LLCAMD Degeneração Macular Relacionada à IdadeBCVA Melhor acuidade visual corrigidaCNV Neovascularização coroidalCRA Clinical Research AssociateDME Edema Macular DiabéticoDR Retinopatia DiabéticaDry AMD Degeneração Macular Relacionada à Idade SecaERG EletrorretinografiaETDRS Estudo de Retinopatia Diabética com Tratamento PrecoceFDA Food and Drug AdministrationGCP Boas Práticas ClínicasIOP Pressão/Tonometria IntraocularIRB Institutional Review BoardOCT Tomografia de Coerência Óptica OD Olho direitoOS Olho esquerdoPI Investigador PrincipalPDR Retinopatia Diabética ProliferativaPVD Descolamento Vítreo PosteriorRVO Oclusão da Veia da RetinaSAE Evento Adverso GraveSC Coordenador do EstudoUSP Farmacopeia dos Estados Unidos da AméricaVEGF Fator de Crescimento Endotelial VascularWet AMD Degeneração Macular Relacionada à Idade Úmida
[083]A degeneração macular relacionada à idade (AMD) é a causa principal de cegueira no mundo ocidental e pacientes com este estado de saúde sofrem danos irreversíveis na mácula ou parte central da retina. A AMD Seca causa perda visual lentamente progressiva, enquanto que a AMD Úmida pode levar à rápida deterioração da visão central. A AMD Úmida causa a grande maioria de perda de visão grave em pacientes afetados, mas ambas as formas representam uma preocupação de saúde pública importante para o século 21. Aproximadamente 1,5 milhão de ame-ricanos possuem neovascularização coroidal (CNV) secundária à AMD e a cada ano 200.000 novos casos se desenvolvem. Foi documentado que a prevalência, a incidência e as taxas de progressão da AMD todas aumentam com a idade. Nos Estados Unidos da América, pessoas acima de 65 anos de idade constituem um dos segmentos maiores da população e esta categoria demográfica é projetada a aumentar ao longo das próximas décadas. É esperado que a população acima de 85 anos de idade nos Estados Unidos da América duplique até 2020. Assim, a AMD representa um problema de saúde pública significativo para os Estados Unidos da América. Em particular, a AMD Úmida é o fator mais significativo que causa visão fraca em pacientes com AMD. A AMD Úmida é caracterizada pela angiogênese co- roidal, isto é, o desenvolvimento de vasos sanguíneos anormais sob a retina. Estes vasos vazam fluido, sangram e se transformam em tecido de cicatriz fibrovascular. Este processo rompe os fotorreceptores subjacentes e causa perda visual grave. Há uma boa evidência de que a perfusão coroidal diminuída leva à disfunção epitelial do pigmento da retina (RPE) e à perda de fotorreceptores na AMD. O edema macular diabético (DME) é o resultado do espessamento da parte central da retina devido a danos de capilares da retina provenientes do diabetes. O DME é a causa principal de cegueira na população com idade de trabalho, causando ainda danos na visão brandos a moderados nesta população bem como em pessoas que não poderão mais trabalhar. A aplicação de laser aos capilares danificados dentro da retina espessada tem sido o suporte principal de tratamento ao longo de 25 anos. Resultados recentes da Rede de Pesquisa Clínica da Retinopatia Diabética demonstraram que nos olhos com acuidade visual reduzida proveniente do DME envolvendo o centro da mácula, a terapia anti-VEGF com Lucentis em combinação com laser focal/grade, fornece resultados de visão superiores e um perfil de segurança aceitável comparado com o tratamento padronizado anterior de laser isoladamente. Os eventos mole-culares envolvidos no desenvolvimento da neovascularização pré-retinal e coroidal não foram completamente elucidados; entretanto, foi mostrado que o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) desempenha uma função importante no processo. As integrinas α5β1, αvβ3 e αvβ5 também estão implicadas no processo angiogêni- co e são conhecidas como sendo expressas no tecido neovascular ocular de pacientes com AMD Úmida e PDR. Há ainda um número de outras moléculas que desempenha funções importantes: bFGF, IL-8, PDGF, várias proteases incluindo ativador de plasminogênio e metaloproteinases de matriz, quimiocinas e outros mediadores inflamatórios. A proliferação celular endotelial, a maior permeabilidade vascular, a inflamação e a produção excessiva de VEGF são alguns dos desenvolvimentos pa- tológicos principais na AMD Úmida e no DME.
[084]A presente invenção fornece uma nova classe de fármacos terapêuticos para doenças vasculares da retina, incluindo AMD Úmida, DR e DME. Os compostos da presente invenção possuem vários mecanismos de ação contra doenças vasculares da retina incluindo a) causando antiangiogênese através da inibição da produção de VEGF diretamente, b) causando inibição do receptor de VEGF-2, c) causando regulação para menos ou inibição de tirosina quinase e d) causando liquefação do corpo vítreo e descolamento vítreo posterior permitindo assim a difusão do VEGF para fora do olho. Os mecanismos de ação podem ser empregados isoladamente (por exemplo, através de terapia utilizando apenas o(s) composto(s) da presente invenção) ou podem ser a inibição aditiva ou complementar de VEGF existente (por exemplo, através de terapia de combinação utilizando o(s) composto(s) da presente invenção em combinação com uma composição que se liga, captura, retira ou de outra maneira detém o efeito do VEGF que já foi produzido, cujos exemplos incluem, mas não estão necessariamente limitados a: Avastin, Lucentis e/ou Eylea). Avastin (bevacizumab) é um anticorpo monoclonal anti-VEGF. Lucentis (ranibizumab) é um fragmento de anticorpo monoclonal do isotipo IgG1 kappa humanizado recombinan- te. Eylea (aflibercept) é uma proteína de fusão recombinante que consiste de porções de receptores 1 e 2 do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) humano.
[085]Através da regulação para menos VEGF ao invés do sequestro do suprimento de VEGF já existente, os compostos da presente invenção possuem mecanismos únicos de ação que permitem a intervenção muito mais cedo na cascada angiogênica quando comparados com o padrão atual de cuidado. Isto é ilustrado esquematicamente na Figura 6. Em adição a atuar em um estágio muito mais cedo da cascada angiogênica, os compostos da presente invenção se ligam a várias su- bunidades de integrina, ao contrário das abordagens com anticorpos monoclonais que são 500 vezes maiores e específicas a apenas uma subunidade de integrina como mostrado na Figura 7A. Em contraste, um oligopeptídeo é capaz de se ligar muito mais eficientemente a várias subunidades de integrina envolvidas na angiogê- nese, como mostrado na Figura 7B.
[086]Os exemplos de doenças neovasculares do olho que podem ser potencialmente tratadas com os compostos da presente invenção incluem Retinopatia diabética (DR), Edema macular diabético (DME) e Degeneração macular relacionada à idade (AMD). Os tratamentos farmacêuticos disponíveis atualmente para estes distúrbios incluem certos fármacos que se ligam, captura, retiram ou de outra maneira detêm o efeito do VEGF que já foi produzido (geralmente referidos aqui como “Armadilhas” para VEGF). Os exemplos comercialmente disponíveis de tais “armadi-lhas para VEGF” incluem bevacizumab (Avastin), ranibizumab (Lucentis) e afliber- cept (Eylea). Bevacizumab é descrito como um anticorpo monoclonal anti-VEGF. Ranibizumab é descrito como um fragmento de anticorpo monoclonal do isotipo IgG1 kappa humanizado recombinante. Aflibercept é descrito como uma proteína de fusão que consiste de porções dos receptores 1 e 2 do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) humano. Estes tratamentos à base de anticorpos anti-VEGF são tipicamente administrados através de injeções intravitreais repetidas, em intervalos de 4 até 6 semanas, potencialmente indefinidamente e em inconveniência substancial, custo e risco cumulativo de infecção.
[087]Ao contrário das “Armadilhas” para VEGF existentes, as composições da presente invenção possuem vários mecanismos de ação contra doenças neovas- culares do olho, especificamente: antiangiogênese através da inibição direta da produção de VEGF, inibição do receptor de VEGF-2, regulação para menos da tirosina quinase e indução da liquefação vitreal e descolamento vítreo posterior (que facilita a difusão de VEGF ou de outras entidades deletérias para fora da retina e para fora do olho). Alguns dos exemplos apresentados a seguir descrevem usos do Composto 1 isoladamente e em combinação com outros agentes (“Armadilhas” para VEGF) no tratamento de doenças neovasculares do olho.
[088]Também deve ser considerado que, em adição ao tratamento de doenças neovasculares do olho, as composições da presente invenção também podem ser úteis para tratar vários outros distúrbios do olho que causam ou não neovascula- rização da retina. Os exemplos de distúrbios do olho que podem ser tratados pelas composições da presente invenção incluem, mas não estão necessariamente limitados à degeneração macular relacionada à idade úmida, ao edema macular diabético, à retinopatia diabética proliferativa ou não proliferativa, à liquefação do vítreo humor, à indução do descolamento vítreo-retinal posterior (PVD), à patogênese de doenças vitreorretinais, tal como orifício macular idiopático, tração vitreomacular, degeneração macular relacionada à idade, neovascularização coroidal, cirurgia vitreorretinal, oclusão da veia, neovascularização da córnea, nervo óptico isquêmico, rubiosis iridis e prevenção de formação de cicatriz na cirurgia de glaucoma.Formulações Farmacêuticas
[089]A seguir estão exemplos de formulações farmacêuticas I-X, que contêm Peptídeos do Ácido R-G-Cisteico da presente invenção, tais como qualquer um dos definidos pelas Fórmulas Gerais I-VII ou qualquer um dos Compostos 1-5 que são descritos aqui.Formulação IPeptídeo do Ácido R-G-Cisteico (RGCys-peptídeo)0,0001 mg até 10 gNaCl 0,01 mg até 0,9 gÁgua QS para 100,0 mLFormulação IIPeptídeo do Ácido RG Cisteico (RGCys-peptídeo) 0,0001 mg até 10 gEDTA 0,001 mg até 100 mgNaCl0,01 mg até 0,9 g Água QS para 100,0 mLFormulação IIIRGCisteico-peptídeo 0,0001 mg até 10 gEDTA 0,001 mg até 100 mgNaCl 0,01 mg até 0,9 gÁcido cítrico 0,0001 mg até 500 mgÁguaQS para 100,0 mLFormulação IVRGCisteico-peptídeo 0,0001 mg até 10 gNaCl0,01 mg até 0,9 gTampão Fosfato até pH = 3,0 - 9,0ÁguaQS para 100,0 mLFormulação VRGCisteico-peptídeo 0,0001 mg até 10 gEDTA0,001 mg até 100 mgNaCl0,01 mg até 0,9 gTampão Fosfato até pH = 3,0 - 9,0ÁguaQS para 100,0 mLFormulação VIRGCisteico-peptídeo0,0001 mg até 10 gNaCl0,01 mg até 0,9 gTampão Borato até pH = 3,0 - 9,0ÁguaQS para 100,0 mLFormulação VIIRGCisteico-peptídeo0,0001 mg até 10 gSal de sódio do ácido hialurônico0,01 até 10%Ácido bórico0,01 até 1,0% Polietilenoglicol (PEG 8000)0,01 até 10%Cloreto de sódio0,10 até 0,9%Cloreto de potássio0,01 até 0,20%Cloreto de cálcio dihidratado 0,001 até 0,05%Cloreto de magnésio hexahidratado 0,01 até 0,20%PreservantepH4,0 - 8,0ÁguaQS para 100,0 mLFormulação VIIIRGCisteico-peptídeo 0,0001 mg até 10 gSal de sódio do ácido hialurônico 0,01 até 10%Carboximetil Celulose 0,01 até 10%Ácido bórico 0,01 até 1,0%Polietilenoglicol (PEG 8000)0,01 até 10%Cloreto de sódio 0,10 até 0,9%Cloreto de potássio 0,01 até 0,20%Cloreto de cálcio dihidratado 0,001 até 0,05%Cloreto de magnésio hexahidratado 0,01 até 0,20%PreservantepH 4,0 - 8,0ÁguaQS para 100,0 mLFormulação IXRGCisteico-peptídeo0,0001 mg até 10 gSal de sódio do ácido hialurônico0,01 até 10%Alginato de sódio0,01 até 10%Ácido bórico0,01 até 1,0%Polietilenoglicol (PEG 8000)0,01 até 10% Cloreto de sódio0,10 até 0,9%Cloreto de potássio0,01 até 0,20%Cloreto de cálcio dihidratado 0,001 até 0,05%Cloreto de magnésio hexahidratado 0,01 até 0,20%PreservantepH3,0 - 8,0ÁguaQS para 100,0 mLFormulação XRGCisteico-peptídeo0,0001 mg até 10 gSal de sódio do ácido hialurônico 0,01 até 10%Ácido algínico 0,01 até 10%Ácido bórico 0,01 até 1,0%Polietilenoglicol (PEG 8000)0,01 até 10%Cloreto de sódio 0,10 até 0,9%Cloreto de potássio 0,01 até 0,20%Cloreto de cálcio dihidratado 0,001 até 0,05%Cloreto de magnésio hexahidratado 0,01 até 0,20%PreservantepH 3,0 - 8,0Água QS para 100,0 mLComparação dos Efeitos Indutores de PVD dos peptídeos RGD e Glicil- Arginil-Glicil-Cisteico-Treonil-Prolina-COOH (Ácido GRG Cisteico TP; Composto 1) em Coelhos
[090]Neste exemplo, os Efeitos Indutores de PVD dos peptídeos RGD e Gli- cil-Arginil-Glicil-Cisteico-Treonil-Prolina-COOH (Peptídeo do Ácido RG Cisteico; Ácido GRG Cisteico TP; Composto 1) foram comparados em coelhos. O protocolo para este estudo era como a seguir: Protocolo:Modelo Animala.20 Coelhos Machos e Fêmeasb.Pesando aproximadamente 1,5 - 2,5kg.c.Dividir em 2 grupos10 Coelhos receberão injeção intravitreal de solução de RGD a 2,5% em pH=6,510 Olhos Direitos injetados com solução de RGD a 2,5%5 Olhos Esquerdos utilizados como Controle BSS5 Olhos Esquerdos injetados com 2,5% de RGD +0,02% de EDTA em pH=6,510 Coelhos receberão injeção intravitreal de solução de RGCisteico a 2,5% em pH = 6,510 Olhos Direitos injetados com solução de RGCisteico a 2,5% em pH=6,510 Olhos Esquerdos injetados com solução de RGCisteico a 2,5% + 0,02% de EDTA em pH=6,5Reagentes Químicos Ativosd.EDTA de sódio - 99,0 - 100,5% da Spectrum Chemical Corp.e.Ácido RG Cisteico - fornecedor cGMP (Pureza >98%).f.RGD - fornecedor cGMP (Pureza >98%).g.Solução de BSS
[091]Ambos o Ácido RG Cisteico, RGD, Ácido RG Cisteico + EDTA de sódio, RGD + EDTA de sódio e as soluções de BSS foram injetados dentro da cavidade vítrea 24 horas antes da cirurgia. Os coelhos (10 mg/kg de peso corporal) foram anestesiados com uma injeção intramuscular de 2,0 mL de combinação 1:1 de xila- zina (100 mg/mL) e Cloridrato de cetamina (100 mg/mL). As pupilas são dilatadas com cloridrato de ciclopentolato tópico a 1% e Cloridrato de fenilefrina a 10%.
[092]Todos os animais foram inicialmente examinados com um biomicrosco- pia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para excluir quaisquer animais com anormalidades vitreorretinais pré-existentes. A injeção intravitreal de 0,10cc foi administrada 2 mm posterior ao limbo no quadrante supranasal utilizando uma agulha de calibre 30 ligada a uma seringa de 1,0cc. Deve-se tomar cuidado para evitar danos no cristalino ou na retina.
[093]Vinte e quatro horas após a injeção e imediatamente antes do início da vitrectomia mecânica, uma ultrassonografia de varredura B foi realizada para determinar o status do vítreo posterior e também a liquefação do vítreo. Uma vitrectomia na pars plana de duas entradas foi realizada utilizando um fiberóptico de infusão e um cortador de vítreo ligado a uma unidade de vitrectomia. Após uma vitrectomia do cerne de 30 segundos, o cortador de vítreo foi direcionado para a superfície da retina peripapilar em que, utilizando baixa aspiração (<30mmHg) uma separação do vítreo cortical posterior da superfície da retina foi tentada em 4 quadrantes. As escleroto- mias foram suturadas e uma ultrassonografia de varredura B pós-operatória foi realizada para determinar a presença e a extensão de qualquer PVD presente em cada quadrante. Os animais foram submetidos à eutanásia com injeções de pentobarbital de sódio intracardíacas e os olhos foram imediatamente extirpados.
[094]A classificação da Liquefação do vítreo e de PVD foi graduada seguindo este sistema de graduação para avaliar a extensão de PVD com base no exame de ultrassom de varredura B pós-operatório;Grau 0. a) Não foi observado descolamento do vítreo posterior.b) Liquefação do VítreoGrau 1. a) Consiste de olhos em que o vítreo é descolado em 2 ou menos quadrantes.i .b) Liquefação do VítreoGrau 2. a) Consiste de olhos em que o vítreo é descolado em 3 ou mais quadrantes, mas com ligações focais remanescentes ao longo dos raios medulares ii .b) Liquefação do VítreoGrau 3. a) Consiste de olhos em que o vítreo é totalmente descolado da superfície da retinaiii .b) Liquefação do Vítreo
[095]Todos os olhos sofreram uma penetração com lâmina afiada no polo superior subadjacente à pars plana imediatamente após a extirpação para garantir rápida penetração do fixativo. Foi tomado cuidado para evitar danos na retina e no cristalino adjacentes. Os olhos foram imersos em 2% de paraformaldeído mais 2,5% de glutaraldeído durante um mínimo de 24 horas a 4 graus Celsius. Uma única calota posterior foi removida, desidratada em metanol e seca em dióxido de carbono até o ponto crítico, revestida com descarga em ouro e fotografada utilizando o microscópio eletrônico de varredura.Resultados:Injeção: 2,5% de Ácido RG CisteicoGrupo 1. Na Linha de Base todos os Animais não tinham PVD em ambos osolhos
Figure img0015
Injeção: 2,5% de RGD
[096]Grupo 2. Na Linha de Base todos os Animais não tinham PVD em ambos os olhos
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Injeção: 2,5% de Ácido RG Cisteico + 0,02% de NaEDTAGrupo 3. Na Linha de Base todos os Animais não tinham PVD em ambos osolhos
Figure img0017
Figure img0018
Injeção: 2,5% de RGD + 0,02% de NaEDTAGrupo 4. Na Linha de Base todos os Animais não tinham PVD em ambos osolhos
Figure img0019
[097]Os resultados deste estudo mostram que RGD e Ácido RG Cisteico (Ácido GRG Cisteico TP; Composto 1) possuem propriedades similares e a injeção de 2,5% de Ácido RG Cisteico de forma intravitreal causa a separação completa do vítreo da retina em 24 horas e em adição o vítreo dos coelhos tratados tanto com RGD quanto com Ácido RG Cisteico está completamente liquefeito.
[098]De forma geral, a atividade do Ácido RG Cisteico é equivalente ou ligei- ramente melhor que aquela de RGD na indução de PVD completo nos coelhos e na liquefação do vítreo. Isto é possivelmente devido a sua capacidade de ligação com-petitiva mais forte com os sítios de ligação de interações de integrina-matriz extrace- lular que RGD. Como descrito em algum lugar aqui, os ácidos sulfônicos são ácidos mais fortes que os ácidos carboxílicos correspondentes. Esta polaridade maior do grupo do ácido sulfônico leva à ligação intermolecular mais forte. Por exemplo, o Ácido R-G-Cisteico, que possui uma ligação O-H mais polarizada, pode formar ligações de hidrogênio mais fortes que o ácido R-G-Aspártico, que possui uma ligação O-H relativamente menos polarizada, com os grupos amida e/ou as cadeias laterais dos aminoácidos no sítio de ligação com a integrina e/ou possui interações mais for-tes com íons metálicos complexados no sítio de ligação com a integrina.
[099]Os resultados também indicam que estes compostos são administrados com 0,02% de Edetato de Sódio, a atividade de tanto RGD quanto do Ácido RG Cis- teico não é alterada.
[0100]Os resultados mostram ainda que não há efeitos adversos ou efeitos de segurança adversos provenientes de injeção intravitreal do composto do Ácido RG Cisteico Composto 1 ou do composto RGD.
[0101]Estudo de Segurança de Várias Injeções do Peptídeo do Ácido RGCisteico Composto 1 (Ácido GRG Cisteico TP ) nos Olhos dos Coelhos
[0102]Neste exemplo, várias injeções do Peptídeo do Ácido RGCisteico Composto 1 foram administradas nos olhos de 5 Coelhos New Zealand Machos e 4 Fêmeas pesando aproximadamente 1,5 - 2,5 kg. E os olhos foram examinados como descrito nos parágrafos a seguir.
[0103]O protocolo do estudo era como a seguir:
[0104]Exames da Linha de Base: Na linha de base os olhos direitos e esquerdos de todos os 9 coelhos foram examinados com biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para confirmar que nenhum animal tinha anormali- dades vitreorretinais pré-existentes. Em adição a ultrassonografia de varredura β bem como varreduras de ERG foram realizadas sobre os olhos esquerdos e direitos de todos os 9 animais para a obtenção de leituras de linha de base.
[0105]Tratamentos Experimentais: Todos os 9 Coelhos então receberam injeções intravitreais de solução ou solução salina (controle). As soluções de tratamento foram preparadas como a seguir:
[0106]Solução de Ácido RGCisteico: uma solução de 2,5 mg/100 μL de Ácido RGCisteico (Composto 1) contendo 0,02 mg de EDTA de dissódico + 0,80 mg de cloreto de sódio e Água esterilizada USP para injeção possuindo um pH ajustado em 6,5.
[0107]Solução Salina (controle): uma solução salina esterilizada isotônica USP que possui um pH ajustado de 6,5.
[0108]A dosagem ocorreu como a seguir:1) O olho direito de cada um dos 9 coelhos foi injetado de forma intravitreal com 100 da Solução a 2,5 mg/100 μL do Ácido RGCisteico (fornecendo uma dose = 2,5 mg do Composto 1)2) O olho esquerdo de cada um dos 9 coelhos foi injetado de forma intravi- treal com 100 μL da Solução Salina (controle).
[0109]Um dia após as injeções intravitreais iniciais, os olhos direitos e esquerdos de todos os 9 Coelhos foram examinados, por biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para verificar se qualquer um dos coelhos tinha quaisquer efeitos adversos provenientes da injeção.
[0110]No 7o dia após as 1as injeções, os olhos direitos e esquerdos de todos os 9 Coelhos foram novamente examinados por biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para determinar se qualquer um dos coelhos exibia efeitos adversos provenientes da injeção. Em adição uma varredura de ERG foi realizada sobre os olhos direitos e esquerdos de todos os animais para determinar se havia quaisquer alterações partindo da linha de base
[0111]Um grupo de 3 coelhos, números 901, 904 e 909, foi então selecionado aleatoriamente e a vitrectomia mecânica foi realizada nos olhos direitos e esquerdos daqueles 3 animais selecionados para determinar o status do vítreo posterior.
[0112]Os 3 animais selecionados aleatoriamente, números 901, 904 e 909, foram submetidos à eutanásia com injeções de pentobarbital de sódio intracardíacas e os olhos foram imediatamente extirpados. Todos os olhos sofreram penetração com lâmina afiada no polo superior subadjacente à pars plana imediatamente após a extirpação para garantir rápida penetração do fixativo. Foi tomado cuidado para evitar danos na retina e no cristalino adjacentes. Os olhos foram imersos em 2% de paraformaldeído mais 2,5% de gluteraldeído durante um mínimo de 24 horas a 4 graus Celsius. Uma única calota posterior foi removida, desidratada em metanol e seca em dióxido de carbono até o ponto crítico, revestida com descarga em ouro e fotografada utilizando o microscópio eletrônico de varredura. As outras amostras foram submetidas ao exame Histopatológico.
[0113]Os 6 Coelhos restantes, números 902, 903, 905, 906, 907 e 908 receberam injeção uma segunda vez 7 dias após a primeira injeção.
[0114]O olho direito de cada um dos 6 coelhos restantes foi novamente injetado de forma intravitreal com 100 da Solução de Ácido RGCisteico a 2,5 mg/100 μL (fornecendo uma segunda dose de 2,5 mg do Composto 1)
[0115]O olho esquerdo de cada um dos 6 coelhos restantes foi novamente injetado de forma intravitreal com 100 μL da Solução Salina (controle).
[0116]No dia após as 2as injeções intravitreais, os olhos direitos e esquerdos de todos os 6 coelhos restantes foram examinados por biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para verificar se qualquer um dos coelhos tinha efeitos adversos provenientes da injeção.
[0117]No 7o dia após as 2as injeções, os olhos direitos e esquerdos de todos os 6 coelhos restantes foram examinados, por biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para verificar quaisquer efeitos adversos provenientes das injeções. Em adição varreduras de ERG dos olhos esquerdos e direitos de todos os animais foram corridas para determinar se havia quaisquer alterações partindo da linha de base.
[0118]Três coelhos, números 902, 903 e 907, foram selecionados aleatoriamente dos 6 animais restantes e a vitrectomia mecânica foi realizada nos olhos direitos e esquerdos daqueles 3 animais selecionados aleatoriamente para determinar o status do vítreo posterior.
[0119]Os 3 animais selecionados aleatoriamente, números 902, 903 e 907 foram então submetidos à eutanásia com injeções de pentobarbital de sódio intra- cardíacas e os olhos foram imediatamente extirpados. Todos os olhos sofreram uma penetração com lâmina afiada no polo superior subadjacente à pars plana imediatamente após a extirpação para garantir rápida penetração do fixativo. Foi tomado cuidado para evitar danos na retina e no cristalino adjacentes. Os olhos foram imersos em 2% de paraformaldeído mais 2,5% de gluteraldeído durante um mínimo de 24 horas a 4 graus Celsius. Uma única calota posterior foi removida, desidratada em metanol e seca em dióxido de carbono até o ponto crítico, revestida com descarga em ouro e fotografada utilizando o microscópio eletrônico de varredura. As outras amostras foram submetidas ao exame Histopatológico.
[0120]O grupo restante de 3 Coelhos, números 905, 906 e 908, foram então injetados uma terceira vez, 14 dias após a primeira injeção, como a seguir:1) O olho direito de cada um dos 3 coelhos restantes foi novamente injetado de forma intravitreal com 100 da Solução de Ácido RGCisteico a 2,5 mg/100 μL (fornecendo uma terceira dose de 2,5 mg do Composto 1)
[0121]O olho esquerdo de cada um dos 3 coelhos restantes foi novamente injetado de forma intravitreal com 100 μL da Solução Salina (controle).
[0122]Um dia após as 3as injeções intravitreais, os olhos direitos e esquerdos de todos os 6 coelhos restantes foram verificados por lâmpada de fenda, biomicros- copia e oftalmoscopia indireta para verificar se qualquer um dos coelhos tinha quaisquer efeitos adversos provenientes da injeção.
[0123]No 7o dia após as 3as injeções, os olhos direitos e esquerdos de todos os 3 coelhos restantes foram novamente examinados por biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para verificar em relação a quaisquer efeitos adversos provenientes das injeções. Em adição varreduras de ERG dos olhos esquerdos e direitos de todos os animais foram corridas para determinar se havia quaisquer alterações partindo da linha de base.
[0124]A vitrectomia mecânica foi realizada nos olhos direitos e esquerdos dos 3 animais restantes (Nos. 905, 906 e 908) para determinar o status do vítreo posterior.
[0125]Os 3 animais restantes (Nos. 905, 906 e 908) foram submetidos à eutanásia com injeções de pentobarbital de sódio intracardíacas e os olhos foram imediatamente extirpados. Todos os olhos sofreram uma penetração com lâmina afiada no polo superior subadjacente à pars plana imediatamente após a extirpação para garantir rápida penetração do fixativo. Foi tomado cuidado para evitar danos na retina e no cristalino adjacentes. Os olhos foram imersos em 2% de paraformaldeído mais 2,5% de gluteraldeído durante um mínimo de 24 horas a 4 graus Celsius. Uma única calota posterior foi removida, desidratada em metanol e seca em dióxido de carbono até o ponto crítico, revestida com descarga em ouro e fotografada utilizando o microscópio eletrônico de varredura. As outras amostras foram submetidas ao exame Histopatológico.Reagentes Químicos Ativos
[0126]Os Reagentes Químicos Ativos utilizados neste estudo foram os seguintes: a. EDTA de dissódico - 99,0 - 100,5% da Spectrum Chemical Corp.b. Peptídeo do Ácido RGCisteico (Composto 1)c. Solução salina isotônica esterilizada USPFormulações do Estudoa) Solução do Ácido RGCisteico: solução a 2,5 mg/100 μL de Ácido RGCis- teico contendo 0,02 mg de EDTA dissódico + 0,80 mg de cloreto de sódio e água esterilizada USP para injeção ajustada em um pH=6,5. Esterilizar por filtração atra-vés de um filtro de 0,22μ para dentro de um frasco de 2,0 mL.b) Solução Salina (Controle): Solução salina esterilizada isotônica USP com pH ajustado em 6,5. Esterilizar por filtração através de um filtro de 0,22μ para dentro de um frasco esterilizado.Anestesia para preparação da injeçãod. Injeção intramuscular de 2,0 mL de uma combinação 1:1 de xilazina (100 mg/mL) e Cloridrato de cetamina (100 mg/mL)e. As pupilas foram dilatadas com cloridrato de ciclopentolato tópico a 1% e Cloridrato de fenilefrina a 10%Preparação para Injeção Intravitreal:
[0127]Um frasco esterilizado contendo a solução do Ácido RGCisteico contendo 2,5 mg/100 μL e solução salina esterilizada isotônica, pH ajustado em 6,5 foi fornecido.
[0128]Antes da injeção, o investigador confirmou que havia 0,10 cc (100 mi- crolitros) de solução na seringa de 1,0 cc.Procedimento de Injeção:
[0129]Uma vez que as injeções intravitreais não resultam em um nível de incapacidade visual suficiente para interromper a atividade diária normal dos coelhos, este não é considerado um procedimento de sobrevivência importante de acordo com a resolução de animais da Association for Research in Vision (Associação para Pesquisa em Visão) e diretrizes de oftalmologia.
[0130]Tanto a solução do Ácido RGCisteico bem como as soluções salinas esterilizadas foram injetadas dentro da cavidade do vítreo após o exame da linha de base de biomicroscopia com lâmpada de fenda, Oftalmoscopia e ERG ter sido completado nos Coelhos. Os Coelhos (10 mg/kg de peso corporal) foram anestesiados com uma injeção intramuscular de 2,0 mL de combinação 1:1 de xilazina (100 mg/mL) e Cloridrato de cetamina (100 mg/mL). As pupilas foram dilatadas com clori- drato de ciclopentolato tópico a 1% e Cloridrato de fenilefrina a 10%.
[0131]Todos os animais foram inicialmente examinados com biomicroscopia com lâmpada de fenda e oftalmoscopia indireta para excluir quaisquer animais com anormalidades vitreorretinais pré-existentes. A injeção intravitreal de 0,10cc foi administrada 2 mm posterior ao limbo no quadrante supranasal utilizando uma agulha de calibre 30 ligada a uma seringa de 1,0cc. Foi tomado cuidado para evitar danos no cristalino ou na retina.
[0132]Sete (7) dias após a injeção a vitrectomia mecânica foi realizada nos animais. Uma vitrectomia da pars plana de duas entradas foi realizada utilizando um fiberóptico de infusão e um cortador de vítreo ligado a uma unidade de vitrectomia. Após uma segunda vitrectomia de 30 segundos, o cortador do vítreo foi direcionado para a superfície retinal peripapilar em que, utilizando baixa aspiração (<30mmHg) uma separação do vítreo cortical posterior da superfície da retina foi tentada em 4 quadrantes. Os animais foram submetidos à eutanásia com injeções de pentobarbital de sódio intracardíacas e os olhos foram imediatamente extirpados.
[0133]Todos os olhos sofreram uma penetração com lâmina afiada no polo superior subadjacente à pars plana imediatamente após a extirpação para garantir rápida penetração do fixativo. Foi tomado cuidado para evitar danos na retina e no cristalino adjacentes. Os olhos foram imersos em 2% de paraformaldeído mais 2,5% de gluteraldeído durante um mínimo de 24 horas a 4 graus Celsius. Uma única calo- ta posterior foi removida, desidratada em metanol e seca em dióxido de carbono até o ponto crítico, revestida com descarga em ouro e fotografada utilizando o microscópio eletrônico de varredura.
Análise dos Resultados
[0134]Os dados sobre a segurança entre os olhos tratados com solução do Ácido RGCisteico e solução salina esterilizada foram analisados em relação à segurança utilizando as técnicas a seguir:Biomicroscopia com lâmpada de fenda;Oftalmoscopia;ERG;Histopatologia; eMicroscopia eletrônica.
Perfil de Segurança:
[0135]A primeira administração intravitreal de 100 μL de solução a 2,5% de Ácido RGCisteico ao grupo de nove Coelhos números 901, 902, 903, 904, 905, 906, 907, 908, 909, não estava associada com qualquer toxicidade significativa em todos os pontos de tempo. Não havia diferença significativa nos efeitos adversos relatados entre o grupo tratado com 2,5% de Ácido RGCisteico e o grupo tratado com solução salina isotônica. Esta falta de toxicidade foi determinada por exame clínico, oftal- moscopia indireta e varredura β com ultrassom e vitrectomia mecânica.
[0136]A biomicroscopia com lâmpada de fenda foi realizada em todas as visitas do estudo e se concentrou nas pálpebras, na conjuntiva e esclera, córnea, alterações endoteliais, reação na câmara anterior, íris, cristalino e cápsula, bem como o vítreo anterior em relação a sinais de inflamação e demonstrou uma ausência quase completa de reação inflamatória às injeções intravitreais de 100 μL de solução a 2,5% de Ácido RGCisteico e o grupo de solução salina isotônica. Em todos os pontos de estudo e em todos os grupos de estudo não pareceu haver quaisquer sinais de toxicidade significativa induzidos pelos artigos de teste.
[0137]A avaliação clínica do segmento posterior também foi seguida ao longo de todo o estudo para garantir que não havia toxicidade da retina significativa presente. A oftalmoscopia indireta bem como avaliações do fundo de olho com lâmpada de fenda foram realizadas em cada ponto de tempo com atenção específica a quaisquer sinais de toxicidade da retina. O segmento posterior foi avaliado em relação a quaisquer alterações na densidade do vítreo, na Liquefação do Vítreo, na ligação do vítreo e em possível hemorragia. A retina foi avaliada em relação a quaisquer sinais de toxicidade RPE, hemorragia da retina com compromisso vascular da retina, exsudatos, rasgaduras da retina, rompimentos ou descolamentos. Não havia alterações de RPE na linha de base entes do tratamento, em todos os pontos de estudo e em todos os grupos de estudo não parecia haver quaisquer sinais de alterações do segmento posterior significativas induzidas pelos artigos de teste. É importante observar que varreduras de ERG realizadas sobre os nove animais antes das injeções intravitreais, bem como varreduras de ERG realizadas em todos os animais 1 dia e 7 dias após a injeção não pareciam causar quaisquer sinais de alteração significativa ou toxicidade induzida pelos artigos de teste.
[0138]A segunda administração intravitreal de 100 μL de solução a 2,5% de Ácido RGCisteico ao grupo de seis Coelhos números 902, 903, 905, 906, 907, 908, não estava associada a qualquer toxicidade significativa em todos os pontos de tempo. Não havia diferença significativa nos efeitos adversos relatados entre o grupo com 2,5% de Ácido RGCisteico e o grupo de solução salina isotônica. Esta falta de toxicidade foi determinada por exame clínico, oftalmoscopia indireta e varredura β de ultrassom e vitrectomia mecânica.
[0139]A biomicroscopia com lâmpada de fenda foi realizada em todas as visitas do estudo e se concentrava nas pálpebras, na conjuntiva e na esclera, córnea, alterações endoteliais, reação da câmara anterior, íris, cristalino e cápsula, bem co- mo o vítreo anterior em relação a sinais de inflamação e demonstrou uma ausência quase completa de reação inflamatória às injeções intravitreais de 100 μL de solução a 2,5% de Ácido RGCisteico e o grupo de solução salina isotônica. Em todos os pontos do estudo e em todos os grupos do estudo não parecia haver quaisquer sinais de toxicidade significativa induzida pelos artigos de teste.
[0140]A avaliação clínica do segmento posterior também foi seguida ao longo de todo o estudo para garantir que não havia toxicidade da retina significativa presente. A oftalmoscopia indireta bem como avaliações de fundo de olho com lâmpada de fenda foram realizadas em cada ponto de tempo de avaliação com atenção específica a quaisquer sinais de toxicidade da retina. O segmento posterior foi avaliado em relação a quaisquer alterações na densidade do vítreo, Liquefação do Vítreo, ligação do vítreo e hemorragia possível. A retina foi avaliada em relação a quaisquer sinais de toxicidade de RPE, hemorragia da retina com comprometimento vascular da retina, exsudatos, rasgaduras da retina, rompimentos ou descolamentos. Não havia quaisquer alterações de RPE na linha de base 7 dias antes do segundo tratamento, em todos os pontos do estudo e em todos os grupos do estudo não parecia haver quaisquer sinais de alterações do segmento posterior significativas induzidas pelos artigos de teste. É importante observar que as varreduras de ERG realizadas nos seis animais para uma segunda vez após as injeções intravitreais, bem como varreduras de ERG realizadas nos animais 8 dias e 14 dias após a injeção não pareciam causar quaisquer sinais de alteração significativa ou toxicidade induzidos pelos artigos de teste.
[0141]A terceira administração Intravitreal de 100 μL de solução a 2,5% de Ácido RGCisteico ao grupo de seis Coelhos números 905, 906, 908, não estava associada a qualquer toxicidade significativa em todos os pontos de tempo. Não havia diferença significativa nos efeitos adversos relatados entre o grupo de 2,5% de Ácido RGCisteico e o grupo de solução salina isotônica. Esta falta de toxicidade foi deter- minada por exame clínico, oftalmoscopia indireta e varredura β de ultrassom e vitrec- tomia mecânica.
[0142]A biomicroscopia com lâmpada de fenda foi realizada em todas as visitas do estudo e se concentrava nas pálpebras, na conjuntiva e na esclera, córnea, alterações endoteliais, reação da câmara anterior, íris, cristalino e cápsula, bem co-mo no vítreo anterior em relação a sinais de inflamação e demonstrava uma falta quase completa de reação inflamatória às injeções intravitreais de 100 μL de solução a 2,5% de Ácido RGCisteico e o grupo de solução salina isotônica. Em todos os pontos do estudo e em todos os grupos do estudo não parecia haver quaisquer sinais de toxicidade significativa induzidos pelos artigos de teste.
[0143]A avaliação clínica do segmento posterior também foi seguida ao longo de todo o estudo para garantir que não havia toxicidade da retina significativa presente. A oftalmoscopia indireta bem como avaliações de fundo de olho com lâmpada de fenda foram realizadas em cada ponto de tempo de avaliação com atenção específica para quaisquer sinais de toxicidade da retina. O segmento posterior foi avaliado em relação a quaisquer alterações na densidade do vítreo, Liquefação do Vítreo, ligação do vítreo e hemorragia possível. A retina foi avaliada em relação a quaisquer sinais de toxicidade de RPE, hemorragia da retina comprometendo a porção vascular da retina, exsudatos, rasgaduras da retina, rompimentos ou descolamentos. Não havia alterações de RPE na linha de base 14 dias antes do terceiro tratamento, em todos os pontos do estudo e em todos os grupos do estudo não parecia haver quaisquer sinais de alterações do segmento posterior significativas induzidas pelos artigos de teste. É importante observar que as varreduras de ERG realizadas nos três animais para uma terceira vez após as injeções intravitreais, bem como as varreduras de ERG realizadas em todos os animais 15 dias e 21 dias após a injeção não pareciam causar quaisquer sinais de alteração ou toxicidade significativa induzidos pelos artigos de teste. Propriedades Antiadesivas de Peptídeos do Ácido RGCisteico: Estudo Cinético da Cicatrização de Ferimentos com o Composto 1 (Ácido GRG Cisteico TP), cí- clico-RGD e RGE
[0144]Neste exemplo, em um modelo de cicatrização de ferimentos, foi demonstrado que os peptídeos do Ácido RGCisteico possuem propriedades antiadesi- vas e, portanto, podem prevenir o desenvolvimento de muitas doenças vitreorretinais patológicas e podem inibir metástase no melanoma humano e células cancerosas do cólon.
[0145]Para testar as propriedades antiadesivas dos peptídeos do Ácido RGCisteico in vitro, um ensaio de cicatrização de ferimentos foi realizado com células endoteliais da veia umbilical humana (HUVEC). As HUVEC foram inoculadas e permitidas crescer até uma monocamada confluente sobre uma superfície revestida com fibronectina. Um ferimento (uma fissura por raspagem) foi criado arrastando uma pequena ponteira de pipeta ao longo da monocamada de HUVEC. As células foram então incubadas em meio de crescimento fresco contendo o peptídeo do Ácido RGCisteico (Composto 1; 10 mM) e foram obtidas imagens da área de ferimento em cinco campos diferentes em vários pontos de tempo (0, 4, 8, 12, 16, 20, 24 horas) para determinar a cinética do fechamento do ferimento. O nível de fechamento do ferimento foi quantificado através da determinação da fração da área de ferimento original que foi reocupada pelas HUVEC através de adesão, migração e proliferação celular.
[0146]Nos estudos de controle, os peptídeos a seguir foram utilizados no lugar do Ácido RGCisteico (Composto 1): peptídeo cíclico-RGD (1 mM), controle positivo) e peptídeo RGE (1 mM, controle negativo).
[0147]O efeito dos peptídeos sobre a cinética de cicatrização do ferimento é apresentado na Figura 1. Os resultados são mostrados na forma de uma porcentagem da área original. As barras de erro correspondem ao desvio padrão no tamanho do ferimento ao longo de 2 - 6 testes independentes. Os resultados mostram que o peptídeo do Ácido RGCisteico inibe a cicatrização de ferimento por HUVEC em 70% após 24 horas, enquanto que Cíclico RGD (peptídeo baseado em RGD; cíclico- RGDf-N(Me)V N-metilado; Cilengitide) inibe a cicatrização de ferimento por HUVEC em 45% após 24 horas. Estes foram ambos comparados com um peptídeo RGE de controle negativo que inibiu a cicatrização de ferimento por HUVEC em 0% após 24 horas. O efeito do Ácido RGCisteico (Composto 1) é quantitativamente comparável com a atividade do peptídeo à base de RGD, um inibidor bem estabelecido de atividade de inibição da integrina. Ainda, o peptídeo do Ácido RGCisteico exibe propriedades similares para as atividades do peptídeo à base de RGD sem apoptose das células HUVEC. Tanto o Cíclico RGD quanto o Composto 1 são inibidores de inte- grina potentes neste ensaio.
[0148]A interação celular com a ECM através da adesão focal é um elemento crucial de migração celular que determina a taxa de fechamento do ferimento. Na migração celular bidimensional, a extremidade anterior da célula com lamelipódios crescentes forma novas adesões com o substrato enquanto que as adesões sobre a extremidade posterior de descolam após a contração do citoequeleto.
[0149]Como descrito em algum lugar aqui, a forte adesão entre o vítreo e a retina poderia ser responsável pelo desenvolvimento eventual de muitas doenças vitreorretinais patológicas tais como tração vitreomacular, retinopatia diabética proli- ferativa, orifício macular, degeneração macular relacionada à idade e corpos flutuantes. Assim, uma abordagem não invasiva não traumática para conseguir o descolamento vítreo posterior, sem ser a separação mecânica do vítreo da superfície da retina interna, é altamente desejável (ver Tezel, T.H. e outros, Retina (1998) 18: 7 -15; e Verstraeten,T.C,e outros., .Arch. Ophthalmol. (1993)111: 849 -854).
[0150]Como descrito em algum lugar aqui, acredita-se que os componentes da ECM, particularmente fibrilas de colágeno do vítreo cortical, são ancorados à su- perfície interna da retina através de sítios de ligação de integrina (ver Foos, R.Y., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (1972) 11:801 -808) na lamela limitante interna (ILL). É também sabido que as glicoproteínas adesivas principais da ILL no olho tais como a fibronectina e a laminina, estão fortemente ligadas às integrinas (ver Curtis,T.M.e outros., Am. J. Physiol. , (1995) 269: L248 -L260; Elner, S.G.,e outros., IOVS (1996) 37:696-701; e Horman,,S.M,e outros., Am. J. Physiol. (1995) 269: L248 -L260) através das sequências de RGD (Arg-Gly-Asp) e várias integrinas se ligam através do motivo de RGD presente nas proteínas da ECM. Ainda, é sabido que a fibronectina se liga a várias outras integrinas além da αvβ3, enquanto que a vitronectina é específica para αvβ3.
[0151]A conexão primária das integrinas à ECM envolve a sequência Arg- Gly-Asp(RGD) e a sequência de RGD se liga a uma fissura superficial localizada entre as subunidades α e β da extremidade superior da integrina (ver Xiong e outros, Science (2002) 296: 151-155). Tal ligação ajuda a modular várias vias de sinalização celular, incluindo a adesão, a migração, a diferenciação celular, a angiogênese e a cicatrização de ferimentos (ver Ruoslahti, E. e outros, Science (1987) 238: 491-497; e J. Clin. Invest. (1991) 87: 1-5).
[0152]Uma vez que a matriz extracelular vítrea; por exemplo, fibrilas de co- lágeno estão conectadas à retina celular através dos sítios de ligação às integrinas, a injeção intravitreal dos peptídeos do Ácido RGCisteico (oligopeptídeos) poderia liberar o motivo de RGD da matriz extracelular vítrea da retina celular através de uma ligação competitiva aos mesmos sítios de receptores de integrina.
[0153]Vários investigadores (ver Ruoslahti, E. e outros., Science (1987) 238: 491-497; Hynes, R.A. e outros, Cell (1992) 68: 303 -322; e Humphries, M.J., J. Cell Sci., (1990) 97: 585 -592) demonstraram que muitas integrinas (αvβ3, α5β1, α11β3, etc.) podem ser inibidas por peptídeos pequenos que possuem o motivo de sequência de RGD. É também bem documentado que as integrinas αvβ3 e α5β1, bem como a vitronectina e a fibronectina, foram reguladas para mais em tumores tais como células de melanoma humano (ver Nip, J., J. Clin. Invest., (1992) 90: 1406-1413), células de câncer de mama humano (ver Rong, L. e outros., Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. (2009) 50: 5988 -5996) e células epiteliais de pigmento da retina humana (Peter C. Brooks e outros, J. Clin. Invest., (1995) 96: 1815 -1822). Assim foi demonstrado que há uma boa correlação entre os potenciais metastásicos de células de melanoma humano e a adesão de células de melanoma à vitronectina de nódulos linfáticos através do receptor da integrina αvβ3 e que a adesão foi inibida por um peptídeo con-tendo RGD (Nip, J., J. Clin. Invest., (1992) 90: 1406-1413). Isto demonstra que os peptídeos RGD podem ser agentes antiangiogênicos importantes.
[0154]Ainda, foi demonstrado em uma linhagem de células do cólon humano que quando havia aumento significativo na adesão celular, havia então maior atividade metastásica (Lehmann, M., Cancer Res., (1994), 54: 2102-2107). Portanto, os agentes que inibem a adesão celular inibem eficientemente câncer de e melanoma de sofrer metástase.
[0155]Com base nos resultados do estudo de cicatrização de ferimentos em que foi mostrado que o Ácido RGCisteico inibe a adesão celular e após a extrapolação do potencial metastásico de RGD nos modelos de Melanoma e Câncer de cólon, os peptídeos do Ácido RGCisteico e seus derivados podem inibir eficientemente a metástase de tumores, por exemplo, no melanoma e no câncer de cólon.Uso de Peptídeos do Ácido RGCisteico para o Direcionamento ou para o Fornecimento de Agentes para Tumores
[0156]Neste exemplo, é fornecido um conjugado de Peptídeo do Ácido RGCisteico dimérico-Paclitaxel (Composto 3), mostrado a seguir. Esta composição é útil como um agente antitumor. O Peptídeo do Ácido RGCisteico dimérico se liga seletivamente a receptores de integrina que são altamente expressos em certas células cancerosas e é útil para tratar certos cânceres metastásicos tal como, por exemplo, câncer de mama metastásico, através da inibição da adesão celular.
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[0157]A síntese e os mecanismos de ação, distribuição biológica e seletividade de tumor do análogo de RGD correspondente do Composto 3 são como descritos em Chen, X. e outros; Synthesis and Biological Evaluation of Dimeric Petide RGD-Paclitaxel Conjugate as a Model for Integrin-Targeted Drug Delivery; J. Med. Chem., (2005) 48 (4):,1098-1106).
[0158]Embora o Composto 3 compreenda um agente antitumor particular, Paclitaxel, ligado ao peptídeo dimérico do Ácido RGCisteico, deve ser considerado que este aspecto da invenção inclui todas as formas monoméricas ou multiméricas dos pep- tídeos do Ácido RGCisteico ligadas a quaisquer agentes para diagnóstico ou terapêuticos possíveis que possam ser úteis no diagnóstico, na obtenção de imagens ou no tratamento de um tumor ou outro tecido ou estrutura que contém integrinas. Os exemplos de substâncias antitumor que podem ser ligadas aos peptídeos do Ácido RGCisteico monoméricos ou multiméricos de acordo com esta invenção podem incluir agentes antitumor (por exemplo, agentes quimioterapêuticos para câncer, modificadores de resposta biológica, inibidores de vascularização, bloqueadores de receptores de hormônios, agentes crioterapêuticos ou outros agentes que destroem ou inibem neoplasia ou tumo- rigênese) tais como; agentes alquilantes ou outros agentes que matam diretamente células cancerosas através do ataque de seu DNA (por exemplo, ciclofosfamida, isofos- famida), nitrosouréias ou outros agentes que matam células cancerosas através da inibição de alterações necessárias para o reparo do DNA celular (por exemplo, carmustina (BCNU) e lomustina (CCNU)), antimetabólitos e outros agentes que bloqueiam o crescimento de células cancerosas através da interferência com certas funções celulares, geralmente síntese de DNA (por exemplo, 6 mercaptopurina e 5-fluorouracil (5FU), antibióticos antitumor e outros compostos que atuam através da ligação ou da intercalação do DNA e prevenindo a síntese de RNA (por exemplo, doxorrubicina, daunorrubicina, epirrubicina, idarrubicina, mitomicina-C e bleomicina) alcaloides de planta (vinca) e outros agentes antitumor derivados de plantas (por exemplo, vincristina e vinblastina), hormônios esteroides, inibidores de hormônios, antagonistas de receptores de hormô-nios e outros agentes que afetam o crescimento de cânceres que respondem a hormônios (por exemplo, tamoxifen, herceptin, inibidores de aromatase tais como aminoglute- tamida e formestane, inibidores de triazol tais como letrozol e anastrazol, inibidores es- teroidais tal como exemestane), proteínas antiangiogênicas, moléculas pequenas, terapias gênicas e/ou outros agentes que inibem a angiogênese ou a vascularização de tumores (por exemplo, meth-1, meth-2, talidomida), bevacizumab (Avastin), esqualami- na, endostatina, angiostatina, Angiozyme, AE-941 (Neovastat), CC-5013 (Revimid), medi-522 (Vitaxin), 2-metoxiestradiol (2ME2, Panzem), carboxiamidotriazol (CAI), pró- fármaco combretastatina A4 (CA4P), SU6668, SU11248, BMS-275291, COL-3, EMD 121974, IMC-1C11, IM862, TNP-470, celecoxib (Celebrex), rofecoxib (Vioxx), interferon alfa, interleucina-12 (IL-12) ou qualquer um dos compostos identificados em Science Vol. 289, Páginas 1197-1201 (17 de agosto de 2000) que é expressamente incorporado aqui como referência, modificadores de resposta biológica (por exemplo, interferon, bacillus calmette-guerin (BCG), anticorpos monoclonais, interluken 2, fator estimulador de colônia de granulócitos (GCSF) etc.), antagonistas de receptores de PGDF, herceptina,asparaginase, busulfan, carboplatina, cisplatina, carmustina, clorambucil, citarabina, dacarbazina, etoposídeo, flucarbazina, flurouracil, gemcitabina, hidroxiuréia, ifosfamida, irinotecan, lomustina, melfalan, mercaptopurina, metotrexato, tioguanina, tiotepa, tomu- dex, topotecan, treosulfan, vinblastina, vincristina, mitoazitrona, oxaliplatina, procarbazi- na, estreptocina, taxol, taxotere, análogos/congêneros e derivados de tais compostos bem como outros agentes antitumor não listados aqui.Peptídeos do Ácido RGCisteico Multiméricos Marcados com 64CU para a Obtenção de Imagens de Tumores que Expressam Integrinas
[0159]Neste exemplo, peptídeos do Ácido RGCisteico tetraméricos e octa- méricos marcados com 64CU da presente invenção (Compostos 4 e 5 respectivamente), mostrados a seguir, são úteis como agentes radioterapêuticos para a obtenção de imagens e finalidades de diagnóstico (por exemplo, radiomarcação de tumores para varredura PET) bem como para o direcionamento ou o fornecimento de agentes terapêuticos para tumores ou outras células que expressam integrinas, tais como tumores que expressam as integrinas αvβ3.
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[0160]A síntese e os mecanismos de ação, distribuição biológica, seletividade de tumor e uso relacionado a PET dos análogos de RGD correspondentes dos Compostos 4 e 5 são como descritos em Li, Z. e outros., 64CU-Labeled Tetrameric and Octameric Peptide RGD for Small-Animal PET of Tumor αvβ3 Integrin Expression; J. Nucl. Med. 48 (7) pp. 1162-1171 (2007).Supressão da Neovascularização Coroidal (CNV) In Vivo pelo Composto 1
[0161]Neste exemplo, o Composto 1 foi testado para determinar sua CNV em um modelo de camundongo publicado. Ver, Umeda N, Kachi S, Akiyama H, Zahn G, Vossmeyer D, Stragies R, Campochiaro P., Supression and Regression of Coroidal Neovascularization by Systemic Administration of an α5β1 Integrin Antagonist: Molecular Pharmacology:2006, 69,1820-1828.
[0162]Os camundongos do estudo tiveram ruptura induzida por laser da membrana de Bruch seguida por uma injeção intravitreal de uma única dose do COMPOSTO 1 na concentração de 1,0 μg/1 μL, 25 μg/1 μL e a 50 μg/1 μL, bem como um veículo imediatamente após o tratamento com laser. Quatorze dias após o tratamento com laser, a área de CNV foi medida através da análise das imagens. O tamanho das lesões de CNV pareciam de alguma maneira menores nos olhos tratados com 1,0 μg/1 μL e as concentrações de 50 μg/1 μL do COMPOSTO 1. A Figura 8 é um gráfico que mostra a área total de neovascularização em um modelo de camundongo de CNV 14 dias após o tratamento com várias doses do Composto 1 e controle (somente o veículo).
[0163]A concentração de 25 μg/1 μL do Composto 1 exibia uma redução estatisticamente significativa de 43% na CNV comparada com os olhos tratados com o veículo. Isto sugere que uma única injeção intravitreal do Composto 1 a 25 μg/1 μL é suficiente para inibir significativamente a CNV.Estudo In-Vivo - Modelo Rop para Retinopatia Diabética
[0164]Neste exemplo, o Composto 1 foi testado em um modelo de camundongos de retinopatia isquêmica para explorar a possibilidade de suprimir a neovas- cularização pré-retinal.
[0165]Os camundongos que tinham retinopatia isquêmica foram injetados de forma intravitreal com uma única dose do Composto 1 na concentração de 0,125 μg/1 μL, 12,5 μg/1 μL, 25,0 μg/1 μL e a 50,0 μg/1 μL (Grupos B, D, F e H, respectivamente), bem como um veículo (BSS) (Controles 1, 2, 3 e 4) no 12o dia pós-natal. No 17o dia pós-natal, 5 dias após a injeção intravitreal, a área de neovascularização foi medida através da análise das imagens. A Figura 9 é um gráfico de barras que compara a área medida de neovascularização nos camundongos tratados com estas doses variáveis de composto 1 ou controle (somente o veículo). Como mostrado na Figura 9, o tamanho das lesões de neovascularização parecia de alguma maneira menor nos olhos tratados com (B) 0,125 μg/1 μL. Entretanto, os Grupos D (12,5 μg/1 μL), F (25,0 μg/1 μL) e H (50,0 μg/1 μL) foram todos enormemente diminuídos e to- das as três concentrações foram observadas como estatisticamente significativa comparadas com os Controles 2, 3 e 4.
[0166]Os resultados deste estudo sugerem que uma única injeção intravi- treal do Composto 1 a 12,5 μg/1 μL, 25,0 μg/1 μL e a 50,0 μg/1 μL é suficiente para inibir significativamente a neovascularização pré-retinal.Toxocologia ao Animal do Composto 1
[0167]As Tabelas A até E a seguir resumem os dados de toxicidade ao ani-idos partindo dos estudos a seguir:
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TABELA ATOXICIDADE OCULAR DA INJEÇÃO INTRAVITREAL DE 2,5 MG/100 μL DO COMPOSTO1 COM E SEM UREIA EM COELHOS NEW ZEALAND
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TABELA BTOXICIDADE OCULAR DA INJEÇÃO INTRAVITREAL DE 2,5 MG/100 μL DOCOMPOSTO 1 E 2,5 MG/100 μL DE RGD EM COELHOS NEW ZEALAND MACHOS E FÊMEAS
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TABELA C TOXICIDADE OCULAR DA INJEÇÃO SUB-CONJUNTIVAL DE
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5,0 MG/100 μL DO COMPOSTO 1 EM COELHOS NEW ZEALANDTABELA DTOXICIDADE OCULAR DE TRÊS INJEÇÕES INTRAVITREAIS DE
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2,5 ΜG/1 00 μL DO COMPOSTO 1 EM COELHOS NEW ZEALANDTABELA ETOXICIDADE OCULAR DE TRÊS INJEÇÕES INTRAVITREAIS DE 2,5 MG/100 μL, 5,0 MG/100 μL E 10,0 MG/100 μL DO COMPOSTO 1 EM COELHOS NEW ZEALAND PIGMENTADOS
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Estudo de Várias Dosagens Humano
[0168]Quinze pacientes humanos com DME em estágio tardio receberam três injeções intravitreais mensais do Composto 1 como parte de um Estudo de Segurança em Humanos de Fase 1 de várias injeções. Não havia Eventos Adversos Graves e Eventos Adversos Significativos. Embora este estudo fosse primeiramente um estudo de segurança, a eficácia também foi avaliada. Oito dos pacientes melhoraram três ou mais linhas em BCVA (representando 53% dos pacientes tratados) e quatro dos pacientes melhoraram de quase legalmente cegos para visão funcional na faixa de 20/40 até 20/60. Adicionalmente, uma melhora significativa na anatomia macular em OCT foi observada em oito pacientes, variando de 30% até 80%. Estas melhoras em BCVA e na espessura macular central de OCT persistiram durante 90 dias de tratamento de acompanhamento. Estes resultados foram atingidos apesar do fato de que estes pacientes humanos sofreram de DME em estágio tardio e muitos foram considerados refratários às opções de tratamento atuais de tanto Avastin bem como laser de fotocoagulação. A Tabela F a seguir mostra um resumo dos pacientes do estudo que receberam tratamento prévio com Avastin ou terapia de laser de foto- coagulação:
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[0169]Detalhes e resultados adicionais deste estudo são mostrados na Ta-bela F a seguir, nos gráficos e nos diagramas das Figuras 10A até 10I_e os parágrafos escritos abaixo.TABELA GSEGURANÇA E EFICÁCIA DE TRÊS INJEÇÕES INTRAVITREAIS DE 2,5 MG/100 μL DOCOMPOSTO 1 EM INDIVÍDUOS HUMANOS COM EDEMA MACULAR DIABÉTICOSUMÁRiO DO TEsTE cLÍNicO
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[0170]O objetivo do estudo de Fase 1 era avaliar a segurança e a eficácia inicial da injeção intravitreal oftálmica do COMPOSTO 1 em indivíduos humanos com edema macular diabético (DME) em estágio terminal. O ponto final primário deste estudo era a observação da toxicidade limitante da dose. Um ponto final secundário deste estudo era a observação de um benefício clínico na redução do edema macular diabético em BCVA (linhas ETDRS) e espessura macular central OCT.
[0171]Quinze indivíduos humanos com DME em estágio terminal crônico completaram este estudo aberto. Os indivíduos no registro tinham BCVA de 20/100 ou pior primariamente devido ao DME e não tinham passado por tratamento anti- VEGF ou laser focal dentro de 90 dias antes do registro. Muitos indivíduos do estudo eram refratários aos tratamentos prévios com Avastin. Os indivíduos do estudo receberam três injeções intravitreais mensais de 2,5 mg do COMPOSTO 1 e foram acompanhados mensalmente durante 3 meses adicionais. As medidas de segurança foram acompanhadas por BCVA, avaliação com lâmpada de fenda, exame de fundo de olho dilatado, medidas de IOP, OCT, FA, Fundus Photos, ultrassom de varredura B e ERG.
[0172]Um total de 15 indivíduos foi registrado neste estudo. De forma geral, todos os indivíduos do estudo toleraram o fármaco do estudo COMPOSTO 1 extremamente bem. Não há relatos de reações inflamatórias na câmara anterior ou na cavidade vítrea. Nenhuma elevação sustentada em IOP foi observada. Nenhuma descompensação da córnea ou progressão de catarata foi observada durante este estudo. Nenhuma rasgadura da retina ou descolamentos da retina foram observados durante este estudo, entretanto uma alta incidência (55%) de descolamento vítreo posterior foi observada por ultrassom de varredura B como é observado nos estudos prévios com coelhos. Além disso, nenhuma oclusão vascular foi observada ao longo de todo o curso destes estudos. Dos 15 indivíduos, não havia Eventos Adversos Graves ou Eventos Adversos significativos relatados.
[0173]53% (8 dos 15) dos indivíduos relataram um aumento de 3 linhas ou maior em BCVA no dia 90 do estudo após receberem 3 injeções intravitreais. Nenhum indivíduo do estudo perdeu BCVA partindo da linha de base. De forma interessante, a mesma proporção de indivíduos (53% ou 8 dos 15) foi observada como possuindo uma redução significativa na espessura macular central de OCT de pelo menos 30%. A redução máxima no edema macular era de 505 micra (608 para 103), uma redução de quase 80% no edema macular. Melhoras em BCVA tipicamente rastreavam melhoras na redução de edema macular por OCT. Um indivíduo do estudo demonstrou progressão partindo de seu edema macular diabético de linha de base, inicialmente melhorando durante seu curso de tratamento, mas posteriormente progredindo de volta para sua espessura macular de OCT de linha de base no dia 150 do estudo, 3 meses depois da terapia intravitreal. Este BCVA do indivíduo do estudo melhorou inicialmente 5 linhas, mas posteriormente regrediu para a linha de base no dia 150 do estudo.
[0174]Neste estudo, como mostrado graficamente nas Figuras 10A a 10J, há uma coerência na ausência de toxicidade demonstrada por BCVA, espessura macular central de OCT, ausência de resposta inflamatória ou patologia da retina no exame clínico, FA, varredura B ou ERG. De forma geral, o COMPOSTO 1 foi muito bem tolerado.
[0175]De forma interessante, apesar da natureza do estágio terminal dos indivíduos do estudo e do pequeno tamanho do estudo, parece haver um indicador clínico evidente de eficácia com melhoras nos aprimoramentos anatômicos rastrean- do BCVA na espessura macular central de OCT. Além disso, as melhoras clínicas parecem durar pelo menos 90 dias após o último tratamento intravitreal com o COMPOSTO 1 em quase todos os indivíduos do estudo que demonstram melhoras. Os autores perceberam que um estudo mais amplo é necessário para avaliar e confirmar adicionalmente a segurança e a eficácia desta nova classe de fármacos anti- angiogênicos e melhor entender as características de seu novo mecanismo de ação.Efeitos de Ranibizumab e Composto 1 Isoladamente e Em Combinação em Camundongos Transgênicos Expressando VEGF Humano
[0176]Os camundongos transgênicos em que o promotor da rodopsina controla a expressão de VEGF humano nos fotorreceptores (camundongos rho/VEGF)foram separados aleatoriamente em grupos de tratamento separados e os estudosforam realizados para fornecer as comparações a seguir
Figure img0039
Figure img0040
[0177]As medidas pré-tratamento da área de neovascularização subretinal foram feitas em cada animal utilizando análise de imagens por um observador de forma oculta. Cada animal recebeu seu tratamento designado em uma única injeção intraocular. Sete dias pós-dose, as medidas da área de neovascularização subretinal foram novamente realizadas e comparadas com as medidas pré-dose para determinar a alteração na área de neovascularização subretinal. Ainda, os animais foram sacrificados e as retinas foram dissecadas, imunocoradas com GSA lectina e examinadas por microscopia de fluorescência.
[0178]A Figura 11A é um gráfico de barras que compara a alteração média na área de neovascularização subretinal de animais que receberam 25 μg de Composto 1 (5 Animais) vs. animais que receberam a combinação de 10 μ de ranibizu- mab + 25 μg de Composto 1 (5 Animais). Os animais que receberam a combinação de 10 μ de ranibizumab + 25 μg de Composto 1 exibiam uma redução maior de 35,34% na área de neovascularização subretinal que os animais que receberam 25 μg de Composto 1 isoladamente. Estes dados indicam que, nas doses testadas, a combinação de ranibizumab e Composto 1 era mais eficiente na redução da neovas- cularização subretinal que o Composto 1 isoladamente.
[0179]A Figura 11B é um gráfico de barras que compara a alteração média na área de neovascularização subretinal de animais que receberam 10 μg de ranibi- zumab (5 Animais) vs. animais que receberam a combinação de 10 μ de ranibizu- mab + 25 μg de Composto 1 (5 Animais). Os animais que receberam a combinação de 10 μ de ranibizumab + 25 μg de Composto 1 exibiam uma redução maior de 34,70% na área de neovascularização subretinal que os animais que receberam 10 μg de ranibizumab isoladamente. Estes dados indicam que, nas doses testadas, a combinação de ranibizumab e Composto 1 era mais eficiente na redução da neovas- cularização subretinal que o Composto 1 isoladamente.
[0180]A Figura 11C é um gráfico de barras que compara a alteração média na área de neovascularização subretinal de animais que receberam 25 μg de Composto 1 (3 Animais) vs. animais que receberam Solução Salina Tamponada com Fosfato (veículo/controle) (3 Animais). Os animais que receberam 25 μg de Composto 1 exibiam uma redução maior de 37,06% na área de neovascularização subretinal que os animais de controle. Estes dados indicam que, na dose testada, o Composto 1 era mais eficiente que o controle na redução da neovascularização subretinal.
[0181]A Figura 11D é um gráfico de barras que compara a alteração média na área de neovascularização subretinal de animais que receberam 10 μg de ranibi- zumab (3 Animais) vs. animais que receberam Solução Salina Tamponada com Fosfato (veículo/controle) (3 Animais). Os animais que receberam 10 μg de ranibizumab exibiam uma redução maior de 38,96% na área de neovascularização subretinal que os animais de controle. Estes dados indicam que, na dose testada, o ranibizumab era mais eficiente que o controle na redução da neovascularização subretinal.
[0182]Em resumo, nas doses testadas nestes estudos de comparação, cada um de ranibizumab e Composto 1 causava uma redução estatisticamente significativa na área de neovascularização subretinal quando administrado isoladamente. Entretanto, a combinação de ranibizumab e Composto 1 causava uma redução significativamente maior na área de neovascularização subretinal que o ranibizumab isoladamente ou o Composto 1 isoladamente. Com base nestes dados, a terapia de combinação utilizando o Composto 1 (ou outra inibição de integrina do Composto da presente invenção) em combinação com uma “Armadilha” de VEGF (tal como ranibi- zumab) tinha benefício clínico potencial em pacientes sofrendo de doenças neovas- culares do olho.
[0183]Como utilizado aqui, qualquer referência a tratar ou tratamento de uma doença ou distúrbio deve, a não ser que seja citado o contrário, ser interpretada como incluindo prevenir ou a prevenção da doença ou do distúrbio antes de ter ocorrido ou ser detectado bem como o tratamento da doença ou do distúrbio após este ter ocorrido ou ser detectado.
[0184]Deve ser considerado que a invenção foi descrita aqui anteriormente com referência a certos exemplos ou modalidades da invenção, mas que várias adições, deleções, alterações e modificações podem ser feitas aqueles exemplos e modalidades sem se afastar do espírito e do âmbito pretendidos da invenção. Por exemplo, qualquer elemento ou atributo de uma modalidade ou exemplo pode ser incorporado ou utilizado com outra modalidade ou exemplo, a não ser que seja especificado o contrário do fato de que se fazendo isso tornaria a modalidade ou o exemplo inadequado para seu uso pretendido. Ainda, quando as etapas de um método ou processo foram descritas ou listadas em uma ordem particular, a ordem de tais etapas pode ser alterada a não ser que seja especificado o contrário ou a não ser que fazendo isso tornasse o método ou o processo inoperável para sua finalidade pretendida. Todas as adições, as deleções, as modificações e as alterações razoáveis devem ser consideradas equivalentes dos exemplos e das modalidades descritas e devem ser incluídas dentro do âmbito das reivindicações a seguir. Todas as publicações e documentos de patentes citados aqui são incorporados aqui como referência em sua totalidade para todas as finalidades até a mesma extensão de que cada um fosse assim indicado individualmente.

Claims (14)

1. Uso de um peptídeo inibidor de integrina que consiste em Glicinil-Arginil- Glicinil-Cisteico(Ácido)-Treonil-Prolina-COOH, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido uso é na fabricação de uma composição farmacêutica para tratar edema macular.
2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo inibe pelo menos α5β1-Integrina, αvβ3-Integrina e αvβ5-Integrina.
3. Uso, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo inibe receptores de integrina associados a um motivo de adesão celular.
4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo inibe receptores de integrina associados com fibronectina, vitro- nectina, laminina, fibrinogênio, trombospondina e fator de von Willebrand.
5. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo é dissolvido em um líquido para formar uma solução adequada para injeção intravítrea.
6. Uso, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo inibidor de integrina também reduz a inflamação no olho.
7. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, CARACTERIZADO pelo fato de que causa uma redução de 30% a 80% na espessura macular central (CMT).
8. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo compreende Arg-Gly-NH-CH(CH2- SO3H)COOH.
9. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo é um peptídeo linear compreendendo Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH.
10. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo é um peptídeo cíclico compreendendo Arg-Gly-NH-CH(CH2-SO3H)COOH.
11. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo tem a fórmula:
Figure img0041
12. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, CARACTERIZADO pelo fato de que o edema macular resultou de um distúrbio ocular neovascular.
13. Uso, de acordo com a reivindicação 12, CARACTERIZADO pelo fato de que o indivíduo sofre de edema macular diabético.
14. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, CARACTERIZADO pelo fato de que o peptídeo está presente como um sal farma- ceuticamente aceitável do mesmo.
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Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
BR112012011731A2 (pt) 2009-11-10 2020-08-25 Allegro Pharmaceuticals, Inc. composições e métodos para inibir a adesão celular ou direcionamento dos agentes de diagnóstico ou terapêuticos para os sítios de ligação rgd
US11673914B2 (en) 2009-11-10 2023-06-13 Allegro Pharmaceuticals, LLC Peptide therapies for reduction of macular thickening
EP3243530B1 (en) * 2011-05-09 2020-07-08 Allegro Pharmaceuticals, Inc. Integrin receptor antagonists and their use
US8901144B2 (en) 2013-02-07 2014-12-02 Scifluor Life Sciences, Llc Fluorinated 3-(2-oxo-3-(3-arylpropyl)imidazolidin-1-yl)-3-arylpropanoic acid derivatives
LT2953948T (lt) 2013-02-07 2018-01-10 Scifluor Life Sciences, Inc Fluorinti integrino antagonistai
RU2017132433A (ru) 2015-02-19 2019-03-19 Сайфлуор Лайф Сайенсиз, Инк. Фторированные производные тетрагидронафтиридинилнонановой кислоты и их применение
EP3384009A4 (en) * 2015-12-04 2019-06-12 Janssen Biotech, Inc. TREATMENT OF RETINAL DEGENERATION WITH PROGENITOR CELLS
CN105837666A (zh) * 2015-12-30 2016-08-10 田梗 一种用于诊断糖尿病性视网膜病的蛋白质
US11045435B2 (en) * 2016-09-29 2021-06-29 Naturewise Biotech & Medicals Corporation Methods for treating ocular diseases
KR20190102003A (ko) 2016-12-12 2019-09-02 쏘흐본느 유니베흐시테 신혈관화 억제제로서 c-형 렉틴인, 레베세틴
CA3050904A1 (en) * 2017-01-19 2018-07-26 Hampar L. Karageozian Therapeutic and neuroprotective peptides
US20190062371A1 (en) 2017-06-19 2019-02-28 Allegro Pharmaceuticals, Inc. Peptide compositions and related methods
CN111658647A (zh) * 2019-03-08 2020-09-15 首都医科大学宣武医院 沙利度胺及其衍生物的用途
CN114173802A (zh) * 2019-07-26 2022-03-11 急速制药有限责任公司 用于治疗非渗出性黄斑变性和其他眼睛病症的肽
JP2023516431A (ja) * 2020-03-06 2023-04-19 アレグロ ファーマシューティカルズ エルエルシー ミトコンドリア機能の改善または機能障害の軽減のための治療
WO2022183360A1 (en) * 2021-03-02 2022-09-09 Tsao Yeou Ping Short synthetic peptide and their uses for treating dry eye disease
WO2023001288A1 (zh) * 2021-07-23 2023-01-26 百奥泰生物制药股份有限公司 整合素GPIIb/IIIa拮抗剂及其和抗VEGF抗体联合用药的应用
CN117771376B (zh) * 2024-02-26 2024-05-03 四川大学华西第二医院 一类化合物在注意缺陷与多动障碍中的应用及产品

Family Cites Families (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4517686A (en) 1982-08-04 1985-05-21 La Jolla Cancer Research Foundation Polypeptide
US4578079A (en) 1982-08-04 1986-03-25 La Jolla Cancer Research Foundation Tetrapeptide
US4589881A (en) 1982-08-04 1986-05-20 La Jolla Cancer Research Foundation Polypeptide
US4614517A (en) 1982-08-04 1986-09-30 La Jolla Cancer Research Foundation Tetrapeptide
US4661111A (en) 1982-08-04 1987-04-28 La Jolla Cancer Research Foundation Polypeptide
US5635477A (en) * 1991-09-30 1997-06-03 The Dupont Merck Pharmaceutical Company Cyclic compounds useful as inhibitors of platelet glycoprotein IIB/IIIA
JPH08508498A (ja) 1993-03-29 1996-09-10 ザ・デュポン・メルク・ファーマシュウティカル・カンパニー 血小板糖タンパク質▲ＩＩ▼ｂ／▲ＩＩＩ▼ａの阻害剤として有用な環状化合物
US6346604B1 (en) 1995-10-31 2002-02-12 Takeda Chemical Industries, Inc. Method for controlling conformation of cyclopentapeptide
EP0767674A4 (en) 1994-06-29 1999-06-16 Texas Biotechnology Corp METHOD FOR INHIBITING THE BINDING OF INTEGRIN ALPHA 4 BETA 1 TO VCAM-1 OR FIBRONECTIN
JPH08119991A (ja) 1994-10-24 1996-05-14 Otsuka Pharmaceut Factory Inc ペプチド誘導体及びｉｌ−１産生抑制剤
US6551574B2 (en) * 1995-06-07 2003-04-22 Rhomed Incorporated Tuftsin metallopeptide analogs and uses thereof
US6610292B2 (en) 1995-11-22 2003-08-26 Ista Pharmaceuticals, Inc. Use of hyaluronidase in the manufacture of an ophthalmic preparation for liquefying vitreous humor in the treatment of eye disorders
RU2195312C2 (ru) 1996-05-31 2002-12-27 Дзе Скриппс Рисерч Инститьют СПОСОБЫ И КОМПОЗИЦИИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ αvβ5-ОПОСРЕДОВАННОГО АНГИОГЕНЕЗА
US6331285B1 (en) * 1996-06-05 2001-12-18 Palatin Technologies, Inc. Structurally determined cyclic metallo-constructs and applications
US20030170250A1 (en) 1998-03-23 2003-09-11 Ezrin Alan M. Local delivery of long lasting therapeutic agents
WO1999063084A1 (fr) 1998-05-29 1999-12-09 St. Marianna University School Of Medicine Sequences de recepteurs d'antigenes de lymphocytes t specifiques d'arthrosis deformans
US7030211B1 (en) 1998-07-08 2006-04-18 Gemvax As Antigenic peptides derived from telomerase
ATE494388T1 (de) 1999-01-13 2011-01-15 Univ New York State Res Found Neues verfahren zum erschaffen von proteinkinase- inhibitoren
US7070936B1 (en) 1999-01-13 2006-07-04 The Research Foundation Of State University Of New York Method for designing protein kinase inhibitors
US20040072315A1 (en) * 2001-02-05 2004-04-15 Xinjie Lu Integrin-binding chimeras
WO2002067972A1 (en) * 2001-02-28 2002-09-06 Duke University Method of inducing vitreous detachment
JP2002326949A (ja) 2001-05-02 2002-11-15 Kansai Tlo Kk 免疫賦活剤
US7906102B2 (en) 2001-10-03 2011-03-15 Vanderbilt University Ligands to radiation-induced molecules
WO2003037172A2 (en) * 2001-11-01 2003-05-08 Gpc Biotech Inc. Endothelial-cell binding peptides for diagnosis and therapy
WO2006017619A2 (en) 2004-08-06 2006-02-16 The Regents Of The University Of California Receptor-binding cyclic peptides and methods of use
JP2010526091A (ja) 2007-04-30 2010-07-29 インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド 癌の処置のための生物学的な標的基の改変
CA2687700A1 (en) 2007-05-16 2008-11-27 Conjuchem Biotechnologies Inc. Cysteic acid derivatives of anti-viral peptides
BR112012011731A2 (pt) 2009-11-10 2020-08-25 Allegro Pharmaceuticals, Inc. composições e métodos para inibir a adesão celular ou direcionamento dos agentes de diagnóstico ou terapêuticos para os sítios de ligação rgd
EP3243530B1 (en) 2011-05-09 2020-07-08 Allegro Pharmaceuticals, Inc. Integrin receptor antagonists and their use

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